抗rSjCTPI单克隆抗体检测血吸虫循环抗原的研究

为探讨抗重组血吸虫磷酸丙糖异构酶（rSjCTPI）的单克隆抗体检测血吸虫循环酶抗原在血吸虫病免疫诊断和疗效考核中的价值。制备日本血吸虫rSjCTPI表达蛋白,以此重组蛋白免疫小鼠,筛选出高效价的抗rSjCTPI单抗,建立以纯化的抗血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）的多克隆抗体（IgG）为捕捉系统,以酶标的抗rSjCTPI单抗为检测系统的酶联免疫吸附试验（P-M-ELISA）法检测血吸虫病人等血清。并对该法的敏感性、特异性、交叉反应以及疗效考核与常规的SEA-ELISA比较。结果获得了一株抗rSjCTPI的单克隆抗体,其抗体同型为IgG1。P-M-ELISA检测急性、慢性血吸虫病人、健康人以及华枝睾吸虫病人、肺吸虫病人血清的阳性率分别为100%、91.7%、0、0和0。而SEA-ELTSA为100%、98.3%、6.69%、10%和20%。P-M-ELISA法对30例同批血吸虫病人治疗前的阳性率和治愈后4个月的阴转率分别为100%和30%;而SEA-ELTSA分别为100%和10%。结果表明,应用抗rSjCTPI单抗检测血吸虫病人循环抗原的P-M-ELISA法具有较高的敏感性和特异性,并有一定的疗效考核价值。     

抗rSjCTPI单克隆抗体检测血吸虫循环抗原疗效考核价值研究

目的 进一步探讨抗重组血吸虫磷酸丙糖异构酶（rSjCTPI）的单克隆抗体检测血吸虫循环抗原对血吸虫病疗效考核的价值。方法 建立以纯化的抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）的多克隆抗体（IgG）为捕捉系统,以酶标抗rSjCTPI为检测系统的酶联免疫吸附试验（P-M-ELISA）法,分别对同批治疗前及治疗后2、4、6、12个月的血吸虫病人进行检测,并与常规检测抗体的SEA-ELISA法比较。结果 P-M-ELISA法对治疗前血吸虫病人检测阳性率为96.6%,而检测抗体的SEA-ELISA为98.3%,P-M-ELISA法对治愈后2、4、6、12个月血清循环抗原检测阴转率分别为15.3%、37.3%、52.0%、83.3%,而检测抗体的SEA-ELISA法分别为3.4%、6.8%、12.0%、16.7%。结论 表明该法既有较好的诊断价值,又有较好的疗效考核价值。     

多价单克隆抗体检测血吸虫循环抗原现场诊断血吸虫病的价值

采用多价单克隆抗体Dot-ELISA试验,检测了血吸虫病流行区居民血清219份,并以单克隆抗体Dot-ELISA、环卵沉淀试验和粪检作为对照.结果:多价单抗Dot-ELISA、单克隆Dot-ELISA、DGS-COPT和粪便孵化阳性检出率分别为20.6%、31.1%、36.1%、11.4%.多价单抗Dot-ELISA检出率明显低于DGS-COPT,两法总符合率为80.8%,25例粪阳病人3种血清学方法检出率分别为52.0%、88.0%、100.0%.提示:多价单抗Dot-ELISA阳性检出率仍处于较低水平,其敏感性并未提高.     

