载脂蛋白E基因分型方法

目的 建立载脂蛋白Ｅ基因型分型聚合酶链反应－限制性片段长度多态性方法。方法 用特异的探地对氨基酸１１２和１５８多形基因区基因组的ＤＮＡ扩增，产物用ＨｈａⅠ酶消化，其片段在４％琼有糖凝胶分离。结果 经消化的载脂蛋白Ｅ片段在琼脂糖上，ε２／ε２为９１、８３、ｂｐ，ε３／ε３为９１、４８、３８ｂｐ，ε４／ε４为７２、４８、３８ｂｐ，ε２／ε４为９１、８３、７２、４８、３８ｂｐ，ε３／ε４为９１、７２、４     

聚合酶链反应限制性片段长度多态性检测载脂蛋白E基因型

目的建立一种简便、准确、实用的人载脂蛋白Ｅ（ａｐｏＥ）基因型的检测方法。方法应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）特异性扩增ａｐｏＥ基因含编码１１２位和１５８位氨基酸的基因序列，扩增产物用限制性内切酶ＨｈａⅠ酶切，聚丙烯酰胺凝胶电泳后，观察酶切位点的限制性片段长度多态性（ＲＦＩＰ）图谱。结果运用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法检测了１１３名健康人ａｐｏＥ基因型，频率分别为ε３／３６９．０％，ε３／２１６．８％，ε４／３１１．５％，ε４／２１．８％，ε４／４０．９％；ε２、ε３和ε４等位基因频率分别是９．３％、８３．２％和７．５％。结论该方法简单、快速、准确，对人体无害，适合于一般实验室开展及大规模人群调查     

载脂蛋白E基因多态性检测技术的对比性研究

目的建立并比较载脂蛋白Ｅ（ＡｐｏＥ）基因多态性检测技术,为ＡｐｏＥ基因分型提供良好的方法。方法应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）和ＰＣＲ单链构象多态性（ＳＳＣＰ）检测技术对１１０例患者及相同人数的正常人进行ＡｐｏＥ基因型检测和分析。结果应用ＲＦＬＰ、ＳＳＣＰ技术测得正常对照组：ε２／２（０,０．０２０）,ε３／３（０．７００,０．７６０）,ε４／４（０,０．０４０）,ε２／３（０．１００,０．０６０）,ε２／４（０,０．０２０）,ε３／４（０．２００,０．１００）,ε２（０．０５０,０．０６０）,ε３（０．８５０,０．８４０）,ε４（０．１００,０．１００）。经χ２检验,ＡｐｏＥ基因型频率和等位基因频率的差异无显著意义（Ｐ＞０．０５）。上两种检测技术与既往两种检测技术（ＩＥＦ,ＷｅｓｔｅｒｐＢｌｏｔｉｎｇ）的结果经χ２检验,其ＡｐｏＥ等位基因频率的差异也无显著意义（Ｐ＞０．０５）,均符合中国汉族人ＡｐｏＥ基因频率分布。结论ＰＣＲＲＦＬＰ方法是一种稳定可靠的ＡｐｏＥ基因多态性分析方法,多重ＰＣＲＳＳＣＰ技术更加简便有效,使ＡｐｏＥ基因多态性的研究更加完善。     

载脂蛋白E外显子4基因多态性与Alzheimer‘s病

探讨了载脂蛋白Ｅ（ａｐｏＥ）外显子４基因多态性与Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ‘ｓ病的关系。应用聚合酶链反应扩增ａｐｏＥ外显子４基因片段，对扩增片段用ＨｈａⅠ酶切消化后进行基因分型，并用ＤＮＡ测序技术对分型结果予以证实，Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ病组与年龄匹配对照组在ａｐｏＥ外显子４ε３／４基因型频率和ε４等位基因频率分布上的差异有显著性（ｘ＾２＝８．９１，Ｐ〈０．０５，Ｘ＾２＝９．４９，Ｐ〈０．０１），Ａｌｚｈ     

人类低密度脂蛋白受体相关蛋白四核苷酸重复序列（TTTC）n遗传？…

目的 了解湖北地区汉族人群低密度脂蛋白受体相关蛋白（ＬＲＰ）四核苷酸重复序列遗传多态性的分布特点。方法 采用聚合酶链反应结合变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染技术，测定了湖北地区汉族人群低密度ＬＲＰ基因四核苷酸重复序列（ＴＴＴＣ）ｎ等位基因及基因型频率，并比较了不同种族间等位基因和基因型的频率分布。结果 检出了２种位基因，等位片断长断为９１ｂｐ、９５ｂｐ；３种基因型、９１／９５型、９５／９５型，其中９５     

