磺化异麦芽寡聚糖对肝癌细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的：探讨磺化异麦芽寡聚糖（isomalto oligosaccharide sulfate,IMOS）对肝癌细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响。方法：分别采用细胞计数、荧光面积和流式细胞仪评价IMOS对肝癌细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响。结果：在体外,IMOS能显著抑制HCCLM3、HepG2、Be-l7402和HCCLM3-RFP细胞的增殖并诱导细胞凋亡。结论：IMOS是一种潜在的抗肝癌药物,可在人肝癌裸鼠移植模型中进一步开展抗肝癌疗效的评价。     

凝血酶敏感蛋白1对人肝癌细胞株HCCLM3生长和黏附的作用

目的:观察凝血酶敏感蛋白1对人肝癌细胞株HCCLM3的生长抑制和黏附的作用。方法:实验于2006-05/2007-01在河南省高等学校省级开放实验室完成。①采用浓度为2×107L-1的HCCLM3对数生长期单细胞悬液接种培养后,采用MTT法检测凝血酶敏感蛋白1对HCCLM3的生长抑制作用。②对数生长期的HCCLM3细胞株接种于纤黏连蛋白覆盖的96孔板后,按照处理因素分组:空白对照组、凝血酶敏感蛋白1组(加入凝血酶敏感蛋白1蛋白40mg/L)、CD36阻断组和CD47阻断组[先加入对应的单抗(浓度5mg/L),在体积分数为0.05CO2,37℃温箱孵育30min使单抗与细胞充分结合后再加入凝血酶敏感蛋白1]。培养72h后MTT方法检测凝血酶敏感蛋白1对细胞黏附力的作用,染色后直接计数黏附细胞。结果:①凝血酶敏感蛋白1对HCCLM3细胞的生长抑制率随着浓度的提高而增加,40mg/L与50mg/L相比抑制作用差异无显著性。抑制率随着时间的延长而增加,在72h抑制作用最明显。②黏附力的检测显示:凝血酶敏感蛋白1组,CD36阻断组,CD47阻断组细胞黏附力均显著低于对照组(P<0.05),但凝血酶敏感蛋白1组,CD36阻断组,CD47阻断组细胞黏附力差异无显著性(P>0.05)。结论:凝血酶敏感蛋白1对HCCLM3的生长有抑制作用,在一定范围内呈剂量依赖性和时间依赖性。凝血酶敏感蛋白1可抑制人肝癌细胞株HCCLM3与细胞外基质的黏附能力,作用途径可能与受体CD36,CD47无关。     

CIK细胞对裸鼠人肝癌移植瘤生长的抑制作用

目的 探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)对裸鼠人肝癌移植瘤生长的抑制作用,为肝癌的生物治疗提供实验依据。方法 提取健康人外周血单个核细胞,加入不同的细胞因子(抗CD3单克隆抗体、重组人白细胞介素2、重组人γ干扰素)促进CIK细胞成熟,采用流式细胞术检测CIK细胞表型,合格标准为CD3⁺CD56⁺CIK细胞达20%以上。用SMMC-7721人肝癌细胞建立裸鼠皮下移植瘤模型,随后将30只模型鼠随机分为CIK细胞组(A组,15只)、空白对照组(B组,15只),A组给予尾静脉注入3×10⁷个检测合格的CIK细胞,每周1次,共4次,B组不予处理。在治疗前及治疗后每4天测量两组肿瘤体积;采用苏木精-伊红染色检测两组肿瘤病理组织学变化;采用免疫组织化学法检测两组肿瘤组织Ki-67蛋白表达情况;采用脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测两组肿瘤细胞凋亡情况。结果 治疗前,A、B组肿瘤体积比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗至第32天时,A组肿瘤体积明显小于B组,差异有统计学意义(P<...     

