5-氮杂-2’-脱氧胞苷逆转CNE-2Z细胞RASSF1A基因甲基化的研究

目的观察去甲基化剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人低分化鼻咽癌细胞系CNE-2Z RASSF1A基因的去甲基化作用。方法用5-Aza-CdR处理CNE-2Z细胞后,应用甲基化特异性PCR(MSP)检测RASSF1A基因的甲基化情况,免疫细胞化学检测RASSF1A基因表达改变,细胞生长曲线和平板克隆形成试验分别检测细胞生长能力和克隆形成能力。结果 CNE-2Z细胞RASSF1A基因呈高甲基化和阴性表达。经5-Aza-CdR处理,第1～2天RASSF1A基因高甲基化状态不改变,第3天部分去甲基化,第4天后全去甲基化,5-Aza-CdR处理停止2天后仍保持全去甲基化。随着RASSF1A基因去甲基化,RASSF1A呈明显阳性表达、细胞生长和平板克隆形成能力明显下降。结论 RASSF1A基因在CNE-2Z细胞中因高甲基化而失表达。5-Aza-CdR可诱导CNE-2Z细胞RASSF1A基因完全去甲基化而增强其表达,明显抑制CNET-2Z细胞生长和克隆形成能力。     

5-氮-2''-脱氧胞苷对人卵巢癌细胞凋亡及DNA错配修复基因表达的影响

目的:观察5-氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine ,又称5-aza-CdR)对卵巢癌细胞SKOV3和3AO增殖凋亡及DNA错配基因hMLH1 和hMLH2 表达的影响.方法: 以特异性甲基转移酶抑制剂5-aza-CdR 0.5、5、50μmol/L处理人卵巢癌细胞SKOV3和3AO 3d,继续常规培养7 d后,采用MTT比色法观察细胞经药物处理前后的增殖活性,用流式细胞术分析5-aza-CdR对细胞凋亡影响,以半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞经5-aza-CdR处理前后DNA错配修复基因hMLH1和hMSH2 mRNA表达水平的改变.结果: 人卵巢癌细胞SKOV3和3AO经5-aza-CdR处理后,与对照组比较,0.5、5、50 μmol/L均能明显抑制肿瘤细胞生长,随着5-aza-CdR浓度增加,细胞增殖速度下降.SKOV3经5-aza-CdR 0.5、5、50μmol/L处理后细胞的凋亡率分别为(10.59±1.57)%、(17.52±1.72)%、(34.10±1.45)%,3A0经0.5、5、50μmol/L 5-aza-CdR处理后细胞的凋亡率分别为(11.11±2.21)%、(17.24±1.11)%、(26.53±2.00)%,与对照组相比均有统计学意义(P＜0.01);且凋亡率与剂量成正相关(FSKOV3=227.6,P SKOV3＜0.01;F3AO=108.4,P 3AO＜0.01).经5-aza-CdR处理后的两株卵巢癌细胞中hMLH1 和hMLH2 的mRNA表达量有不同程度的增加(P＜0.01),且与药物存在剂量依赖性.结论: 在人卵巢癌细胞株SKOV3和3AO中,5-aza-CdR可部分逆转hMLH1 和hMLH2 的失活,恢复其生长调控功能,抑制肿瘤细胞生长,并诱导细胞凋亡.     