多价McAb—RIHA检测血吸虫循环抗原的应用研究

采用多价ＭｃＡｂ－ＲＩＨＡ检测５０６例不同疫区粪检阳性的血吸虫病人血清ＣＡｇ，累计阳性率为９０．３％，比用单价ＭｃＡｂ－ＲＩＨＡ提高了敏感性。３７５例下沉人的假阳性率为２．１３％，与２２例肺吸虫病人和６６例肝吸虫病人的交叉反应率分别为４．５％和０％。血吸虫病人经吡喹酮治疗后半年和１年，ＣＡｇ转阴率分别为７９．０％和９２．３％。结果表明该方法有较高的敏感性和特异性，可用于确诊病人的１年内考核疗效，操     

单克隆抗体双抗体夹心ELISA检测日本血吸虫病人循环抗原

本文用抗日本血吸虫肠相关抗原的单克隆抗体Ｓｊ１１６和Ｓｊ１０ｃ作双夹心ＥＬＩＳＡ检测粪检阳性的血吸虫病人血清中的循环抗原，阳性率达９３．４％。正常人假阳性率为６．７％。与肺吸虫、华支睾吸虫、旋毛虫及囊虫病的交叉反应分别为３．２％、０、１３．３％和１３．３％。     

检测血吸虫循环抗原的多价单克隆抗体诊断试剂盒的研制和应用

用杂交瘤技术生产抗血吸虫肠相关循环阳极抗原单克隆抗体与血吸虫卵糖蛋白单克隆抗体经混合后标记辣根过氧化物酶，制成Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ诊断试剂盒，检测轻、中、重不同疫区粪检阳性的血吸虫闰人血清中循环抗原，阳性率分别为８４．３％、８７．２％和９１．５％。     

单克隆抗体Dot—ELISA检测血吸虫病人循环抗原

制备抗日本血吸虫排泄分泌抗原单克隆抗体(McAb),应用于斑点酶联免疫吸咐试验(Dot-ELISA)检测血吸虫病人循环抗原.血吸虫病人血清的阳性率为80.9％(152/188),其中EPG为1～24、25～99和≥100的病人检出率分别为76.8％、86、6％和100％。血吸虫病人经吡喹酮治疗1年以上粪检阴性者50例,均为阴性.并殖吸虫病人、华支睾吸虫病人、丝虫病人和健康人血清均为阴性.McAb-Dot-ELISA操作简便,试剂用量少,肉眼判断结果,可用于血吸虫病的诊断和疗效考核。     

压电免疫传感器检测日本血吸虫循环抗原的研究

通过葡萄球菌蛋白A(SPA)将从感染兔血清 (InRS)或免疫兔血清 (ImRS)中纯化的IgG抗体固定于镀金的石英晶片上 ,制成一种新型的液相压电免疫传感器 ,用于检测感染兔血清中的日本血吸虫循环抗原 (SjCAg)。分别比较了提纯前血清、部分纯化抗体和完全纯化抗体 ,以及感染和免疫兔血清纯化IgG的固定效率和检测效果。结果表明 ,以完全纯化抗体的效果最好 ,免疫兔血清纯化IgG优于感染兔血清纯化IgG。同时 ,还研究了SPA的固定浓度、检测时间、血清最适稀释度及晶体的再生性等。用该法检测了不同感染度的兔血清 ,发现频移值变化在一定范围内与感染度成正比     

检测血吸虫循环抗原的多价单克隆抗体诊断试剂盒的研制和应用

用杂交瘤技术生产抗血吸虫肠相关循环阳极抗原（ＣＡＡ）单克隆抗体与血吸虫卵糖蛋白单克隆抗体经混合后标记辣根过氧化物酶（ＨＲＰ），制成Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ诊断试剂盒，检测轻、中、重不同疫区粪检阳性的血吸虫病人血清中循环抗原，阳性率分别为８４．３％、８７．２％和９１．５％。累计阳性率为８９．２％（６１９／６９４）。对健康人、肝吸虫、肺吸虫病人血清均未出现阳性反应，显示有较高的敏感性和特异性。ＥＰＧ＞８０的病人循环抗原检出率高干ＥＰＧ／８０的病人。说明循环抗原检出率与感染度有关。血吸虫病人经吡喹酮治疗后半年和１年循环抗原转阴率分别为７１．４％和８８．６％。结果表明．该试剂盒可用于确诊病人和考核疗效。试剂盒质量稳定，操作简便快速，整个试验可在１小时内完成，且不需特殊仪器，适于现场大规模查病应用。     