异基因瘤基对小鼠H22肝癌的抗瘤作用

用异基因肿瘤细胞加ＢＣＧ作为瘤苗免疫小鼠，１０天后再用Ｈ２２肝癌细胞攻击。与对照组ＢＣＧ组比较，经异基因瘤苗免疫后的小鼠存活期显著延长。用该组长期存活小鼠的脾细胞制备的ＬＡＫ细胞，较同龄未免疫小鼠的脾细胞制备的ＬＡＫ细胞具有更强的抗瘤作用。     

苦参碱联合顺铂对人肝癌细胞株HepG2裸鼠移植瘤模型瘤体生长及caspase-3和Survivin表达的影响

目的分析苦参碱联合顺铂对人肝癌细胞株Hep G2裸鼠移植瘤模型瘤体生长及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)和存活素(Survivin)表达的影响。方法于BALB/c裸鼠腋部皮下注入人肝癌细胞株Hep G2以此构建移植瘤模型。在成瘤后,将28只裸鼠随机分为对照组(等量生理盐水)、顺铂组(顺铂2 mg/kg)、苦参碱组(苦参碱100 mg/kg)、联用组(苦参碱100 mg/kg+顺铂2 mg/kg)各7只,各组均通过腹腔注射给药。观察各组瘤体生长状况,对各组抑瘤率进行计算。通过免疫组化法对各组瘤组织中caspase-3、Survivin表达水平进行检测,计算和比较各组阳性细胞率。结果联用组裸鼠抑瘤率为80. 00%,较顺铂组(64. 00%)、苦参碱组(36. 00%)明显升高(P 0. 05)。联用组裸鼠caspase-3阳性细胞率为(77. 89±7. 35)%,较对照组(19. 89±4. 14)%、顺铂组(64. 86±9. 34)%、苦参碱组(36. 97±9. 35)%均显著上升(P 0. 05)。联用组裸鼠Survivin阳性细胞率为(20. 04±4. 37)%,较对照组(84. 85±14. 75)%、顺铂组(39. 05±7. 69)%、苦参碱组(64. 06±9. 14)%均显著降低(P 0. 05)。结论单用顺铂或苦参碱对人肝癌细胞株Hep G2裸鼠移植瘤均具有一定的抑瘤作用,但二者联用的抑瘤作用更为明显。其作用机制可能与苦参碱联合顺铂处理可对caspase-3、Survivin表达水平造成影响,进而促使肿瘤细胞凋亡存在密切关系。     

三氧化二砷对人胆囊癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的:观察三氧化二砷(As2O3)对人胆囊癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法:20只皮下接种移植瘤大小相似的BALB/c裸鼠,随机分为0.9%氯化钠液(NS)组(n=10)和As2O3组(n=10)。尾静脉注射NS0.2ml.只-1(NS组)或As2O310mg·kg-1(As2O3组),每日1次,连续7d。21d时处死所有裸鼠,测量肿瘤的重量和体积。结果:NS组瘤重0.992±0.401g、体积(1.50±0.57)mm3,As2O3组瘤重(0.526±0.269)g、体积(0.83±0.39)mm3,瘤重和体积明显下降(P<0.01)。结论:As2O3能明显抑制人胆囊癌裸鼠移植瘤的生长。     

异臭椿烷对S180肉瘤细胞小鼠移植瘤的影响

目的探讨不同剂量的异臭椿烷治疗S180肉瘤细胞小鼠皮下移植瘤效果。方法建立S180肉瘤细胞小鼠皮下移植瘤动物模型,随机分为空白对照组、阳性对照组、异臭椿烷高、中、低剂量组,每组9只。异臭椿烷高、中、低剂量组分别给予1.0、0.5、0.1mg/L异臭椿烷0.1mL,灌胃给药,每天1次;阳性对照组采用环磷酰胺腹腔注射给药,25mg/（kg·d）;空白对照组每只给予0.1mL纯食用油灌胃。5组均连续给药5d后间隔2d再次连续给药5d。停药后24h处死小鼠,称取小鼠体质量,比较小鼠实验前后体质量变化;称取瘤质量,计算抑瘤率。结果异臭椿烷各剂量组和阳性对照组小鼠状态总体表现明显强于空白对照组,体质量增加幅度明显高于空白对照组,肿瘤生长速度明显慢于空白对照组,差异均有显著意义（F=34.786、16.407,q=3.059～16.077,P〈0.05）。结论异臭椿烷对S180肉瘤细胞小鼠皮下移植瘤生长具有一定的抑制作用。     