5-氮-2′-脱氧胞苷对人卵巢癌细胞凋亡及DNA错配修复基因表达的影响

目的:观察5-氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,又称5-aza-CdR)对卵巢癌细胞SKOV3和3AO增殖凋亡及DNA错配基因hMLH1和hMLH2表达的影响。方法:以特异性甲基转移酶抑制剂5-aza-CdR0.5、5、50μmol/L处理人卵巢癌细胞SKOV3和3AO3d,继续常规培养7d后,采用MTT比色法观察细胞经药物处理前后的增殖活性,用流式细胞术分析5-aza-CdR对细胞凋亡影响,以半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞经5-aza-CdR处理前后DNA错配修复基因hMLH1和hMSH2mRNA表达水平的改变。结果:人卵巢癌细胞SKOV3和3AO经5-aza-CdR处理后,与对照组比较,0.5、5、50μmol/L均能明显抑制肿瘤细胞生长,随着5-aza-CdR浓度增加,细胞增殖速度下降。SKOV3经5-aza-CdR0.5、5、50μmol/L处理后细胞的凋亡率分别为(10.59±1.57)%、(17.52±1.72)%、(34.10±1.45)%,3A0经0.5、5、50μmol/L5-aza-CdR处理后细胞的凋亡率分别为(11.11±2.21)%、(17.24±1.11)%、(26.53±2.00)%,与对照组相比均有统计学意义(P<0.01);且凋亡率与剂量成正相关(FSKOV3=227.6,PSKOV3<0.01;F3AO=108.4,P3AO<0.01)。经5-aza-CdR处理后的两株卵巢癌细胞中hMLH1和hMLH2的mRNA表达量有不同程度的增加(P<0.01),且与药物存在剂量依赖性。结论:在人卵巢癌细胞株SKOV3和3AO中,5-aza-CdR可部分逆转hMLH1和hMLH2的失活,恢复其生长调控功能,抑制肿瘤细胞生长,并诱导细胞凋亡。     

5-氮杂-2’-脱氧胞苷联合低浓度顺铂对肺癌细胞增殖影响的实验研究

目的 探讨5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）与低浓度顺铂（DDP）联合用药对非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞增殖的影响。方法 选择1μmol／L DDP、10μmol／L 5-Aza-CdR及两者联合分别处理体外培养的A549细胞,MTT法检测处理前后的细胞增殖活性,流式细胞仪、Hoechst 33258染色分别观察处理前后的细胞周期、凋亡率及凋亡形态学变化。结果 MTT法显示,与单独1μmol／L DDP组比较,联合组能够明显抑制A549细胞的增殖,A549细胞的凋亡率亦明显增加;流式细胞仪显示,联合组作用于细胞G0／G1期,使A549细胞生长阻滞在此期,细胞的增殖指数降低;与单独1μmol／L DDP组比较,联合组A549细胞的凋亡形态学改变更明显。结论5-Aza-CdR联合低浓度DDP能够明显抑制NSCLC A549细胞的增殖和诱导A549细胞的凋亡。     

5-氮杂-2'-脱氧胞苷对人胰腺癌细胞系MiaPaca2生长和RUNX3基因甲基化的影响

目的 探讨去甲基化制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对胰腺癌细胞系MiaPaca2生长的影响,以及对RUNX3抑癌基因表达和甲基化的影响.方法 光镜观察5-Aza-CdR处理前后MiaPaca2细胞形态学变化,四甲基偶氮唑蓝法检测5-Aza-CdR对MiaPaca2细胞增殖活性的影响,半定量逆转录聚合酶链反应检测RUNX3 mRNA表达的变化,甲基化特异性聚合酶链反应检测RUNX3基因甲基化的变化.结果 经2.5、5、10和20 μmol/L 5-Aza-CdR处理24h后,MiaPaca2细胞的抑制率分别为(9.17 ±2.15)％、(10.75 ±2.04)％、(12.57±1.64)％和(18.70±1.51)％;48 h后分别为(14.94±1.68)％、(18.60±1.57)％、(22.84±1.58)％和(33.24±1.53)％;72 h后分别为(21.46±1.60)％、(28.62±1.72)％、(35.14±1.64)％和(45.06±1.47)％;96 h后分别为(26.35±1.71)％、(34.48±1.69)％、(40.05 ±1.60)％和(49.99±1.61)％.各实验组与对照组抑制率比较,差异均有统计学意义(均P ＜0.05).在同一时点,各浓度组间MiaPaca2细胞的抑制率差异均有统计学意义(均P＜0.05).在48、72、96h时,各浓度组抑制率两两比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).在药物处理24h以后,5-Aza-CdR对MiaPaca2细胞的生长抑制作用随着5-Aza-CdR浓度的增加而增强.5-Aza-CdR能够逆转RUNX3基因的甲基化状态,恢复RUNX3 mRNA的表达.结论 RUNX3基因甲基化状态与胰腺癌的发生发展密切相关,异常甲基化可能是引起RUNX3基因表达缺失的重要机制.5-Aza-CdR可以逆转MiaPaca2细胞RUNX3基因的甲基化状态,重新激活其表达,从而抑制肿瘤细胞的生长,为胰腺癌的诊断和治疗提供了一条新途径.     

