MicroRNA-940在乳腺癌中的表达变化及作用机制

目的 探讨microRNA-940(miR-940)在乳腺癌组织和细胞中的表达以及对乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响及其相关分子机制。 方法 实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测2016年1月~2017年1月我院手术切除的78例患者的乳腺癌组织、癌旁组织和人乳腺癌细胞系MCF-7、SK-BR-3、MDA-MB-231、BT-549及人正常乳腺细胞系MCF-10 A中miR-940的表达情况。在乳腺癌细胞系MDA-MB-231中利用脂质体LipofectaminsTM 2000转染miR-940模拟物上调miR-940的表达,CCK-8实验检测细胞增殖活性的改变,小室侵袭及迁移实验（transwell）检测细胞侵袭、迁移能力的改变。生物学信息法预测miR-940的可能作用靶基因,双荧光素酶报告实验检测miR-940与CXC趋化因子受体2 (CXCR2)的3’UTR区结合情况,Western blotting检测miR-940对CXCR2 蛋白表达的影响。 结果 miR-940在乳腺癌组织和细胞中表达明显降低（P<0.01）,并且miR-940的表达与TNM分期和淋巴结转移密切相关（P<0.01）。上调MDA-MB-231细胞miR-940表达后,细胞的增殖活性明显下降（P<0.01）,侵袭及迁移能力明显下降（P<0.01）。双荧光素酶报告显示,miR-940可与CXCR2 的3’UTR区特定序列结合显著抑制荧光素酶活性(P<0.01),上调miR-940后细胞中CXCR2 蛋白的表达均明显下降(P<0.01)。 结论 miR-940在乳腺癌中的表达降低,miR-940可以通过靶向CXCR2抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力。     

miR-153-3p靶向下调Rho相关螺旋蛋白激酶1(ROCK1)基因抑制乳腺癌细胞增殖及迁移

目的探究miR-153-3p调节乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭的分子机制。方法利用生物信息学软件检索预测miR-153-3p的候选靶基因;采用双荧光素酶报告实验分析miR-153-3p与候选基因的靶向关系;应用实时荧光定量PCR和Western blot法检测miR-153-3p对MDA-MB-231细胞mRNA和蛋白质表达水平的影响;通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,并以Transwell~(TM)检测细胞的迁移和侵袭能力。结果软件预测显示miR-153-3p与Rho相关螺旋蛋白激酶1(ROCK1)有连续的结合区域;共转染miR-153-3p模拟物(miR-153-3p mimics)与ROCK1野生型报告载体的细胞相对荧光素酶活性降低;转染hsa-miR-153-3p-mimics后, MDA-MB-231细胞的miR-153-3p表达水平显著增高,且ROCK1蛋白的表达量明显降低。与对照组相比,转染组MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭能力均减弱。结论 miR-153-3p通过靶向下调ROCK1的表达来抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-138靶向调控FAK抑制三阴型乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭转移的机制

目的 探讨miR-138对三阴型乳腺癌(triple-negative breast cancer, TNBC)MDA-MB-231细胞侵袭、转移的影响及分子机制。方法 将MDA-MB-231细胞转染miR-138 mimics及其阴性对照,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力改变。生物信息学预测miR-138的潜在靶基因,采用双荧光素酶报告实验和Western blot法分析miR-138与FAK的靶向调控关系。回复实验使用Transwell及Western blot实验验证miR-138通过FAK抑制MDA-MB-231细胞侵袭、转移。结果 Transwell实验结果表明：过表达miR-138后,MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力均显著降低(P<0.05)。生物信息学预测FAK为miR-138的潜在靶基因,双荧光素酶报告实验结果表明：FAK 3′UTR区域存在miR-138的互补结合位点。Western blot结果发现过表达miR-138后FAK蛋白表达降低。回复实验Transwell及Western blot结果表明：上调FAK可以部分恢复miR-138过表...     

