雪旺氏细胞分泌的神经营养活性物质的提取及体外生物活…

雪旺氏细胞（ＳＣ）分泌多种神经营养因子促进周围神经再生，但ＳＣ分泌的各种蛋白质对周围神经再生的影响尚未完全阐明。为此，从成年大鼠瓦勒氏变性坐骨神经中分离出ＳＣ，经培养获ＳＣ无血清条件培养液（ＳＣ－ＳＦＣＭ）。通过ＰＭ１０超滤浓缩、Ｄｉｓｃ－ＰＡＧＥ和Ｂｉｏｔｒａｐ电洗脱，从ＳＣ－ＳＦＣＭ中分离出Ｄ蛋白带，分子量在４７－６７Ｋｄ之间，经ＭＴＴ检测，Ｄ带蛋白在２５－５０ｎｇ／ｍｌ浓度时对脊髓产角神经元     

雪旺氏细胞分泌蛋白质及其神经营养活性物质的生化分析

成年大鼠瓦勒氏变性神经来源的雪旺氏细胞（ＳＣ），经体外无血清分离培养，收集ＳＣ无血清条件培养液，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析其超滤浓缩液（分子量大于１０ＫＤａ）中ＳＣ分泌蛋白，发现其含有１４条蛋白带，分子量从大于９４ＫＤａ至小于３４ＫＤａ。用免疫印迹技术、抗２．５Ｓ神经生长因子（ＮＧＦ）抗体鉴定证实ＳＣ分泌蛋白中含有ＮＧＦ。用Ｄｉｓｃ－ＰＡＧＥ（４℃）分离ＳＣ分泌蛋白带，分别经电洗脱、浓缩收集１０份蛋白区带，结合有髓腹侧运动神经元细胞培养、ＮＴＦｓ生物学活性鉴定，初步发现其中一组蛋白区带（Ｂ＋）含运动性神经营养因子（ＮＴＦ）活性，其分子量在６５ＫＤａ至３４ＫＤａ。     

神经生长因子和雪旺氏细胞分泌的神经营养活性物质促进周围神经再生的实验研究

在桥接大鼠坐骨神经２０ｍｍ缺损的肌移植体中，于术中、术后１０天、２０天分３次分别注Ａ２．５Ｓ神经生长因子（ＮＧＦ）纯品和雪旺氏细胞分泌的神经营养活性物质（５Ｃ－Ｄ－ＮＴＳ）。术后５个月经组织形态学、神经电生理和肌肉收缩功能测定等，发现两者均能促进周围神经再生，其中注入ＳＣ－Ｄ－ＮＴＳ组能增加再生有髓神经纤维的数目、直径和髓鞘厚度，提高腓肠肌Ｍ波幅值，增强比目鱼肌收缩力；而注入ＮＧＦ组仅增加再生有髓神经纤维数口。     

雪旺细胞分泌的〉10kD蛋白分子支持脊髓前角神经元生存的初步报告

目的：探讨成年大鼠坐骨神经瓦勒变性期雪旺细胞（ＳＣ）促进周围神经再生的物质基础。方法：将２１５ｍｌＳＣ无血清条件培养液经ＰＭ１０超滤浓缩器（分子筛）分离，获得分子量＜１０ｋＤ（１ｄａｌｔｏｎ＝０．９９２１ｕ）蛋白质滤过液及＞１０ｋＤ蛋白质浓缩液，分别加入２４孔、９６孔培养板内脊髓前角神经元（ＳＡＨＮ）的培养液中，用倒置显微镜及ＭＴＴ微量自动比色法进行神经营养活性观察。结果：在＞１０ｋＤ蛋白分子影响下，ＳＡＨＮ在体外培养４８小时仍存活良好，并伴有少部分ＳＡＨＮ长出短突起。ＭＴＴ微量自动比色法进一步显示，＞１０ｋＤ蛋白分子神经营养活性在统计学上显著高于＜１０ｋＤ蛋白分子。结论：成年大鼠瓦勒变性期ＳＣ在无血清培养条件下仍能合成与分泌神经营养因子，其活性存在于＞１０ｋＤ蛋白分子中。     

