冷库作业工人淋巴细胞中HSP70水平的研究

目的　研究冷应激对冷库作业工人体内HSP70水平的影响及可能的机制。方法　选取冷库作业工人为研究对象 ,其中保鲜冷库 ( 0℃组 ) 5 3人 ,水产冷库 ( -2 0℃组 ) 5 3人 ;另选年龄、性别、劳动强度与之匹配的、不从事有毒有害作业的村民 5 8人作为对照。用Westernblot法检测淋巴细胞HSP70水平。结果　 0℃组和 -2 0℃组分别与对照组相比 ,其淋巴细胞HSP70水平明显增高 ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;0℃组与 -2 0℃组相比 ,HSP70水平差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　低温环境作为一种应激因素 ,可使体内热应激蛋白合成与表达增加。     

硝酸铅诱导L-02细胞HSP70表达及氧化应激的研究

目的研究硝酸铅诱导人胚胎肝细胞株L-02细胞热应激蛋白70(HSP70)表达以及细胞氧化应激的变化,并探讨HSP70表达与抗氧化作用的关系。方法以0、10、20和40μmol/L硝酸铅染毒人胚胎肝细胞株L-02细胞,以免疫组化技术观察HSP70表达的变化,并检测L-02细胞裂解液超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物还原酶(GSH-Px)活力以及丙二醛(MDA)含量的变化。结果 20、40μmol/L硝酸铅组L-02细胞未出现细胞毒作用,HSP70出现阳性表达,且40μmol/L剂量组呈明显阳性;同时40μmol/L剂量组SOD活力高于对照组(P0.05)。结论该研究剂量的硝酸铅能够诱导L-02细胞HSP70表达明显增强,且细胞抗氧化作用增强。     

中暑病人血浆中热应激蛋白(HSP70)及其抗体水平的意义

目的　探讨中暑病人热应激蛋白 (HSP70 )及其抗体水平变化和其在中暑发生中的可能作用。方法　应用Westernblot法 ,测定血浆HSP70水平 ;应用酶联免疫反应技术测定血浆HSP70抗体滴度。结果　HSP70在高温中暑组为 42 11.2± 12 86 .2 (积分光密度 )、重症中暑组为 4137.8±12 0 7.5 ,与对照组 (6 0 43.5± 135 4.8)比较 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5 )。中暑病人HSP70抗体水平在 1∶10、1∶2 0、1∶40阳性率分别为 5 4.1%、48.9%、2 1.6 % ,显著高于对照组 (2 6 .7%、13.8%、0 % ) ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　HSP70水平的下降和HSP70抗体的出现在中暑发生过程中具有一定的作用。     

HSP70高表达对K562细胞化疗敏感性研究

目的：研究化学因素引起的热应激蛋白70（HSP70）升高对K562细胞化疗药物体外敏感性的影响。方法：用氯化镉诱导K562细胞使其HSP70高表达，在高表达细胞中分别加入甲氨蝶呤（MTX）、丝裂霉素C（Mitomycin C）、顺氯氨铂（PDD）、平阳霉素（Bleomycin）等4种化疗药物，药物浓度以临床一次用量的1／250为中剂量，中剂量的1／10、10倍分别为低剂量和高剂量，作用16h后用MTT比色法检测细胞活力；HSP70用RT－PCR检测。结果：氯化镉可诱导细胞HSP70高表达，其中作用4h后表达最高；HSP70高表达可以降低细胞对化疗药物的敏感性，HSP70表达水平越高，细胞对化疗药物的敏感性越低。结论：非热诱导的HSP70高表达可以降低肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，其结果与热诱导的作用相似。     

