小鼠诺如病毒检测方法团体标准的编制

随着生命科学的发展,对实验动物质量的要求也越来越高,实验动物标准的不断完善就变得尤为重要,小鼠诺如病毒在实验小鼠中有很高的感染率,小鼠感染后不仅对动物本身造成危害,对实验结果也会产生较大影响。我国的实验动物国家标准目前还未将小鼠诺如病毒纳入常规检查项目,我们参考国内外小鼠诺如病毒的最新研究成果及国外相关标准,编制了小鼠诺如病毒的团体标准。本文介绍了小鼠诺如病毒检测方法团体标准编制的背景、法律法规依据,对标准内容的设置进行了解释。本标准的编制完善了实验动物相关标准,为推动实验动物质量的提高,适应实验动物国际化发展的需求提供了技术支持。     

实验小鼠感染诺如病毒后组织病理变化及病毒含量分析

目的研究常用实验小鼠在人工感染小鼠诺如病毒后组织病理改变及病毒含量变化情况。方法使用KM、BALB/c、NIH、C57BL/6及BALB/c-nu等五个品系小鼠,每个品系分为对照组和感染组,感染组以灌胃方式接种小鼠诺如病毒液,对照组灌同等体积生理盐水,分别在感染后第7、14、21、28、55天采集肝、脾、肺、盲肠、结肠及小肠,每个组织取2份,分别进行病理诊断及病毒核酸含量检测,最后对结果进行汇总分析。结果肝、脾、肺病理改变总发生率分别为8%(10/125)、5.6%(7/125)和4%(5/125),盲肠、结肠及小肠均未发现病变,其中KM及BALB/c小鼠病变主要发生在肝、脾和肺,C57BL/6小鼠主要在肝和肺,NIH及BALB/c-nu小鼠主要在肝和脾。在所观察的实验鼠中KM小鼠较易发生肺的病变; KM及NIH小鼠发生病变较早,C57BL/6小鼠较晚。所有实验鼠盲肠、结肠MNV核酸阳性率均为100%(125/125),小肠、肝、脾、肺及血阳性率分别为71.2%(89/125),17.6%(22/125),39.2%(49/125),3.2%(4/125)和1.6%(2/125);病毒含量比较盲肠结肠小肠脾肺肝; BALB/c-nu小鼠结肠病毒含量显著高于其他品系小鼠(P0.01),其它品系小鼠各组织病毒含量无统计学差异; C57BL/6小鼠在感染MNV第14天盲肠及结肠病毒含量达峰值(P0.05),其它品系小鼠不同时间点病毒含量无统计学差异;组织器官病理检查及病毒核酸检测结果之间无相关性。结论小鼠诺如病毒感染会引起组织病变,建议进行病理有关的动物实验选择MNV阴性小鼠。     

汉滩病毒感染成龄鼠模型用于特异性单克隆抗体保护作用的研究

目的　建立汉滩病毒感染成龄鼠的模型 ,以进行 m Ab的保护实验 .方法　将 7～ 8wk BAL B/ c小鼠于感染病毒前 1d及感染后 1d,2 d和 4d,分别经腹腔注射环磷酰胺 6 5 mg· kg- 1 ,总剂量为 2 6 0 m g· kg- 1 ,观察其发病及死亡情况 ,并检测其体内不同脏器中汉滩病毒抗原的分布及滴度 .用 m Ab对上述感染小鼠进行保护实验 .结果　经环磷酰胺处理的成龄鼠 ,由汉滩病毒隐性感染变为急性致死性感染 (死亡率达 10 0 % ) .其发病症状与汉滩病毒感染的乳鼠类似 ,平均发病与死亡时间较感染乳鼠晚 2～ 3d,且较为规律和集中 .汉滩病毒抗原在感染的成…     

大、小鼠病毒性疾病诊断和控制的初步探索

病毒性疾病是实验动物的重大危害因素之一。目前,国际确认品系小鼠中已发现的病原体有60多种,其中病毒有20种以上。实验动物可同时自然感染几种病毒,感染后产生的临床症状和病理变化不一。急性感染可引起剧烈发病,暴发性死亡,甚至全群覆没。不少动物属隐性感染,无明显临床症状;但由于实验条件等外界环境的刺激,体内的病毒因子被激活,可使动物发病死亡,给实验造成严重的干扰。国际上发达国家均把实验动物的微生物学质量控制列于重要地位,特别是定期进行病毒性疾病的检测。各国根据本地区疾病流行情况及其所掌握的检测手段,制定了各种实验动物病毒学检测内容。在实验用鼠方面,不同国家和组织的检测项目不尽相同,但均将对实验人员和饲养人员造成威胁的人畜共患性病毒如:流行性出     