神经再生条件液对运动神经元细胞活性的影响

目的 比较源于运动及感觉神经的再生条件液（ＮＲＣＦ）以及碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）对体外分散培养的ＤＳ大鼠运动神经元的生物学效应,探讨周围神经再生趋化特异性产生的机制。方法 建立运动及感觉神经再生室模型,收集术后７天的运动及感觉神经再生条件液（ＭＤ－ＮＲＣＦ,ＳＤ－ＮＲＣＦ）,将两者以及ｂＦＧＦ分别加入分散培养的ＳＤ大鼠运动神经元的ＤＭＥＭ无血清培养基中,在倒置相差显微镜下观察并摄片,运用     

神经生长因子和脑源性神经营养因子基因转入雪旺细胞的实验 …

目的 神经生长因子（ｎｅｒｖｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ,ＮＧＦ）和脑源性神经营养因子（ｂｒａｉｎ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ,ＢＤＮＦ）是具有感觉和运动神经元营养活性的因子。为提高雪旺细胞（Ｓｃｈｗａｎｎ ｃｅｌｌ,ＳＣ）分泌ＮＧＦ和ＢＤＮＦ的能力,将ＮＧＦ和ＢＤＮＦ基因转入ＳＣ进行探讨。方法 用消化后的组织块法和差速离心法分离、纯化雪旺细胞。用脂质体转染法将ＮＧＦ     

睫状神经营养因子对周围神经损伤后再生的影响

目的 研究睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）对周转神经损伤后再生的影响。方法 用硅胶管桥接大鼠双侧坐骨神经缺损,形成神经再生室。左侧室内注入基因重组人ＣＮＴＦ,右侧注入生理盐水（ＮＳ）。术后１４、３０、６０和９０天取材,行大体、光镜、电镜观察。术后９０天行轴突图像分析、电生理检测及霍乱毒素－辣根过氧化物酶（ＣＢ－ＨＲＰ）逆行追踪。结果 与对照侧相比,实验侧再生有髓神经纤维数目较多、轴突较粗且髓鞘较厚,复合肌肉动作电位（ＣＭＡＰ）的潜伏期较短、神经传导速度较快且波幅较高。实验侧ＣＢ－ＨＲＰ标记的脊髓前角运动细胞数明显多于对照侧。结论 外源性ｈＣＮＴＦ有明显促进周围神经再生作用。     

氧化低密度脂蛋白刺激人肾小球系膜细胞产生单核细胞趋化蛋白-1由核因子-κB活化调控

目的 研究核因子ＫＢ（ＮＦ－ＫＢ）在氧化低密度脂蛋白（Ｏｘ- ＬＤＬ）诱导的体外培养的人肾小球系膜细胞表达单核／巨噬细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）中的作用。方法 采用凝胶迁移率变动分析检测ＮＦ－ＫＢ的ＤＮＡ结合活性变化，以免疫组织化学观测细胞内ｐ６５的核转位，用细胞ＥＬＩＳＡ法检测细胞内 ＭＣＰ－１及ＩＫＢα蛋白含量变化。结果 不同浓度（１０、２５、５０、１００μｇ／ｍｌ）Ｏｘ－ＬＤＬ刺激肾小球系膜细胞均可引起细胞ＮＦ-ＫＢ的ＤＮＡ结合活性增强、ＩＫＢα蛋白表达下降以及ＭＣＰ－１蛋白表达增强，以５０μｇ／ｍｌ刺激１ｈ ＮＦ－ＫＢ活化及ＩＫＢα表达减弱最明显，作用２４ｈＭＣＰ-１表达水平最高。ＮＦ－ＫＢ俯活化的同时伴有ｐ６５核转位。上述效应可被ＮＦ－ＫＢ特异性抑制剂吡咯二硫氨基甲酸酯（ＰＤＴＣ）所抑制。结论Ｏｘ－ＬＤＬ刺激人肾小球系膜细胞产生ＭＣＰ－１是由ＮＦ－ＫＢ调控，ＮＦ－ＫＢ参与了脂质肾损害的发病过程。     

