冬虫夏草及人工菌丝体的核苷类成分的HPLC研究

冬虫夏草 Cordycepssinensis( Berk) Sacc.为麦角科虫草属的药用真菌 ,为冬虫夏草菌的子座及其寄主蝙蝠蛾科虫草蝙蝠蛾 H epialus armoricanusOberthus等幼虫尸体的复合体 ,具有广泛的药理作用。核苷类成分为虫草有效成分之一 ,具有扩张心脏和外周血管的药效作用 ,其中尤以腺苷的作用为显著 [1～ 3 ]。《中华人民共和国药典》2 0 0 0年版对冬虫夏草中腺苷规定 ,不得少于 0 .0 1 0 %。目前核苷类分析方法有 HPLC法[4～ 6] 、薄层色谱法[7,8] 、高效毛细管电泳法[9～ 11] 等。高效液相色谱法主要针对单个指标进行评估 ,如以腺苷为指标作含…     

冬虫夏草中核苷及其碱基含量测定方法的研究

采用薄层层析扫描法测定天然虫草及人工虫草中核苷及其碱基的含量。并与紫外分光法比较，两法测得结果一致。     

LC-ESI-MS快速同时测定冬虫夏草中主要核苷类成分

目的:建立同时快速测定冬虫夏草中腺嘌呤、腺苷和虫草素含量的方法.方法:LC-ESI-MS法,采用选择性离子检测(SIM)和电喷雾离子化(ESI),色谱条件为shimadzu VP-ODS色谱柱;流动相为水-甲醇-甲酸(92∶7∶1),以甲醇为提取溶剂和2-氯腺苷为内标.结果:腺嘌呤线性回归方程为Y=0.072 64X+0.006 22,线性范围为0.8～130.0 mg·L~(-1),r=0.998 7;腺苷线性回归方程为Y=0.159 7X+0.014 6,线性范围为0.5～124.5 mg·L~(-1),r=0.9991;虫草素线性回归方程为Y=0.194 2X+0.018 6,线性范围为0.5～128.5 mg·L~(-1),r=0.999 4;腺嘌呤、腺苷和虫草素的加标回收率分别为98.76%,99.37%和99.26%.结论:方法灵敏、快速和选择性好,可用于同时快速测定冬虫夏草中腺嘌呤、腺苷和虫草素含量及质量控制.     

蛹虫草菌丝与冬虫夏草中核苷类成分的含量测定

蛹虫草菌丝与冬虫夏草中核苷类成分的含量测定刘静明,刘岱,杨立新,钟裕容,崔淑莲(中国中医研究院中药研究所北京100700)蛹虫草CardycepsmiliLaris(L.)Link,为冬虫夏草同属真菌,近年来发现蛹草有重要的药用价值,越来越受到国内外的重视,国外报道从蛹虫草人工培养液中分离出虫草素,3′-氨基-3-去氧腺甙及肌氨酸氨基腺音。我们从蛹虫草菌丝中分离得6种成分:β-谷甾醇、麦角甾醇、D-甘露醇、腺嘌呤、腺苷和虫草素￣[1]。并对5批样品....     

HPLC定量分析冬虫夏草的主要核苷类有效成分

目的探讨冬虫夏草主要核苷类成分的定量分析方法.方法采用微量提取及HPLC-UV分析法.结果建立了冬虫夏草核苷类物质的微量提取方法,在优化的HPLC-UV色谱条件下,鸟嘌呤、胸腺嘧啶、腺嘌呤、腺苷和虫草素等5种冬虫夏草主要核苷类物质的标准品分离完全.精密度、稳定性和回收率实验表明,用HPLC-UV方法即可定量分析冬虫夏草的核苷类有效成分.用该方法检测到这5种核苷类物质含量在冬虫夏草子座部分与其虫体部分之间以及冬虫夏草居群间存在显著差异.结论冬虫夏草主要核苷类成分的有效定量分析方法的建立对冬虫夏草的品质评价及质量控制具有重要的现实意义,也为进一步研究影响冬虫夏草品质的因素并建立品质评价体系奠定了基础.     

冬虫夏草中核苷类化学成分的含量测定研究进展

通过检索、阅读文献,分析与归纳文献内容,综述近年来冬虫夏草中核苷类物质的的含量测定研究进展。包括HPLC法、毛细管电泳法、薄层色谱扫描法,以上含量测定方法各有特点,均可用于冬虫夏草中核苷类物质的含量测定。     

冬虫夏草的水溶性成分——核苷类化合物的研究

自西藏产冬虫夏草的子座中分得次黄嘌呤核苷、胸腺嘧啶、尿嘧啶和杂有少量鸟嘌呤的次黄嘌呤。以次黄嘌呤的含量最高。自虫体中得到微量次黄嘌呤、鸟嘌呤、腺嘌呤和腺苷。     

冬虫夏草与虫草发酵菌丝体的HPLC指纹图谱比较研究

目的:研究冬虫夏草与虫草发酵菌丝体的高效液相指纹图谱。方法:利用高效液相色谱法,梯度洗脱,测定冬虫夏草与虫草发酵菌丝体样品,色谱条件为:Agilent C18色谱柱(4.6mm×25mm,5μm),乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱,流速0.5mL/min,检测波长260nm。结果:测定冬虫夏草与虫草发酵菌丝体指纹图谱中共有6个峰为共有峰,并确定其中的3个色谱峰分别为尿嘧啶、腺苷、虫草素。结论:本研究所建立的方法可作为虫草发酵菌丝体质量标准制定的参考依据。     

