肝癌MHCC97H细胞肝细胞生长因子(HGF)/c-Met通路激活对血管内皮生长因子表达的影响

目的:研究肝癌MHCC97H细胞中肝细胞生长因子(HGF)诱导血管内皮生长因子(VEGF)表达过程中的转录因子Sp1的活性.方法:将MHCC97H细胞分为对照组、HGF组、光辉霉素组,分别用RT-PCR及Western blot分析与VEGF mRNA、蛋白质表达及Sp1水平、磷酸化Sp1水平变化以及应用Sp1阻断剂光辉霉素后上述目标蛋白的变化情况.结果:外源性HGF 60 ngmL-1孵育15 min、16 h后分别可以使MHCC97H细胞的VEGF mRNA及其蛋白质的表达明显提高(P<0.01).这一过程中Sp1水平无明显变化(P>0.05).进一步分析发现磷酸化Sp1水平明显升高(P<0.01).用Sp1抑制剂光辉霉素预先处理MHCC97H细胞1 h后,再加入HGF 60 ngmL-1VEGFmRNA及其随后蛋白质表达均受到抑制(P<0.01).结论:HGF诱导MHCC97H肝癌细胞VEGF表达是通过增强Sp1磷酸化实现的.     

肝细胞生长因子对心肌细胞肥大的影响

目的 探讨肝细胞生长因子（HGF）在培养新生大鼠心肌细胞肥大中的作用。方法 原代心肌细胞中进行，分对照组和不同浓度HGF组（1ng／mL、10ng／mL、100ng／mL），采用放射性同位素3H-leu掺入法检测培养心肌细胞蛋白质合成速率。应用荧光定量PCR方法检测HGF对培养心肌细胞肥大相关基因ANF、B-MHC表达的影响。结果 HGF（1ng／mL、10ng／mL、100ng／mL）作用心肌细胞24h后可明显增加心肌细胞3H—leu的掺入量，分别增高2．15、4．66、2．51倍，与对照组比较有显著性差异（P〈0．01，0．01，0．01）；并可诱导心肌细胞ANF和B-MHC表达增加，ANFmRNA表达增加平均为（2．63±0．04，4．32±0．08，3．91±0．05），分别增高1．61、3．32、2．91倍，与对照组（1±0．00）比较有显著性差异（P〈0．01，0．01，0．01）；B-MHCmRNA表达增加平均为（2．14±0．03，2．81±0．07，2．42±0．06），分别增高1．10、1．82、1．41倍，与对照组比较有显著性差异（P〈0．01，0．01，0．01）；上述结果表明1ng／mL已经起作用，10ng／mL作用最强，100ng／mLHGF有所下降。结论 肝细胞生长因子可促进心肌细胞蛋白质合成速率和心肌细胞ANF、B-MHC表达增加，它可直接促进心肌细胞的肥大。     

脑胶质瘤患者血清中肝细胞生长因子定量测定的临床意义

目的检测脑胶质瘤患者血清肝细胞生长因子（HGF）水平,分析血清HGF水平与胶质瘤恶性程度、手术、放射治疗及化学治疗的关系。方法32例脑胶质瘤患者按病理分级标准分为高级别组和低级别组。以20例健康人作为对照组,采用ELISA法检测患者外周血中的HGF水平,比较正常人及胶质瘤患者手术前后、放射治疗和化学治疗前后血清HGF水平。结果高级别组脑胶质瘤患者血清中HGF水平显著高于低级别组HGF水平（P〈0．01）,且高级别组和低级别组均显著高于正常人（P〈0．01、P=0．000446）;脑胶质瘤患者手术、放射治疗及化学治疗后血清HGF水平显著下降。结论脑胶质瘤患者血清HGF浓度水平可以反映肿瘤恶性程度及治疗预后。     