广东省实验小鼠自然感染鼠诺如病毒的调查

目的了解广东省实验小鼠自然感染小鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)的情况。方法随机抽取广东省7个繁育设施的小鼠206只,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测其感染MNV的情况。结果共检测小鼠盲肠内容物206份,阳性样本为77份,阳性率为37.38%。3个设施的小鼠感染MNV,各品系小鼠易感性差异无显著。结论证实广东省小鼠存在MNV感染,部分设施小鼠MNV感染率很高,需加强动物的饲养管理。RT-PCR方法可以应用于MNV感染检测。     

肠道病毒71型（EV71）对ICR小鼠的感染

目的 研究肠道病毒71型经不同途径感染不同日龄ICR小鼠后的感染状况,了解肠道病毒71型的感染特点,为了解EV71小鼠感染机制和模型制备提供实验信息和技术支撑.方法 分别通过口腔途径、颅腔途径、肌肉途径及腹腔途径感染1日龄、7日龄及3 ～ 4周龄SPF级ICR小鼠,定期安乐动物,采集各器官组织进行病原学诊断,确定EV71病毒感染情况;同时建立一步RT-PCR、病毒分离、IFA及IEA等方法.结果 经腹腔途径感染成年鼠出现竖毛、弓背、消瘦症状,其他各途径感染小鼠感染后未见竖毛、弓背、觅食减少、体重减轻、精神呆滞及神经系统症状.颅腔注射3 ～ 4周龄ICR小鼠能在脑组织检测到病毒RNA,腹腔注射和肌肉注射1日龄乳鼠能在肌肉组织和肠道检测到病毒RNA,其中,肌肉组织病毒分离可检测到活病毒.本研究同时建立了分子生物学、血清学方法,为今后研究其它适合EV71的动物模型奠定了基础.结论 临床分离的EV71毒株通过口腔接种、颅腔、肌肉、腹腔注射途径感染1日龄、7日龄及3 ～ 4周龄SPF级ICR小鼠的疾病程度和病毒检出不同,ICR乳鼠及成年鼠可作为该病毒感染机制、病毒体内分布等基础研究,但用作EV71动物模型应用,感染程度尚不十分理想.     

KM小鼠一起鼠痘的发病及其流行特点

2002年10～12月，湖北某实验动物中心因外购KM小鼠而造成鼠群爆发鼠痘，幼龄鼠和成年鼠易感，老龄鼠发病率较低。大部分病鼠在5～7d死亡，病死率高达62．5％，其临床表现虽未见典型的四肢、尾和头部溃烂等症状，但剖检病变主要表现为肝、脾、十二指肠和小肠严重出血性坏死。经电镜观察、病毒分离和动物感染试验，确诊为鼠痘病毒感染。     

实验小鼠痘病毒感染检测分析

小鼠痘病毒急性感染可导致实验小鼠脱脚病 (鼠痘 )发作 ,临床症状明显 ,发病动物短期内大量死亡。近 10年某地区鼠痘发生次数依次为昆明小鼠 (7次 )、NIH小鼠 (3次 )、ICR小鼠 (2次 )和BABL c小鼠 (1次 )。无明显临床症状慢性持续性感染 (隐性感染 ) ,是病毒传播或转化成急性感染主要原因 ,用免疫荧光技术 (IFA)可检测到病毒抗体 ,鸡胚病毒培养意义不大。流行病学调查证实IFA抗体阳性小鼠群体脱脚病发病率显著高于IFA抗体阴性小鼠群体 (P <0 0 0 1)。     

病毒性鼠肝炎检测方法的探讨

病毒性鼠肝炎是小鼠群中的一种常见疾病,多数为隐性感染。在实验条件的刺激下病毒可以被激活,使小鼠发病死亡,影响了实验结果的可靠性,因此,病毒性鼠肝炎的检测为国内外鉴定实验动物质量的重要指标之一。以往检测本病大多采用补体结合试验及测定谷丙转氨酶的含量。1978年Carthen报告应用ELIsA试验检测鼠肝炎病毒,使病毒性鼠肝炎检测技术得以提高。本文介绍我所最近应用HRP—SPA—ELISA法检测鼠肝炎病毒,获得了较为满意的结果。     

小鼠诺瓦克病毒研究现状

诺瓦克病毒（Norwalk virus,NV）,也称为诺如病毒（norovirus,NV）,是引起人类非细菌性胃肠炎的主要病原体,此外,在牛、猪和小鼠也发现了诺瓦克病毒的存在.该病毒可分5个基因型（GⅠ～Ⅴ）,鼠诺瓦克病毒（Murine norovirus,MNV）属于GV,是一种新发现的感染实验小鼠的病毒,并且被认为是目前小鼠中最流行的一种病毒.MNV是诺瓦克病毒中在细胞内有效复制的病毒,被作为研究诺瓦克病毒复制分子机制的模型,同时MNV与人诺瓦克病毒（Human noroviruses,HuNV）有许多相似的分子生物学特点,也被认为是研究人诺瓦克病毒的理想病毒模型.     

