Ghrelin对THP-1源性泡沫细胞ATP结合盒转运子G1的调控作用及途径

目的 探讨Ghrelin对人单核细胞系(THP-1)源性泡沫细胞ATP结合盒转运子G1(ABCG1)表达的调控作用及其可能途径.方法 体外培养THP-1,由佛波酯(PMA)作用使其分化为巨噬细胞,继而在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)存在条件下进一步转变为泡沫细胞,油红O染色法鉴定泡沫细胞形成.运用RT-PCR法和Western印迹法分别检测Ghrelin干预后及封闭过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPARγ)后ABCG1 mRNA与蛋白表达.采用酶法,通过荧光分光光度计检测胆固醇含量及胆固醇流出率.结果 Ghrelin可明显减少细胞内脂滴的形成,增加胆固醇流出,并能显著增加单核/巨噬细胞泡沫化过程中ABCG1 mRNA水平和蛋白表达,此作用呈浓度依赖性.封闭PPARγ后,Ghrelin抑制泡沫细胞形成的效应被阻断,且PPARγ拮抗剂浓度越高,该阻断作用越明显.结论 Ghrelin可能通过上调ABCG1转录翻译水平延缓动脉粥样硬化的发生,且该效应可能通过PPARγ途径发挥作用.     

ATP结合盒转运蛋白A1研究进展

动脉粥样硬化是心脑血管疾病的重要基础病理改变,而胆固醇在巨噬细胞内聚集和泡沫细胞形成是动脉粥样硬化的始动环节。ATP结合盒转运蛋白Al（ABCAl）是一种重要的胆固醇流出调节蛋白,能介导细胞内胆固醇逆向转运到细胞外,使之与载脂蛋白A-Ⅰ结合并包装形成高密度脂蛋白（HDL）的膜转运蛋白。因此,ABCAl是调节血浆HDL及细胞内胆固醇水平的重要膜蛋白,ABCAl的表达水平与动脉粥样硬化的发生关系密切。同时,细胞内脂质、核受体PPAR、LXR、RXR和细胞因子等对ABCAl蛋白表达具有凋控作用。本文将ABCAl研究进展作一综述。     

ATP结合盒转运蛋白A1与动脉粥样硬化

对Tangier病病因的研究,发现ATP结合盒转运蛋白A1(ATP binding cassette transport protein A1,ABCA1)在胆固醇逆向转运(reverse cholesterol transport,RCT)中起重要作用。ABCA1主要通过核受体PPARs途径发挥作用。ABCA1基因变异影响其功能。     

ATP结合盒转运子A1与冠心病

ATP结合盒转运子A1蛋白是一个由2 261个氨基酸组成的蛋白,其功能是在胆固醇逆转运过程中起第一步限速作用.ATP结合盒转运子A1的转录受多余的胆固醇、肝脏核受体肝孤儿受体、视黄酸X受体、维生素A的衍生物全反式视黄酸等多种脂质调节.ATP结合盒转运子A1常见位点的单核苷酸多态性与冠心病的发生发展有关.     

葛花提取物通过激活PPARγ上调ABCA1的表达而抑制THP-1源性泡沫细胞形成

目的]探寻葛花提取物(PFE)对巨噬细胞源性泡沫细胞脂质蓄积的影响。 [方法]通过MTT法筛选PFE对THP-1源性泡沫细胞的作用浓度,采用油红O染色和胆固醇检测试剂盒检测细胞内脂质蓄积情况,采用胆固醇流出试剂盒检测细胞的胆固醇流出水平,使用RT-qPCR和Western blot检测mRNA和蛋白表达。 [结果]PFE显著降低THP-1源性泡沫细胞内的脂质蓄积。PFE不影响CD36、清道夫受体AⅠ(SR-AⅠ)、固醇调节元件结合蛋白2(SREBP2)及3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)的mRNA表达,但能上调ATP结合盒转运体A1(ABCA1)的mRNA和蛋白表达水平(P＜0.05),促进巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出(P＜0.01)。PFE可以激活过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的活性(P＜0.01)及上调其mRNA和蛋白表达水平(P＜0.05)。与PFE对照组相比,加入GW9662处理后PPARγ和ABCA1的蛋白表达水平均下降(P＜0.01),胆固醇流出水平降低(P＜0.01)。 [结论]PFE可显著改善THP-1源性泡沫细胞内的脂质蓄积,通过PPARγ上调ABCA1表达及其介导的胆固醇流出抑制泡沫细胞形成。     

GW9662对内脏脂肪素诱导的THP-1源性泡沫细胞的作用

目的 研究过氧化物酶体增殖物活化受体(PPAR)γ拮抗剂GW9662对内脂素(visfatin)调控的人单核细胞(THP-1)源性泡沫细胞的作用.方法 THP-1诱导分化为巨噬细胞后,分为以下6组:visfatin组、1μmol/L GW9662+visfatin组、5μmol/L GW9662+visfatin组、1...     