黄芪对内毒素性急性肺损伤大鼠肝细胞生长因子表达的影响

目的：探讨黄芪在急性肺损伤（ALI）时对肝细胞生长因子（HGF）表达的影响，评价黄芪在ALI中的治疗机制。方法：制备内毒素（LPS）性ALI模型。设正常对照组（生理盐水1ml／kg）、模型组（LPS5mg／kg）、黄芪治疗组（黄芪8mg／kg）。用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）检测各组大鼠肺组织匀浆中HGFmRNA表达的变化；用免疫组化法检测各组大鼠肺组织中HGF阳性细胞数的变化。结果：RT—PCR检测结果显示，ALl时HGF mRNA表达明显增加（P〈0．05），黄芪能促使HGFmRNA表达进一步升高（P〈0．05）。免疫组化显示，ALI时HGF阳性细胞表达产物增加（P〈0．01），黄芪能促进HGF的表达（P〈0．05）。结论：黄芪通过促进HGF的表达来促进ALI的修复。     

检测肺癌患者血清中肝细胞生长因子 血管内皮生长因子含量的临床意义

目的探讨血清中肝细胞生长因子（HGF）、血管内皮生长因子（VEGF）含量对肺癌的影响,及其各自在判断肺癌种类方面的价值。方法收集40例肺癌患者,12例肺良性病变患者,15例健康对照组人群的血清。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）分别测定HGF、VEGF的含量。结果肺良性病变、健康对照组血清中HGF分别为（245±135）、（228±164）ng/L,无明显升高,VEGF分别为（65±32）、（59±28）ng/L,肺癌组HGF[（431±202）ng/L]、VEGF[（165±52）ng/L]均分别高于肺良性病变组及健康对照组,差异有统计学意义（P〈0.01）。两种血管生长因子在不同类型肺癌中的阳性表达比较分析显示,HGF以肺腺癌中表达更明显,VEGF在肺鳞癌患者血清升高更明显（P〈0.01）。结论肺癌患者血清中HGF、VEGF升高,联合检测对肺癌的诊断和鉴别诊断具有重要价值,有望为提高肺癌的早期检出率提供新的依据。     

子宫内膜异位症患者腹腔液肝细胞生长因子和血管内皮生长因子水平的检测

[目的]探讨肝细胞生长因子（HGF）和血管内皮生长因子（VEGF）在子宫内膜异位症（EMs）发病中的意义。[方法]应用双抗体夹心ABC-酶联免疫吸附法（ELISA）检测25例EMs患者和15例正常对照组腹腔液HGF和VEGF的浓度。[结果]①EMs患者腹腔液中HGF和VEGF浓度Ⅰ-Ⅱ期和Ⅲ-Ⅳ期均显著高于对照组（P〈0.01,P〈0.05）;但Ⅰ-Ⅱ期与Ⅲ-Ⅳ期比较差异无显著性（P〉0.05）,且HGF和VEGF浓度与r-AFS评分均无相关性（r=-0.348,P〉0.05;r=-0.323,P〉0.05）。②EMs患者腹腔液中HGF浓度卵泡期与黄体期比较,差异无显著性（P〉0.05）,VEGF浓度卵泡期较黄体期显著升高（P〈0.05）;对照组两因子浓度在卵泡期和黄体期的差异无显著性（P〉0.05）;卵泡期腹腔液HGF和VEGF浓度在EMs组和对照组间比较,差异有显著性（P〈0.01,P〈0.05）,黄体期腹腔液HGF浓度在两组间比较差异无显著性（P〉0.05）,VEGF浓度差异有显著性（P〈0.05）。③EMs患者腹腔液中HGF和VEGF浓度呈明显正相关（r=0.485,P〈0.05）;而对照组两者无相关性（r=0.372,P〉0.05）。[结论]HGF和VEGF可能参与EMs的发生,且两者在EMs的发生发展中可能起协同作用。EMs患者腹腔液HGF浓度可能与月经周期无关,VEGF浓度可能受卵巢激素周期性调节。     