冷库工人血浆中HSP70抗体及脂质过氧化水平的研究

目的　研究低温作业人群中HSP70抗体水平及血浆中SOD、GSH、MDA等脂质过氧化指标水平,探讨低温作业对人可能的危害与机制。方法　选冷库作业工人为研究对象,其中保鲜冷库(0℃组) 5 3人,水产冷库(-2 0℃组) 5 3人,另选不从事有毒有害职业的村民5 7人作为对照。用Westernblot ELISA法研究血浆中热应激蛋白抗体表达水平,用试剂盒检测血浆中SOD、GSH、MDA等生化指标。结果　对照组5 7人中有3人出现血浆HSP70抗体1∶10阳性,阳性率为5 %;而0℃组5 3人中有14人阳性,占2 6%;-2 0℃组5 3人有11人出现阳性(2 .1%)。对照组1人出现1∶2 0阳性(2 %) ,0℃组有8人阳性,占15 %;-2 0℃组也有8人出现阳性(15 %)。0℃组与-2 0℃组分别与对照组相比,其血浆HSP70抗体水平明显增高,差异有显著性(P <0 .0 5 )。此外,0℃组与-2 0℃组中还各有1人出现1∶40阳性,而对照组没有检出。0℃组与-2 0℃组相比,HSP70抗体水平差异没有显著性(P >0 .0 5 )。对于各生化指标,0℃组与-2 0℃组分别与对照组相比,其血浆中SOD活性、GSH含量均下降,差异有显著性(P <0 . 0 5 )。而MDA含量增高(P <0 . 0 5 )。0℃组与-2 0℃组相比,各指标差异均无显著性。结论　在冷作业工人中存在着血浆中HSP70抗体水平的升高及脂质过氧化程度加重。     

刚地弓形虫HSP70真核表达质粒构建及评价

目的 构建刚地弓形虫热休克蛋白70(TgHSP70)真核表达重组质粒p3×Flag-CMW-14-TgHSP70,并在HEK 293T细胞内获得表达,为制备基因疫苗奠定基础。方法 扩增TgHSP70基因,双酶切后与真核表达质粒p3×Flag-CMW-14连接,经酶切、PCR及测序鉴定;脂质体法将重组体转染HEK 293T细胞中,TgHSP70的表达产物通过RT-PCR和western blot在基因和蛋白2个水平鉴定。结果 PCR扩增获得约495 bp的HSP70基因片段,p3×Flag-CMW-14-TgHSP70重组质粒构建成功,经双酶切、PCR及测序鉴定,重组质粒基因序列完全正确;将p3×Flag-CMW-14-TgHSP70转染到HEK 293T细胞中,经RT-PCR检测获得预期大小目的基因条带,Western-blot检测表达产物大小约19 kDa。结论 成功构建了真核表达重组质粒p3×Flag-CMW-14-TgHSP70,并在HEK 293T正确表达。     

HSP70基因多态性与焦炉工外周血淋巴细胞凋亡的易感性研究

目的探讨焦炉工人HSP70基因多态性与外周血淋巴细胞凋亡率的关系。方法于2008年7—8月,在某焦化厂选取341名工人作为研究对象,按照工人班后尿1-羟基芘(1-OHP)的浓度,分为低暴露组(<1.52μmol/mol cr)、中暴露组(1.52～3.88μmol/mol cr)、高暴露组(>3.88μmol/mol cr)。采用流式细胞仪测定淋巴细胞凋亡率,以限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法分析焦炉作业工人外周血淋巴细胞HSP70-1基因G190C、HSP70-2基因A1267G和HSP70-hom基因T2437C基因多态性。结果携带HSP70-hom基因T/C+C/C基因型中、高暴露组工人淋巴细胞早期凋亡率均高于低暴露组(P<0.05)。携带HSP70-1 G/C+C/C、HSP70-2 A/G+G/G和HSP70-hom T/C+C/C基因型高暴露组工人淋巴细胞早期凋亡阳性率均高于低暴露组(P<0.05)。HSP70-2基因A/G+G/G基因型与高暴露环境之间存在次相乘模型的正向交互作用(γ>1,OReg=11.273,95%CI=2.244～56.641);HSP70-hom基因T/C+C/C基因型与高暴露环境之间存在超相乘模型的正向交互作用(γ>1,OReg=3.718,95%CI=1.293～10.693)。低、中、高暴露组GAC、CGT单倍型者淋巴细胞早期凋亡阳性率逐渐增加(P趋势<0.05)。结论 HSP70-2基因A/G+G/G基因型、HSP70-hom基因T/C+C/C基因型与高暴露环境的交互作用可增加淋巴细胞凋亡的危险度。GAC和CGT单倍型是淋巴细胞早期凋亡阳性率增加的危险因素。     