中国人凝血因子IX基因Mes I多态性

利用聚合酶链反应和限制性内切酶Ｍｓｅ Ｉ酶解分析，发现我国人群凝血因子ＩＸ基因５＇侧翼－６９８位核苷酸存在Ｍｓｅ Ｉ多态性，该多态性由８３ｂｐ／５８ｂｐ＋２５ｂｐ组成，在受检的１１８个ＦＩＸ基因中，二者基因频率分别为０．６３５和０．３６５，多态性信息量为０．４６３。此系我国人群中发现的第二种限制性片段长度多态，有助于血友病乙携带者的检测及产前基因诊断。     

载脂蛋白E基因对血脂代谢的调节及其与脑梗塞的关系

应用改良的聚合酶链反应－限制性片段长度多态性的方法，测定了１０２例正常人和６８例脑梗塞者的载脂蛋白Ｅ（ａｐｏＥ）基因型，并分析了两组受试者的血脂、脂蛋白和载脂蛋白Ｂ（ａＰＯＢ）水平的差别，以及该基因对上述脂质参数的影响。结果显示，ａｐｏＥ４等位基因有升高血总胆固醇（ＴＣ）、低密度脂蛋白胆固醇（ＬＤＬ－ｃｈ）和ａｐｏＢ水平的作用，而ａｐｏＥ２位基因则有相反的作用。后者的频率在脑梗塞组高于对照组。提示，ａｐｏＥ对个体的血脂水平有明显的调节，ａｐｏＥ２等位基因携带者患脑梗塞的危险性增加。     

中国人凝血因子Ⅸ基因MseⅠ多态性

利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和限制性内切酶ＭｓｅⅠ酶解分析，发现我国人群凝血因子ＩＸ（ＦｌＸ）基因５’侧翼－６９８位核苷酸存在ＭｓｅＩ多态性，该多态性由８３ｂｐ／５８ｂｐ＋２５ｂｐ组成。在受检的１１８个ＦＩＸ基因中，二者基因频率分别为０．６３５和０．３６５，多态性信息量为０．４６３。此系我国人群中发现的第二种限制性片段长度多态（ＲＦＬＰ），有助于血友病乙携带者的检测及产前基因诊断。     

胆固醇酯转运蛋白基因15显子D442G突变的检测

应用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性分析（ＰＣＲ－ＲＥＬＰ）的方法检测１１０例脑动脉粥样硬化患者胆固醇酯转运蛋白（ＣＥＴＰ）基因１５外显子Ｄ４２Ｇ错义突变。首先用聚合酶链反应行异性扩增包含人ＣＥＴＰ基因１５外显子第１５０６位碱基的基因序列，扩增产和用限制性内切酶ＭｓｐⅠ酶切，聚丙烯酰胺凝胶电泳后分析结果。１１０例脑动脉粥样硬化患者中发现４例杂俣突变。突变率３．６％，与对照组４％比较无明显差异。该     

应用聚合酶链反应研究载脂蛋白B基因多态性及其临床意义

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对１００例正常人及１０３例冠心病人载脂蛋白Ｂ（ａｐｏＢ）基因ＸｂａＩ和ＥｃｏＲＩ限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ＿Ｓ）研究表明：（１）此两个位点上少见等位基因（Ｘ￣＋和Ｅ￣－）相对频率在冠心病组中均明显高于正常对照组，提示这些基因多态性与冠心病发病有一定关联。（２）ＸｂａＩ位点上具Ｘ￣＋Ｘ￣－基因型含血浆ＨＤＬ—Ｃ水平明显低于相应的Ｘ￣－Ｘ￣－基因型者，可能为Ｘ￣＋等位基因与冠心病关联的机理之一。（３）ＸｂａＩ和ＥｃｏＲＩ两位点的多态性间无连锁不平衡，推测这些位点的多态性以各自独立的方式影响动脉粥样硬化的形成。（４）ＰＣＲ方法用于ａｐｏＢ基因多态性的研究具有简便、敏感、重复性好、可判性强等优点，值得推广应用。     

