姜黄素及Avastin抑制鼠角膜碱烧伤新生血管对比

目的:通过对比姜黄素与Avastin抑制大鼠碱烧伤后角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达水平的影响,进一步探讨姜黄素抑制CNV形成的机制。方法:选取SD大白鼠共30只,建立碱烧伤模型,随机将大鼠分成A,B两组,各15只,A组中右眼为实验组A1组,左眼为空白对照组A2;B组中右眼为实验组B1,左眼为空白对照组B2。A1组给予40μmol/L姜黄素配置成的滴眼液,A2组滴用生理盐水;B1组给予5g/LAvastin滴眼液,B2组滴用生理盐水。根据不同时间点取角膜组织进行病理切片研究、抽取房水进行ELISA测定,计算出每视野计数微新生血管及房水中VEGF含量。对以上指标进行对比分析研究。结果:两种药物均未发现在角膜水肿、角膜修复等方面的毒副作用。对新生血管的影响,两种药物CNV计数均明显低于空白对照组(P<0.01),两种药物之间对新生血管影响的对照,平均CNV计数无显著性区别。A1组与A2组对比、B1组与B2组对比,实验组VEGF均明显低于对照组,有高度显著性统计学意义(P<0.01),A1组与B1组对照,平均VEGF含量A1组高于B1组,有统计学意义(P<0.05)。结论:姜黄素的VEGF抑制能力可能不如Avastin,但在整体抗CNV的能力上并不输于Avastin,说明姜黄素还参与了干预角膜碱烧伤CNV形成的其他机制。     

Avastin抑制兔角膜新生血管的实验研究

目的探讨Avastin对角膜新生血管（NV）的抑制作用。方法日本大耳白兔20只,以角膜缝线法制作角膜新生血管模型,观察4周。在角膜缝线1周后,实验组以浓度为4mg／mL的Avastin溶液滴眼,对照组以注射用水滴眼,均为每日2次,共28d。记录角膜新生血管出现的时间、生长的长度和数量。结果两组角膜新生血管的出现时间分别为（3．43±0．53）d和（3．14±0．69）d（P〉0．05）;在缝线后14d、21d、28d,实验组角膜新生血管的面积均明显小于对照组（P〈0．05）。且实验组角膜新生血管在用药后明显变细。两组角膜荧光素染色在观察期间均未发现明显着色。结论Avastin滴眼能够有效抑制角膜新生血管的生长,并能在一定程度上使已有的新生血管消退,且未发现明显的毒副作用。     

PEDF和Avastin对大鼠角膜碱烧伤新生血管作用的比较

目的:比较局部应用PEDF与Avastin对大鼠碱烧伤角膜新生血管(CNV)的作用。方法:建立碱烧伤诱导大鼠CNV模型,将30只SD大鼠随机分为5组:A组于烧伤当日开始给予10μg/mL PEDF点眼;B组于烧伤后第3d开始给予10μg/mL PEDF点眼;C组于烧伤当日开始给予5mg/mL Avastin点眼;D组于烧伤后第3d开始给予5mg/mL Avastin点眼;E组于烧伤当日开始使用生理盐水点眼,均每日4次,每次10μL。裂隙灯显微镜观察CNV情况并计算各组CNV的面积,采用免疫组织化学染色观察VEGF和CD31的表达。结果:第12d时,A组CNV面积小于B组和C组,差异有统计学意义(P<0.01);B,C组与D组相比,差异无统计学意义(P=0.215,0.058)。免疫组织化学检测VEGF及CD31示A组VEGF及CD31表达较弱,B,C,D组表达增多,E组表达显著增强。结论:局部应用Avastin及PEDF均能抑制大鼠角膜化学伤后的CNV。烧伤后早期使用PEDF效果优于Avastin。     

