线粒体DNA缺失突变在氨基糖苷类抗生素耳毒易感？…

目的 建立大鼠线粒体ＤＮＡ（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ＤｎＡ,ｍｔＤＮＡ）缺失突变模型,探讨ｍｔＤＮＡ缺失突变在氨基糖苷类抗生素（ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ,ＡｍＡｎ）耳毒易感性中的作用。方法 取Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分为Ａ、Ｂ两组,每组１５只,其中Ａ组大鼠以皮下注射阿毒素（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ,ＤＯＸ）２ｍｇ／ｋｇ体重,每周２次３个月,Ｂ组则以生理盐水取代ＤＯＸ,然后     

氨基甙类抗生素耳毒性与线粒体基因突变分析

进一步证明遗传因素对氨基甙类抗生素耳毒性的作用,探讨该病的发病机理。方法应用ＰＣＲ限制性酶切方法分析了９个氨基甙类抗生素致聋家系中６２个成员线粒体ＤＮＡ。结果发现５个家系中２０例线粒体ＤＮＡ２２ＳｒＲＮＡ基因第１５５５位Ａ→Ｇ点突变。结论该突变是氨基甙类抗生素耳毒性遗传易感性的分子生物学基础。可能有其他他粒体ＤＮＡ基因突变与氨基甙类抗生素耳毒性有关。     

线粒体DNA大片段缺失与老年性聋的关系

目的 :探讨内耳组织线粒体DNA(mtDNA)大片段缺失与老年性聋发病的关系。方法 :取Wistar大鼠按年龄分为A组 (青年鼠 ,4月龄 )和B组 (老年鼠 ,>2 4月龄 ) ,每组 15只。测试听性脑干反应 (ABR) ,应用聚合酶链反应 (PCR)技术对大鼠内耳膜迷路组织mtDNA 4 834bp缺失片段进行检测。结果 :A、B组大鼠ABR反应阈均值分别为 :(4 0 .0 0± 4 .6 6 )dBpeSPL、(6 4 .79± 10 .88)dBpeSPL ,二者之间差异有显著性意义 (P <0 .0 1)。大鼠内耳组织mtDNA检测发现 :A组大鼠未检测到 4 834bp缺失 ;B组大鼠有 9只存在 4 834bp缺失。 结论 :老年大鼠内耳膜迷路组织存在mtDNA片段缺失 ,这种缺失与老年性聋有关 ,可能是引起老年性聋的原因之一     

一母系遗传氨基糖苷类抗生素致聋家系线粒体DNA A1555G突变检测

目的 应用耳聋基因芯片对一母系遗传氨基糖苷类抗生素致聋家系和散发的非综合征性耳聋患者进行分子病因学研究.方法 采集一母系遗传耳聋家系2代共12人和散发非综合征耳聋患者68人的外周静脉血,从白细胞中提取DNA,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增,应用耳聋基因芯片检测中国人常见的药物性耳聋相关基因--线粒体DNA A1555G突变.结果 家系中有7份样品存在线粒体DNA 12S rRNA 1555位点A→G的突变.其余样品为A1555G点突变阴性;而散发的耳聋患者中未检测出一例携带此突变.结论 线粒体DNA A1555G点突变是导致该家系致聋的主要因素之一,具有母系遗传耳聋特点.     

老年大鼠耳蜗螺旋神经节及耳蜗核线粒体DNA缺失的研究

目的　探讨耳蜗螺旋神经节及耳蜗核线粒体DNA(mitochondrialDNA ,mtDNA)缺失在老年聋发病中的可能作用。方法　分别测试老年组及青年组大鼠听性脑干反应 (ABR)阈值 ,应用聚合酶链反应 (polymerasechainre action,PCR)技术对老年及青年大鼠耳蜗螺旋神经节及脑组织中耳蜗核mtDNA 4 834bp缺失片段进行检测。结果老年组及青年组大鼠ABR阈值分别为 71.0 0± 6 .75、39.83± 4 .4 5dBpeSPL。老年大鼠耳蜗螺旋神经节及脑组织中耳蜗核mtDNA483 4 缺失出现率分别为 6 6 .7%、10 0 % ;青年鼠耳蜗螺旋神经节及脑组织中耳蜗核均无此片段缺失。　结论　老年大鼠耳蜗螺旋神经节及脑组织中耳蜗核存在mtDNA片段缺失 ,并可能在老年聋发病中起重要作用。     