聚合酶链反应限制性片段长度多太民性检测载脂蛋白E基因型

建立一种简便、准确、实用的人载脂蛋白Ｅ基因型的检测方法应用聚合酶链反应特异性扩增ａｐｏＥ基因含编码１１２位和１５８位氨基酸的基因序，扩增产物用限制性内切酶ＨｈａⅠ酶切，聚丙烯酰胺凝胶电泳后，观察酶切位点的限制性片段长度多态性图谱。结论该方法简单、快速、准确，对人体无害，适合于一般实验室开展及大规模人群调查。     

丙型肝炎病毒不同区抗原酶免疫试剂研究

目的　探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ） 不同区抗原的反应性,为建立抗ＨＣＶ 酶免疫测定（ＥＩＡ） 确认试剂提供依据。方法　利用基因工程技术,重组所表达的ＨＣＶ 不同区抗原片段（ ＨＣＶＣ、ＮＳ３ 、ＮＳ４ 、ＮＳ５） ,建立了ＨＣＶ 单片段抗原ＥＩＡ 检测方法,检测了７４７ 份四川地区献血员血清。对其中３７３ 份血清,用２ 个厂生产的经批检合格的抗ＨＣＶＥＩＡ 试剂进行检测比较,对个别结果不符的样品进一步进行逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ ＰＣＲ） 分析。结果　献血员中抗ＨＣＶＣ 等４ 种抗体阳性检出率分别为４ ．６８ ％ （３５／７４７） 、５ ．２ ％ （３９／７４７） 、１ ．１ ％ （８／７４７） 、１ ．２ ％ （９／７４７） ,２ 家试剂阳性检出率均为４ ％（１５／３７３） 。结论　ＨＣＶ 不同区抗原片段的抗体检出率差异较大,ＮＳ３ 检出率最高,其次为Ｃ 区、ＮＳ５ 、ＮＳ４ 。说明抗ＨＣＶＥＩＡ 检测试剂以ＨＣＶ ＮＳ３ 区和Ｃ 区为主要抗原片段。     

鉴别乙型肝炎病毒野菌株及E阴性突变株的新方法

同是检测乙型肝炎病毒野毒株及２种ＨＢｅＡｇ阴性空株。用聚合酶链反应方法，以人为改变核苷酸序列的２对引物，自乙型肝炎患者血清ＤＮＡ中，同时扩增出１４８ｂｐ及１０２ｂｐ两种产物，根据限制性内切酶Ｂｓｕ３６０２８１和ＡｆｌⅢ对ＰＣＲ产物消化片段长度多态性的分析，鉴别ＨＢＶ野毒株Ｍ０与２种Ｅ阴性突变株Ｍ１，Ｍ２。     

维生素D受体基因型多态性分析方法学探讨

目的　探讨聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR RFLP)技术检测维生素 D受体(vitamin D receptor,VDR)基因多态性的具体方法。方法　聚合酶链反应限制性片段长度多态性技术。结果　在本院40例骨质疏松患者中检测出了两种VDR基因型,即 bb型和 Bb型。结论　利用PCR RFLP技术对VDR基因进行分型,操作简单,结果准确,适宜普及。     

广东粤北地区瑶族载脂蛋白E基因多态性与血脂代谢的关系

目的检测广东粤北地区瑶族人群载脂蛋白E（apoE）基因多态性并探讨其与血脂代谢的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法（PCR-RFLP）对750例23～80岁广东粤北地区瑶族人群进行apoE基因多态性检测，分析瑶族人群apoE基因频率分布特点，并比较分析不同apoE基因型与血脂水平的关系。结果共检测瑶族apoE6种基因型，以E3／3型最常见，占61．47％，其次E3／4型，占23．07％，E2／3、E2／4、E4／4、E2／24种基因型分别占11．87％、1．73％、1．07％、0.8％；apoE有3种等位基因，以ε3分布频率最高，为81．4％，其次是ε4，分布的频率为9．6％，ε2分布频率最低，为9．0％；男性和女性apoE基因型分布无差异；ε4等位基因携带者的TG、TC、LDL、apoB水平显著高于E2携带者和ε3携带者（P〈0．05）。结论apoE基因多态性影响广东粤北地区瑶族人群的血脂代谢，apoEε4等位基因携带者的TG、TC、TC、LDL、apoB水平较高，推测ε4等位基因可能是瑶族人群患高脂血症的危险因素之一。     

