红色毛癣菌表型稳定性研究

为探讨红色毛癣菌表型的稳定性,所有菌株采用沙堡琼脂试管培养基(SDA)培养。菌株鉴定及分型依据菌落的特征及色素,大小分生孢子的形态,尿素酶试验和毛发穿孔试验。对近期临床分离的10株红色毛癣菌和1株标准株,间隔4周传代1次,共传4次。207株红色毛癣菌共分离出4个表型,其中绒毛型占首位(45.4%),沟纹型(24.1%),羊毛型(20.8%),粉末型(9.7%),未见颗粒型。保存1年后207株有54株发生形态变异,变异率为26.1%,沟纹型变异最小,相对稳定。11株红色毛癣菌传代后菌落形态或色素发生变异。红色毛癣菌表型不稳定,保存和传代后的菌落形态或产色均易发生变异;沟纹型变异率最低。     

红色毛癣菌菌落表型和基因型的分型研究

目的:确定红色毛癣菌菌落表型和基因型的相关性以及与感染部位的关系。方法:收集红色毛癣菌临床分离株138株,采用传统培养方法对红色毛癣菌进行表型分型,利用红色毛癣菌特异性引物扩增TRS-1区重复序列进行种内基因分型,并分析检测结果与感染部位的相关性。结果:138株红色毛癣菌共分离出3种菌落表型:绒毛型、沟纹型和粉末型;分离出5型基因型,其中Type1 64株,Type2 18株,Type3 19株,Type4 12株,Type5 25株。红色毛癣菌的表型和基因型与感染部位均无相关性(均P0.05),红色毛癣菌的菌落表型与基因型有一定的相关性(P0.05)。结论:红色毛癣菌基因型与菌株来源有关而与感染部位无关,可为判断复发和再感染提供依据。     

红色毛癣菌和须癣毛癣菌的PCR指纹分析

红色毛癣菌和须癣毛癣菌的传统鉴别主要依据培养形态、生理生化等方法,但红色毛癣菌的菌落产红现象受培养基类型、 pH、培养温度等因素的影响 [1],我们应用 PCR方法,以微小卫星 DNA引物,对这 2种癣菌的基因组 DNA进行扩增,可以在很短时间内把它们区分开来。 泳道 1为 Markerλ DNA/EcoRⅠ＋ HindⅢ,泳道 2、 7、 8、 9为红色毛癣菌,泳道 3～ 6为须癣毛癣菌 图 1 (GACA)4作引物的 PCR扩增结果 一、材料与方法 (一 )实验菌株：本研究采用红色毛癣菌临床分离株 23株 ,须癣毛癣菌临床分离株 11株。红色毛癣菌中 11株来自上海…     

红色毛癣菌的基因分型研究

目的 探讨探针与DNA印迹杂交法对红色毛癣菌的基因分型并分析其基因型与来源地区的相关性。方法 用溴化十六烷基三甲铵（CTAB）法提取DNA，以皮肤癣菌的特异性引物NS5[5′-AACTAAAGGAATTGACGGAAG-3′]与ITS4[5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′]为引物，以红色毛癣菌的标准菌株为模板，用PCR法扩增出其rDNA部分18S区，ITSI区，5.8S区和ITSⅡ区为探针，用随机引物法将探针标记^32P，用EcoRI酶切基因组DNA，采用DNA印迹的标准流程将酶切的基因组DNA与探针杂交；显示的不同带型，以此作为红色毛癣菌基因分型的依据。结果 所试49株红色毛癣菌（南京21株，大连26株，北京2株）分为20型（A-T型），其中A-C型占48.98%。南京株绝大多数为3条带，大连株大部分为4条带。结论 用ITS区域探针与DNA印迹杂交法对红色毛癣菌基因组分型敏感性强，分辨力高；南京与大连两地区红色毛癣菌DNA分型具有明显差异，DNA分型对红色毛癣菌病的流行病学，临床疗效的判定以及指导用药均具有重要价值。     