多器官功能不全综合征患者外周血单核细胞炎性细胞因？…

为探讨多器官功能不全综合征或多脏器衰竭的发病机理，对６８例ＭＯＤＳ患者外周血单核细胞分泌肿瘤坏死因子（ＴＮＦ），白细胞介素１（ＩＬ－１）及白细胞介素６（ＩＬ－６）水平进行了动态观察。采用不同细胞因子生长依赖细胞株生长指数（ＭＴＴ法）测定方法，检测ＭＯＤＳ患者发病时及治疗３、５、７、１０及１５天后外周血单核细胞分泌ＴＮＦ、ＩＬ－１及ＩＬ－６水平。结果：ＭＯＤＳ患者发病后外周血单核细胞分泌ＴＮＦ、ＩＬ     

肝癌病人树突状细胞诱导高效而特异的抗肝癌免疫

目的 以肝癌病人树突状细胞（ＤＣ）体外诱导抗肝癌免疫。方法 自肝癌病人外周血中分离出单个核细胞（ＰＢＭＣ０;以人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２肿瘤细胞的肿瘤相关抗原（ＴＡＡ）激活ＤＣ;以粒／巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）及白介素４（ＩＬ－４）联合刺激ＰＢＭＣ中ＤＣ;ＤＣ诱导自体Ｔ淋巴细胞增殖,分化为细胞毒性Ｔ细胞（ＣＴＬ）;检测ＣＴＬ及其上清液对ＨｅｐＧ２,ＢＥＬ－７４０２,ＬＯＶＯｅｙ ＨＯＳ－８６     

黄芪皂甙对人系膜细胞基质分泌和β1整合素表达的影响

目的 了解黄芪皂甙对人肾小球系膜细胞（ＨＭＣ）的影响。方法 应用不同浓度的黄芪皂甙或黄芪皂甙血清处理经人理组血小板衍化生长因子（ＰＤＧＦ－ＢＢ）刺激的培养的人系膜细胞，分别采用四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）法和酶联免疫吸附（ＥＬＩＳＡ）方法检测系膜细胞的增殖和Ⅳ型胶原分泌情况，用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法检测β１整合素基因的表达。结果 经黄芪皂甙或黄芪血清处理７２ｈ后，由ＰＤＧＦ－ＢＢ诱导的     

肿瘤坏死因子α对膀胱肿瘤细胞作用的影响因素探讨

目的 探讨肿瘤坏死因子抗膀胱癌细胞作用的影响因素。方法 将肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）和不同浓度的丝裂霉素（ＭＣ），顺铂（ＣＤＤＰ）以及干扰素α（ＩＦＮ－α）作用于体外培养的膀胱癌细胞系ＢＩＵ－８７，用噻唑蓝（ＭＴＴ）法测定细胞毒效果。结果 ＴＮＦ－α对ＢＩＵ－８７细胞有明显的浓度依赖性抑制作用，ＭＣ（２．５～５．０ｍｇ／Ｌ）或ＩＦＮ－α（２５００Ｕ－５０００Ｕ／ｍｌ）与ＴＮＦ－α（１００００Ｕ／     