用聚合酶链反应技术检测急性髓细胞白血病

应用一对引物通过逆转录酶／聚合酶链反应扩增１７例急性髓细胞白血病患的ＡＭＬ１－ＥＴＯ融合转录本，１２例初治患中一致性扩增到预期的２００ｂｐ大小的片段，其中７例证实有典型ｔ（８；２１）易其变异型。扩增片段大小及其限制性内切酶谱提示ｔ（８；２１）易位的ＡＭＬ１和ＥＴＯ基因断裂点局限于一个内含子。５例Ｍ２已完全缓解２－３８个月仍检测到相同的ＡＭＬ１－ＥＴＯ融合ｍＲＮＡ，提示体内仍残存少量ｔ（８；２１     

聚合酶链反应限制性片段长度多态性检测维生素D受体基因型

目的建立一种简便、实用、准确的人维生素Ｄ受体（ＶＤＲ）基因型的检测方法，以利于ＶＤＲ基因变异在骨质疏松研究中的应用。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）特异性扩增ＶＤＲ基因序列，扩增产物用限制性内切酶ＢｓｍⅠ酶切，琼脂糖凝胶电泳后，观察酶切位点的限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）图谱。结果应用ＰＣＲＲＦＬＰ法检测了１１０名健康汉族人ＶＤＲ基因型，ｂｂ、Ｂｂ、ＢＢ基因型分布频率分别是９４％（１０３例）、６％（７例）、０。结论该方法简便、准确、重复性好，适用于一般实验室及流行病学调查。     

痴呆病人ApoE基因检测与多态性分析

目的研究痴呆病人与载脂蛋白Ｅ（ＡｐｏＥ）等位基因之间的关系。方法对３０例老年性痴呆（ＡＤ）患者和２５例多发梗死性痴呆患者的ＡｐｏＥ基因进行检测,确定基因型,计算基因频率,验证ＡｐｏＥ与ＡＤ的相关性。结果ＡＤ病人基因型以ε３／４最多,ε３／３型次之;血管性痴呆（ＶＤ）病人以ε３／３型最多,ε２／３次之;从等位基因频率看,ＡＤ病人及ＶＤ均以ε３型等位基因频率最高,ＡＤ病人ε４等位基因频率显著高于ＶＤ病人及正常人群, ＶＤ各型基因频率与上常人群无差别。结论 ＡｏｐＥ基因频率分布在ＡＤ与 ＶＤ及正常人群之间存在异质性,ε４等位基因是ＡＤ的主要危险因素。     

CA72—4在胃癌患者血清中检测的临床意义

探讨胃癌患者血清中肿瘤标志物ＣＡ７２４水平的表达及临床诊断价值。方法采用放射免疫法对５７例胃癌患者，２６例胃良性疾病及３０例正常人（健康助血员）进行了血清ＣＡ７２４水平的检测。结果胃癌、良性疾病及健康对照组血清中的ＣＡ７２４中位水平分别为５７（２５５～１５１５）Ｕ／ｍｌ、２１０（１６０～２６３）Ｕ／ｍｌ和１２１（０９１～１９２）Ｕ／ｍｌ，胃癌组较良性疾患及健康对照组，均达统计学上的显著意义（Ｐ＜００１）。以３７Ｕ／ｍｌ为界值，胃癌组与胃良性疾患的敏感度的分别为：６３２％（３６／５７）与７７％（２／２６），正常对照组中ＣＡ７２４水平均＜３７Ｕ／ｍｌ，胃癌组较良性疾病组及正常对照组的阳性率有显著性差异（Ｐ＜００１）。不同病理类型的胃癌阳性检出率也有差异，其中以未、低分化胃癌患者最高（１８／２５）７２％，浸润伴转移癌（１０／１４）７１４％，中高分化胃癌（７／１１）６３６％，其他胃癌如残胃癌、印戒细胞癌等（１／７）１４３％。结论ＣＡ７２４是一种具有临床诊断参考价值的胃癌标志物，其表达水平在不同病理类型中具有一定差别     

载脂蛋白B基因位点多态性与冠心病关系的研究

利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增技术对载脂蛋白（ａｐｏ）Ｂ基因点３＇端可变数目串联重复位点（ＶＮＴＲ）作快速而准确分型。研究了该位点多态性与冠心病之间关系，与相关疾病及正常对照组作了比较。在２５３例中，各组的ａｐｏＢ基因位点呈现不同的基因带型。扩增片段大小为５５２～１１２８ｂｐ。冠心病组发现有１５个ａｐｏＢ等位基因，正常人群组有１２个等位基因。ａｐｏＢ３＇端ＶＮＴＲ的基因频率分布为０．００１～０．４