七氟烷抑制人乳腺癌细胞系MCF-7增殖、迁移和侵袭

目的研究七氟烷对人乳腺癌细胞(MCF-7)增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法用Western blot检测MCF-7细胞中高迁徙率族蛋白1 HMGB1的表达; miR-34a组(转染miR-34a mimics)、miR-con组(转染miR-con)、七氟烷处理+anti-miR-con组(转染anti-miR-con)及七氟烷处理+anti-miR-34a组(转染anti-miR-34a),均用脂质体法转染至MCF-7细胞; RT-qPCR检测细胞miR-34a表达; MTT法检测细胞增殖; Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因实验检测细胞荧光活性。结果与对照组相比,1. 7%的七氟烷处理的细胞中miR-34a表达显著升高(P0. 05),HMGB1表达显著降低(P0. 05),且细胞增殖、迁移和侵袭均显著下调(P0. 05);过表达miR-34a可抑制MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭,敲减miR-34a可降低七氟烷对MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。miR-34a可明显降低野生型HMGB1的细胞荧光活性,且负向调控HMGB1的表达。结论七氟烷可抑制人乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

MiR-215-5p经AKT/GSK-3β/Snail信号通路抑制乳头状甲状腺癌增殖、迁移和侵袭

目的探究miR-215-5p对乳头状甲状腺癌增殖、迁移和侵袭能力的影响以及机制。方法乳头状甲状腺癌TPC1细胞体外转染miR-215-5p mimic后利用MTT实验、细胞划痕实验、细胞侵袭实验检测TPC1细胞增殖、迁移、侵袭能力的变化;预测并验证miR-215-5p的靶基因,并且在TPC1细胞过表达和低表达miR-215-5p的靶基因后,检测TPC1细胞增殖、迁移、侵袭能力的变化;利用Western blot检测转染后靶基因的表达水平,AKT和GSK-3β的磷酸化水平,以及Snail的表达水平。结果 miR-215-5p mimic能够显著抑制TPC1细胞增殖、迁移、侵袭能力(P0.05);通过双荧光素酶报告实验验证了miR-215-5p的靶基因为ARFGEF1;低表达ARFGEF1的TPC1细胞增殖、迁移、侵袭能力被显著抑制(P0.05);miR-215-5p mimic可显著抑制过表达ARFGEF1引起的TPC1细胞增殖、迁移、侵袭能力的增加(P0.05);Western blot结果显示miR-215-5p mimic可引起ARFGEF1和Snail表达水平显著降低(P0.05),AKT和GSK-3β的磷酸化水平降低(P0.05),但是miR-215-5p inhibitor和过表达ARFGEF1均可恢复ARFGEF1和Snail表达水平以及AKT和GSK-3β的磷酸化水平。结论 MiR-215-5p通过AKT/GSK-3β/Snail信号通路以ARFGEF1为目标发出信号抑制乳头状甲状腺癌增殖、迁移和侵袭。     

miR-183在人乳腺癌中表达及意义

目的:研究miR-183在人乳腺癌组织和细胞株中表达状况及其对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法:使用实时定量PCR方法检测miR-183在人乳腺细胞株和临床乳腺病变组织中表达;使用脂质体介导的miRNA转染技术,检测转染miR-183后对乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移活力的影响。结果:高度侵袭力的乳腺癌细胞株miR-183表达较低侵袭乳腺细胞株显著下调(P<0.01);临床人乳腺癌组织中miR-183表达较乳腺良性病变组织显著下调(P<0.01);使用miR-183抑制物和模拟物分别转染乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231后,乳腺癌细胞侵袭和迁移活力分别上调和下调(P<0.05),而细胞增殖活力改变不明显(P>0.05)。结论:乳腺癌中miR-183表达出现失调。miR-183可能参与了乳腺癌细胞侵袭和迁移过程。     

miR-214对人黑素瘤细胞A375增殖和侵袭及JNK1蛋白表达的影响

目的研究miR-214对人皮肤黑素瘤细胞系A375的增殖、侵袭及c-Jnk氨基末端激酶1(JNK1)表达的影响,探讨miR-214影响黑色素细胞增殖、侵袭的机制。方法将miR-214 mimics或inhibitor应用阳离子脂质体Lipofectamine~(TM)2000转染A375细胞,MTT和克隆形成实验分别检测转染后细胞增殖、侵袭能力的变化,Western blot方法检测JNK1蛋白表达。结果转染miR-214 mimics后,A375细胞增殖、侵袭能力明显降低,JNK1蛋白表达显著降低,(P<0.01);转染miR-214 inhibitor后,A375细胞增殖、侵袭能力明显升高,JNK1蛋白表达显著升高,(P<0.01)。结论 miR-214可能通过调控JNK1的表达抑制人黑素瘤细胞A375的增殖与侵袭能力。     