重组人内皮抑素抑制角膜新生血管的实验研究

目的研究重组人内皮抑素（rHES）对碱烧伤诱导大鼠角膜新生血管（CNV）的抑制效应。方法60只Wistar大鼠按随机数字表法分为正常组、阳性对照组、rHES组3组,每组各20只。阳性对照组右眼角膜碱烧伤后不治疗;rHES组右眼角膜碱烧伤后立即100mg／mL rHES点眼,每日3次;20只正常鼠不做任何干预处理作为正常组。观察碱烧伤后1、4、7、10、14d各组角膜情况及CNV的生长面积。碱烧伤后第16天处死动物,取角膜行组织病理学检查。免疫组织化学、PCR检测血管内皮生长因子（VEGF）蛋白量和mRNA在角膜组织的表达,透射电镜下检查碱烧伤后角膜组织的超微结构变化。结果rHES组角膜在碱烧伤后各时间点新生血管面积均小于阳性对照组（t4d=3．294,P=0．040;t7d=5．391,P=0．000;t10d=6．560,P=0．000;t14d=10．346,P=0．000）。角膜碱烧伤后第16天各组VEGF蛋白表达量的差异有统计学意义（F=337．62,P=0．00）,各组VEGF mRNA表达量的差异有统计学意义（F=114．43,P=0．00）。透射电镜检查显示正常组结构正常,rHES组较阳性对照组角膜结构变化小。PCR结果发现rHES组VEGF mRNA的相对表达量低于阳性对照组,但高于正常组。结论rHES用于眼表可有效抑制碱烧伤诱导的CNV。     

Avastin对大鼠角膜新生血管的抑制及超微结构的影响

目的:探讨Avastin对角膜新生血管形成及角膜内血管内皮生长因子(VEGF)的影响及其超微结构的影响。方法:Wistar大鼠96只随机分3组,采用碱烧伤的方法制备大鼠角膜新生血管模型;正常不烧伤组4只。烧伤后隔日球结膜下注射0.1mL生理盐水组32只,烧伤后隔日球结膜下注射Avastin0.1mL组32只,烧伤后隔日球结膜下注射地塞米松0.1mL组32只。碱烧伤术后在裂隙灯显微镜下观察大鼠角膜混浊度;宏观测量新生血管长度;组织病理切片HE染色作微血管计数;透射电镜观察超微结构的改变;免疫组化检测角膜VEGF的蛋白表达情况;CD34标记新生血管,显微镜下微血管计数方法研究角膜新生血管形成及抑制情况。结果:治疗组在3,7,10,14d较对照组角膜混浊程度轻(P<0.05);14d形成的新生血管数量较对照组少(P<0.05)。实验组新生血管微血管数量减少,VEGF蛋白表达下降,具有统计学差异。VEGF主要表达在角膜受损区的感染细胞胞质内,其出现时间与位置与角膜新生血管一致。Avastin和地塞米松均可有效抑制角膜新生血管,减少角膜内VEGF表达,两者无统计学差异,结膜下注射Avastin和地塞米松后,大鼠角膜超微结构无除烧伤后其它显著改变。结论:Avastin和地塞米松可抑制角膜新生血管,减少角膜内VEGF表达,对角膜的超微结构均无显著毒性。     

碱烧伤后抑制角膜新生血管的实验研究--血管内皮生长因子165反义RNA的作用

目的研究重组腺相关病毒介导的血管内皮生长因子165反义RNA(rAAN-aVEGF165)抑制碱烧伤后角膜新生血管的作用。方法30只SD大鼠随机分成2组，每组15只。实验组前房注射rAAV-aVEGF165，对照组前房注射rAAV-Lacz。30天后，碱烧伤诱导角膜新生血管，以形态学分析评价角膜新生血管的情况，Western blot评价角膜VEGF的表达。结果形态学分析显示实验组角膜新生血管得到抑制，Western blot结果显示，碱烧伤后各个时期角膜VEGF165的表达实验组明显低于对照组。结论下调VEGF能有效抑制角膜新生血管的形成．重组腺相关病毒是眼反义基因治疗的有效载体。     

角膜碱烧伤后VEGF的表达与新生血管的关系

目的研究碱烧伤后角膜血管内皮生长因子（vascular endothelial growthfactor，VEGF）的表达与角膜新生血管化的关系。方法30只Sprague-Dawleg（SD）大鼠碱烧伤，诱导角膜新生血管模型。碱烧伤后不同时间形态学分析来评价角膜新生血管的情况，免疫组化及Westem blot评价角膜VEGF的表达。结果角膜碱烧伤后24hVEGF的表达开始增高，伤后4d达高峰，伤后7d VEGF的表达下降，14d后显著下降。碱烧伤后，角膜新生血管与VEGF的表达呈明显的平行关系。结论碱烧伤后大鼠角膜VEGF的表达水平与新生血管的形成有相关性，并在其中发挥重要作用。     