腺病毒载体介导肝细胞生长因子基因对血管内皮细胞的作用

目的：研究腺病毒载体介导肝细胞生长因子（HGF）基因感染血管内皮细胞后在正常供氧、缺氧及缺氧后复氧的情况下细胞的凋亡情况。方法：将分离、培养的内皮细胞分为3组，分别给予M199（对照组）、HGF（HGF组）和HGF基因腺病毒载体（Ad-HGF组），分别在正常供氧、缺氧及缺氧后复氧3种情况下观察细胞的凋亡情况。结果：Ad-HGF组及HGF组细胞凋亡数均低于对照组（P〈0．01），Ad-HGF组与HGF组细胞凋亡数差异无显著性意义。结论：腺病毒载体介导HGF基因感染内皮细胞后能在缺氧情况下有效地阻止细胞凋亡。     

肝细胞生长因子在非小细胞肺癌中的表达及其意义

目的研究肝细胞生长因子（简称HGF／SF）表达与肺癌微血管密度及肺癌预后的相关性。方法应用免疫组化方法和图像分析仪分析对49例手术切除非小细胞肺癌（NScLc）标本进行检测分析。结果HGF阳性表达率63．3％，HGF阳性表达主要出现肺癌组织中癌细胞胞浆内，HGF表达与肺癌的微血管生成及肺癌的进展有关，其中Ⅲ期肺癌组HGF阳性率为85．7％高于Ⅰ、Ⅱ期组（P＜0．005）；有淋巴结转移N1N2组HGF阳性率分别为91．7％和90．9％，高于无淋巴结转移N0组（46．2％）（P＜0．005）；2年生存率HGF表达阳性组（51．6％）明显低于HGF表达阴性组（83．3％）（P＜0．05）；HGF表达阳性肺癌组织中微血管密度明显高于HGF表达阴性组（P＜0．05）。结论HGF是促进肺癌组织血管生成的重要因素，可作为判断肺癌患者预后的重要指标。     

肝细胞生长因子在胎儿生长受限孕妇胎盘组织的表达及其意义

目的：探讨肝细胞生长因子（HGF）在胎儿生长受限孕妇胎盘组织中的表达及其对胎盘滋养细胞凋亡的影响。方法：选取胎儿生长受限（FGR）孕妇42例及正常晚孕孕妇（对照组）38例,采用逆转录聚合酶联反应、免疫印迹的方法,检测胎盘组织中HGF和Fas基因mRNA及蛋白表达水平。结果：胎盘组织HGFmRNA和蛋白的表达水平,FGR组明显低于对照组（P〈0.05）;FasmRNA和蛋白在胎盘组织中的表达水平,FGR组明显高于对照组（P〈0.05）。胎盘HGF的表达与Fas的表达呈负相关。结论：胎盘组织HGF低表达和F as高表达可能是FGR胎盘滋养细胞凋亡的一个重要影响因素。     

格尔德霉素对胶质瘤细胞MT1-MMP及u—PA基因表达的影响

目的研究格尔德霉素（GDM）作用下,膜型基质金属蛋白酶-1（MT1-MMP）和尿激酶型纤溶酶原激活物（u—PA）基因在胶质瘤细胞中的表达水平。方法培养胶质瘤细胞株U251-MG和U87-MG,反转录PCR方法检测MT1-MMP和u-PAmRNA表达。结果与正常对照组（NC）相比,HGF组u—PAmRNA表达显著增加（P〈0．05）;GDM组MT1-MMP和u—PAmRNA表达水平较对照组和HGF组均显著降低（P〈0．05）;HGF＋GDM组u—PAmR—NA表达水平较对照组和HGF组显著降低（P〈0．05）。结论GDM能够抑制胶质瘤细胞中MT1-MMP和u—PAmRNA的表达。     

Calcium and protein kinase C (PKC)-related kinase mediate alpha 1A-adrenergic receptor-stimulated activation of phospholipase D in rat-1 cells,independent of PKC