鼠诺沃克病毒特征及其检测技术

鼠诺沃克病毒-1(MNV-1)是一个新认知的鼠病原体,可引起固有免疫系统应答组分缺陷鼠的致死性感染,是目前唯一一个能够在细胞以及小动物体中复制的诺沃克病毒。通过病毒分离、免疫组化、RT-PCR技术,均可检测鼠诺沃克病毒-1。     

一起诺如病毒引起感染性腹泻疫情的流行病学调查分析

目的通过分析承德市某中学一起诺如病毒感染性腹泻暴发疫情的流行病学特征,为制定防控措施提供依据。方法采用现场流行病学调查方法 ,搜索病例并进行个案调查。结果 2008年10月6-13日该校共报告诺如病毒感染幸腹泻病例144例,罹患率为5.01%。平均潜伏期多在24~48h,最短12h,最长72h。净实验室检测及调查结果分析,为诺如病毒引起的群体性腹泻暴发疫情,经采取对现患病例集中管理就地隔离治疗的综合防治措施后,疫情得到控制。结论该次疫情为诺如病毒引起感染性腹泻事件,在诺如病毒感染性腹泻好发季节,应继续加强对集体单位、学校诺如病毒感染性腹泻疫情监测,积极开展健康教育,有效预防诺如病毒感染性腹泻疫情的发生。     

BNX小鼠生物学特性及其应用

本文综述了T、B和NK细胞联合免疫缺陷BNX小鼠的培育，详细介绍其一般的生物学特性及其在血液学、肿瘤学、免疫学和微生物学等方面的应用。     

2013年~2015年广东地区实验小鼠和大鼠微生物学及寄生虫学调查

目的 调查2013~2015年广东地区实验小鼠和大鼠的病原携带情况。方法 本文涉及的样品主要来源于监督检测的抽样样品和委托检测的送样样品,共收集到广东省12家监督单位和32家委托单位样品。按照国家标准要求的项目及标准外的螺杆菌和小鼠诺如病毒进行检测。结果 监督检测和委托检测结果存在较大差异。3年中监督检测的小鼠检出4种病原,包括绿脓杆菌（0.7%）、嗜肺巴斯德杆菌（0.3%）、肺炎克雷伯杆菌（0.7%）和鞭毛虫（1.7%）,未检出病毒;大鼠检出1种病原即嗜肺巴斯德杆菌（1.1%）,未检出病毒和寄生虫。委托检测的小鼠检出15种病原,包括绿脓杆菌（3.7%）、嗜肺巴斯德杆菌（5.2%）、支原体（1.9%）、金黄色葡萄球菌（0.7%）、肺炎克雷伯杆菌（0.8%）、螺杆菌（45.3%）,小鼠肝炎病毒（8.5%）、小鼠脑脊髓炎病毒（7.0%）、小鼠诺如病毒（16.2%）、鼠痘病毒（0.3%）、小鼠细小病毒（0.5%）、仙台病毒（0.1%）、鞭毛虫（11.7%）、蠕虫（1.0%）、体外寄生虫（0.1%）。大鼠检出8种病原,包括绿脓杆菌（3.4%）、嗜肺巴斯德杆菌（8.6%）、支原体（0.9%）、金黄色葡萄球菌（2.9%）、泰泽病原体（4.8%）、大肠杆菌（1.0%）、大鼠细小病毒H-1株（3.0%）、大鼠冠状病毒（1.0%）,未检出寄生虫。其中,实验小鼠7种病原,包括绿脓杆菌、嗜肺巴斯德杆菌、螺杆菌、鞭毛虫、小鼠肝炎病毒、小鼠脑脊髓炎病毒和小鼠诺如病毒,大鼠2种病原,包括金黄色葡萄球菌和泰泽病原体,检出范围广、检出率较高,而且存在区域分布特点,即设施污染后能在多次送检的动物中检出这些病原。结论 本研究获得广东省实验大小鼠病原流行情况和分布,这些数据的统计为我国实验动物质量标准的制订提供基础数据,同时也为各动物实验设施的质量控制方案制订提供依据。     

实验小鼠感染鼠诺如病毒的检测

目的了解实验小鼠鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)的携带情况及其基因特征。方法在广州某实验动物中心抽取两个种系的实验小鼠,采集其粪便标本,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测粪便标本的MNVORF2特异性基因(547bp,MNVnt5104～5650)。对阳性PCR产物进行测序并以测序结果构建基因进化树分析。结果共采集实验小鼠粪便标本20份,粪便来源的小鼠外表健康、活泼、进食正常,没有腹泻现象。MNV的阳性率为30.0%(6/20),阳性实验小鼠种类包括昆明小鼠(3/13)和NIH小鼠(3/7)。本研究检测的6个MNVs在进化树上独立一小分支,与参考株MNV2、3、4最为相近;核酸序列比较发现6个MNVs核酸序列的同源性最高,为98.3%～99.8%。结论该实验动物中心的小鼠存在较高的MNV携带状况,并可能在饲养设施内传播,有必要进一步探讨实验小鼠携带MNV的生物学意义。     