槲皮素抑制HSP70表达对紫外线C致DNA损伤的影响

目的研究热休克蛋白70(HSP70)在紫外线C致DNA损伤中的保护作用。方法用254 nm紫外线不同照射剂量(10,20,40,80 J/m2)照射槲皮素(quercetin)抑制HSP70表达的A549细胞株(A549/quercetin),用Western-blot检测HSP70的水平,用碱性单细胞凝胶电泳检测DNA损伤,用彗星细胞率和Olive尾矩评价DNA损伤情况。A549细胞作为正常对照组,DMSO处理作为溶剂对照组(A549/DMSO)。结果无论在A549组、A549/DMSO组,还是在A549/quercetin组,DNA损伤的彗星细胞率随着紫外照射的剂量增加而逐渐增加,在10 J/m2时,未观察到HSP70的保护作用,3组的彗星细胞率差异无统计学意义;在20 J/m2照射时,可以观察到HSP70的保护作用,但不明显;40 J/m2照射时,观察到HSP70对DNA有很明显的保护作用;80 J/m2照射时,HSP70的保护作用又逐渐地消失了。进一步分析40 J/m2照射的Olive尾矩显示,与A549组或A549/DMSO组相比,A549/quercetin组Olive尾矩明显增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论HSP70能保护细胞免受一定剂量范围内的紫外线C照射引起的DNA损伤。     

焦炉工人外周血淋巴细胞HSP 72表达特征

目的 研究焦炉工人外周血淋巴细胞热休克蛋白72(HSP72)表达特征及其影响因素.方法 选取某焦化厂焦炉工人267人和对照30人,蛋白印迹(Western blot)法检测外周血淋巴细胞HSP 72的表达,高效液相色谱法测定作业环境空气中苯并(a)芘[B(a)P]浓度.收集研究对象个人信息.结果 炉顶工、炉侧工外周血淋巴细胞HSP 72表达水平(G±SG)(1.20±0.47,1.30±0.37)显著高于对照组(0.85±0.34),炉侧工显著高于炉底工(1.01±0.35),差异有统计学意义(P＜0.05).不同作业环境[B(a)P]浓度与相应作业区工人外周血淋巴细胞HSP72表达水平呈二项式分布(R2=0.9999).Logistic分析显示,与对照组相比,焦炉逸散物暴露引起淋巴细胞HSP 72表达阳性的调整OR为1.31,其中炉顶工、炉侧工调整OR分别为1.49和2.69.多元线性回归分析显示,在低暴露水平下(炉底工、对照组),吸烟指数和饮酒是HSP 72表达水平升高的抑制因素(β分别为-0.0001和-0.05,P＜0.05).结论 焦炉逸散物可诱导外周血淋巴细胞HSP72表达升高,但高暴露剂量为焦炉逸散物对HSP 72表达有抑制作用.低暴露水平下吸烟和饮酒对HSP 72表达有抑制作用.     

单细胞凝胶电泳法检测焦炉作业工人淋巴细胞DNA损伤

目的 :利用单细胞凝胶电泳技术 ,检测焦炉作业工人外周血淋巴细胞 DNA的损伤 ,以了解作业工人所受的遗传损害。方法 :分别抽取炼焦和非炼焦工人进行流行病学调查 ,同时采用单细胞凝胶电泳技术 ,对每一位对象观察 DNA断裂分级 (将 DNA断裂损伤按其损伤程度分级 )。结果 :焦炉作业工人的 DNA断裂程度随生产环境的不同而不同 ,其炉顶、炉侧组均明显高于对照组 ,差异有显著性 (P<0 .0 1) ;专业工龄 10～年的工人 DNA损伤程度远高于专业工龄 0～年及 5～年者 (P<0 .0 1) ;吸烟与 DNA损伤呈正相关 ,而饮酒与 DNA损伤程度未见相关性。结论 :单细胞凝胶电泳法能够快速、敏感地检测炼焦工人淋巴细胞的 DNA损伤 ,提示对于检测环境致癌物和致突变物可能是一有用的工具     

焦炉工外周血淋巴细胞热应激蛋白70水平的变化

目的检测焦炉工外周血淋巴细胞热应激蛋白70(HSP70)水平的变化。方法在炼焦工人中选取118例作为接触组,无任何职业致癌物接触史的男性健康体检者50例为对照组。采用Western blot法检测淋巴细胞HSP70蛋白表达,并采用高效液相色谱法检测苯并(a)芘(B[a]P)及GB5748—85《作业场所空气中粉尘浓度测定方法》测定粉尘。结果各测定地点粉尘和B[a]P浓度都远远高于国家卫生标准。接触组不同工龄组之间HSP70蛋白的表达水平具有统计学意义(P<0.05),并且随着工龄的增加,HSP70的表达量增加(r=0.931,P<0.01)。结论结果表明焦炉逸散物可能致焦炉工外周血淋巴细胞HSP70表达水平升高并可能与工龄有关。     