核因子-κB对血管紧张素Ⅱ诱导THP-1源性泡沫细胞ATP结合盒转运子A1表达的影响

目的:探讨核因子-κB(NF-κB)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导THP-1源性泡沫细胞ATP结合盒转运子A1(ABCA1)表达的影响及在胆固醇流出中的作用。方法:THP-1源性泡沫细胞分别给予10-5mol/LAngⅡ(AngⅡ组)、10μmol/LNF-κB特异性抑制剂TPCK预孵(TPCK组)。采用夹心酶联免疫分析法检测泡沫细胞内NF-κB的活化程度。通过透射电镜和荧光分光光度计、酶化学法,检测泡沫细胞内胆固醇含量的变化。利用闪烁计数法测量泡沫细胞内胆固醇流出率。用逆转录-聚合酶链反应法和免疫印迹法半定量分析泡沫细胞ABCA1的表达。结果:TPCK组NF-κB活化核易位则无明显高峰,维持在较低的水平。TPCK组泡沫细胞内胆固醇含量较AngⅡ组降低24.1%(P<0.05),胆固醇流出率较AngⅡ组显著升高41.1%(P<0.05),ABCA1mR-NA和蛋白表达较AngⅡ组升高30%和19%(P<0.05)。结论:AngⅡ可经NF-κB介导下调THP-1源性泡沫细胞ABCA1的表达,致泡沫细胞内胆固醇流出减少,增加泡沫细胞内胆固醇含量,加速动脉粥样硬化。     

ATP结合盒转运蛋白A1研究进展

<正>随着冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary heart disease,CHD)发病率和死亡率的不断增加,预防和延缓CHD的发生发展显得尤为重要。研究表明,心血管疾病的患病率和发病率与血浆高密度脂蛋白胆固醇(HDL)水平呈负相关,HDL代谢的有关因子对心肌有保护作用。由于三磷酸腺苷(ATP)结合盒转运蛋白A1(ATP_binding cassette transporter A1,     

荷叶碱对巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达与胆固醇流出的影响及机制

目的观察荷叶碱(NF)对巨噬细胞源性泡沫细胞ATP结合盒转运体A1(ABCA1)表达和胆固醇流出的影响及机制。方法体外培养人源性THP-1单核细胞,使用佛波酯(160 nmol/L)对其进行诱导,促进其分化为巨噬细胞,并在50 mg/L氧化低密度脂蛋白处理下,使其荷脂形成泡沫细胞,进行常规体外培养细胞。高效液相色谱检测泡沫细胞内脂质成分,液体闪烁计数仪检测泡沫细胞胆固醇流出的水平;实时荧光定量PCR和Western blot检测ABCA1表达情况。PPARγ抑制剂GW9662和LXRα抑制剂GGPP分别处理泡沫细胞,通过荧光定量PCR和Western blot检测荷叶碱对泡沫细胞PPARγ、LXRα和ABCA1表达的影响。结果荷叶碱显著减少泡沫细胞内的脂质成分,增加ABCA1表达与胆固醇流出水平。PPARγ抑制剂GW9662处理细胞后,显著降低了PPARγ、LXRα和ABCA1的表达。泡沫细胞在LXRα抑制剂GGPP处理下,也明显降低了LXRα和ABCA1表达。结论荷叶碱通过PPARγ/LXRα途径上调巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1的表达,促进胆固醇流出,减少细胞内脂质蓄积。     

内脂素通过过氧化体增殖物激活型受体γ信号转导通路上调酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1的表达