组合单克隆抗体多表位检测日本血吸虫循环抗原的研究

目的探讨抗肠相关抗原单克隆抗体（单抗）JPG5和抗虫卵可溶性抗原单抗JPS6、JPG5＋JPG1组合和JPS6＋JPG1组合对血吸虫循环抗原（CAg）的诊断效能。方法采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）对慢性血吸虫病、急性血吸虫病、晚期血吸虫病、卫氏并殖吸虫病、华支睾吸虫病、乙型肝炎患者血清,以及治疗前、治疗后半年、治疗后1年的慢性血吸虫病疗效考核血清进行CAg单位点和多位点检测。结果JPG5检测慢性血吸虫病患者的敏感性和特异性分别为74.3%和96.8%,JPS6分别为78.7%和95.3%;两株单抗与卫氏并殖吸虫病、华支睾吸虫病及乙型肝炎患者血清的交叉反应率分别为15.2%、15.6%、3.2%和21.5%、15.6%、16.0%。JPG5检测治疗后1年的慢性血吸虫病患者血清CAg阴转率高于JPS6。JPG5＋JPG1组合检测慢性血吸虫病患者的敏感性和特异性分别为80.1%和93.7%,JPS6＋JPG1组合分别为73.5%和96.1%;两种组合与卫氏并殖吸虫病、华支睾吸虫病及乙型肝炎患者血清交叉反应率分别为21.5%、15.6%、18.0%和22.8%、15.6%、16.0%。两种组合多位点检测治疗后1年的慢性血吸虫病患者血清CAg阴转率分别为66．7％和45．5％。结论JPG5、JPS6可用作CAg检测的备选探针。JPG5＋JPG1组合与JPS6＋JPG1组合对CAg的诊断效能相近;较之单位点检测,多位点检测敏感性无明显提高。     

单克隆抗体Dot-ELISA检测血吸虫病循环抗原的研究.Ⅰ.

将血吸虫肠相关阴极抗原的单克隆抗体3D8A联结过氧化物酶后用于直接法Dot-ELISA检测急性、慢性与晚期血吸虫病人血清中循环抗原,阳性率分别为90.6、83.2及30.7％。正常人血清及非寄生虫感染病人血清均未见阳性反应。EPG>100组血清阳性率及抗原水平高于EPG<100。慢性血吸虫病人经吡喹酮治疗后一年,粪检阴性者大部分血清抗原转为阴性;粪检阳性者血清检查仍为阳性。结果表明,肠相关阴极抗原单克隆抗体3D8A能用于Dot-ELISA检测各期病人血清中循环抗原,并能反映病人感染度与药物治疗效果。     

血吸虫循环抗原检测的现场试验Ⅰ

将血吸虫肠相关趋阴极抗原的单克隆抗体用于Dot—ELISA,共检测2175份血清,其中急性血吸虫病血清210份,阳性率为91.9％;慢性血吸虫病血清798份,阳性率为86.7％;正常人血清752份,假阳性率为1.1％;除肺吸虫病外,对其他寄生虫病或非寄生虫感染疾病血清无明显交叉反应。用单盲法Dot—ELISA检测3批血清,结果敏感性为86.5％～95.1％;特异性为96.9％～100.0％。检测流行区居民547份血清,Dot—ELISA阳性反应130份;粪检阳性72例。两者均为阳性者55例,相符率为76.4％。上述结果表明,Dot—ELISA检测循环抗原确实具有较好的敏感性与特异性,适于大规模应用及流行病学调查。     