过表达miR-101对卵巢癌SKOV3细胞增殖和迁移的影响及可能机制

目的探讨miR-101对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移的影响及可能机制。方法将卵巢癌SKOV3细胞分为miR-101模拟物组、miR-101阴性对照组及空白对照组,将miR-101模拟物转染至miR-101模拟物组细胞,阴性对照组细胞转染无关序列,空白对照组细胞不作任何处理,采用Real time PCR方法验证其转染效率,分别用MTT方法与Transwell实验检测转染后各组SKOV3细胞的增殖与迁移能力变化。采用双荧光素酶报告基因验证Girdin是否为miR-101的靶基因,Real-time PCR与Western blot实验分别检测各组细胞Girdin mRNA和蛋白表达水平。结果与对照组相比,miR-101模拟物组SKOV3细胞miR-101表达水平显著升高(P0.01)。与对照组相比,miR-101模拟物组SKOV3细胞增殖、迁移能力显著降低(P0.01)。双荧光素酶报告基因分析结果显示,Girdin为miR-101的靶基因;过表达miR-101后,Girdin mRNA及蛋白表达水平显著降低(P0.01)。结论 miR-101可能通过下调Girdin的表达抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖、迁移。     

沉默UHMK1对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨干扰乳腺癌细胞系中UHMK1的表达对乳腺癌细胞体外增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法应用短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰乳腺癌细胞株MDA-MB-231中UHMK1的表达,分别采用qRT-PCR和Western blot实验检测shRNA的干扰效率。应用MTT实验检测细胞活力;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力。结果UHMK1-shRNA可显著干扰乳腺癌细胞MDA-MB-231中UHMK1的表达(P<0.01)。与对照组Plko.1相比,干扰UHMK1表达可使乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖、迁移及侵袭能力显著下调(P<0.01)。结论UHMK1表达可能参与乳腺癌生物学行为的调控。     

miR-205对人黑素瘤A375细胞增殖、侵袭和HIF-1及VEGF蛋白表达的影响

目的研究miR-205对人皮肤黑素瘤细胞系A375的增殖、侵袭和对缺氧诱导因子-1(HIF-1)及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响,探讨miR-205影响黑色素细胞增殖、侵袭的机制。方法将miR-205mimics或inhibitor应用阳离子脂质体Lipofectamine~(TM)2000转染A375细胞,MTT和克隆形成实验分别检测转染后细胞增殖、侵袭能力的变化,Western blot方法检测HIF-1及VEGF蛋白表达。结果转染miR-205 mimics后,A375细胞增殖、侵袭能力明显降低,VEGF与HIF-1蛋白表达显著降低,P0.01;转染miR-205 inhibitor后,A375细胞增殖、侵袭明显升高,VEGF与HIF-1蛋白表达显著升高,P0.01。结论 miR-205抑制人黑素瘤细胞A375的增殖与侵袭能力可能与调控HIF-1及VEGF的表达相关。     

miR-135b-3p调控XAF1表达影响甲状腺癌细胞的迁移、侵袭和放射增敏性

目的探讨miR-135b-3p对甲状腺癌细胞迁移、侵袭和放射敏感性的影响以及其可能的调控机制。方法培养正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1、甲状腺癌细胞K1和TPC-1,RT-qPCR检测细胞中miR-135b-3p表达,Western blot检测细胞中X染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(XAF1)表达。转染anti-miR-135b-3p至TPC-1细胞抑制miR-135b-3p表达,Transwell、Western blot及克隆形成实验分别检测抑制miR-135b-3p表达对TPC-1细胞迁移和侵袭、E-cadherin和MMP-2蛋白表达及对TPC-1细胞放射敏感性的影响。双荧光素酶报告基因实验验证miR-135b-3p与XAF1之间的靶向调控关系。结果与Nthy-ori 3-1细胞相比,K1和TPC-1细胞中miR-135b-3p表达水平显著升高(P<0.05),XAF1蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。抑制miR-135b-3p表达可抑制TPC-1细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05),促进TPC-1细胞E-cadherin蛋白表达(P<0.05),抑制MMP-2蛋白表达(P<0.05),增强TPC-1细胞的放射敏感性(P<0.05)。miR-135b-3p靶向负调控XAF1表达。抑制XAF1表达可降低抑制miR-135b-3p表达对TPC-1细胞迁移、侵袭及放射敏感性的影响。结论miR-135b-3p通过下调XAF1表达促进甲状腺癌细胞的迁移和侵袭能力,并降低其放射增敏性,是甲状腺癌的潜在治疗靶点。     