Bevacizumab抑制高转移性人肝癌原位移植瘤的血管形成

目的：探讨Bevacizumab对人高转移肝癌模型LCI-D20血管形成的抑制作用。方法：分别采用空白对照及Bevacizurnab治疗LCI-D20，用药28d后处死裸鼠，测量肿瘤质量，检测肿瘤组织微血管密度。结果：对照组肿瘤负荷平均为2．0g；MVD（microvascular density，微血管密度）平均39．6个／HP；治疗组平均肿瘤负荷为0．1g及平均MVD为4．9个／HP，与对照组比较有显著差异（P〈20．05）。结论：Bevacizumab有抑制肝癌血管形成及肿瘤生长的活性。     

鹅去氧胆酸衍生物对HepG2裸鼠肝癌移植瘤的影响

目的探讨鹅去氧胆酸衍生物对HepG2裸鼠肝癌移植瘤的影响。方法将HepG2细胞注射于SPF级BALB/c裸鼠,形成移植瘤后将瘤体接种于裸鼠,接种成功的小鼠随机分为三组(A组、B组与C组),每组6只裸鼠。A组给予生理盐水腹腔注射,B组给予鹅去氧胆酸衍生物按20 mg/(kg·d)进行腹腔注射,C组给予鹅去氧胆酸衍生物按60 mg/(kg·d)的进行腹腔注射。计算三组的抑瘤率,对肝脏组织进行病理分析与肝癌衍生生长因子(HDGF)表达分析。结果所有裸鼠均接种与造模成功。B组、C组的抑瘤率分别为(38.45±2.15)%和(49.28±3.19)%,C组显著高于B组(P 0.05)。A组肝细胞排列紊乱,肿瘤细胞异型性明显,肝小叶组织正常结构消失,假小叶形成; B组与C组的肝脏病理显著改善(P 0.05),癌症细胞巢形成和细胞坏死显著减少(P 0.05)。三组肝脏组织的HDGF mRNA与蛋白表达水平比较,差异均有统计学意义(P 0.05),B组与C组均显著低于A组(P 0.05)。结论鹅去氧胆酸衍生物可呈剂量依赖性地在HepG2裸鼠肝癌移植瘤中有效发挥抑瘤作用,改善肝脏病理状况,其作用机制可能与抑制HDGF基因与蛋白表达有关。     

沙利度胺对人肝癌细胞株SMMC-7721荷瘤鼠移植瘤作用

目的研究沙利度胺对人肝癌细胞株SMMC-7721荷瘤鼠移植瘤的生长抑制作用及可能机制。方法建立肝癌细胞株SMMC-7721的荷瘤鼠模型,观察沙利度胺组与对照组瘤体变化,应用免疫组化方法测定瘤体组织中微血管密度,ELISA法测定荷瘤鼠外周血血管内皮生长因子（VEGF）表达,并采用流式细胞仪测定瘤体组织细胞凋亡指数及瘤体细胞中Caspase-3的表达。结果成功建立肝癌细胞株SMMC-7721的荷瘤鼠模型,随着皮下移植瘤的生长,在第7天以后,对照组瘤体体积渐大于沙利度胺组,且随时间延长差值增大。实验结束时沙利度胺组抑瘤率为24.6%。沙利度胺组荷瘤鼠外周血VEGF含量及瘤体组织微血管密度均显著低于对照组（t=6.563、3.586,P〈0.01）,瘤体组织细胞凋亡指数及Caspase-3阳性表达均显著高于对照组（t=7.356、5.147,P〈0.01）。结论沙利度胺能抑制人肝癌细胞株SMMC-7721荷瘤鼠移植瘤的生长,诱导肿瘤细胞凋亡及抑制肿瘤血管形成可能为其机制,Caspase-3参与细胞的凋亡过程。     