目的观察过氧化体增殖物激活型受体γ信号转导通路在内脂素调控人THP-1单核细胞源性巨噬细胞酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达中的作用,探讨内脂素诱导泡沫细胞形成的机制和途径。方法 THP-1单核细胞诱导分化为巨噬细胞,随机分组,给予不同浓度的内脂素和过氧化体增殖物激活型受体γ激动剂罗格列酮进行干预,分别运用油红O染色法观察细胞内脂滴形成情况,逆转录聚合酶链反应法和免疫印迹法检测细胞过氧化体增殖物激活型受体γ和酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1mRNA和蛋白的表达,酶荧光学法检测细胞内总胆固醇和游离胆固醇含量,总胆固醇与游离胆固醇之差为胆固醇酯含量。结果与对照组比较,内脂素组细胞内脂滴形成增加,过氧化体增殖物激活型受体γmRNA和蛋白表达水平降低(P0.05),酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1mRNA和蛋白表达水平升高(P0.05),细胞内胆固醇酯含量升高(P0.05);随着内脂素浓度(10-7mol/L、10-6mol/L和10-5mol/L)升高,过氧化体增殖物激活型受体γmRNA和蛋白表达水平逐渐降低(r值分别为-0.73和-0.83,P0.05),酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1mRNA和蛋白表达水平逐渐升高(r值分别为0.91和0.72,P0.05)。与内脂素组比较,罗格列酮组酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1mRNA和蛋白表达水平降低(P0.05),细胞内胆固醇酯含量降低(P0.05);随着罗格列酮浓度(10μmol/L、15μmol/L和20μmol/L)升高,酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1mRNA和蛋白表达水平逐渐降低(r值分别为-0.69和-0.84,P0.05)。结论内脂素呈浓度依赖性下调THP-1单核细胞源性巨噬细胞过氧化体增殖物激活型受体γ的表达,上调酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1的表达,而罗格列酮呈浓度依赖性抑制内脂素所诱导的上述效应。提示内脂素可能通过过氧化体增殖物激活型受体γ信号转导通路上调酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达,使细胞内胆固醇酯合成增加,从而诱导泡沫细胞形成。     

牛磺酸下调单核-巨噬细胞ACAT-1表达

目的:观察牛磺酸对THP-1及THP-1源性巨噬细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT-1)表达及活性的影响。方法:将THP-1细胞与PMA孵育48h使之分化为巨噬细胞,在有或无干扰素-γ(IFN-γ)的条件下,用不同浓度的牛磺酸与THP-1持续作用不同的时间,RTPCR检测ACAT-1mRNA水平,WesternBlot检测其蛋白表达,并测定其酶活性。结果:牛磺酸显著下调THP1及THP1源性巨噬细胞的ACAT1mRNA和蛋白表达水平以及ACAT-1活性(P<0.05～0.01,n=3);IFNγ促进ACAT1mRNA和蛋白表达、增强ACAT-1活性(P<0.05,n=3)的作用被牛磺酸部分抑制(P<0.05,n=3)。结论:牛磺酸不但能降低单核巨噬细胞ACAT-1的基础表达和活性,而且能抑制由IFN-γ诱导的ACAT-1表达和活性,这可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一。     

不同压力对巨噬细胞ATP结合盒转运子A1表达的影响

目的观察不同压力对巨噬细胞ABCA1 mRNA及蛋白表达的影响。方法将THP—1源巨噬细胞依照不同压力分为对照组、60组、80组、100组、120组、140组、160组和180组，分别在大气压下，60mmHg、80mmHg、100mmHg、120mmHg、140mmHg、160mmHg和180mmHg压力下继续培养48h。观察巨噬细胞ABCA1 mRNA及蛋白表达。结果60组、80组、100组、120组ABCA1 mRNA分别为1．11±0．08、1．31±0．04、1．53±0．11和1．15±0．07，较对照组（0．91±0．10）明显增加（P〈0．05或P〈0．01），以100组增加最显著；140组、160组和180组ABCA1mRNA分别为0．75±0．06，0．46±0．08及0．35±0．05，较对照组明显减少（P〈0．01）。ABCA1蛋白表达与mRNA情况相似：60组（1．09±0．06），80组（1．12±0．09），100组（1．41±0．06），120组（1．11±0．06）较对照组（1．00±0．00）明显增加（P〈0．05或P〈0．01），而140组（0．78±0．07）、160组（0．49±0．09）和180组（0．47±0．10）较对照组明显减少（P〈0．01）。结论压力在80---120mmHg范围时，压力升高促进了巨噬细胞ABCA1 mRNA及蛋白表达，压力〉120mmHg后，随着压力的增高，巨噬细胞ABCA1 mRNA及蛋白表达反而减少。     

肿瘤坏死因子-α对泡沫细胞胆固醇流出及ATP结合盒转运子A1表达的影响

目的探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对泡沫细胞胆固醇流出途径的影响及可能作用机制.方法采用人组织瘤细胞-1（THP-1）细胞诱导分化形成的泡沫细胞,测定TNF-α与细胞胆固醇流出的时间、浓度关系.然后给予饱和浓度的TNF-α刺激,随机将泡沫细胞分成对照组、TNF-α组、对甲苯磺酰L-苯丙氨酸甲基甲酮（N-α-tosyl-L-phenylalanine chloromethy ketone,TPCK）组及TPCK＋TNF-α组,以RT-PCR法、Western blot法测定细胞ATP结合盒转运子A1（ABCA1）的表达.结果TNF-α抑制细胞胆固醇流出呈时间、浓度效应,在10.0 ng/ml时,TNF-α抑制胆固醇流出达到饱和效应.10.0 ng/ml TNF-α刺激后以时间依赖方式下调ABCA1表达.TPCK预孵育后可部分逆转TNF-α对ABCA1表达的下调.结论炎症因子TNF-α可通过抑制ABCA1的表达而减少细胞胆固醇的流出,核因子κB（NF-κB）激活抑制剂TPCK可逆转TNF-α的上述影响,提示TNF-α抑制ABCA1表达与NF-κB激活有关.TNF α/NF-κB信号途径可抑制泡沫细胞的胆固醇流出,从而加重细胞内胆固醇的蓄积。     