干扰素抑制角膜新生血管的实验研究

目的 :探讨局部应用干扰素对角膜新生血管是否具有抑制作用 ,为临床治疗角膜新生血管提供依据。方法 :2 5只大耳白兔皆以双眼碱烧伤制备角膜新生血管模型 ,随机分成实验和对照二组 :实验组分成A、B、C三组 ,B、C组给予不同深度α IFN隔日结膜下注射 ,A组给予α IFN点眼。碱烧伤后第 14天各组免以墨汁灌注法显示角膜新生务管 ,进行血管图像分析 ,统计学处理 ,扫描电镜下比较两组间新生血管形态差异。结果 :结膜下注射α IFN实验和对照血管图像分析 ,统计学处理后F >F0 .0 1,P <0 . 0 1;结膜下注射α IFN使角膜新生血管形成受到抑制破坏。结论 :结膜下注射α IFN具有抑制角膜新生血管作用 ,且剂量大者抑制作用显著。但α IFN局部点眼对角膜新生血管无抑制作用。     

聚乙二醇化内皮抑素抑制碱烧伤角膜新生血管的实验研究

目的观察聚乙二醇化内皮抑素（PEG—endostatin）抑制碱烧伤诱导的兔角膜新生血管（CNV）的效果，探讨其作用机制。方法采用碱烧伤法诱导兔角膜新生血管形成。在碱烧伤后1d，治疗1、2组和对照组分别在球结膜下注射50μg／mL PEG化内皮抑素、50μg／mL重组内皮抑素、生理盐水各0．2mL。以后隔日注射1次，共8次。动态观察CNV的生长状况。利用免疫组化方法检测血管内皮生长因子（VEGF）的表达，并在显微镜下进行微血管计数。结果治疗1、2组CNV的长度和面积、VEGF的表达及微血管数量均明显少于生理盐水对照组（P〈0．05）；而治疗1组的CNV的长度和面积、VEGF的表达及微血管数量均明显少于治疗2组（P〈0．05）。结论PEG化内皮抑素及重组内皮抑素都可有效抑制CNV的生长，但前者效果更好。     

Bevacizumab (Avastin)抑制角膜新生血管的应用新进展

诱发角膜新生血管的因素涉及各种生长因子。研究表明:在角膜新生血管中广泛存在的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)起着主要作用。一种可行的治疗角膜新生血管策略是:通过特异性的中和抗VEGF抗体竞争性的结合VEGF,从而抑制VEGF活性。近年来,利用抗VEGF治疗策略,抑制脉络膜新生血管获得了很好的效果。靶向VEGF治疗药物的疗效和安全性已经证明。因此我们设想,局部应用新的抗VEGF药物,如贝伐单抗、兰尼单抗等可以有效地抑制角膜新生血管,恢复角膜透明和视力。     

Bevacizumab对大鼠角膜新生血管的抑制作用

目的：评价Bevacizumab抑制大鼠角膜新生血管的效果。 方法：碱烧伤诱导角膜新生血管模型,对20只wistar大鼠40眼随机平均分4组。角膜碱烧伤后分别给予结膜下注射药物溶剂和不同剂量Bevacizumab。比较并计算角膜新生血管生长面积。16d后角膜标本行HE检验和免疫组织化学检测VEGF的表达。 结果：各用药组与对照组新生血管面积比较差异有统计学意义;治疗组间新生血管面积比较差异没有统计学意义。组织学发现各药物治疗组炎性细胞浸润、新生血管形成均明显轻于对照组。新生血管对照组VEGF染色明显增强,药物注射组表达明显减弱。 结论：结膜下注射一定浓度的Bevacizumab对大鼠角膜碱烧伤形成的新生血管有抑制作用。     

