雄黄对HL—60／ADR作用的初步研究

目的：探讨中药雄黄对HL－60／ADR耐药细胞在抑制生长、逆转耐药、诱导凋亡方面的作用和影响。方法：（１）MTT比色法观察对细胞的换制;（2）用免疫组化法检测细胞Pgp的变化;（3）流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：（1）雄黄抑制HL－60／ADR耐药细胞的生长,药物浓度与HL－60／ADR细胞生长抑制率之间呈指数关系;（2）随着药物浓度的增加和时间的推移,HL－60／ADR细胞中MDR基因的表达产物Pgp阳性率逐步降低;（3）随着药物浓度的增加,HL－60／ADR细胞凋亡率增加。结论：雄黄可抑制HL－60／ADR 细胞生长,逆转其耐药,促进细胞凋亡,与剂量呈依赖性,其机制可能与Pgp表达下降有关。     

HL60/ADM的耐药性及逆转研究

目的：研究人类白血病多药耐药细胞株HL60／ADM对8种常用化疗药的耐药性及环孢菌素A(CsA)对其耐药的逆转作用。方法：MTT比色法检测细胞耐药性及CsA对细胞耐药性的影响，流式细胞仪检测细胞内柔红霉素(DNR)的浓度。结果：HL60／ADM对DNR、ADM、VCR、Har、VP16、MIT交叉耐药，对DNR耐药性最强，对Acla和Ara-c基本不耐药。CsA使HL60／ADM细胞内药物浓度增加，而对HL60的胞内药物浓度基本无影响。结论：HL60／ADM对Acla基本不产生耐药性，阿克拉霉素可能成为治疗白血病和克服白血病多药耐药性的重要药物。CsA对HL60／ADM的耐药性有部分逆转作用。     

环孢霉素A逆转Pgp多药耐药机理的研究

目的 控讨环孢霉素A（CsA)逆转糖蛋白Pap耐药细胞株K562/ADR耐药的机理。方法 采用RT-PCR、荧光法、MTT和共聚焦激光扫描镜等方法，研究CsA对柔红霉素（DNR）在Pgp耐药细胞株K562/ADR蓄积、毒性及分布的影响。结果 CsA可明显增加DNR在耐药细胞内的蓄积，恢复DNR在耐药细胞核、浆的弥漫分布，提高耐药细胞对DNR的敏感性。结论 CsA通过增加耐药细胞内化疗药物含量和逆转化疗药物异常分布的作用，恢复耐药细胞对化疗药物的敏感性。     

五味子乙素对转染多药耐药1基因的MCF-7细胞的多药耐药逆转作用

目的 探讨五味子乙素(SchB)对转染多药耐药1基因(MDR1)的人乳腺癌细胞MCF-7的多药耐药逆转作用及相关机制。方法 将人MDR1基因导入MCF-7细胞,形成耐药细胞株MCF-7／MDR1;用该细胞株为模型评价SchB的体外逆转多药耐药作用,用MTT法进行化疗药物单独或与SchB联合作用时对耐药细胞的IC50比较,计算逆转倍数。结果 转染细胞MCF-7／MDR表现为P糖蛋白高表达,对阿霉素、长春新碱、紫杉醇、高三尖杉酯的抗药性均增加;SchB(25μmol／L)显著减少阿霉素、长春新碱、紫杉醇和高三尖杉酯对MCF-7／MDR细胞的IC50,逆转倍数达6．03-23．94倍;SchB(25μmol／L)使MCF-7／MDR细胞对若丹明123的胞内积聚增加约5倍。效果与维拉帕米10μmol／L浓度时相当;但SchB(25μmol／L)不影响MCF-7／MDR细胞的P-糖蛋白表达。结论 SchB能有效逆转转染MDR1的MCF-7细胞的多药耐药,其机制可能是抑制了P-糖蛋白的药物外排生物学活性。     

多药耐药细胞系HL-60/Mx的建立

目的 探讨建立多药耐药（MDR）白血病细胞系的简便方法。方法 HL－60细胞反复暴露于浓度递增的米托蒽醌（Mx）培养液中，暴露间期维持低浓度培养；MTT法检测耐药性改变，并对其P糖蛋白（P－170）、多药耐药相关蛋白（MRP）表达进行免疫组化检测。结果 ①HL－60／Mx细胞系对多种化疗药物产生耐药。②MRP阳性表达率增高。结论 本方法为建立耐药HL－60细胞系的有效方法。     

