荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒-DNA的临床意义

目的　评价荧光定量聚合酶链反应 (PCR)检测乙型肝炎病毒 (HBV) DNA对辨别病毒复制的临床意义。　方法　采用荧光定量PCR和酶联免疫吸附试验 (ELISA)方法 ,检测 79份血清HBV DNA拷贝数和免疫学血清指标。　结果　在乙型肝炎病毒表面抗原 (HBsAg)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、乙型肝炎病毒核心抗体 (抗 HBc)阳性的 2 6份标本中 ,HBV DNA全部阳性 ,平均拷贝数为2 7× 10 5/ml。 8例HBsAg、HBeAg阳性的标本中 ,HBV DNA全部阳性 ,平均拷贝数为 5 2× 10 4/ml。 2 1例HBsAg、乙型肝炎病毒e抗体 (抗 HBe)、抗 HBc阳性的标本中 ,HBV DNA阳性率为 6 6 7% ,平均拷贝数为 3 1× 10 4/ml。 9例HBsAg阳性的标本中HBV DNA阳性率为 11% ,平均拷贝数为 1 4× 10 3 /ml。　结论　荧光定量聚合酶链反应检测HBV DNA可以更加准确地判断HBV的感染和复制情况。     

血浆甘油三酯对酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒表面抗原的影响探讨

目的 探讨甘油三酯(TG)对酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的影响.方法 收集HBsAg阳性血浆样本,用蒸馏水做对倍稀释至1:8,分成4个组,对照组用蒸馏水稀释10倍,实验组用TG浓度不同的脂血浆稀释10倍.用ELISA法检测HBsAg的吸光度(A)值并做定性判读.结果 试验组HBsAg的A值与对照组之间差异有统计学意义,试验组间HBsAgA值差异有统计学意义;HBsAg的定性判读试验组1与对照组间差异无统计学意义,试验组2、3与对照组间差异有统计学意义,试验组间差异有统计学意义.结论 TG浓度明显影响ELISA法检测HBsAg,TG浓度和A值有明显的相关性.在HBsAg滴度相同TG浓度不同的样本中,TG浓度增高,A值减低.在低滴度的HBsAg样本中,高TG浓度可导致A值低于临界值,出现假阴性.样本HBsAg滴度越低,高浓度TG的影响越明显.     

酶联免疫吸附试验测定乙型肝炎病毒血清标志物的具体要求和注意事项

目的:探讨酶联免疫吸附试验测定乙型肝炎病毒血清标志物的具体要求和注意事项。方法:根据有关资料及笔者的切身实践经验、体会,进行归纳和总结。结果:归纳出乙型肝炎病毒血清标志物酶联免疫吸附试验测定时的具体要求和注意事项。结论:规范乙型肝炎病毒血清标志物酶联免疫吸附试验检测的具体要求和注意事项,有助于上述标志物测定的标准化,提高检测结果的准确性和特异性,有益于结果的报告和解释。     

聚合酶链反应与酶联免疫吸附试验诊断结核性脑膜炎

采用脑脊液聚合酶链反应（PCR）与抗结核抗体酶联免疫吸附试验（ELISA）观察结核性脑膜为32例，对照组30例，以评价两种技术的诊断价值。结果显示：PCR与ELISA单独应用时其敏感性及特异性无明显差异（P＞0．05），二者作平行试验时其敏感性高达96．88％，明显高于两者单独应用，特异性和准确性较单独应用时差异无显著性。提示：PCR是诊断结核性脑膜炎较有前途的技术，PCR与ELISA的平行试验具有互补作用。     

聚合酶链反应与酶联免疫吸附试验诊断结核性脑膜炎

采用脑脊液聚合酶链反应（ＰＣＲ）与抗结核抗体酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）观察结核性脑膜炎３２例，对照组３０例，以评价两种技术的诊断价值。结果显示：ＰＣＲ与ＥＬＩＳＡ单独应用时其敏感性及特异性无明显差异（Ｐ＞０．０５），二者作平行试验时其敏感性高达９６．８８％，明显高于两者单独应用，特异性和准确性较单独应用时差异无显著性。提示：ＰＣＲ是诊断结核性脑膜炎较有前途的技术，ＰＣＲ与ＥＬＩＳＡ的平行试验具有互补作用。     