苦参碱对大鼠角膜新生血管的抑制作用

目的观察苦参碱对大鼠角膜烧伤后新生血管生成的抑制作用。方法选取Wistar大鼠32只,建立碱烧伤角膜新生血管模型,随机分成对照组和3个不同剂量的苦参碱实验组,每组8只(16眼)。模型建立后,实验组大鼠在结膜下注射不同剂量的苦参碱(0.2mg、0.4mg、0.8mg),对照组注射生理盐水,在裂隙灯下动态观察大鼠角膜新生血管生长情况并计算角膜新生血管的面积,观察周期为21d。于造模后4d、7d、14d、21d取不同剂量的苦参碱实验组大鼠角膜进行组织病理学检测,采集各组大鼠的角膜标本,用免疫组化法检测角膜组织中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,计算其平均光密度值;采用RT-PCR方法检测各组大鼠角膜组织中VEGF mRNA的表达。结果碱烧伤后4d、7d、14d、21d,与对照组相比,各实验组大鼠新生血管面积明显减少,差异均有显著统计学意义(P<0.01);造模后14d时,不同剂量的苦参碱实验组新生血管密度计数(17.83±2.32、11.00±2.37、10.87±2.41)明显低于对照组(21.11±2.14)(P<0.05);各实验组角膜VEGF的平均光密度值均小于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);各实验组VEGF mRNA水平与对照组相比也显著下降(P<0.05)。结论结膜下注射苦参碱对大鼠角膜碱烧伤后的新生血管生长有抑制作用。     

分泌粒蛋白Ⅲ(Scg3)抗体对角膜新生血管的抑制作用

目的 分析分泌粒蛋白III (Scg3)抗体对兔角膜新生血管(CNV)的干预作用。方法 选取健康新西兰白兔45只,未做碱烧伤的5只作为对照组,剩余40只白兔用碱烧伤法构建CNV模型,随机分为模型组(20只)和干预组(20只),自碱烧伤之日起每隔2 d结膜下分别注射0.1 mL 1×PBS溶液或0.5 mg·L^-1的Scg3抗体工作液。碱烧伤后14 d, Western blot检测对照组与模型组兔角膜组织中Scg3的蛋白表达。分别在碱烧伤后1 d、7 d、14 d应用眼前段分析仪测量CNV的面积和长度,应用角膜共聚焦显微镜观察眼表变化,利用蛋白芯片法检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子-β1(TGF-β1)等炎症相关细胞因子的表达。结果 角膜碱烧伤后14 d,模型组兔烧伤区域出现大量CNV,而干预组兔角膜无明显CNV生长。Western blot检测结果显示,与对照组相比,模型组兔角膜中Scg3蛋白表达显著升高(P<0.05)。角膜共聚焦显微镜下观察可见,模型组兔的角膜缘内出现大量活动性CNV。角膜碱烧伤后7 ...     

卡托普利对大鼠角膜新生血管生长的影响

目的研究血管紧张素转换酶抑制剂卡托普利对角膜新生血管生长的影响。方法缝线诱导角膜新生血管模型，28只SD大鼠随机分为正常对照组、角膜新生血管对照组、卡托普利灌喂组、卡托普利球结膜下注射组。比较第8d各组新生血管并计算生长面积，分别检测血管内皮生长因子(VEGF)在基因和蛋白质水平的表达。结果卡托普利灌喂或球结膜下注射均显著抑制了角膜新生血管的生长，以后者更为明显；免疫组织化学染色，VEGF在正常角膜不表达或在上皮基底细胞有弱表达，新生血管对照组染色明显增强，球结膜下注射组表达明显减弱；VEGFmRNA和蛋白质水平表达有一致性。结论卡托普利球结膜下注射较全身应用更有效地抑制了角膜新生血管的生长，其抑制金属蛋白酶活性可能只是卡托普利治疗角膜新生血管机制的一部分。     

反应停对大鼠碱烧伤诱导角膜新生血管的影响

目的:研究反应停(thalidomide)对碱烧伤诱导角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)的影响。方法:建立大鼠角膜碱烧伤诱导CNV模型,SD大鼠36只随机分成角膜新生血管对照组(A组)、反应停灌胃组(B组)和反应停球结膜下注射组(C组)。采用裂隙灯照相、免疫组化和RT-PCR等方法,检测碱烧伤后各时间点不同处理方法大鼠CNV的生长情况及VEGF的表达情况。结果:B组和C组的角膜新生血管面积和VEGF的表达均显著少于A组(P均(0.05);C组的角膜新生血管面积和VEGF的表达少于B组(P均<0.05)。结论:反应停可有效抑制大鼠角膜碱烧伤诱发CNV的生长,降低角膜新生血管VEGF的表达。球结膜下注射较全身应用更有效。     