重组腺病毒介导MRP反义RNA逆转人肝癌细胞多药耐药表型的体外实验研究

目的探讨重组腺病毒介导的多药耐药相关蛋白（MRP）反义RNA对阿霉素诱导的人肝癌耐药细胞株SMMC-7721／ADM多药耐药表型的体外逆转作用。方法应用自行构建的携带反义MRP的重组腺病毒（Ad—Asmrp）,在体外转染人肝癌耐药细胞,测定转染后细胞对阿霉素（ADM）及柔红霉素（DNR）的半数致死量（IC50）并计算耐药倍数（RF值）;在转染后不同时间点用流式细胞仪动态测定细胞对DNR摄取的变化及细胞膜表面P。。表达、并用RT—PCR反映细胞MRP之mRNA水平的变化。结果携带MRP反义RNA的重组腺病毒转染后的人肝癌耐药细胞对ADM、DNR的IC50分别为0．487μg／ml、0．328μg／ml,RF值分别为97．4、109．3,RF值分别下降36．8和35．4。在转染后24h,MRPmRNA水平开始下降并呈持续下降趋势（P〈0．01）,48h后伴有P190蛋白表达的持续下降（P〈0．01）,二者趋势一致。转染后48h,经流式细胞仪测得细胞内DNR浓度明显上升（P〈0．01）。结论重组腺病毒介导的MRP反义RNA可有效封闭MRP基因表达,在体外实验中能增加人肝癌耐药细胞株对化疗药物的敏感性,对肝癌耐药细胞的MDR表型有较好的逆转作用。     

槲皮素逆转HL-60/ADR多药耐药机制的研究

目的探讨槲皮素在体外逆转耐药细胞株HL-60/ADR的多药耐药.方法以HL-60/ADR细胞为研究对象,用RT-PCR法检测耐药基因MRP1的表达及槲皮素对其表达的影响;采用共聚焦激光扫描显微镜观察槲皮素作用前后柔红霉素(DNR)在耐药细胞HL-60/ADR内亚细胞结构分布的改变.结果 HL-60/ADR中有MRP1的过量表达,且槲皮素能下调该基因的表达;槲皮素能恢复DNR在HL-60/ADR细胞中的异常分布,回归其作用靶点,逆转耐药.结论 DNR在耐药细胞中的异常分布与肿瘤细胞耐药基因形成有关,槲皮素在体外直接抑制MRP1功能,恢复DNR在细胞内的分布.     

槲皮素逆转HL-60/ADR多药耐药机制的研究

目的探讨槲皮素在体外逆转耐药细胞株HL-60/ADR的多药耐药.方法以HL-60/ADR细胞为研究对象,用RT-PCR法检测耐药基因MRP1的表达及槲皮素对其表达的影响;采用共聚焦激光扫描显微镜观察槲皮素作用前后柔红霉素(DNR)在耐药细胞HL-60/ADR内亚细胞结构分布的改变.结果 HL-60/ADR中有MRP1的过量表达,且槲皮素能下调该基因的表达;槲皮素能恢复DNR在HL-60/ADR细胞中的异常分布,回归其作用靶点,逆转耐药.结论 DNR在耐药细胞中的异常分布与肿瘤细胞耐药基因形成有关,槲皮素在体外直接抑制MRP1功能,恢复DNR在细胞内的分布.     

蟾酥注射液逆转HL60/阿霉素细胞多药耐药性机制研究

探讨蟾酥注射液（CHS）对人类白细胞多药耐药细胞系HL60/阿霉素细胞的逆转作用机制。方法 MTT法测定CHS预作用后HL60/阿霉素细胞对阿霉素的敏感性；流式细胞术考察 CHS 对HL60/阿霉素细胞周期的影响；免疫组化考察CHS对HL60/阿霉素细胞 NF-κB、MRP、GST-π、iNOS 蛋白表达的调节作用。结果 CHS 可将阿霉素对 HL60/阿霉素细胞的 IC50值由34.1971 μmol/L降至17.4393 μmol/L，逆转倍数为1.9609倍；FCM显示CHS作用后HL60/阿霉素阻滞于G0/G1期、G2/M期，降低进入S期比例，并出现凋亡峰；免疫组化结果显示，CHS能下调HL60/阿霉素细胞中MRP、GST-π表达，上调NF-κB、iNOS的表达。结论 蟾蜍注射液逆转HL60/阿霉素细胞的多药耐药性可能是通过下调MRP、GST-π的表达，上调NF-κB、iNOS的表达，促进HL60/阿霉素细胞凋亡，从而增加HL60/阿霉素细胞对药物的敏感性。     