miR-138-5p靶向HIF-1α影响人白血病K562细胞增殖和侵袭转移

目的探索miR-138-5p与缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对人白血病K562细胞增殖和侵袭转移的影响。方法以体外培养的人白血病K562细胞为研究对象,将其分为K562组、miR-138 mimic组、pc-HIF-1α组和mimic+pc-HIF-1α组。荧光素酶报告实验确认miR-138-5p与HIF-1α的靶向关系;qRT-PCR法检测miR-138-5p和HIF-1α的mRNA水平;Western blot检测HIF-1α的蛋白水平;CCK-8检测细胞存活率;Transwell检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;Western blot检测增殖和上皮间质转化(EMT)相关蛋白表达水平。结果miR-138-5p能靶向HIF-1α,与K562组相比,miR-138 mimic组HIF-1α的mRNA和蛋白水平均显著较低(P<0.01),而pc-HIF-1α组HIF-1α的蛋白水平则显著较高(P<0.01);同时,与pc-HIF-1α组相比,mimic+pc-HIF-1α组HIF-1α的蛋白表达显著较低(P<0.01)。与K562组相比,miR-138 mimic组细胞增殖倍数、细胞迁移和侵袭能力均显著较低(P<0.01),pc-HIF-1α组则显著较高(P<0.01);与pc-HIF-1α组相比,mimic+pc-HIF-1α组细胞增殖倍数、细胞迁移和侵袭能力均显著较低(P<0.01)。同时,mimic+pc-HIF-1α能部分逆转pc-HIF-1α对肿瘤细胞增殖和EMT能力的上调作用(P<0.01)。结论miR-138-5p可通过靶向HIF-1α,进而降低人白血病K652细胞增殖和侵袭转移能力。     

MST1过表达抑制宫颈癌细胞系SiHa的增殖、迁移和侵袭

目的探讨哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)对子宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法Western blot检测正常宫颈上皮细胞H8与宫颈癌细胞SiHa中MST1的表达;构建p J3H-HA-MST1质粒并转染SiHa细胞系,Western blot检测MST1、Ki-67和MMP9的蛋白表达;MTS、划痕实验和Transwell分别检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。结果 SiHa细胞的MST1蛋白表达水平明显低于H8细胞(P0.05);SiHa细胞转染MST1质粒后,MST1蛋白表达明显升高,而Ki-67和MMP9蛋白表达水平显著下降(P0.05),SiHa细胞的增殖被明显抑制(P0.05),同时细胞的迁移和侵袭能力也显著降低(P0.01)。结论 MST1过表达可以抑制宫颈癌细胞SiHa的增殖、迁移和侵袭能力。     

miR-504靶向CHD1L抑制乳腺癌细胞侵袭的分子机制

目的探讨miR-504靶向染色质解旋酶DNA结合蛋白(chromodomain helicase/ATPase DNA binding protein 1-like gene,CHD1L)抑制乳腺癌细胞侵袭的分子机制。方法 qRT-PCR检测人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)与乳腺癌细胞(MDA-MB-231、MCF-7)中miR-504的表达量,同时检测miR-504在MDA-MB-231细胞中的转染效率;双荧光素酶实验检测miR-504与CHD1L是否存在结合靶点;qRT-PCR及Western blot法检测CHD1L mRNA和蛋白的表达水平;Transwell侵袭实验检测MDAMB-231细胞的侵袭能力;Western blot法检测p-Akt、MMP-2和MMP-9的表达情况。结果乳腺癌细胞中miR-504的表达量明显低于人正常乳腺上皮细胞(P 0. 05);miR-504在MDA-MB-231/miR-504组中的表达水平明显增高(P 0. 05);双荧光素酶实验检测显示miR-504能与CHD1L mRNA的3'-UTR结合;此外,过表达miR-504后CHD1L mRNA的表达水平无显著变化,但CHD1L蛋白表达水平显著降低(P 0. 05);与MDA-MB-231/NC组相比,MDA-MB-231/miR-504组侵袭能力明显降低,而MDA-MB-231/miR-504+CHD1L组侵袭能力比MDA-MB-231/miR-504+Con组明显增加;用表皮生长因子分别刺激转染不同质粒的MDA-MB-231细胞,与MDA-MB-231/NC组相比,MDA-MB-231/miR-504组中p-Akt、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平明显降低(P 0. 05),而MDA-MB-231/miR-504+CHD1L组中p-Akt、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平与MDA-MB-231/miR-504+Con组相比明显增加(P 0. 05)。结论 miR-504靶向CHD1L通过PI3K/Akt/MMP信号通路抑制乳腺癌细胞的侵袭。     