Using lymphocyte and plasma Hsp70 as biomarkers for assessing coke oven exposure among steel workers

BACKGROUND: Hsp70, an early-response protein induced when organisms are confronted with simple or complicated environmental stresses, can act as either a cellular protector or a danger signal. OBJECTIVES: The goal of this study was to evaluate levels of lymphocyte and/or plasma Hsp70 as biomarkers for assessing exposure response to complex coke oven emissions (COEs). METHODS: We recruited 101 coke oven workers and determined levels of polycyclic aromatic hydrocarbon (PAH) exposure, urinary 1-hydroxypyrene (1-OHP), genotoxic damage by comet assay and micronuclei test, and other markers of damage, including plasma malondialdehyde (MDA) and lactate dehydrogenase (LDH). These were compared to levels of lymphocyte (intra-cellular) and plasma (extracellular) Hsp70 using Western blots and enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA), respectively. RESULTS: We observed a COEs-related dose-dependent increase in levels of DNA damage, micronuclei rate, MDA concentration, and LDH activity. Lymphocyte Hsp70 levels increased in the intermediate-exposure group (1.39 +/- 0.88) but decreased in the high-exposure group (1.10 +/- 0.55), compared with the low-exposure group. In contrast, plasma Hsp70 levels progressively increased as the dose of exposure increased. Negative correlations were seen between lymphocyte Hsp70 levels and olive tail moment and LDH activity in the intermediate- and high-exposure groups. However, we observed positive correlations between plasma Hsp70 levels and LDH activity in the low and intermediate groups. CONCLUSIONS: In workers exposed to COEs, high lymphocyte Hsp70 levels may provide protection and high plasma Hsp70 levels may serve as a danger marker. Larger validation studies are needed to establish the utility of Hsp70 as a response marker.     

焦炉作业多环芳烃暴露工人诱发电位检测

目的 检测多环芳烃暴露人群诱发电位的变化情况。方法 按炉顶、炉侧、炉底不同作业岗位各随机选取15名焦炉工为暴露组,另选一般情况相近的25名库工为对照组。高效液相色谱法检测研究对象尿中1-羟基芘水平;Neuropack M1肌电图仪进行体感诱发电位(SEP)、听觉诱发电位(AEP)和视觉诱发电位(VEP)的测定。结果 尿中1-羟基芘对照组、炉底组、炉侧组、炉顶组分别为(2.71±0.22),(3.29±0.38),(3.63±0.55),(4.13±0.62)μmol/mol Cr,呈现炉顶>炉侧>炉底>对照的趋势;各组体感诱发电位、听觉诱发电位和视觉诱发电位各指标经方差分析,差异无统计学意义(P<0.05)。结论 在目前的接触水平下,多环芳烃暴露人群躯体感觉传导通路、听觉传导通路和视觉传导通路未发生明显异常。     

焦炉工人痰细胞p53基因外显子突变检测

目的探讨焦炉工人痰细胞p53基因突变与焦炉暴露关系。方法选取某焦化厂125名焦炉作业工人(炉底38人,炉侧45人,炉顶42人)作为暴露组,同时选取同厂37名材料管理工人作为对照组;个体采样法对作业环境进行监测;高渗盐水超声雾化法诱导取痰,分离痰细胞;高效液相色谱法检测环境空气样本B〔a〕P和尿中1-羟基芘的水平;聚合酶链式反应-单链构象多态性方法(PCR-SSCP)检测痰细胞p53基因突变的情况。结果暴露组中炉顶工人组痰细胞p53基因6、7外显子和p53基因5、6、7外显子总突变率分别为14.3%,21.4%,33.3%,明显高于对照组(0%,5.4%,5.4%),差异有统计学意义(P<0.05),且总突变率有随外暴露水平升高而升高的趋势(χ²=7.457,P<0.01);经多元Logistic回归分析,焦炉暴露、炉顶暴露、炉底暴露和年龄的调整OR值(95%CI)分别为25.278(3.461~184.625)、7.359(1.017~53.267)、22.228(3.146~157.082)、1.106(1.011~1.211),是焦炉工人痰细胞p53基因突变率升高的主要危险因素。结论焦炉逸散物可诱发焦炉工人的痰细胞p53基因突变率升高,且与暴露水平有关。     