血吸虫循环抗原检测的现场试验Ⅱ

制备血吸虫病单克隆抗体诊断试剂盒,将其用于Dot—ELISA,分别检测江苏、安徽流行区急性血吸虫病患者及四川、江西、安徽流行区慢性血吸虫病患者血清中循环抗原。结果不同流行区Dot—ELISA反应的平均“+”值、阳性率和抗原滴度的几何均数不同,循环抗原水平可以反映流行区的疫情。另将Dot—ELISA、ELISA检测四川慢性血吸虫病人治前及治后半年、1年的血清循环抗原及抗体,结果循环抗原在病人治疗后很快下降,治后1年77.8％(35/45)病人的循环抗原转为阴性。循环抗体在病人治疗后也逐渐下降,但速度甚为缓慢。治疗后1年,仅21.7％(10/46)病人转为阴性。上述结果表明,循环抗原能更直接、更真实地反映防治效果。     

McAb—RIHA法检测日本血吸虫病患者血清循环抗原的效果

本文报告了用抗日本血吸虫肠相关趋阴极抗原单克隆抗体致敏血球建立反向间接血凝试验，对６６例急性血吸虫病，１２３例慢性血吸虫病，５７例肝吸虫病，５４例钩虫病和８２例非疫区健康人血清的检测效果，结果显示，该方法检测急、慢性血吸虫病轿清的生分别达到９８．５％和８１．３％，与肝吸虫病血清交叉反应率为１０．５％，与钩病血清未交叉反应，与非疫区健康人血清仅有１．２％的假阳性反应。与平行对照的ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ     

抗血吸虫成虫表膜抗原单克隆抗体检测循环抗原及/或免疫复合物的实验研究

本文报告用单克隆抗体检测血吸虫感染兔血清中循环抗原及/或免疫复合物的实验结果.以血吸虫成虫盐水浸液抗原ACSE免疫BALB/c小鼠,取其脾脏与SP2/0骨髓瘤细胞融合获得抗成虫表膜的单克隆抗体8SE_4。此抗体经DE_(52)柱层析提纯后制成HRP-8SE_4结合物.血清样本与HRP-8SE_4作用后加入PEG(mw·6000)沉淀免疫复合物,然后加入底物OPD显色,于492nm读数,OD值即反映血循环中抗原及/或免疫复合物的量。实验结果表明5只重感染兔(接种尾蚴15O0～2000条)于感染后6wk可见OD值明显升高,达到感染前的1.9～4.5倍。5只轻感染兔接种尾蚴10～500条亦于感染6wk后OD值明显上升,至感染后8wk达高峰,此后至11wk剖杀时仍维持在较高水平.5轻感染兔检虫数为4～326条,未见虫荷与检测结果有明显相关。本实验结果提示感染兔血清中有循环表膜抗原及/或其复合物存在。至于检测该抗原能否用于考核治疗效果,有待进一步研究。     

单克隆抗体斑点ELISA检测血吸虫病患者循环抗原的现场应用

我们试用中国预防医科院上海寄研所提供的血吸虫单克隆抗体酶结合物试剂盒,在成都市12个区、县,25个乡、镇血吸虫病查病工作中,大面积应用7000余人,发现其重现性好,结果稳定。与粪孵阳性者符合率为64.08％(41/64),与肝吸虫感染者及其它肝病患者交叉反应为2.17％(1/46)及4％(2/50)。41例血吸虫病人正规治疗9个月后阴转率为75.6％。首次将本法用于耕牛查病,与粪孵符合率为86.6％(26/30)。本法操作简便,省工省时。经用于成都轻疫区(大部份乡已达标)血吸虫病监测取得了良好的社会效益和经济效益。     

日本血吸虫感染中循环抗原动态变化及其机制研究

探讨日本血吸虫感染中循环抗原动态变化及其机制。感染日本血吸虫的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠淋巴结Ｂ细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合，制备抗血吸虫循环抗原不同表位的单克隆抗体组合后为探讨针，检测日本血吸虫病患者和健康人血清；晚期血吸虫病患者脾血和外周血；感染日本血吸虫兔和小鼠的门脉血和外周血。