miR-137通过TWIST1调控乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭、迁移及凋亡

目的:探讨微小RNA-137(miR-137)对乳腺癌细胞侵袭、迁移及凋亡的影响和分子机制。方法:在乳腺癌MDA-MB-231细胞中转染miR-137模拟物(miR-137 mimics),RT-qPCR检测miR-137表达量,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室检测侵袭和迁移,Western blot检测基质金属蛋白酶9(MMP-9)、cleaved caspase-3(C-caspase-3)和Bax的蛋白水平。生物信息学软件预测TWIST1可能是miR-137的靶基因后用萤光素酶报告基因鉴定。Western blot检测miR-137 mimics对TWIST1蛋白表达影响。在乳腺癌细胞中共转染TWIST1过表达载体和miR-137 mimics,测定细胞凋亡、侵袭、迁移及MMP-9、C-caspase-3、Bax蛋白水平的变化。结果:转染miR-137 mimics后的乳腺癌细胞中miR-137水平升高,细胞凋亡率升高,细胞侵袭和迁移能力降低,C-caspase-3和Bax的蛋白水平增高,MMP-9蛋白表达减少(P0.05)。萤光素酶报告载体鉴定显示miR-137靶向调控TWIST1,并且miR-137 mimics能够抑制乳腺癌细胞中TWIST1表达。与共转染阴性对照载体和miR-137 mimics的细胞比较,TWIST1过表达载体和miR-137 mimics共转染后的乳腺癌细胞TWIST1和MMP-9蛋白表达水平升高,C-caspase-3和Bax蛋白水平减少,细胞凋亡率降低,细胞侵袭和迁移能力增强(P0.05)。结论:miR-137靶向TWIST1抑制乳腺癌细胞侵袭迁移并诱导细胞凋亡。     

miR-124a靶向TGFBR1基因对乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨miR-124a对乳腺癌MDA-MB231细胞株增殖和侵袭的影响。方法 Real-time PCR法检测24例患者乳腺癌组织及邻近的癌旁正常组织中miR-124a的表达,用Western bolt法检测TGFBR1的表达。利用脂质体将pre-miR-124a或anti-miR-124a瞬时转染至乳腺癌MDA-MB231细胞,real-time PCR分析miR-124a与其调控的靶基因TGFBR1的表达调控关系。Western blot法检测转染后细胞中TGFBR1的表达水平,同时采用CCK-8和克隆形成实验检测转染后MDA-MB231细胞的增殖和侵袭情况。结果 miR-124a在乳腺癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织(P0.01),TGFBR1在乳腺癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织(P0.01)。过表达和抑制表达miR-124a能反向调控其靶基因TGFBR1及蛋白的表达;CCK-8和克隆形成实验结果显示,过表达miR-124a能明显抑制乳腺癌MDA-MB231细胞的增殖和侵袭(P0.01)。结论 miR-124a可以通过下调TGFBR1的表达抑制乳腺癌MDA-MB231细胞的增殖和侵袭。     

长链非编码RNA XIST 通过miR-186 调控宫颈癌细胞侵袭迁移及凋亡 的分子机制

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)XIST通过miR-186调控宫颈癌细胞侵袭迁移及凋亡。方法:宫颈癌细胞中转染XIST shRNA,qRT-PCR检测XIST表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移,Western blot检测Cleaved Caspase-3、MMP-2和MMP-9蛋白表达。生物信息学软件预测XIST和miR-186互补结合位点,荧光素酶报告载体鉴定。qRT-PCR检测XIST shRNA对miR-186表达影响。宫颈癌细胞中共转染XIST shRNA和miR-186 inhibitor,检测细胞凋亡、侵袭迁移和Cleaved Caspase-3、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平,评估抑制miR-186对XIST shRNA影响宫颈癌细胞凋亡、侵袭和迁移的作用。结果:转染XIST shRNA可以下调宫颈癌细胞中XIST表达水平,促进细胞凋亡并抑制细胞侵袭和迁移,诱导Cleaved Caspase-3蛋白表达,减少MMP-2和MMP-9蛋白表达。XIST可靶向调控miR-186表达,XIST shRNA可提高miR-186表达。miR-186 inhibitor可明显逆转XIST shRNA对宫颈癌细胞miR-186表达促进、凋亡促进、侵袭迁移抑制和Cleaved Caspase-3、MMP-2、MMP-9蛋白表达影响。结论:下调XIST通过促进miR-186表达抑制宫颈癌细胞侵袭迁移并诱导细胞凋亡。     