包载反义RNA重组腺病毒微球体外逆转肝细胞癌MRP的表达

目的 了解包载反义RNA重组腺病毒微球对肝细胞癌多药耐药相关蛋白(MRP)的作用。方法 采用可降解的生物材料聚乳酸-聚乙烯醇(PELA)包被携带反义MRP基因的重组腺病毒制备的微球转染人肝癌耐药细胞株HepG2／ADM，48h及120h后以MTT、法检测耐药细胞的阿霉素半数抑制浓度(IC50)；流式细胞仪检测细胞内红色荧光强度，以荧光指数代表柔红霉素(DNR)浓度；以β-actin为内参照，用RT-PCR法观察转染48h及120h后耐药细胞MRP mRNA表达量的高低。结果 HepG2／ADM耐药细胞48h及120h阿霉素IC50为9．72mg／L和4．15mg／L；HepG2／ADM细胞内DNR红色荧光强度明显升高，转染Adv微球后48h及120h MRP mRNA／β-actin的比值分别较转染前降低16．7％及63．6％。结论 包载反义RNA重组腺病毒微球可有效抑制MRP mRNA的表达，增加HepG2／ADM耐药细胞内化疗药物的浓度，提高耐药细胞对化疗药物的敏感性，为进一步研究体内逆转肝癌耐药提供实验基础。     

白血病细胞株HL60和HL60/DNR的多药耐药性

目的研究白血病细胞的多药耐药性（ＭＤＲ）。方法用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ＨＬ６０，ＨＬ６０／ＤＮＲＭＤＲ１的ｍＲＮＡ表达，用流式细胞仪分析单抗ＵＩＣ２标记的细胞株Ｐ糖蛋白（Ｐｇｐ）的表达，了解它们摄取和滞留荧光素Ｒ１２３的功能。结果ＨＬ６０／ＤＮＲ在ｍＲＮＡ水平高度表达ＭＤＲＩ，在蛋白质水平高度表达Ｐｇｐ，功能性试验中细胞内Ｒ１２３最终浓度ＨＬ６０为ＨＬ６０／ＤＮＲ的５０倍。结论ＨＬ６０／ＤＮＲ为典型的表达ＭＤＲ１的细胞株     

微囊藻毒素-LR对HL60细胞遗传毒作用的研究

目的探讨微囊藻毒素-LR对HL60细胞的遗传毒性效应。方法不同剂量的MCLR作用HL60细胞24h或48h后，应用彗星实验及微核实验分别检测DNA链断裂和染色体损伤情况。结果10-100μg／ml剂量的MCLR引起HL60细胞明显的DNA链断裂，染毒量与DNA链断裂之间呈现剂量-反应关系。相同剂量的MCLR还引起HL60细胞微核率升高，随着染毒剂量的增加，微核率呈增高趋势。结论MCLR可引起HL60细胞DNA和染色体损伤，具有细胞遗传毒性。     

DHAQ-GM-CSF免疫脂质体对HL60细胞的杀伤作用研究

目的:制备DHAQ-GM-CSF免疫脂质体并观察其对白血病细胞株HL60的杀伤作用,为探索临床治疗急性髓性白血病(Acute myelogenous leukemia,AML)的新方法提供实验依据.方法:用逆向蒸发法制备DHAQ脂质体、戊二醛交联法偶联GM-CSF和DHAQ脂质体制备GM-CSF免疫脂质体,MTT法测定其对白血病HL60细胞的杀伤作用,透射电镜观察凋亡细胞形态,流式细胞术测定凋亡率.结果:DHAQ-GM-CSF免疫脂质体对HL60的细胞毒作用显著强于DHAQ脂质体和DHAQ,免疫脂质体作用后细胞超微结构破坏,形成大量凋亡小体.结论:成功制备并鉴定了GM-CSF-DHAQ免疫脂质体,其对HL60细胞具有靶向性杀伤作用,为进一步研究奠定了基础.     

HL60/VCR白血病细胞多药耐药机制的初步探讨

目的探讨白血病细胞产生耐药的机制,以及VEGF在白血病细胞产生耐药过程中的作用。方法采用反复暴露并逐渐提高诱导药物浓度的方法建立HL60/VCR多药耐药细胞系,MTT法检测细胞的耐药性及交叉耐药性;RT-PCR检测诱导前后mdr1、MRP、TopoⅡα、GSTπ和VEGF mRNA的表达情况。结果诱导后的HL60/VCR耐药细胞不仅对VCR高度耐药,对其他类化疗药物亦具有交叉耐药性;与HL60相比,HL60/VCR的mdr1、TopoⅡα和VEGF mRNA的表达明显增强,GSTπmRNA的表达无明显变化;HL60和HL60/VCR均不表达MRP mRNA。结论耐药基因mdr1和TopoⅡα以及VEGF共同参与HL60/VCR多药耐药的形成。     