A previous study conducted in rat-1 cells expressing alpha(1A)-adrenergic receptors showed that phenylephrine (PHE) stimulates phospholipase D (PLD) activity. This study was conducted to determine the contribution of protein kinase C (PKC) to PHE-induced PLD activation in these cells. PKC inhibitors bisindolylmaleimide (BIM) I and Ro 31-8220, but not G? 6976 or a pseudosubstrate peptide inhibitor of PKCalpha, decreased PLD activity and arachidonic acid release elicited by PHE. However, antisense oligonucleotides directed against PKC alpha, delta, epsilon, and eta reduced PKC isoform levels by about 80% but failed to alter PHE-induced PLD activation, indicating that these PKC isoforms are not involved in PLD activation elicited by alpha1A-adrenergic receptor stimulation. Ectopic expression of a kinase-deficient mutant of the PKC-related kinase PKN significantly attenuated PHE-induced PLD activation. On the other hand, BIM I and Ro 31-8220 blocked PHE-mediated increase in intracellular Ca2+ but G? 6976 and the peptide inhibitor did not. In the absence of extracellular Ca2+, PHE failed to increase PLD activity. These results indicate that alpha1A-adrenergic receptor-stimulated PLD activation is mediated by a mechanism independent of PKCalpha, delta, epsilon, and eta, but dependent on a PKC-related kinase, PKN. Moreover, PKC inhibitors BIM I and Ro 31-8220 block PHE-induced PLD activity by inhibiting calcium signal. Caution should be used in interpreting the data obtained with PKC inhibitors in vivo.     

Protein kinase C‐δ mediates von Willebrand factor secretion from endothelial cells in response to vascular endothelial growth factor (VEGF) but not histamine

Summary. Background: Vascular endothelial growth factor (VEGF) and histamine induce von Willebrand factor (VWF) release from vascular endothelial cells. Protein kinase C (PKC) is involved in the control of exocytosis in many secretory cell types. Objectives: We investigated the role of PKC and the interactions between PKC and Ca²⁺ signaling in both VEGF‐induced and histamine‐induced VWF secretion from human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). Results: Several PKC inhibitors (staurosporine, Ro31‐8220, myristoylated PKC peptide inhibitor and Go6983) block VEGF‐induced but not histamine‐induced VWF secretion. PKC‐α and novel PKCs (PKC‐δ, PKC‐ε, and PKC‐η), but not PKC‐β, are expressed in HUVECs. Both VEGF and histamine activate PKC‐δ. However, gene inactivation experiments using small interfering RNA indicate that PKC‐δ (but not PKC‐α) is involved in the regulation of VEGF‐induced but not histamine‐induced secretion. Both VEGF and histamine induce a rise in cytosolic free Ca²⁺ ([Ca²⁺]_c), but the response to VEGF is weaker and even absent in a significant subset of cells. Furthermore, VEGF‐induced secretion is largely preserved when the rise in [Ca²⁺]_c is prevented by BAPTA‐AM. Conclusions: Our study identifies striking agonist specificities in signal–secretion coupling. Histamine‐induced secretion is dependent on [Ca²⁺]_c but not PKC, whereas VEGF‐induced secretion is largely dependent on PKC‐δ and significantly less on [Ca²⁺]_c. Our data firmly establish the key role of PKC‐δ in VEGF‐induced VWF release, but suggest that a third, VEGF‐specific, signaling intermediate is required as a PKC‐δ coactivator.     

血管内皮生长因子、肝细胞生长因子在虹膜新生血管大鼠房水中的含量变化

目的：探讨血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）在虹膜新生血管（neovascularization of the iris,NVI）大鼠模型房水中的含量变化。方法将清洁级健康10周龄Wistar大鼠随机分为4组,每组20只（40眼）,乙醚吸入法全身麻醉大鼠,实验1组：经尾部静脉注射孟加拉玫瑰红光敏剂;实验2组：尾部静脉注射孟加拉玫瑰红光敏剂＋氪激光光凝Wistar大鼠全部视网膜分支静脉;实验3组：氪激光光凝Wistar大鼠全部视网膜分支静脉;实验4组：空白对照组（未经任何处理）。利用虹膜荧光造影（iris fluorescence angiography,IFA）对各实验组大鼠进行鉴定,对NVI动物模型复制成功的大鼠采用Miller方法进行分级,对大鼠NVI形成前1天及模型复制后3、7、10、14、21、30 d分别抽取房水,采用酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测房水中VEGF、HGF的含量。采用SPSS 13.0统计软件分析实验组及对照组之间不同时间组房水中VEGF、HGF 含量变化,并分析两种因子的相关性。结果单纯应用孟加拉玫瑰红尾部静脉注射和单纯激光的方法不能使大鼠产生视网膜缺血,用尾部静脉注射孟加拉玫瑰红光敏剂＋氪激光光凝法可诱导大鼠视网膜静脉阻塞,成功制作NVI动物模型。 NVI模型复制前1 d房水中VEGF和HGF的浓度分别为（15.58±5.85）pg/ml和（22.84±6.75）pg/ml,复制后3、7、10、14、21、30 d二者浓度分别为（17.30±4.80）、（31.83±9.90）、（36.89±11.73）、（57.34±18.55）、（112.03±46.41）、（106.93±52.89）pg/ml和（24.58±7.18）、（36.47±11.28）、（46.27±13.11）、（59.25±15.47）、（90.71±29.91）、（102.08±34.82）pg/ml;VEGF和HGF与NVI形成呈正相关,但二者浓度无相关性。结论大鼠虹膜新生血管的形成与其房水中VEGF、HGF含量成正相关,二者在虹膜新生血管形成中可能扮演重要角色。     