角膜新生血管的发病机制

角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)形成是角膜化学烧伤、角膜炎等疾病带来的一个难题,严重影响角膜的透明性,最终可导致眼部组织结构的破坏和视功能的损害,是致盲的主要原因之一。随着细胞分子生物学的发展,大量实验研究表明,许多因素参与CNV的形成过程。我们就血管内皮生长因子等主要促角膜血管生长因素及其与CNV的关系作一综述。     

Effects of AMD3100 subconjunctival injection on alkali burn induced corneal neovascularization in mice

AIM: To investigate the therapeutic effects of local and systemic administration of AMD3100 for alkali burn induced corneal neovascularization (CNV) in mice. METHODS: CNV was induced in vivo by alkaline burn of cornea in C57BL/6 mice. AMD3100 was administrated topically by subconjunctival injection or systemically by intraperitoneal injection for 7 days; balanced salt solution was administrated topically or systemically as a control respectively. Inflammatory index was evaluated by slit-lamp biomicroscopy and inflammatory cells infiltrated to cornea tissue were detected by histologic analysis at multiple time points. CNV was compared between the local and systemic treated mice 2 weeks after alkali burn, as quantified by CD34 immunostaining. Fluorescence-Activated Cell Sorter Analysis was used to investigate the mobilizing effects of EPC in mice after subconjunctival injected or intraperitoneal injected AMD3100. Immunohistochemistry was used to detect the expression of endothelial progenitor cells (EPC) marker proteins VEGFR2 and CD34. RESULTS: Three days after alkali burn, infiltration of inflammatory cells was found in corneal tissue. At the first 7 days of local injection group, the number of inflammatory cells was significantly lower than that in systemic injection group. CNV could be seen at the 7th day, and at the 14th day reached the peak, then started to decrease. The number of CNV in the subconjunctival injection group was 7.57±1.26 per 0.034mm2, compared to a number of 14.87±2.21 per 0.034mm2 in the control group (P<0.05). On the contrary, the number of CNV in the intraperitoneal injection group was a little higher than that in the control group, 16.34±1.53 per 0.034mm2 vs 13.26±1.87 per 0.034mm2. The research also showed that intraperitoneally, but not subconjunctivally injected AMD3100 could mobilize EPC. On the other hand, subconjunctival, but not intraperitoneally injected AMD3100 could reduce the expression of EPC marker proteins. CONCLUSION: In mice locally administrated AMD3100 can reduce the number of alkali burn induced CNV. The number of inflammatory cells and inflammatory responses in corneal tissue.     

Therapeutic effect of subconjunctival injection of bevacizumab in the treatment of corneal neovascularization

Purpose: To investigate the efficacy of subconjunctival injection of bevacizumab in the treatment of patients with corneal neovascularization. Methods: Twenty‐nine eyes of 29 patients with corneal neovascularization were treated with subconjunctival injection [1.25 mg/0.05 ml (seven eyes), 2.5 mg/0.1 ml (15 eyes) and 5.0 mg/0.2 ml (seven eyes)] of bevacizumab. Best‐corrected visual acuity, intraocular pressure and area of corneal neovascularization were measured before injection and at 1 week, 1 month and 3 months after treatment. Results: At 1 week, the mean neovascularized corneal area decreased significantly to 85.5 ± 18.0% (p = 0.01) in the eyes treated with 2.5 mg bevacizumab and to 73.1 ± 23.4% (p = 0.02) in the eyes treated with 5.0 mg bevacizumab. At 3 months, the mean neovascularized corneal area was 93.6 ± 10.6% (p = 0.10 compared to baseline; p < 0.01 compared to 1 week) in the eyes treated with 2.5 mg bevacizumab and 83.3 ± 25.8% (p = 0.03 compared to baseline; p = 0.02 compared to 1 week) in the eyes treated with 5.0 mg bevacizumab. However, there were no significant changes in the areas of the eyes injected with 1.25 mg bevacizumab. Conclusion: Subconjunctival injection of bevacizumab can partially reduce corneal neovascularization in the short term, and the efficacy of this treatment correlates with the injection dose.