毛细管电泳法测定青海不同产地冬虫夏草核苷类的含量

 目的通过毛细管电泳的方法,寻找青海省不同产地之间冬虫夏草的核苷类含量变化。方法采用Beckman P/ ACE^TMMDQ高效毛细管电泳仪,熔融石英毛细管57cm×75μm,有效长度50cm,自动压力(500 kPa)进样5s,检测波长254 nm,分离电压20 kV,温度25℃,运行缓冲液为0.2 mol/·L^-1硼酸(用5 mol·L^-1氢氧化钠溶液调pH 8.5)。进样前,毛细管分别以1mol·L^-1氢氧化钠溶液和运行缓冲液冲洗5 min。结果该方法快速简便,青海省不同产地间冬虫夏草核苷类成分含量有一定的差异。结论本方法能有效鉴别天然冬虫夏草中的核苷类成分,而冬虫夏草化学成分与生态因子的相关性还需要进一步研究。     

固相萃取结合HPLC测定蝉花菌丝体中多球壳菌素的含量

 目的建立蝉花菌丝体中多球壳菌素含量的固相萃取结合高效液相色谱测定法。方法高效液相色谱法,甲醇超声提取,固相萃取小柱纯化,ODS柱,流动相为乙腈-水(65∶35),流速1.0mL·min^-1,柱温30℃,检测波长203nm。结果多球壳菌素分离良好,加样回收率为98.95%,RSD为2.22%(n=6),在0.15～7.54μg内呈现良好的线性关系。结论该方法简便易行、灵敏、重现性好,可用于蝉花菌丝体中多球壳菌素含量的测定。     

HPLC测定虫草片中淫羊藿苷和腺苷的含量(英)

目的:建立高效液相色谱法测定虫草片中淫羊藿苷和腺苷的含量.方法:色谱柱:MetaChem Polaris ODS C18-A(4.6mm×250 mm,5μm),流动相:乙腈-水(梯度洗脱),检测波长:272 nm(淫羊藿苷),260 nm(腺苷),柱温:25℃,流速:1.0mL·min-1.结果:淫羊藿苷的线性范围为0.374～2.246μg,腺苷的线性范围为0.348～1.392μg.淫羊藿苷的加样回收率为99.43%,RSD为1.84%(n=6),腺苷的加样回收率为99.63%,RSD为1.29%(n=6).结论:该方法简便、快速、准确,可用于虫草片的质量控制.     

人工虫草与冬虫夏草HPLC特征图谱研究

目的以人工北虫草、发酵虫草菌粉和冬虫夏草为研究对象,建立高效液相色谱(HPLC)特征图谱。方法采用超声法提取虫草中的水溶性成分,HPLC建立虫草的特征图谱。采用Agilent ZORBAX SB-Aq色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-0.04 mol/L磷酸二氢钾溶液(B),梯度洗脱(0~16 min,0%A;16~38 min,0%→10%A;38~58 min,10%→15%A;58~65 min,15%→0%A),流速1.0 m L/min,柱温25℃,检测波长260 nm,进样体积20μL。运用国家药典委员会《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004 A)》,建立人工虫草与天然虫草HPLC特征图谱,同时指认了7个核苷类成分,并进行比较研究。结果本方法精密度、重复性、稳定性良好。以腺苷为参照峰,对11批冬虫夏草、10批人工北虫草和12批发酵虫草菌粉进行指纹图谱分析结果显示,其指纹图谱相似度分别为0.889~0.982、0.781~0.980、0.502~0.970。结论天然虫草的指纹图谱相似度较高,人工北虫草和发酵虫草菌粉指纹图谱的相似度较低。本方法可作为评价人工虫草和天然虫草质量的参考依据。     

冬虫夏草不同部位核苷类成分比较分析

目的：建立一种同时测定冬虫夏草中尿苷、肌苷、鸟苷、腺苷和虫草素5种核苷类成分含量的高效液相色谱法。方法：ZORBAX SB-Aq（150 mm×4.6 mm,5 μm）色谱柱,0.1%甲酸水溶液-乙腈梯度洗脱,检测波长260 nm,柱温30℃,流速0.8 mL·min-1。结果：对6批冬虫夏草样本子座、虫体和全草的核苷类成分进行了分析,结果发现冬虫夏草子座核苷类成分含量高于虫体和全草。结论：该方法重复性好,准确性高,可用于冬草夏草中核苷类成分的含量测定。     