IGF-1通过ERK-MNK信号通路诱导骨髓间充质干细胞表达VEGF的实验研究

目的 为探讨ERK-MNK信号通路是否参与胰岛素样生长因子-1（IGF-1）诱导骨髓间充质干细胞（BMSCs）表达VEGF,进一步揭示MSCs与VEGF的作用机制.方法 通过免疫印迹方法检测经IGF-1诱导的骨髓间充质干细胞内HIF-1α、p-MNK等信号蛋白及VEGF的表达变化,给予MNK抑制剂CGP 57380和HIF-1α抑制剂YC-1后再检测含外源性IGF-1的BMSCs中VEGF的表达水平.结果 外源性IGF诱导后,HIF-1α等信号蛋白表达上调,分别阻断MNK和HIF后,VEGF的表达降低.结论 IGF-1通过调节ERK-MNK信号通路从而诱导BMSCs表达VEGF.     

IGF-1通过ERK-MNK信号通路诱导骨髓间充质干细胞VEGF表达的实验研究

目的 探讨ERK-MNK信号通路是否参与IGF-1对骨髓间充质干细胞VEGF表达的诱导.方法 免疫印迹方法检测IGF诱导的骨髓间充质干细胞内HIF-1α、p-MNK等信号蛋白的表达变化和VEGF表达的变化,给予MNK抑制剂CGP 57380和HIF-1α抑制剂YC-1后再检测含外源性IGF-1的骨髓质间充质细胞中VEGF的表达水平.结果 外源性IGF诱导后,HIF-1α、p-MNK等相关信号蛋白表达上调,分别阻断MNK和HIF后,VEGF的表达趋于正常.结论 IGF-1通过调节ERK-MNK信号通路诱导骨髓间充质干细胞BMSCS表达VEGF.     

急性白血病患者肝细胞生长因子及血管内皮生长因子血清水平检测及临床意义

目的 检测急性白血病(AL)患者治疗前后外周血血清肝细胞生长因子(HGF)和血管内皮生长因子(VEGF)的水平,探讨血清HGF和VEGF与急性白血病的发生、发展及预后等方面的关系.方法 应用双抗体夹心酶联免疫吸附测定(ELSIA)法动态检测并分析患者疾病不同时期血清HGF和VEGF的水平.结果 急性非淋巴细胞白血病(ANLL)组血清HGF水平(1 196.86±282.31)ng/L明显高于正常对照组(332.55±65.16)ng/L(P<0.01);急性淋巴细胞白血病(ALL)组血清HGF水平(1 224.53±283.19)ng/L明显高于正常对照组水平(332.55±65.16)ng/L(P<0.01);ANLL患者CR组治疗前后血清HGF水平分别为(1 140.31±266.23)ng/L,(478.50±183.75)ng/L(P<0.01),NR组治疗前后血清HGF水平分别为(1 432.51±235.30)ng/L,(1 386.63±197.95)ng/L(P>0.05).结论 AL患者血清HGF及VEGF水平均较正常对照组HGF水平及VEGF水平升高.血清HGF及VEGF水平可作为监测AL的疗效指标.血清VEGF水平可作为AL的预后判断指标,血清HGF水平对白血病的预后判断有一定意义.     