线粒体DNA缺失突变在氨基糖甙类抗生素耳毒易感中的作用

目的　建立大鼠线粒体DNA(mitochondrialDNA ,mtDNA)缺失突变模型 ,探讨mtDNA缺失突变在氨基糖甙类抗生素 (aminoglycosideantibiotics,AmAn)耳毒易感性中的作用。方法　取Wistar大鼠随机分为A、B两组 ,每组 15只。其中A组大鼠以皮下注射阿霉素 (doxorubicin ,DOX) 2mg/kg体重 ,每周 2次共 3个月 ,B组则以生理盐水取代DOX。然后A、B组均连续腹腔注射卡那霉素(kanamycin ,KM)每日 5 0 0mg/kg体重共 10d。用药前、后测试听性脑干反应 (auditorybrainstemre sponse,ABR)阈 ,并用聚合酶链反应 (polymerasechainreaction ,PCR)技术对大鼠内耳膜迷路mtDNA 4834bp缺失突变进行检测。结果　①A、B两组大鼠用KM前、后 ,ABR反应阈提高 ,均值 ( x±s)分别为(6 7 0 8± 8 5 9)dBpeSPL和 (12 71± 4 42 )dBpeSPL ,二组均数间差异有显著性意义 (P <0 0 1) ;②大鼠内耳组织mtDNA检测发现 :A组有 9/15只存在 4834bp片段缺失 ,而在B组未检测到 4834bp片段缺失。结论　DOX可诱导大鼠内耳组织mtDNA缺失突变。大鼠内耳组织mtDNA缺失突变可增加其对AmAn耳毒作用的敏感性。     

氨基糖甙类抗生素致聋家系线粒体DNA1555G点突变分析

目的考察１５５５Ｇ点突变与氨基糖甙类抗生素致聋的对应关系，建立相应的基因诊断方法提供依据。方法收集了３个有明确氨基糖甙类抗生素应用史的母系遗传耳聋家系１３人（包括聋人和听力正常者）的外周静脉血标本，聚合酶链反应扩增线粒体ＤＮＡ，Ａｌｗ２６Ｉ限制性内切酶分析、ＤＮＡ斑点杂交和ＤＮＡ序列分析检测１５５５Ｇ点突变。结果家系１和３的７份样品均为１５５５Ｇ点突变阳性，家系２的６份样品为１５５５Ｇ点突变阴性。结论发现１个１５５５Ｇ点突变阴性的氨基糖甙类抗生素致聋家系，说明线粒体ＤＮＡ１５５５Ｇ点突变不是氨基糖甙类抗生素遗传易感性唯一的分子基础。     

氨基糖苷类抗生素耳中毒机理、临床表现及治疗进展

氨基糖苷类抗生素耳中毒的治疗一直是临床 及基础研究的难点和热点。本文对氨基糖苷类抗生素耳中 毒机理、临床表现及治疗进展进行了综述。     

氨基糖苷类抗生素耳毒性影响因素研究进展

氨基糖苷类抗生素是一类广泛使用的治疗严重细菌感染的关键药物,耳毒性为药物的严重并发症,其主要病因是药物触发的内耳感觉毛细胞死亡。介导感觉毛细胞死亡的分子事件一直以来被广泛研究。近年来关于增加药物毒性的外在因素及导致个体敏感性增加的遗传因素不断被揭示,为氨基糖苷类抗生素耳毒性的预防及个体化治疗提供可能。现对氨基糖苷类抗生素内耳损害机制、影响药物耳毒性的多个因素及预防氨基糖苷类药物耳毒性的潜在干预策略的最新研究进展进行综述。     

The role of mtDNA deletion in the sensitivity to aminoglycoside antibiotic induced deafness]

OBJECTIVE: To establish an animal model of mitochondrial DNA (mtDNA) deletion and investigate the possible role of mtDNA deletion in aminoglycoside antibiotic induced deafness. METHODS: Thirty wistar rats (4 months) were randomly divided into group A and B. Doxorubicin (DOX) was subcutaneously injected at doses of 2 mg/kg twice per week for 3 months in group A and then kanamycin (KM) was intraperitoneally injected 500 mg/kg per day for 10 consecutive days. The treatments of group B were identical to group A, except normal saline was substituted for DOX. The thresholds of auditory brainstem response (ABR) were measured before and after the drug administrations. The inner ear membranous labyrinthine tissue was harvested and mtDNA was amplified to identify 4,834 bp deletion by PCR technique. RESULTS: The elevation of the mean ABR thresholds in group A(67.08 +/- 8.59) dB peSPL was significantly higher than that in group B (12.71 +/- 4.42) dB peSPL after KM administration (P < 0.001). In group A, 9 of the 15 rats demonstrated 4,834 bp mtDNA deletion. However, mtDNA 4,834 bp deletion was negative in group B animals. CONCLUSION: DOX can induce mtDNA deletion in the inner ear tissue of the rat. mtDNA deletion in the inner ear may play an important role in the hypersensitivity to aminoglycoside antibiotic ototoxicity.     