肿瘤坏死因子α对妊娠早期人滋养层细胞分泌绒毛膜促性腺激素的调节机理研究

从正常妊娠早期人胎盘中分离出滋养层细胞，经重组肿瘤坏死因子α（ｒＴＮＦ－α）刺激，ＭＴＴ生物检测法测定其上清液白细胞介素６（ＩＬ－６）的活性，同时用酶免疫分析法检测人绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）的活性。结果显示，被ｒＴＮＦ－α刺激之后，合体滋养层细胞分泌ＩＬ－６先于ｈＣＧ．当用抗ＩＬ－６受体的单克隆抗体ＰＭ－１阻断后，ｈＣＧ分泌量明显下降，而此时ＩＬ－６的产生量不受影响。当滋养层细胞经ｒＴＮＦ－α刺激产生ＩＬ－６之后再用ＰＭ－１阻断ＩＬ－６受体，则不影响ｈＣＧ的分泌。结果表明，肿瘤坏死因子刺激合体滋养层细胞先产生ＩＬ－６，然后再通过其ＩＬ－６受体信号系统调节ｈＣＧ的分泌。     

低密度脂蛋白对大鼠系膜细胞增殖及系膜基质合成的影响

为研究高脂血症对肾小球损害作用机制，用３Ｈ－Ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ掺入法测定系膜细胞（ＭｓＣ）在不同浓度ＬＤＬ、ＯＸ－ＬＤＬ，及不同时间刺激下的增殖情况；ＥＬＩＳＡ法测定ＭｓＣ培养上清液纤维连结蛋白（ＦＮ）浓度。结果提示ＬＤＬ、ＯＸ－ＬＤＬ对ＭｓＣ增殖有双相作用，低浓度ＬＤＬ能刺激ＭｓＣ增殖，高浓度抑制ＭｓＣ增殖。高浓度ＬＤＬ、ＯＸ－ＬＤＬ对系膜基质合成有促进作用，能通过促进系膜基质合成引起肾小球硬化。     

雪旺细胞分泌神经营养蛋白的提纯

目的：寻找出提纯神经营养蛋白的实用而有效的方法。方法：收集ＳＤ乳鼠周围神经的雪旺细胞无血清条件培养液，离心，将上清液超滤浓缩（ＰＭ１０）收集分子量大于１０ＫＤａ浓缩蛋白液，经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤获得三个蛋白峰，经生物活性检测，证明洗脱Ⅱ峰液生物活性最大。将冼脱Ⅱ峰液再经ＰＭ１０超滤膜浓缩收集浓缩蛋白液，分别用ＴＨＫ２４、ＴＴＫ２４微型过滤器去除大于１００ＫＤａ和小于３０ＫＤａ蛋白，过分子筛高效液相色谱柱。结果：得到４个主要蛋白峰，前三峰蛋白分子量均超过１５０ＫＤａ，第四峰分子量为６７ＫＤａ，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和银染色法进一步证实该蛋白分子量为６７ＫＤａ，基本为单一蛋白带。结论：Ｓｅｐｈａｄｅｘ凝胶过滤、多次超滤和分子筛高效液相色谱技术综合应用是纯化雪旺细胞源神经营养蛋白较好的方法。     

IL-6、IL-1和PDGF对大鼠肾小球系膜细胞生长的影响

目的：探讨白细胞介素－６（ＩＬ－６）、白细胞介素－１（ＩＬ－１）和血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）对大鼠肾小球系膜细胞（ＭｓＣ）增殖的影响。方法：采用改良的ＭＴＴ法和ＢｒｄＵ掺入法检测ＳＤ大鼠体外ＭｓＣ悬液中加入ＩＬ－６、ＩＬ－１及ＰＤＧＦ后１２ｈ及２４ｈ的增殖情况。分７组进行观察。结果：ＩＬ－６组、ＩＬ－１组和ＰＤＧＦ组１２ｈ及２４ｈ的光密度（ＯＤ值）与标记指数（ＬＩ）均为２％ＦＣＳ组也均高,但所有实验组均不能达２０％ＦＣＳ组的细胞增殖水平。联合应用双因子刺激１２ｈ及２４ｈ均未见明显的协同促增殖作用。结论：ＩＬ－６、ＩＬ－１及ＰＤＧＦ均能在一定程度上刺激大鼠肾小球ＭｓＣ增生。联合应用双因子刺激无明显的协同效应。     