铁离子螯合剂去铁胺对巨噬细胞、泡沫细胞细胞外基质金属蛋白酶诱导因子表达的影响

目的:观察铁负荷过低对巨噬细胞、泡沫细胞细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)表达的影响。方法: 体外诱导THP-1单核细胞转化为巨噬细胞、泡沫细胞。实验细胞分为3组:对照组（正常巨噬细胞、泡沫细胞）、铁离子螯合剂去铁胺(DFO)刺激组、柠檬酸铁和DFO共刺激组。应用RT-PCR和Western blot测定巨噬细胞、泡沫细胞中EMMPRIN基因和蛋白的表达。用Western blot测定MMP-9蛋白的表达。用明胶酶谱法测定MMP-9的活性。结果: DFO刺激组中EMMPRIN基因及蛋白的水平、MMP-9蛋白表达的水平及活性均明显高于对照组（P<0.05,P<0.01）。柠檬酸铁逆转了DFO对EMMPRIN表达的上调作用。结论: 铁负荷过低可增加巨噬细胞及泡沫细胞中炎症因子的表达及活性,可能会促进心血管事件的发生。     

葡萄糖对THP-1源性巨噬细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1表达的影响

研究葡萄糖对人THP-1单核分化巨噬细胞酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶1（ACAT-1）表达的影响。发现高糖作用下，巨噬细胞ACAT-1的mRNA及蛋白表达增加，这可能是糖尿病血管病变机制之一。     

薯蓣皂苷元对THP-1巨噬细胞ABCA1表达及胆固醇流出的影响

目的　探讨薯蓣皂苷元（Dgn）对巨噬细胞ATP结合盒转运体A1（ABCA1）表达及其介导胆固醇流出的影响。方法　用Dgn或结合ABCA1小干扰RNA（siRNA）处理THP-1源性巨噬细胞24　h后,Western　blot检测ABCA1蛋白水平,HPLC检测胞内总胆固醇（TC）、游离胆固醇（FC）及胆固醇酯（CE）含量,液体闪烁计数仪检测胞内胆固醇流出,油红O染色观察胞内脂滴情况。结果　Dgn呈浓度依赖性上调巨噬细胞ABCA1的表达,促进胞内胆固醇流出,降低胞内TC、FC和CE含量,抑制胞内脂质蓄积和泡沫细胞形成。而ABCA1　siRNA与Dgn共处理细胞后,明显抑制Dgn促胆固醇流出作用,胞内脂质蓄积和泡沫细胞形成明显加剧。结论　Dgn通过促进巨噬细胞ABCA1表达和胆固醇流出,抑制胞内脂质蓄积和泡沫细胞形成。     

β受体介导肾上腺素对THP-1源性巨噬细胞清道夫受体AI与ABCA1基因表达的影响

目的 探讨肾上腺素对THP-1源巨噬细胞ATP结合盒转运体A1与清道夫受体AI mRNA表达影响的β受体介导作用.方法 分别用β1受体拮抗剂美托洛尔(10 nmol/L～100 μmol/L)和β2受体拮抗剂丁氧胺(2.5mol/L～25 μmol/L)预处理细胞1 h,再加入终浓度为1 μmol/L肾上腺素继续孵育24 h,检测受试基因的表达.结果 1 μmol/L的肾上腺素上调清道夫受体AI mRNA水平和下调ATP结合盒转运体A1 mRNA水平,与各自对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).而终浓度为1 μmol/L肾上腺素分别与不同浓度的β肾上腺素能受体拮抗剂美托洛尔和丁氧胺联合作用时,随着美托洛尔和丁氧胺浓度加大,各组ATP结合盒转运体A1 mRNA的表达升高而清道夫受体AI mRNA的表达随浓度升高呈下降趋势,与1 μmol/L肾上腺素组比较差异有统计学意义(P<0.05),且丁氧胺对肾上腺素的拮抗作用在2.5 μmol/L达到平台期.结论 肾上腺素可能通过β1和β2肾上腺素能受体介导从而上调THP-1源性巨噬细胞清道夫受体AI mRNA水平和下调ATP结合盒转运体AI mBNA水平.