蟾酥注射液逆转HL60/阿霉素细胞多药耐药的机制

目的探讨蟾酥注射液(CHS)对人类白细胞多药耐药细胞系HL60/阿霉素细胞的逆转作用机制。方法 MTT法测定CHS预作用后HL60/阿霉素细胞对阿霉素的敏感性;流式细胞术考察CHS对HL60/阿霉素细胞周期的影响;免疫组化考察CHS对HL60/阿霉素细胞NF-κB、MRP、GST-π、iNOS蛋白表达的调节作用。结果 CHS可将阿霉素对HL60/阿霉素细胞的IC50值由34.1971μmol/L降至17.4393μmol/L,逆转倍数为1.9609倍;FCM显示CHS作用后HL60/阿霉素阻滞于G0/G1期、G2/M期,降低进入S期比例,并出现凋亡峰;免疫组化结果显示,CHS能下调HL60/阿霉素细胞中MRP、GST-π表达,上调NF-κB、iNOS的表达。结论蟾蜍注射液逆转HL60/阿霉素细胞的多药耐药性可能是通过下调MRP、GST-π的表达,上调NF-κB、iNOS的表达,促进HL60/阿霉素细胞凋亡,从而增加HL60/阿霉素细胞对药物的敏感性。     

去甲斑蝥素诱导HL60细胞凋亡的研究

探讨去甲斑蝥素 (NCTD)对人早幼粒白血病细胞株HL60细胞增殖的抑制作用。用流式细胞仪测定NCTD对HL60细胞体外培养过程中细胞毒性、细胞凋亡及细胞周期的影响。结果显示 :NCTD作用 4 8h对HL60细胞有较强生长抑制作用 ,作用 2 4h后达到凋亡高峰 ;1、5、10、50 μmol L的NCTD作用 2 4h后 ,G1期细胞百分数均减少 ,S期与G2 M期细胞百分数均增加 ,呈现G2 M期阻滞现象。说明NCTD可诱导HL60细胞凋亡 ,抑制瘤细胞分裂生长 ,且有明显的时间和剂量效应     

HL60细胞冻存复苏生物学特性对比分析

目的探讨不同冻存复苏条件对白血病细胞株HL60生物学特性的影响,并优化培养方法与条件。方法对比不同浓度DMSO冻存条件、不同复苏方法对复苏后细胞生物学特性的影响,并确定培养液血清最佳浓度。结果采用5%DMSO冻存防护效果好于其他组,改良后细胞的复苏存活率明显高于传统复苏方法。结论以5%DMSO作为HL60细胞冻存保护剂并采用改良复苏方法,可使细胞保持最佳生物学特性,12%血清为HL60细胞常规培养的最适浓度。     

罗格列酮对人HL60细胞诱导凋亡作用的影响

目的 探讨过氧化物酶体增殖因子活化受体(PPARγ)配体罗格列酮(rosiglitazone,ROZ)对人急性髓性白血病细胞诱导凋亡作用的分子机制.方法 体外培养人急性髓性白血病HL60细胞,流式细胞仪(flow cytometry, FCM)检测细胞凋亡,West blot法检测药物处理后PPARγ、Bcl-2、Bax、NF-KB 蛋白表达的改变. 结果ROZ(50,100 μmol/L)可诱导HL60细胞凋亡.ROZ(2,10,50 μmol/L)处理后,HL60细胞PPARγ、Bax蛋白表达上调,Bcl-2、NF-KB蛋白表达下调.ROZ(10 μmol/L)处理HL60细胞6、12、24小时后PPARγ、Bax蛋白表达上调,Bcl-2、NF-KB蛋白表达下调.呈浓度依赖性和时间依赖性.结论 过氧化物酶增殖因子活化受体PPARγ配体罗格列酮诱导HL60细胞凋亡.使PPARγ、Bax蛋白表达上调,Bcl-2、NF-KB蛋白表达下调.     

不同方法制备的蝌蚪提取液对HL-60细胞的作用

为探讨不同方法制备的蝌蚪提取液对ＨＬ６０细胞作用的差异，利用水提法、醚提法、醇提法制备不同的蝌蚪提取液，依次称为Ｔ８７１１、Ｔ８７１２（此二者均为水提法制备，区别在于前者在水提的基础上用盐酸沉淀去除酸性蛋白）、Ｔ８７１３、Ｔ８７１４，分别将其以不同浓度与ＲＰＭＩ１６４０培养基混合，以培养ＨＬ６０细胞。结果显示：几种蝌蚪提取液对ＨＬ６０细胞的生长均有抑制作用，且在一定范围内呈浓度依赖性，其中以Ｔ８７１３的抑制效应最显著。经蝌蚪提取液作用后，Ｗｒｉｇｈｔ染色显示ＨＬ６０细胞的形态表现为向单核／巨噬样细胞分化的特征，细胞还原硝基蓝四氮唑盐（ＮＢＴ）的能力和酸性非特异性酯酶（αＮＡＥ）的活力均显著提高。提示蝌蚪提取液可抑制ＨＬ６０细胞增殖，并且诱导其向成熟的单核／巨噬样细胞分化，其中以醚提法制备的提取液作用效果最好