蛋白激酶C在苯并(a)芘致内皮细胞HSP70基因表达改变中的作用

[目的]研究蛋白激酶C(PKC)信号途径在苯并(a)芘(BaP)影响热休克蛋白70(HSP70)基因表达中的作用。[方法]离体培养猪主动脉内皮细胞，不同浓度BaP(0、0．1、0．5、1、5、10μmol／L)染毒24h，并以12-十四酸佛波酯-13乙酸盐(PMA)和抑制剂Staurosporine于不同时问点进行干预，以Western-blot法检测各组细胞HSP70表达的变化。[结果]BaP抑制HSP70表达；PKC的激动剂(PMA)可完全或部分消除BaP对HSP70的抑制作用，而这种作用可迅速被PKC的抑制剂(Staurosporine，STP)所阻断。[结论]BaP可能通过抑制内皮细胞PKC活性而抑制HSP70的表达。     

焦炉工HSP70基因多态性和外周血淋巴细胞DNA损伤的关系

[目的]探讨焦炉工HSP70基因多态性和外周血淋巴细胞DNA损伤的关联。[方法]选择某焦化厂234名焦炉作业工人和130名无多环芳烃(PAHs)及其他毒物暴露者,采集外周静脉血,分离淋巴细胞,使用单细胞凝胶电泳实验评价DNA损伤;应用多聚酶链反应-限制片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测热休克蛋白70(HSP70)基因多态性;运用PHASE2.0.2遗传分析软件计算单倍型。[结果]焦炉工外周血淋巴细胞的Olive尾矩(OliveTailMoment,OTM)高于对照组(对数转换后分别为1.29±1.07、0.56±0.99),差异有极显著性(P<0.01)。焦炉工中,HSP70-1基因190位点C/C基因型携带者外周血淋巴细胞的OTM为2.19±0.65,高于G/C及G/G基因型携带者(分别为1.30±1.03、1.23±1.10),差异有极显著性(P<0.01);HSP70-2基因1267位点A/A、A/G及G/G基因型携带者OTM分别为1.23±1.02、1.27±1.06和1.42±1.18,三者间差异无显著性(P>0.05);HSP70-hom基因2437位点T/T、T/C及C/C基因型携带者OTM分别为1.32±1.09、1.25±1.01和0.83±0.96,三者间差异也无显著性(P>0.05)。焦炉工HSP70-hom基因2437位点、HSP70-1基因190位点和HSP70-2基因1267位点组成的单倍型对中,TCG/TCG单倍型对携带者DNA损伤程度较重(OTM为2.04±0.59),显著高于单倍型对中含一个TCG单倍型者(OTM为1.24±1.14)及不含TCG单倍型者(OTM为1.30±1.01),P<0.05。[结论]焦炉工外周血淋巴细胞HSP70-1基因190位点C/C基因型与TCG单倍型和DNA严重损伤有关联。     

HSP70在鼻咽癌中的表达及其临床意义

目的探讨热休克蛋白70（HSP70）在正常鼻咽组织、鼻咽异型增生和鼻咽癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化法检测16例正常鼻咽组织、11例鼻咽异型增生组织和47例鼻咽癌组织HSP70蛋白表达，分析鼻咽癌组织HSP70表达与鼻咽癌组织类型、恶性程度（鼻咽癌的病理分级）相关性。结果HSP70在正常鼻咽组织阳性率为18．8％（3／16）、表达弱（＋）；鼻咽异型增生组织阳性率为54．6％（6／11）、强度为中等（＋～＋＋）；鼻咽癌组织阳性表达率分别为70．2％（33／47）、表达强（＋＋＋），各组之间比较差异有显著性（P〈0．01）。在47例鼻咽癌组织标本中，19例为高分化，阳性率为31．5％（6／19）、强度为中等（＋～＋＋）。28例为低分化，阳性率为96．4％（27／28），表达为强阳性（＋＋＋）。结论HSP70表达强度以及阳性率与在鼻咽癌癌变进程呈相关，HSP70表达水平与鼻咽癌的类型、恶性程度（鼻咽癌的病理分级）密切相关。