5-氮-2′-脱氧胞苷诱导膀胱癌EJ细胞凋亡研究

[目的]探讨5-氮-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）诱导膀胱癌EJ细胞凋亡机制。[方法]以不同浓度的5-Aza-CdR作用于膀胱癌EJ细胞，以四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞的增殖程度，原位凋亡细胞检测技术（TUNEL）和流式细胞术（FCM）检测5-Aza-CdR对膀胱癌EJ细胞凋亡和细胞周期的影响。[结果]EJ细胞加入不同浓度的5-Aza-CdR（0.625，1.25，2.50，5.00mg/ml），与对照组相比各组EJ细胞增长速度减慢。与对照组相比，不同浓度的各组5-Aza-CdR（0.625，1.25，2.50，5.00mg/ml）可以显著降低EJ细胞的增殖比和增高EJ细胞的凋亡指数（P〈0.05），且与5-Aza-CdR呈浓度依赖关系（P〈0.05）；不同浓度的5-Aza-CdR作用EJ细胞后G0/G1期细胞明显增加（P〈0.05）。[结论]5-氮-2′-脱氧胞苷诱导膀胱癌EJ细胞凋亡并使EJ细胞阻滞于G0/G1期，从而抑制膀胱癌EJ细胞的增殖。     

5-氮-2＇-脱氧胞苷诱导膀胱癌BIU87细胞凋亡的研究

目的：研究5-氮-2＇-脱氧胞苷（5-Aza-2＇-decxycytidine,5-Aza-CdR）对膀胱癌BIU87细胞凋亡的影响。方法：以不同浓度的5-氮-2＇-脱氧胞苷作用于膀胱癌BIU87细胞,以四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞的增殖程度,AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞仪（flow cytometry,FCM）检测凋亡率,AO荧光染色对细胞凋亡形态学观察,同时应用Western blot检测膀胱癌BIU87细胞RASSF1A蛋白表达的改变。结果：BIU87细胞加入（0.1、0.5、1.0、5.0）nmol/L的5-Aza-CdR后与对照组相比各组BIU87细胞增长速度减慢。不同浓度的5-Aza-CdR可以显著降低BIU87细胞的存活率,与对照相组比差异显著（P〈0.05）。BIU87细胞的凋亡率逐渐增高且与5-Aza-CdR呈浓度依赖关系（P〈0.05）。荧光显微镜下见典型的凋亡形态学改变,随5-Aza-CdR浓度的升高BIU87细胞RASSF1A蛋白的表达也升高。结论：5-Aza-CdR可能通过对RASSF1A基因的再表达而抑制肿瘤细胞的生长,从而诱导膀胱癌BIU87细胞凋亡的增加。     