大鼠内耳拟老化模型对卡那霉素耳毒性的易感性

目的 研究大鼠内耳拟老化模型对卡那霉素的易感性.方法 Wistar大鼠50只,随机分为4组,A组(半乳糖组,14只)5%D-半乳糖颈部皮下注射(150 mg·kg-1·d-1),共8周,继以生理盐水腹腔注射10 d;B组(半乳糖加卡那霉素组,14只)皮下注射半乳糖同A组,8周后,腹腔注射硫酸卡那霉素(500 mg·kg-1·d-1)10 d;C组(卡那霉素组,12只)前8周用生理盐水代替半乳糖,后10 d注射卡那霉素同B组;D组(空白对照组,10只)仅给予生理盐水注射.听性脑干反应(auditory brainstem respones,ABR)检测各组大鼠反应阈,比色法检测各组大鼠膜迷路谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)活性.利用巢式聚合酶链式反应技术检测内耳组织线粒体DNA4834 bp缺失突变的发生情况.结果 用药后A组大鼠线粒体DNA 4834 bp缺失突变发生率为100%(28耳/28耳),B组为92.86%(26 耳/28耳),C组和D组均无线粒体DNA 4834 bp缺失突变检出.A组GSH-PX活性为(59.07±8.70)U(-x±s,下同),B组(63.29±12.40)U,C组(136.67±9.53)U,D组(142.10±7.02)U;A组和D组之间差异具有统计学意义(P=0.000),A组和B组、C组和D组之间差异无统计学意义(P值分别为0.307和0.151).ABR阈值(峰值等效声压级)A组平均提高(5.36±3.08)dB,B组为(61.79±11.20)dB,C组为(34.17±4.69)dB,D组为(6.50±3.37)dB;A组和D组之间差异无统计学意义(P=0.398),B组和D组、B组和C组、C组和D组之间差异具有统计学意义(P值均为0.000).结论 D-半乳糖可以诱导大鼠内耳拟老化模型,内耳组织中线粒体DNA 4834 bp缺失突变率极高,该模型对卡那霉素耳毒性的易感性增强.     

噪声暴露引起大鼠听觉器官线粒体DNA缺失

目的　探讨线粒体DNA(mitochondrialDNA ,mtDNA)缺失与噪声性聋的关系。方法　3月龄大鼠分噪声暴露组和无暴露对照组 ,各 2 0只。噪声暴露组暴露于 1 0 8～ 1 1 0dBSPL的白噪声4h/d ,共 40d ;对照组不接触噪声。噪声暴露结束 2周后测试两组大鼠的听性脑干反应 (auditorybrainstemresponse ,ABR)阈值 ,聚合酶链反应 ( polymerasechainreaction ,PCR)检测其耳蜗、蜗核、颞叶脑组织和颞肌组织中是否存在mtDNA4834缺失 ,对存在的缺失进行定量分析 ;PCR产物进行克隆、测序。结果　噪声暴露组大鼠出现永久性阈移 ,其ABR平均阈值 ( x±s,下同 )为 ( 75 2 5± 6 1 7)dBSPL ( 4 0耳 ) ,对照组为 ( 34 75± 3 80 )dBSPL( 4 0耳 ) ,两组ABR阈值的差异具有非常显著性意义 (P<0 0 1 )。噪声暴露组大鼠的耳蜗、蜗核、颞叶脑组织中mtDNA4834缺失发生率 ( 2 4 /40、1 6/2 0、1 8/2 0 )明显高于对照组 ,两组之间的差异具有非常显著性意义 (P <0 0 1 ) ;而与听觉无关的颞肌组织中mtDNA4834缺失发生率 ( 2 /2 0 )在两组中均很低 ,两组之间的差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;噪声暴露组大鼠的耳蜗、蜗核、颞叶脑组织和颞肌中mtDNA4834 缺失占总mtDNA的平均百分率 ( x±s)分别为( 0 9988± 0 5 5 1 6)× 1 0 - 2 %、( 1 0     

非综合征型遗传性聋家系系谱分析及mtDNA 12SrRNA tRNA^Leu（UUR） tRNA^Ser（UCN）基因突变分析

目的：探讨非综合征型遗传性聋(NSHL)家系中线粒体基因(mtDNA)突变所占比重以及母系遗传的统计学规律。探讨mtDNA突变与遗传性聋的关系及突变在这类家系及散发感音神经性聋(SNHL)中的发生率。方法：收集遗传性NSHL家系29个，行家系调查；对家系进行形式遗传学分析、分离分析；采取外周血，从白细胞中抽取DNA；以多重聚合酶链反应(PCR)法检测mtDNA(nt)1555^G、7445^G、3243^G点突变；行mtDNA 12SrRNA，tRNA^Leu(UUR)及tRNA^Ser(UCN)基因序列测定。结果：多重PCR检测示mtDNA突变家系12个；形式遗传学分析确定为显性遗传不规则外显的家系，mtDNA突变率高；分离分析结合mtDNA突变检测示：母系遗传不具有常染色体遗传基因分离比。经测序证实，12个家系具有mtDNA突变；形式为：1555^G突变家系10个，7445^G突变家系2个，未发现3243^G突变家系。结论：母系遗传与常染色体显性及隐性遗传基因传递分离比有差异；mtDNA突变在NSHL中占较高比例，主要形式是1555^G及7445^G突变。在散发病例中发生率很低；7445^G结合1555^G点突变筛查对SNHL的诊断有重要意义。多重PCR法是mtDNA多基因突变位点简便的检测方法。     