多重荧光定量PCR检测婴幼儿腹泻病毒感染及其临床应用

目的:建立一种能同时检测婴幼儿腹泻粪便中常见病毒的多重荧光定量 PCR技术。方法:根据GenBank上几种病毒基因组保守序列设计引物序列,建立多重荧光定量PCR方法,对所建立的多重荧光定量PCR方法的特异性、灵敏性及重复性进行验证;并以所建立的方法对150例婴幼儿病毒性腹泻患者粪便标本进行检测。结果:所建立的多重荧光定量PCR检测方法具有很好的特异性,灵敏性检测可达102拷贝/mL,检测不同病毒核酸浓度各自的检测 Ct 值标准差均较小,变异系数均低于1.0%,具有较好的重复性;检测150 份粪便标本,多重荧光定量 PCR 的检出率为36%,胶体金方法检出率为38.67%,两者比较差别无统计学意义（χ2= 6.91,P > 0.05）。多重荧光定量 PCR方法中轮状病毒、腺病毒、诺如病毒、星状病毒的检出率分别为12.67%、6.00%、13.33%和4.00%,测序结果与已知病毒株基因都具有高度同源性。结论:所建立的多重荧光定量PCR方法快速、特异、灵敏,可以作为临床病原诊断的一个重要工具且适用于流行病学调查研究。     

小鼠腺病毒PCR检测方法的建立及初步应用

目的 建立小鼠腺病毒（MAdV） PCR检测方法,应用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MAdV的检测.方法 根据已发表的小鼠腺病毒（MAdV） E1B基因序列,设计合成引物.建立RT-PCR方法,并对方法的特异性、敏感性、稳定性等进行验证.用建立的方法对65只长爪沙鼠、12只小鼠进行检测.结果 建立的MAdV PCR检测方法与小鼠微小病毒、多瘤病毒无交叉反应;以MAdVDNA为模板,所能检测DNA最小模板浓度为1.67 pg/μl,可检测病毒最小滴度为10-7/ml; MAdVDNA在-30℃冰箱放置12个月,仍能扩增出大小约606 bp的可见目条带.经PCR检测,65只沙鼠和12只小鼠均为阴性.结论 建立的小鼠腺病毒（MAdV） PCR检测方法特异、敏感、稳定,可用于小鼠、长爪沙鼠等实验动物MAdV的检测.     

北京地区2011-2012年度实验小鼠POLY病毒感染情况调查与分析

目的使用血清学方法和PCR方法对北京地区实验小鼠多瘤病毒（POLY）感染情况进行初步调查和评估分析。方法对2011-2012年度我中心收检的不同实验动物生产设施的SPF级、清洁级小鼠血清130份、不同实验动物使用机构实验小鼠血清67份,共197份样品进行POLY病毒血清学检测;根据多瘤病毒保守序列设计引物,应用PCR方法检测不同动物生产设施的SPF级、清洁级小鼠的80份肠内容物样品是否存在POLY病毒。结果抽检的2011-2012年度实验动物生产设施的SPF级、清洁级小鼠血清130份未检出POLY病毒抗体;实验动物使用机构实验小鼠血清样品检出POLY病毒抗体7/67阳性。使用的PCR方法检测实验动物生产设施不同级别的80份小鼠肠内容物未检出POLY病毒核酸。结论北京地区实验动物饲养机构的实验动物基本排除POLY病毒的潜在污染,实验动物使用机构中实验用动物仍然存POLY病毒的潜在污染。实验动物生产设施对各级别实验动物应每年度至少进行一次全项病毒检测,以便更客观的了解实验动物质量;实验动物使用机构应对如何加强实验中动物的质量控制问题加以关注。     

Friend鼠白血病病毒对BALB/c小鼠和KM小鼠的影响

目的：探讨Friend鼠白血病病毒（FLV）对BALB/c和KM小鼠体质量、胸腺和脾脏的影响。方法：以齐多夫定片（AZT）作为阳性药物,用FLV攻击BALB/c和KM小鼠,观察各鼠系的体质量、胸腺和脾脏变化情况。结果：FLV能引起BALB/c和KM小鼠脾肿大,各鼠系脾指数与正常鼠脾指数差异有统计学意义（P〈0.01）。AZT对BALB/c和KM小鼠具有明显的抑制脾肿大作用（P〈0.05）。各鼠系小鼠的体质量和胸腺变化差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：FLV对KM小鼠体质量、胸腺和脾脏的影响程度相当于BALB/c小鼠。