5-氮-2''''-脱氧胞苷诱导膀胱癌EJ细胞凋亡研究

[目的]探讨5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)诱导膀胱癌EJ细胞凋亡机制.[方法]以不同浓度的5-Aza-CdR作用于膀胱癌FJ细胞,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖程度,原位凋亡细胞检测技术(TUNEL)和流式细胞术(FCM)检测5-Aza-CdR对膀胱癌EJ细胞凋亡和细胞周期的影响.[结果]EJ细胞加入不同浓度的5-Aza-CdR(0.625,1.25,2.50,5.00 mg/ml),与对照组相比各组FJ细胞增长速度减慢.与对照组相比,不同浓度的各组5-Aza-CdR(0.625,1.25,2.50,5.00 mg/ml)可以显著降低EJ细胞的增殖比和增高EJ细胞的凋亡指数(P＜0.05),且与5-Aza-CdR呈浓度依赖关系(P＜0.05);不同浓度的5-Aza-CdR作用FJ细胞后G0/G1期细胞明显增加(P＜0.05).[结论]5-氮-2'-脱氧胞苷诱导膀胱癌FJ细胞凋亡并使EJ细胞阻滞于G0/G1期,从而抑制膀胱癌FJ细胞的增殖.     

5-氮杂-2ˊ-脱氧胞苷对乳腺癌细胞RASSF1A甲基化的逆转作用

目的：通过甲基化抑制剂5-氮杂-2ˊ-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）作用于乳腺癌细胞株MCF-7,探索5-Aza-CdR逆转乳腺癌抑癌基因RASSF1A甲基化作用的机理。方法：体外培养乳腺癌细胞株MCF-7细胞,使用不同浓度5-氮杂-2ˊ-脱氧胞苷处理MCF-7细胞,对照组不加药。MSP及Western blot分别检测经5-Aza-CdR处理前、后RASSF1A DNA、蛋白的表达情况。结果：经去甲基化药5-Aza-CdR作用后,实验组恢复了RASSF1A的表达,明显高于对照组（ P〈0.05）。结论：去甲基化药5-Aza-CdR可以逆转乳腺癌细胞RASSF1A的甲基化作用,恢复了RASSF1A蛋白的表达,为临床治疗乳腺癌提供了理论基础。     

5-氮杂脱氧胞苷对MCF7细胞中MEG3基因表达及细胞增殖活性的影响

背景与目的:MEG3(maternal expressed gene 3)基因是一类印记基因,其转录缺失可能诱导多种肿瘤的发生发展.本研究通过检测乳腺癌MCF7细胞中MEG3基因mRNA的转录情况及细胞增殖活性,以探讨DNA甲基化抑制剂5-氮杂脱氧胞苷对MEG3基因转录的诱导作用及其对细胞增殖活性的影响.方法:以浓度为5 μmol/L的5-氮杂脱氧胞苷分别作用MCF7细胞0、2、4和6 d后,用RT-PCR及Northern blot技术检测MEG3基因mRNA的转录水平;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性的变化.结果:与未处理组相比,5-氮杂脱氧胞苷分别作用2、4和6 d后,MCF7细胞中MEG3基因mRNA表达显著增强,并呈现时间依赖性(P<0.01);MTT检测结果显示MCF7细胞的增殖活性受到抑制.与未处理组相比,药物作用2、4和6 d的细胞增殖抑制率分别为(23.16±3.93)%、(49.39±2.38)%和(64.73±2.24)%,差异有显著性(P<0.01).结论:MEG3基因可能具有抑制MCF7细胞生长的作用,其基因转录下调与DNA甲基化有关,可能参与了乳腺癌的发病机制.     

5-氮杂-2-脱氧胞苷对人胰腺癌细胞株PANC-1增殖和凋亡的影响

目的:探讨5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)干预对胰腺癌细胞株PANC-1增殖和凋亡的影响及可能的机制。方法:用不同浓度的5-Aza-CdR处理PANC-1细胞株,未予干预的细胞为对照,采用台盼蓝染色、细胞计数法检测5-Aza-CdR干预前后细胞增殖能力的变化,FCM法检测干预前后细胞凋亡率的变化,caspase-3活性测定检测5-Aza-CdR诱导凋亡的能力。结果:5-Aza-CdR干预后,PANC-1细胞增殖明显受到抑制,细胞凋亡率明显提高,细胞内caspase-3活性明显增强(P<0.05)。结论:5-Aza-CdR可以明显抑制胰腺癌细胞株PANC-1的生长增殖,并诱导细胞发生凋亡,线粒体凋亡途径可能是其诱导凋亡的机制之一。     