非综合征型遗传性聋家系系谱分析及mtDNA 12SrRNA tRNALeu(UUR)tRNASer(UCN) 基因突变分析

目的探讨非综合征型遗传性聋(NSHL)家系中线粒体基因(mtDNA)突变所占比重以及母系遗传的统计学规律.探讨mtDNA突变与遗传性聋的关系及突变在这类家系及散发感音神经性聋(SNHL)中的发生率.方法收集遗传性NSHL家系29个,行家系调查;对家系进行形式遗传学分析、分离分析;采取外周血,从白细胞中抽取DNA;以多重聚合酶链反应(PCR)法检测mtDNA(nt)1 555G、7 445G、3 243G点突变;行mtDNA12SrRNA,tRNALeu(UUR)及tRNASer(UCN)基因序列测定.结果多重PCR检测示mtDNA突变家系12个;形式遗传学分析确定为显性遗传不规则外显的家系,mtDNA突变率高;分离分析结合mtDNA突变检测示母系遗传不具有常染色体遗传基因分离比.经测序证实,12个家系具有mtDNA突变;形式为1 555G突变家系10个,7 445G突变家系2个,未发现3 243G突变家系.结论母系遗传与常染色体显性及隐性遗传基因传递分离比有差异;mtDNA突变在NSHL中占较高比例,主要形式是1 555G及7 445G突变.在散发病例中发生率很低;7 445G结合1 555G点突变筛查对SNHL的诊断有重要意义.多重PCR法是mtDNA多基因突变位点简便的检测方法.     

Supra-normal sensitivity to ototoxic antibiotic of the developing rat cochlea

Summary A period of increased sensitivity to the ototoxic antibiotic amikacin was found in the cochlea of the developing rat. Starting either at birth, 10 or 30 days of age, rats were injected i.p. daily with 200 mg/kg of amikacine for 10 days. Only in the group injected with drug from 10 to 20 days of age was there evidence of a substantial (40–100 dB) permanent threshold shift (PTS). To characterize the period of supra-normal sensitivity more precisely, independent groups of pups were injected with 50 mg/kg of amikacin from 10 to 20, 15 to 25, 20 to 30, and 30 to 40 days of age. Only those pups injeced from 10 to 20 or 15 to 25 days of age showed PTS (30–60 dB). These data, taken together with those on rat cochlear maturation indicate that the sensitive period to ototoxicity starts at the age of onset of cochlear function (around day 10) and ends a few days after the cochlea shows adult-like characteristics (3^rd postnatal week).Research supported by grants from INSERM (CRL, ARS no. 6), DGRST (BRD, DN), and CNRS (RCP 537)     

新疆地区941例新生儿聋病基因GJB2、SLC26A4、线粒体DNA 12S rRNA筛查分析

目的通过对新生儿进行聋病易感基因和听力筛查,探讨聋病易感基因筛查应用于新生儿筛查的必要性,为制订防聋治聋策略提供依据。方法以941例新生儿作为研究对象,所有新生儿出生时采脐带血,采用限制性内切酶酶切结合直接测序的方法对3种国人常见耳聋易感基因（线粒体DNA 12S rRNA、GJB2、SLC26A4）突变热点进行筛查,运用SPSS 13.0软件对结果进行统计分析。结果3种基因热点突变的总携带率为2.02%（19/941）,GJB2基因235delC杂合突变9例（0.96%）,SLC26A4基因IVS7-2A〉G杂合突变9例（0.96%）,线粒体DNA 12S rRNA A1555G突变3例（0.32%）,其中2例为复合突变（235delC杂合突变/IVS7-2A〉G杂合突变、1555A〉G均质突变/235delC杂合突变）。GJB2基因235delC杂合突变在维吾尔族和汉族新生儿中的携带率分别为0.36％（1/276）、1.19％（7/586）;SLC26A4基因IVS7-2A〉G杂合突变在维吾尔族和汉族新生儿中的携带率分别为0.36％（1/276）、1.37％（8/586）;线粒体DNA 12S rRNA 1555A〉G突变在维吾尔族和汉族新生儿中的携带率分别为0.72％（2/276）、0％。在维吾尔族和汉族新生儿中,以上三基因突变携带率不同,但没有统计学差异。结论聋病易感基因筛查应用于维、汉族新生儿筛查必要且可行。