血透前后甲状腺素、胰岛素、钙调蛋白对红细胞膜钙泵的影响

血透前后甲状腺素、胰岛素、钙调蛋白对红细胞膜钙泵的影响林新伟，刘钟明ＴＨＥＥＦＦＥＣＴＳＯＦＴＨＹＲＯＸＩＮＥ，ＣＡＭ－ＯＤＵＬＩＮ．ＡＮＤＩＮＳＵＬＩＮＯＮＣａ（２＋）ＡＴＰａｓｅＡＣＴＩＶＩＴＹＯＦＲＥＤＢＬＯＯＤＣＥＬＬＭＥＭ－ＢＲＡＮＥＤＵＲ...     

尿毒症患者红细胞变形能力与膜磷脂和收缩蛋白变化的关系

探讨尿毒症患者红细胞变形能力（ＥＤ）与红细胞膜磷脂成分和收缩蛋白的关系。方法检测了４８例尿毒症患者和４０例健康人红细胞滤过指数（ＩＦ）、红细胞膜磷脂成分和收缩蛋白二聚体（ＳＰ－Ｄ）和四聚体（ＳＰ－Ｔ）相对含量的变化。结果尿毒症患者红细胞ＩＦ明显高于对照组（Ｐ＜０．００１），膜磷脂成分中神经磷脂（ＳＭ）、磷脂酰胆碱（ＰＣ）、磷脂酰丝氨酸（ＰＳ）和磷脂酰乙醇胺（ＰＥ）明显低于对照组（Ｐ＜０．０１），而ＳＭ／ＰＣ高于对照组（Ｐ＜０．０５）；尿毒症患者红细胞ＳＰ－Ｄ和ＳＰ－Ｄ／ＳＰ－Ｔ明显增高，而ＳＰ－Ｔ明显减低，与对照组比较有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。尿毒症患者红细胞ＩＦ与ＳＭ、ＰＣ、ＰＳ、ＰＥ和ＳＰ－Ｔ呈负相关（Ｐ＜０．０５，０．０１），与ＳＭ／ＰＣ、ＳＰ－Ｄ和ＳＰ－Ｄ／ＳＰ－Ｔ呈正相关（Ｐ＜０．０１）。结论尿毒症患者ＥＤ降低与红细胞膜磷脂和收缩蛋白异常有关     

肌肉源22、35kD神经诱向因子对游离周围神经修复脊髓损伤的作用

将从３周龄大白鼠腓骨肌中提取的２２、３５ｋＤ的肌肉源神经诱向因子（ＭＮＴＦ），用１×１ｍｍＰｈａｓｔ凝胶块运载后放入游离周围神经移植与脊髓连接处。结果表明：术后４周，实验组游离神经与脊髓连接处无明显空洞反应，大量神经纤维长入神经内，再生的有髓纤维为对照组的１０．５倍（Ｐ＜０．０１）。ＨＲＰ示踪发现实验组有１４８０．３±４２３．５个阳性神经元，而对照组只有２０．３±６．５个神经元（Ｐ＜０．０１）。显然，ＭＮＴＦ具有增强脊髓及神经根背节神经元，尤其是脊髓运动神经元再生的能力，并可能有营养移植神经中雪旺氏细胞的作用。这对脊髓损伤修复具有一定的意义。     

牛脑垂体中碱性成纤维细胞生长因子的提纯及其体外骨形成 …

本实验首先参照Ｇｏｓｐｏｄａｒｏｗｉｃｚ等人介绍的硫酸铵盐析，ＣＭ－Ｓｅ ｐｈａｄｅｘ Ｃ－５０阳离子交换层析，肝素Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析三步方法提取碱性成纤维细胞生长因子，并从以下三方面进行鉴定；（１）生物活性鉴定显示ｂＦＧＦ能明显促进３Ｔ３细胞增殖。（２）ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果显示提取ｂＦＧＦ分子量为１８．４ＫＤ，且呈一单一蛋白区带，表明样品纯度较高。