卡培他滨联合干扰素-α抑制裸鼠肝癌生长的实验研究

目的:研究卡培他滨联合干扰素-α抑制肝癌生长的作用及其机制。方法:人肝癌高转移裸鼠模型LCI—D20 30只,随机分为对照组、卡培他滨组、干扰素组和联合用药组。用药3周后,观察肝内原位瘤体积的变化,利用ELISA方法检测肿瘤组织内的胸苷磷酸化酶(TP)表达水平。结果:对照组、卡培他滨组、干扰素组和联合用药组肿瘤体积分别为1033±146mm~3、455±236mm~3、248±114mm~3和46±29mm~3。与对照组肿瘤体积相比,给药组肿瘤体积明显缩小,联合用药组尤为突出,差异极显著(P<0.01)。析因设计方差分析表明联合应用卡培他滨与干扰素具有协同作用。应用干扰素组(包括干扰素组与联合用药组)与未用干扰素组(包括对照组与卡培他滨组),肿瘤组织中TP酶表达水平分别为30.52±10.73ng/mg蛋白质20.10±3.67ng/mg蛋白质,两组差异极显著(P<0.01)。结论:干扰素-α可上调肝癌组织中TP酶表达,与卡培他滨联合应用具有协同抑制LCI—D20肝癌生长的作用。     

聚乙二醇化干扰素-α抑制人肝癌生长的实验研究

目的：探讨聚乙二醇化干扰素-α抑制人肝癌高转移裸鼠模型LCI-D20肿瘤生长的作用。方法：将人肝癌高转移裸鼠模型LCI-D20随机分为对照组、小剂量常规干扰素-α组、大剂量常规干扰素-α组、小剂量聚乙二醇化干扰素-α组和大剂量聚乙二醇化干扰素-α组。用药4周后行血常规和肝肾功能检查,并观察裸鼠体重变化、肿瘤生长及肝内转移情况。结果：对照组、小剂量常规干扰素-α组、大剂量常规干扰素-α组肿瘤体积分别达到(3293±993)mm~3、(3134±869)mm~3和(2240±1048)mm~3,且发现肝内转移和腹壁浸润,而聚乙二醇化干扰素-α组无肿瘤存活,具有显著差异(P＜0.01)。2种剂量聚乙二醇化干扰素-α组白细胞计数均有下降(P=0.009和P=0.002)。结论：聚乙二醇化干扰素-α能抑制LCI-D20裸鼠模型中肝移植瘤的生长和肝内转移,其作用可能与血清中保持稳定的干扰素治疗浓度有关。     

免疫脂质体超声造影剂增强荷肝癌裸鼠肿瘤显像的实验研究

目的探讨人肝细胞癌靶向脂质体超声造影剂对荷肝癌裸鼠肿瘤的增强显像效果。方法采用人肝癌细胞株HHCC接种于裸鼠皮下,建立荷人肝癌裸鼠模型;将靶向脂质体超声造影剂或普通脂质体超声造影剂经尾静脉注入荷瘤裸鼠体内,使用二次谐波显像模式观察并记录造影过程;采用目测观察和视频灰阶分析技术,以时间-强度曲线分析来定量评价肿瘤显像的增强效果。结果造影后目测观察,靶向造影剂对肿瘤有延迟增强显像效果,靶向造影剂组肿瘤的增强显影约在8min达到峰值,峰值灰阶强度值为(39.545±10.099)dB;普通造影剂组肿瘤增强显影达峰值时间约为10s,峰值灰阶强度值为(22.438±5.108)dB,与靶向造影剂造影后灰阶强度峰值比较相差显著(P<0.01)。结论人肝细胞癌靶向脂质体超声造影剂可以增强荷人肝癌裸鼠的肿瘤超声显像效果。     