尿素-吲哚培养液快速鉴别石膏样毛癣菌和红色毛癣菌

石膏样毛癣菌（石毛）和红色毛癣菌（红毛）是最常见的皮肤癣菌［１］，因菌落形态及显微结构相近，常不易鉴别。我们用尿素－吲哚培养液对医学真菌中心保藏的３个属１７种皮肤癣菌标准株和临床分离的３个属７种１３８株皮肤癣菌进行实验观察，现总结报告如下。一、菌种标准株为中国微生物菌种保藏管理委员会医学真菌中心保藏的菌种，分别是：毛癣菌属：红毛（ＩＤ００００１），石毛（ＩＤ０００１２），许兰氏毛癣菌（许兰：ＩＤ００００２），紫色毛癣菌（紫毛：ＩＤ００００４），断发毛癣菌（断毛：ＩＤ０００１８），猴类毛癣菌（猴毛…     

须癣毛癣菌基因分型的研究

目的探讨ITS区域的探针与DNA印迹杂交法对须癣毛癣菌的基因分型,并分析基因型与来源地区的相关性。方法用溴化十六烷基三甲铵(CTAB)法提取DNA,以皮肤癣菌的特异性引物NS5[5-′AACTTAAAGGAATT-GACGGAAG-3′]与ITS4[5-′TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′]为引物,以须癣毛癣菌的标准菌株为模板,用PCR法扩增rD-NA部分18S区、ITSⅠ区、5.8 s区和ITSⅡ区为探针,随机引物法将探针标记,EcoR1酶切基因组DNA,按ECL试剂盒标准流程将酶切的基因组DNA与探针杂交;根据杂交的不同带型而分型。结果所试35株须癣毛癣菌分为14型(A~N型),A,B,C,D四型占62.86%。南方株以A和C型为主,北方株以B和D型为主。结论用ITS区域探针与DNA印迹杂交法对须癣毛癣菌基因组分型敏感性强、分辨力较高;南北方须癣毛癣菌DNA分型存在一定差异;DNA分型对须癣毛癣菌病的流行病学调查和菌学的生物学研究具有重要价值。     

播散型红色毛癣菌肉芽肿5例

通过对1998～2004年我院5例播散型红色毛癣菌肉芽肿患者的临床资料回顾性分析,探讨播散型红色毛癣菌肉芽肿的临床特征、病理表现及治疗方案。5例均口服伊曲康唑治疗,4例随诊未见复发,1例经常复发,与其疗程不足有关。     

甲真菌病患者多部位红色毛癣菌分离株的DNA分型

目的探讨甲真菌病患者多部位红色毛癣菌感染不同部位分离菌株基因型的差异。方法采用PCR扩增红色毛癣菌rDNA非转录间隔区(NTS)中Trs-1片段,检测基因多态性并比较。结果30株受试菌株按照PCR指纹图共分为3型,基因型分布与感染部位无相关。10例受试患者中,5例不同感染部位分离出的菌株基因型存在差异。结论甲真菌病患者多部位红色毛癣菌感染可能为多菌株引起,部分患者可能存在多菌株的混合感染。     

亚硝酸钠联合抗真菌药物对红色毛癣菌的体外药敏检测

目的探讨亚硝酸钠联合不同浓度抗真菌药物对红色毛癣菌的体外抗菌活性。方法实验参照美国临床实验室标准化研究所(CLSI)颁布的M38-A2方案和相关文献对临床分离的30株红色毛癣菌进行体外药敏实验。其中亚硝酸钠的MIC值定义为与生长对照相比,肉眼观察出现80%生长抑制的最低药物浓度。采用分数抑菌浓度(FIC)评定两药联合效果。FIC≤0.5,两药为协同作用;0.54,两药为拮抗作用。结果亚硝酸钠和伊曲康唑、特比萘芬以及伏立康唑不同浓度联合,0.54所占比例较高,主要为拮抗作用。亚硝酸钠与高浓度氟康唑、卡泊芬净联合,FIC≤0.5所占比例较高,最高可达100%,协同作用最强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论亚硝酸钠与高浓度氟康唑、卡泊芬净联合,体外对红色毛癣菌有较强的协同作用。     