5-氮-2'-脱氧胞苷诱导膀胱癌BIU87细胞凋亡的研究

目的:研究5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-decxycytidine,5-Aza-CdR)对膀胱癌BIU87细胞凋亡的影响。方法:以不同浓度的5-氮-2'-脱氧胞苷作用于膀胱癌BIU87细胞,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖程度,AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测凋亡率,AO荧光染色对细胞凋亡形态学观察,同时应用Western blot检测膀胱癌BIU87细胞RASSF1A蛋白表达的改变。结果:BIU87细胞加入(0.1、0.5、1.0、5.0)nmol/L的5-Aza-CdR后与对照组相比各组BIU87细胞增长速度减慢。不同浓度的5-Aza-CdR可以显著降低BIU87细胞的存活率,与对照相组比差异显著(P<0.05)。BIU87细胞的凋亡率逐渐增高且与5-Aza-CdR呈浓度依赖关系(P<0.05)。荧光显微镜下见典型的凋亡形态学改变,随5-Aza-CdR浓度的升高BIU87细胞RASSF1A蛋白的表达也升高。结论:5-Aza-CdR可能通过对RASSF1A基因的再表达而抑制肿瘤细胞的生长,从而诱导膀胱癌BIU87细胞凋亡的增加。     

5-氮杂-2’-脱氧胞苷对人前列腺癌裸鼠移植瘤生长及雄激素受体表达影响的研究

目的探讨5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2’deoxycytidine,5-Aza-CdR)对LNCaP荷瘤裸鼠的肿瘤生长及雄激素受体(androgen receptor,AR)表达的影响。方法裸鼠皮下接种LNCaP细胞,建立人前列腺癌裸鼠移植瘤模型,待肿瘤长至300 mm3大小时,荷瘤裸鼠腹腔内注射5-Aza-CdR,0.25 mg/kg,隔天1次。对照组给予生理盐水注射。每3天测量肿瘤体积1次,共观察24天。实验结束时处死裸鼠,取出肿块称重后,肿瘤组织抽提RNA和蛋白质,分别应用实时定量PCR和western blot方法,检测AR在mRNA和蛋白质水平上的表达。结果 LNCaP荷瘤裸鼠经5-Aza-CdR治疗后,与对照组相比,肿瘤生长缓慢。第24天观察结束时,5-Aza-CdR处理组肿瘤体积[(982±83)mm3]显著低于对照组[(1 867±195)mm3](P<0.01)。移植瘤重量与对照组相比明显下降[(796±178)mg vs(1 267±252)mg],抑瘤率为37.2%,差异有统计学意义(P<0.01)。5-Aza-CdR组游离PSA(FPSA)浓度相对对照组显著下降,分别为(40.25±13.3)ng/mL和(79.7±13.2)ng/mL,差异有统计学意义(P<0.01)。荷瘤裸鼠经5-Aza-CdR处理后,AR在mRNA水平上的表达下降为对照组的0.5倍,在蛋白质水平上的表达也显著降低(P<0.01)。结论 5-Aza-CdR能够有效抑制LN-CaP荷瘤裸鼠移植瘤的生长,并显著降低AR基因表达,为前列腺癌的去甲基化治疗提供了理论依据。     