A new signaling mechanism of hepatocyte growth factor-induced endothelial proliferation

BACKGROUND: The hepatocyte growth factor (HGF) has been shown to promote endothelial cell proliferation. In this study, the signaling cascade responsible for the HGF-induced proliferation was examined. METHODS: The proliferation of human umbilical cord vein endothelial cells (HUCVEC) was determined using cell counts. Changes of the membrane potential were analyzed using the fluorescence dye DiBAC. Intracellular cGMP-levels were measured by means of [3H]-cGMP-radioimmunoassay. Phosphorylation of the p42/p44 MAP-kinase (MAPK) and the endothelial nitric oxide synthase (eNOS) was analyzed by immunocytochemistry. RESULTS: A dose-dependent (1-30 ng mL(-1)) increase of HUCVEC proliferation with a maximum at a concentration of 15 ng mL(-1) was induced by HGF. This effect was significantly reduced by the addition of the K+ channel blocker iberiotoxin (100 nmol L(-1)), eNOS inhibitor L-NMMA (300 micromol L(-1)), or the MEK inhibitor PD 98059 (20 micromol L(-1)). A HGF-induced hyperpolarization that was blocked by iberiotoxin was observed. In addition, HGF-induced activation of the eNOS was blocked by the K+ channel inhibitor. An increase of +101% MAPK phosphorylation was induced by HGF, which was blocked, if the cells were treated with L-NMMA (n = 20; P < 0.05), whereas HGF-induced phosphorylation of the eNOS was not affected by MEK inhibition. CONCLUSIONS: Hepatocyte growth factor modulates endothelial K+ channels causing an activation of the eNOS; the increase of nitric oxide is necessary for the phosphorylation of the MAPK inducing the proliferation of HUCVEC.     

肌肉注射异种脐带间充质干细胞大鼠心肌肌钙蛋白I及血清相关因子的表达

背景：目前关于肌肉注射异种脐带间充质干细胞是否安全缺乏理论依据。 目的：观察异种脐带间充质干细胞肌肉注射对大鼠心肌血管内皮生长因子、肌钙蛋白I及血清血管内皮生长因子、肝细胞生长因子、胰岛素样生长因子1和粒-巨噬细胞集落刺激因子表达的影响。 方法：正常Wistar大鼠分为6组,分别于大鼠四肢肌肉肌注磷酸盐缓冲液、DMEM液、培养人脐带间充质干细胞上清液、0.25×10^5;105,1.0×10^5;105和4.0×10^5;105人脐带间充质干细胞。4周后重复注射,8周后取血和心肌组织, ELISA法检测血清血管内皮生长因子、肝细胞生长因子、胰岛素样生长因子1和粒-巨噬细胞集落刺激因子水平,免疫组化法检测大鼠心肌肌钙蛋白I及血管内皮生长因子表达情况。 结果与结论：肌注前后各组间大鼠血清血管内皮生长因子、肝细胞生长因子、胰岛素样生长因子1和粒-巨噬细胞集落刺激因子水平差异无显著性意义（P〉0.05）;同组大鼠肌注前后血清血管内皮生长因子、肝细胞生长因子、胰岛素样生长因子1和粒-巨噬细胞集落刺激因子水平差异亦无显著性意义（P〉0.05）。肌注后8周,各组大鼠肌钙蛋白I在心肌细胞胞浆中均匀分布且呈强阳性表达;血管内皮生长因子亦在心肌细胞胞浆中分布,但呈弱阳性表达;各组间大鼠心肌组织肌钙蛋白I及血管内皮生长因子水平比较差异无显著性意义（P〉0.05）。提示肌注人脐带间充质干细胞或其培养上清液对正常大鼠血清血管内皮生长因子、肝细胞生长因子、胰岛素样生长因子1、粒-巨噬细胞集落刺激因子水平及心肌组织肌钙蛋白I及血管内皮生长因子的表达无影响。