盐酸小檗碱联合抗真菌药物对红色毛癣菌的体外药敏实验

目的观察盐酸小檗碱联合不同浓度抗真菌药物对红色毛癣菌的体外抗菌活性。方法参照美国临床实验室标准化研究所(CLSI)颁布的M38-A2方案和相关文献对临床分离的30株红色毛癣菌进行体外药敏实验。其中盐酸小檗碱的MIC值定义为与生长对照相比,肉眼观察出现80%生长抑制的最低药物浓度。采用分数抑菌浓度(FIC)评定两药联合效果。FIC≤0.5,两药为协同作用;0.54,两药为拮抗作用。结果盐酸小檗碱和不同浓度伊曲康唑联合,主要为无关作用。盐酸小檗碱和不同浓度特比奈芬、伏立康唑联合,均为拮抗作用。16.0μg/mL氟康唑组与盐酸小檗碱联合时FIC≤0.5所占比例为83.33%,协同作用最强;2.0～8.0μg/mL卡泊芬净组与盐酸小檗碱联合时,FIC≤0.5所占比例最高,均为63.33%,协同作用最强,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论盐酸小檗碱与高浓度氟康唑、卡泊芬净联合,体外对红色毛癣菌有较强的协同作用。     

红色毛癣菌基因型与表型的研究

目的 探讨红色毛癣菌基因型与表型、侵犯部位及其来源地区的相关性.方法 基因分型采用ITS区域探针与DNA印迹杂交法,表型分型采用传统方法.结果 所试49株红色毛癣菌(南京21株、大连26株、北京2株)分为20型(A-T型),其中A型9株均为大连株;B型9株中7株为南京株;C型6株均为南京株.5种表型除颗粒型外其他4型均有A型,17株绒毛型和7株沟纹型B型占居首位,6株羊毛型和17株粉末型A型占居首位.分离自甲癣的21株以C型为主;股癣10株和体癣6株以A型为主;足癣8株,B型占居首位;头癣4株G型占居首位.结论 红色毛癣菌基因型与表型、侵犯部位及其来源地区可能具有一定的相关性.     

鲁比切克毛癣菌致体癣一例

【摘要】 患者男，54岁，右侧臀部红斑伴瘙痒半年，皮损逐渐扩大，出现脱屑。体检见右侧臀部红色斑片，覆散在鳞屑，边界清楚，边缘略高于皮面，鳞屑明显。真菌学检查：取皮屑行10% KOH直接镜检，见带有折光性的透明菌丝。皮屑真菌培养，培养物在形态学、生理学和遗传学上有以下几个方面特征：①沙氏葡萄糖琼脂培养基上菌落呈绒毛状，马铃薯葡萄糖培养基培养产红色色素，中央有紫红色色素颗粒形成；②小培养见梨形或棒状小分生孢子，圆柱状大分生孢子，丰富的节孢子；③尿素酶试验阳性，毛发穿孔试验阴性。取培养菌落提取DNA进行分子生物学鉴定，扩增菌株rDNA的ITS1-4区，测序结果与已知的鲁比切克毛癣菌或红色毛癣菌ITS1-ITS4片段序列进行比对，显示完全一致。分离菌株鉴定为鲁比切克毛癣菌。诊断：鲁比切克毛癣菌所致体癣。治疗：口服特比萘芬片0.25 g·kg-1·d-1，2周后皮损消退。     

First report on autochthonous urease-positive Trichophyton rubrum (T. raubitschekii) from South-east Europe