5-氮杂-2＇-脱氧胞苷对人卵巢癌细胞株RASSF1A基因表达的影响

目的 观察5-氮杂-2＇-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对体外培养的人卵巢癌细胞株（SKOV3、3AO） RASSF1A mRNA及蛋白表达的影响.方法 卵巢癌细胞株（SKOV3、3AO）经不同浓度（0.5、5、50 μmol/L）的5-Aza-CdR处理,未经处理的作为对照组,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）及免疫印记（Western Blot）检测RASSF1A在mRNA和蛋白质水平表达的变化.结果 对照组细胞株SKOV3、3AO均可见RASSF1A mRNA及蛋白的表达,但表达较弱,经药物处理后的细胞RASSF1A mRNA及蛋白的表达较前明显增强.经不同浓度5-Aza-cdR处理的SKOV3细胞株中,随浓度增加,RASSF1A mRNA及蛋白的表达依次递增.经不同浓度5-Aza-cdR处理的3AO细胞株中,经0.5μmol/L 5-Aza-cdR处理后,RASSF1A mRNA的表达明显低于经5和50 μmol/L 5-Aza-cdR处理后的表达（t=-8.866,P=0.01;t=-12.256,P=0.000）;但经5、50 μmol/L 5-Aza-cdR分别处理的3AO细胞株RASSF1A mRNA的表达差异无统计学意义（t=0.431,P=0.689）.在3AO细胞株中,0.5 μmol/L组与5μmol/L组RASSF1A蛋白表达差异无统计学意义（t=-1.586,P=0.188）.结论 经过5-Aza-CdR处理后,卵巢癌细胞株（SKOV3、3AO） RASSF1A mRNA及蛋白的表达均明显增强,细胞增殖能力受到明显抑制,从而起到抑制肿瘤细胞生长,甚至促进肿瘤细胞凋亡的作用.     

14-3-3σ蛋白表达对恶性肿瘤诊断和治疗的意义

目前的研究表明,肿瘤从本质上来说是基因病。其中,抑癌基因的基因调控失活很大程度会导致肿瘤发展[1]。在许多癌组织中发现,由于启动子的DNA高度甲基化而致抑癌基因沉默。那些基因包括:FHI T、△Np63、CDH1、RASSFI A、CDH13、sFRP1、RARb、p16、DAPK和14-3-3σ基因[2]。14-3-3     

5-氮杂-2'-脱氧胞苷对肝癌细胞HepG2凋亡及其PEG10基因表达的影响

目的 探讨去甲基化药物5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人肝癌细胞系HepG2凋亡及其PEG10基因表达调控的影响,进一步探讨肝癌的发病机制及5-Aza-CdR治疗肝癌的可行性.方法 用浓度为50 μmol/L的5-Aza-CdR分别处理HepG2细胞24、48、72 h,hoechst 33342/PI双染荧光显微镜检测HepG2细胞凋亡情况.RT-PCR、Western blot法分别检测PEG10 mRNA和蛋白表达水平的变化.结果 与对照组相比,5-Aza-CdR作用24、48、72 h后,HepG2细胞的凋亡率明显升高,PEG10 mRNA和蛋白表达水平显著下降,并呈现时间依赖性(P＜0.05).结论 5-Aza-CdR可促进HepG2细胞凋亡并抑制PEG10基因的表达.     

5-氮杂-2′-脱氧胞苷对肝癌细胞HepG2凋亡及其PEG10基因表达的影响

目的探讨去甲基化药物5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对人肝癌细胞系HepG2凋亡及其PEG10基因表达调控的影响,进一步探讨肝癌的发病机制及5-Aza-CdR治疗肝癌的可行性。方法用浓度为50 μmol/L的5-Aza-CdR分别处理HepG2细胞24、48、72 h,hoechst 33342/PI 双染荧光显微镜检测HepG2细胞凋亡情况。RT-PCR、Western blot法分别检测PEG10 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果与对照组相比,5-Aza-CdR作用24、48、72 h后,HepG2细胞的凋亡率明显升高,PEG10 mRNA 和蛋白表达水平显著下降,并呈现时间依赖性（P＜0.05）。结论5-Aza-CdR 可促进HepG2细胞凋亡并抑制PEG10基因的表达。     