HPLC法测定冬虫夏草中腺苷含量

采用甲醇为溶剂,提取冬虫夏草及其虫体、子座中的核苷类成分,用ＨＰＬＣ法测定腺苷的含量;色谱条件以μＢｏｎｄａｐａｋ Ｃ_(１８)（４．６ ｍｍ × ２５０ ｍｍ,１０μｍ）为色谱柱,０．０１ ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液（ｐＨ６．５）－ 甲醇（８５： １５）为流动相,检测波长 ＵＶ２６０ ｎｍ,ｒ＝０．９９９９,线性范围 ０．２～１μｇ,回收率１０４．５％。     

反相高效液相法测定虫草菌粉中核苷类成分的含量

目的　用反相高效液相色谱法测定冬虫夏草菌粉中核苷类成分 (腺苷、腺嘌呤、鸟苷、尿苷 )含量。方法　采用Agilent110 0高效液相色谱仪 ,PolarisC18分析柱 (4.6mm× 2 5 0mm) ,柱温 2 5℃ ,流速 0 .5～ 1.0mL·min-1。以乙腈 水梯度洗脱的方法同时测定 4个核苷含量。结果　 4个核苷的线性范围分别为 ,尿嘧啶 :0 .0 113～ 0 .4 5 2 μg(r =0 .9999) ;尿苷 :0 .0 0 84～0 .336 μg(r =0 .9999) ;腺嘌呤 :0 .0 0 5 1～ 0 .2 0 4 μg(r =0 .9998) ;腺苷 :0 .0 0 5 4～ 0 .2 17μg(r =0 .9999)。平均加样回收率分别为 ,尿嘧啶 10 1.4 % ,RSD为 1.85 % ,尿苷 96 .7% ,RSD为 1.2 6 % ,腺嘌呤 10 0 .8% ,RSD为 1.86 % ,腺苷 98.3% ,RSD为1.35 %。结论　实验表明 ,该方法灵敏度高、操作简便、重现性好、效率高。为全面评价虫草质量提供一个可靠方法     

HPLC法测定蛹虫草子实体及其培养基的虫草素含量

目的:建立蛹虫草子实体及其培养基中虫草素(Cordycepin)含量的测定方法。方法:采用高效液相色谱(HPLC)法,选用YMC-PackC18色谱柱(250×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-水(20:80),流速为1mL/min,检测波长为260nm,柱温为30℃,分析时间为20min。结果:蛹虫草子实体中虫草素含量为0.503mg/g,平均加样回收率(n=9)为100.8%(RSD=1.33%);蛹虫草培养基中虫草素含量为0.118mg/g,平均加样回收率(n=9)为101.7%(RSD=1.82%)。结论:本方法分离度好、精密度高、专属性强、灵敏度高,可用于蛹虫草子实体及其培养基的质量评价。     

RP-HPLC测定天然虫草与人工虫草中核苷类成分的含量

 目的分析不同来源的天然虫草与人工虫草中主要核苷类成分的差异。方法应用RP-HPLC检测18个样品中尿苷、腺嘌呤、腺苷、虫草素的含量。Symmetry Shield Rp18柱(3.9 mm×150 mm,5μm),以乙腈-水为流动相,梯度洗脱。流速0.2～1.2mL·min^-1,检测波长260 nm,柱温30℃。结果本法高效灵敏,重现性好。所测人工虫草核苷类成分的含量较天然虫草高,不同产地天然虫草4种主要的核苷类成分的差异较不同来源人工虫草的小。结论本法能有效鉴别虫草的核苷类成分,可用于天然虫草和人工虫草中核苷类成分的分析,评价不同来源虫草的质量。     

高效液相法测定多动安口服液中阿魏酸的含量

目的 :用反相高效液相色谱法测定多动安口服液中阿魏酸的含量。方法 :经大孔吸附树脂处理后 ,进样分析 ,采用Spherisob C1 8柱 (5μm,4.6mm× 3 0 0 mm) ,流动相 :甲醇∶ 1%醋酸溶液 (4∶ 6) ,检测波长 :3 13 nm,流速 :0 .5 ml/min,柱温 :45℃。结果 :阿魏酸在 0 .0 1～ 0 .0 9μg,(r=0 .9997)范围内呈线性 ,其加样回收率为 96.69%。结论 :实验方法简便 ,可靠 ,重现性好     

烫伤合剂中没食子酸和绿原酸的测定

目的：建立烫伤合剂中没食子酸和绿原酸的测定方法。方法：采用反相高效液相色谱法法进行定量分析,用Inertsil C8—3柱,乙腈-0．1％磷酸-四氢呋喃（14：85：1）为流动相,流速为1．0mL·min^-1,检测波长为290nm。结果：没食子酸和绿原酸的线性范围分别为21．55～215．5μg·mL-1和25．45～254．5μg·mL-1。平均加样回收率分别为98．40％和99．99％（n=6）。结论：此法简便、准确,具有良好的重现性和回收率,适用于烫伤合剂中没食子酸和绿原酸的同时测定。