微泡增强低频超声空化抑制裸鼠前列腺癌移植瘤

目的观察低频超声（20kHz）辐照联合静脉注射微泡造影剂SonoVue对裸鼠前列腺癌（Dul45）移植瘤的抑瘤效应,并探讨其可能的抑瘤机制。方法通过细胞移植和瘤块移植方法建立24只裸鼠前列腺癌Dul45移植瘤模型,随机分为超声微泡组、单纯超声组、单纯微泡组和对照组,每组各6只。超声微泡组：尾静脉注射0．2mLSonoVue的同时对瘤体行20kHz超声辐照,辐照强度200mW／cm2;单纯超声组：尾静脉注射生理盐水0．2mL,同时超声辐照2min;单纯微泡组：尾静脉注射SonoVue0．2mL同时行假照,各组均隔天1次,共3次,对照组不做任何处理。治疗后测量瘤体大小,绘制瘤体生长曲线,计算抑瘤率。首次治疗后14d剥离瘤体,通过光学显微镜、电子显微镜观察肿瘤组织病理改变。免疫组织化学方法观察CD34阳性染色血管,计算肿瘤微血管密度（microvesseldensity,MVD）,比较各组间MVD的差异。结果24只裸鼠均成功植瘤。治疗后超声微泡组瘤体体积均数明显小于其他3组（P〈O．05）,抑瘤率为62．7％。光学显微镜下超声微泡组瘤体组织大部分损伤坏死,电子显微镜下超声微泡组肿瘤内微血管的内皮细胞损伤,线粒体肿大,基底膜断裂。超声微泡组瘤体内CD34阳性染色微血管数减少,其MVD值显著低于其他各组。结论20kHz低频超声辐照联合微泡造影剂SonoVue可有效抑制裸鼠人前列腺癌移植瘤的生长,其抑瘤机制可能是通过超声空化效应破坏肿瘤的微血管实现的。     

抑制Smac基因表达对胰腺癌裸鼠移植瘤生长影响的研究

[目的]探讨Smac基因对人胰腺癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用.[方法]于裸鼠腋下接种200 μL 107/mL的PANC-1细胞悬液,建立人胰腺癌裸鼠移植瘤模型,将其分为三组：注射PBS液（A组）、转染空载体（B组）、转染Smac基因（C组）,比较三组移植瘤的大小、移植瘤细胞的凋亡率,移植瘤中Smac蛋白表达和微血管密度（MVD）.[结果]与A、B组比较,C组裸鼠移植瘤体积、质量和MVD显著减小;移植瘤细胞的凋亡指数和Smac蛋白的表达率均明显增高,其差异均有统计学意义（P〈0.05）.[结论]脂质体转染Smac基因能抑制人胰腺癌裸鼠移植瘤的生长,可能与该基因诱导胰腺癌细胞凋亡和抑制肿瘤血管形成有关.     

克栓酶对荷瘤裸鼠血液流变性的影响

目的 观察并了解东菱精纯克栓酶对荷瘤裸鼠全血流变学参数值的影响。方法 采用锥板式粘度计对移植胃癌和鼻咽癌荷瘤裸鼠使用东菱精纯克栓酶前后的全血粘度进行检测,并进行统计学分析。结果 使用东菱精纯克栓酶后胃癌裸鼠血液流变学各项指标皆于用药前差异显著（P＜0．01）,鼻咽癌裸鼠用药后全血低切粘度低于用药前（P＜0．01）,其它指标无明显改变（P＞0．05）。结论 使用东菱精纯克栓酶对荷瘤裸鼠的血液流变学参数有明显改善,提示有可能将其应用于临床预防肿瘤转移及扩散。     

丙戊酸抗裸鼠Kasumi-1细胞移植瘤血管新生的作用研究

本研究旨在探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸（VPA）体内、体外抑制急性髓系白血病血管新生及其作用机制。用不同浓度的VPA处理人t（8;21）急性白血病细胞株Kasumi-1细胞3d后用RT-PCR及Westernblot分析细胞Angl、Ang2mRNA及蛋白水平的变化;建立Kasumi-1细胞裸鼠移植瘤模型,采用RT-PCR、Westernblot的方法分析对照组和VPA治疗组瘤组织ang]、Ang2、VEGFmRNA及蛋白水平的变化,免疫组织化学的方法分析瘤组织CD34及Angl、An蛇蛋白水平的改变。结果表明,VPAl-3mmol／L处理3d能够下调Kasumi-1细胞AnglmRNA（3mmol／L组0．040±0．008,对照组O．360±0．116）、Ang2mRNA（3mmol／L组0．146±0．038,对照组0．540±0．049）及蛋白的相对表达,呈浓度依赖性;VPA500mg／kg,ip,处理14d能够明显降低裸鼠瘤组织Angl、Ang2、VEGFmRNA及蛋白的相对表达（P〈0．01）,并能明显减少荷Kasumi-1细胞裸鼠移植瘤微血管密度（8．470±0．3001352．600±O．200）。结论：VPA可能通过调节血管生成素及VEGF的表达,阻碍白血病的血管新生,从而抑制白血病细胞浸润、迁移。