5-Aza-CdR对人喉鳞癌Hep2细胞凋亡及蛋白质表达的影响

目的:探讨5-Aza-CdR对人喉鳞癌Hep2细胞凋亡及蛋白质表达的影响。方法:Hep2细胞分别经10-7mol/L 5-Aza-CdR和DMSO处理72h,应用Hoechst33258染色及流式细胞仪检测5-Aza-CdR对Hep2细胞凋亡的影响。抽提各组Hep2细胞总蛋白质,行双向电泳,采用PDQuest-7.0.1软件及MALDI-TOF质谱技术筛查5-Aza-CdR对Hep2细胞蛋白表达的影响,并通过Western blot对显著性差异蛋白质进行验证。结果:人喉鳞癌Hep2细胞在10-7mol/L 5-Aza-CdR处理72h后出现明显的细胞核致密浓染,Hep2细胞的凋亡率由对照组的(2.70±0.28)%增加到(13.96±0.41)%,具有统计学意义(P<0.05)。双向电泳筛查了包括S100A4在内的5种表达显著差异的蛋白质,Western blot进一步验证了5-Aza-CdR能明显上调喉鳞癌Hep2细胞中S100A4的表达,进而证明了双向电泳结果的可信性。结论:5-Aza-CdR介导的Hep2细胞部分蛋白质表达改变,直接或间接地参与了5-Aza-CdR诱导的Hep2细胞凋亡的发生,为5-Aza-CdR在喉鳞癌探讨性治疗中的机制研究奠定基础。     

5-氮杂-2-脱氧胞苷及曲古抑菌素A对人胃癌SGC-7901细胞生长及CHFR基因表达水平的影响

背景与目的:抑癌基因甲基化具有可逆性,相关药物可逆转甲基化使失活的基因重新表达。本研究观察去甲基化制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-dC)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对体外培养的人胃癌SGC-7901细胞活性及CHFR基因mRNA和蛋白表达水平的影响。方法:使用不同浓度的5-Aza-dC和(或)TSA处理SGC-7901细胞,分为对照组、TSA组(250 nmol/L)、5-Aza-dC组(5μmol/L)及TSA(250 nmol/L)联合5-Aza-dC(5μmol/L)组等4个组,采用台盼蓝染色法检测细胞活性,并利用RT-PCR及蛋白质印迹法(Westernblot)方法检测CHFR基因mRNA和蛋白表达的水平。结果:5-Aza-dC和TSA作用24、48、60和72 h后SGC-7901细胞活性均被抑制,且抑制率呈浓度和时间依赖性,两药联合作用更明显;SGC-7901细胞经5-Aza-dC单独或与TSA联合干预后,能提高CHFR基因mRNA和蛋白表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:5-Aza-dC和(或)TSA均能抑制细胞活性,提高CHFR基因mRNA和蛋白表达水平,两药联合的效果比单药明显增加,为临床胃癌患者的化疗方案提供了实验依据。     

DNA甲基转移酶抑制剂5-杂氮-2’-脱氧胞苷对人鼻咽癌细胞株CNE2的影响

目的探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-aza-2dC对人低分化鼻咽鳞癌细胞株CNE2的影响。方法应用10-7、10-6、10-5、10-4mol/L浓度的5-aza-2dC,处理人低分化鼻咽鳞癌细胞株CNE2 12、24、36、48、72 h后,应用MTT法测定CNE2细胞株的生存情况,应用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。用甲基化特异性PCR检测药物处理前后死亡相关蛋白激酶(DAPK)启动子甲基化状态。结果同一作用时间不同药物浓度组间,细胞存活率差异有统计学意义(P<0.05),且作用72 h对人低分化鼻咽鳞癌细胞株CNE2生长抑制作用最强。流式细胞仪检测结果显示:10-4mol/L 5-aza-2dC诱导细胞凋亡最明显(P<0.01)。甲基化特异性PCR显示鼻咽癌细胞株中,5-aza-2dC可成功逆转DAPK基因启动子高甲基化状态。结论 5-aza-2dC对人低分化鼻咽鳞癌细胞株CNE2生长有抑制作用,且呈浓度和时间依赖性。