布托啡诺调控PBX3基因抑制乳腺癌细胞系MCF7增殖、迁移和侵袭

目的探讨布托啡诺(butorphanol)对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及相关的分子机制。方法用MTT法检测不同浓度布托啡诺对人乳腺癌细胞系MCF7的抑制作用;用Transwell迁移及侵袭实验检测不同浓度布托啡诺对人乳腺癌MCF7细胞迁移及侵袭的影响;RT-qCR与Western blot法分别检测乳腺癌细胞系、正常乳腺上皮细胞以及布托啡诺对MCF7细胞中PBX3 mRNA及蛋白表达的影响;观察转染si-PBX3或si-con后,MCF7细胞增殖、迁移及侵袭能力的变化;PBX3过表达验证布托啡诺对乳腺癌增殖、迁移及侵袭的作用机制。Western blot检测cyclin D1和MMP-2蛋白表达。结果PBX3在乳腺癌细胞系中的表达上调,沉默PBX3表达可明显抑制MCF7细胞增殖、迁移及侵袭,同时抑制cyclin D1和MMP-2的表达;不同浓度的布托啡诺干预能显著抑制MCF7细胞增殖、迁移及侵袭且具有浓度依赖性,还可抑制PBX3、cyclin D1和MMP-2的表达;过表达PBX3可逆转布托啡诺对乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论布托啡诺可通过抑制PBX3降低乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。     

miRNA-186调控CDK6和IL-10表达抑制乳腺癌MCF-7细胞生长与转移机制的研究

目的探讨miR-186介导的CDK6和IL-10表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。方法用已构建的miR-186 mimic质粒转染乳腺癌MCF-7细胞,荧光显微镜下观察转染效率,Western blot技术检测重组质粒对CDK6和IL-10表达的影响,光学显微镜下观察细胞生长群落,分别用MTT法、流式细胞术和Transwell小室法测定重组质粒转染对细胞增殖、凋亡周期及侵袭能力的影响。结果 miR-186转染效率良好,与non-targeting组比较,在转染miR-186后,可明显抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖(P0.01),细胞生长群落分析结果显示,miR-186组细胞群落数目明显低于non-targeting组细胞(P0.01),细胞周期结果显示,miR-186组的G0/G1和S期百分比明显的低于non-targeting组(P0.05),G2/M期百分比明显的高于non-targeting组(P0.05),Transwell检测结果显示,miR-186组乳腺癌MCF-7细胞侵袭细胞数量(81.00±2.00)个明显少于non-targeting组(125.00±3.00)个,miR-186转染后,CDK6和IL-10在miR-186组乳腺癌MCF-7细胞中的表达率明显低于non-targeting组。结论 miR-186可下调乳腺癌MCF-7细胞中CDK6和IL-10的表达,可有效抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖、侵袭,miR-186可能成为一个潜在的乳腺癌基因治疗靶标。     

miR-101靶向调节c-Fos基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨miR-101对卵巢癌SKOV3细胞增殖及侵袭能力的影响。方法将卵巢癌SKOV3细胞分为miR-101抑制剂组、miR-101模拟物组和对照组,分别将miR-101抑制剂或miR-101模拟物转染至miR-101抑制剂组或miR-101模拟物组细胞,对照组细胞转染无关序列,Real-time PCR法检测各组细胞miR-101表达水平,分别用MTT方法与Transwell细胞侵袭实验检测转染后各组SKOV3细胞的增殖与侵袭能力变化。Real-time PCR与Western blot实验分别检测各组细胞c-Fos mRNA和蛋白表达水平。结果转染miR-101模拟物后,SKOV3细胞miR-101的表达水平显著升高,SKOV3细胞的增殖与侵袭能力显著降低,c-Fos mRNA及蛋白的表达水平显著降低(P0.01);转染miR-101抑制剂后,SKOV3细胞miR-101的表达水平显著降低,SKOV3细胞的增殖与侵袭能力显著升高,c-Fos mRNA及蛋白的表达水平显著升高(P0.01)。结论 miR-101抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖和侵袭可能与下调c-Fos的表达相关。