BACKGROUND: Trichophyton raubitschekii is a dermatophyte belonging to the T. rubrum complex and is differentiated principally by its positive urease activity and production of profuse macroconidia and microconidia in culture. It is classically isolated from African, South-east Asian and Australian aboriginal patients with tinea corporis or tinea cruris. OBJECTIVES: This study was undertaken to screen Greek and Bulgarian clinical isolates identified as T. rubrum for T. raubitschekii and to delineate these strains by two molecular methods used for the first time in T. rubrum epidemiological studies. METHODS: Ninety-five Greek and 10 Bulgarian strains, originating from various body sites, initially identified as T. rubrum, were screened for urease activity. The biochemical properties and morphology of the urease-positive strains were determined. Strains were delineated with polymerase chain reaction (PCR)-ribotyping amplifying repeat elements of the intergenic spacer region and by PCR fingerprinting. RESULTS: Five Greek and one Bulgarian T. raubitschekii strains were identified comprising isolates from patients with tinea manuum (one), tinea corporis (one), tinea cruris (one) and tinea unguium (three). Only one strain had the classical T. raubitschekii microscopic morphology, whereas the remaining five presented a dominant arthroconidial phenotype. Both typing methods clustered all T. raubitschekii and T. rubrum isolates together in the same group, indicating strain homogeneity in the genetic regions examined. CONCLUSIONS: The reported isolation of T. raubitschekii in the Balkan and South-eastern Mediterranean regions extends the geographical distribution of this species. As the more primitive T. raubitschekii probably represents the parental population of T. rubrum, the Greek and Bulgarian T. raubitschekii strains could represent a remnant of the T. rubrum spread that took place after the First World War, rather than being a recent epidemiological event.     

Asthma induced by allergy to Trichophyton rubrum

The worldwide incidence of asthma and of allergic respiratory diseases is increasing (Akiyama K. 'Environmental allergens and allergic diseases.' Rinsho Byori 1997;45(1):13. D'Amato G, Liccardi G, D'Amato M. Environment and development of respiratory allergy. II. Indoors. Monaldi Arch Chest Dis 1994;49(5):412. Weeke AR. Epidemiology of allergic diseases in children. Rhinol Suppl 1992;13:5. Ulrik CS, Backer V, Hesse B, Dirksen A. Risk factors for development of asthma in children and adolescents: findings from a longitudinal population study. Respir Med 1996;90(10):623.) This has been attributed to several factors, including lifestyle changes and an expanding variety of potential causative allergens. Management of asthma entails preventive and acute medications, immunologic therapies, and removal of the identified allergen(s) from the patient's environment. Without the latter, patients may not experience full symptomatic relief. This case report describes a patient who developed bronchial asthma subsequent to an infection of tinea pedis and pedal onychomycosis; antifungal management resulted in full resolution of his tinea pedis, onychomycosis and asthma.     

HaCaT细胞对红色毛癣菌生长的抑制作用

目的 探讨角质形成细胞对红色毛癣菌生长的抑制作用.方法 将HaCaT细胞采用含10%小牛血清的DMEM培养液,5%CO2环境下,37 ℃孵育至80%融合时,弃去培养液,加入用无血清DMEM配制的菌丝段悬液共孵育(浓度0.1×105/mL～1.0×105/mL),并以菌丝段悬液作为阴性对照.分别于4 h、8 h、16 h和24 h制备共孵育后的菌丝段悬液,进行台盼蓝染色计数和菌落计数,对真菌生长状况进行评价并计算真菌生长抑制率.结果 在细胞和菌丝段共孵育4 h、8 h、16 h和24 h,台盼蓝染色法测得的菌生长抑制百分数分别为46.8%±8.0%、64.0%±5.5%、76.3%±7.7%和39.5%±4.9%;菌落计数法测得菌生长抑制百分数分别为39.7%±4.9%、58.0%±8.9%、68.3%±7.4%和39.9%±5.5%.结论 HaCaT细胞对体外培养的红色毛癣菌有一定的抑制作用.     

多发性红色毛癣菌病患者不同部位菌株的分子鉴定

目的 用形态学、生物化学和分子生物学方法鉴定和分析从一例多发性皮肤癣菌病患者6个患病部位分离的菌种和菌株相关性。方法 6个部位的分离株先用形态学和生化方法鉴定,再用PCR扩增ITS（内转录间隔区）经序列分析证实全为红色毛癣菌。利用红色毛癣菌特异的随机扩增多态性（RAPD）和串联重复亚单位1和2（Trs-1/Trs-2）的PCR扩增产物判断6菌株基因结构的异同。结果 RAPD可将6株红色毛癣菌分为5个带型。Trs-1扩增产物可将6株菌分为3个带型,并能区分RAPD未能区分的菌株。结论 用RAPD、Trs-1/Trs-2的PCR扩增发现此多发性红色毛癣菌病患者6个感染部位的菌株均不相同,提示同一患者感染的多源性和多克隆性。