电化学发光法与酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒标志物的临床研究

目的 探究电化学发光法与酶联免疫吸附试验（ELISA）检测乙型肝炎病毒（HBV）标志物的临床研究。方法 选取2020年2月至2021年2月我院接诊的70例疑似乙型肝炎患者为研究对象,所有患者分别采用电化学发光法（ECLIA）和ELISA法检测乙型肝炎病毒血清标志物（HBV-M）。结果 2种检测方法的乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阳性检出率、阴性检出率差异均无统计学意义（P>0.05）;ECLIA检测敏感度为95%(54/56),特异度为93%(13/14);ELISA检测敏感度为89%(50/56),特异度为86%;2种检测方法在敏感度及特异度上差异无统计学意义（P>0.05）。结论 ECLIA与ELISA用于HBV检测在阳性检出率、敏感度、特异度上差异均无统计学意义,但2种检测方法各有优缺点,在临床使用时,应根据具体检测项目选择合适方法。     

酶联免疫吸附试验与化学发光免疫分析检测乙型肝炎病毒感染血清学标志物应用研究

目的 探究酶联免疫吸附试验（ELISA）与化学发光免疫分析（CLIA）检测乙型肝炎病毒（HBV感染血清学标志物应用价值。方法 纳入100例2019年4月至2021年6月南阳市第二人民医院收治的HBV病毒感染的患者,采集所有患者空腹静脉血离心后进行血清学标志物测定,包括乙型肝炎表面抗体（HBsAb）、乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎e抗体（HBeAb）、乙型肝炎e抗原（HBeAg）、乙型肝炎核心抗体（HBcAb）。比较ELISA及CLIA在HBV感染血清标志物中阳性检出率及诊断准确度。结果 CLIA法在HBsAb阳性检出率为65.0%、HBsAg阳性检出率为50.0%、HBeAb阳性检出率为44.0%、HBeAg阳性检出率为22.0%、HBcAb阳性检出率为49.0%,均高于ELISA法阳性检出率的50.0%、31.0%、26.0%、8.0%、33.0%,差异有统计学意义（P<0.05）;CLIA法诊断准确度为92.0%高于ELISA法的74.0%,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 ELISA法与CLIA法均可检出HBV感染血清学相关标志物,但CLIA法应用价值...     

荧光定量聚合酶链反应检测乙肝病毒DNA的临床意义

目的　研究荧光定量聚合酶链反应 (FQ -PCR)检测血清中乙型肝炎病毒 (HBV)DNA的临床意义。方法　用FQ -PCR诊断试剂盒 ,以完全闭管式的PCR和荧光探针技术相结合所产生的实时检测定量PCR方法 ,检测了 489份临床血清标本。结果　 132例HBsAg、HBeAg、抗 -HBc均阳性的标本 ,HBVDNA也全部阳性 ,平均HBVDNA拷贝数为 2 .83× 10 8·ml-1。 85例HBsAg、抗 -HBe和抗 -HBc均阳性的标本 ,检出HBVDNA 6 1例 (72 % ) ,平均拷贝数 7.9× 10 5·ml-1;HBV血清标志物均阴性的 74例标本 ,HBVDNA也全阴。结论　FQ -PCR可以检测HBV的感染和复制情况     

乙肝血清标志物与聚合酶链反应的检测比较

<正> 用ELISA法检测乙型肝炎血清标志物已有几十年的历史,方法简单易操作,为各实验室广为使用。近年来,随着仪器与诊断试剂的迅速发展,PCR也越来越受到普遍关注。为了解我院乙型肝炎病毒(HBV)感染者的血清学标志物的状况,本文联合应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和聚合酶链反应(PCR)检测乙肝患者和乙肝病毒携带者共计693例。现将结果报告如下。     

Detection of hepatitis B viral DNA in liver with polymerase chain reaction

The sensitivity of PCR was determined for detection of HBV DNA in paraffin-embed-ded liver tissue with different methods for sample preparation.Of 8 cases of HBeAg-positiveHBV infection,HBV DNA was detected in 6 by extracting DNA from both frozen and dewaxedsamples,but in none by direct reaction.Of 12 cases subjected to Southern blot hybridization,HBV DNA was detected in 7 by this technique,in 10 by PCR with both methods of DNA extrac-tion and in 3 by direct PCR.The results showed that PCR was sensitive and was comparablewith blot hybridization in detecting intrahepatic HBV DNA.In comparison between differentmethods of sample preparation,the viral detection rate from the dewaxed samples was near thatfrom the frozen ones,while by the direct reaction HBV DNA could be detected only in a fewsamples with high level of infection.     

Nested real-time quantitative polymerase chain reaction assay

Background  Successful treatment of hepatitis B can be achieved only if the template for hepatitis B virus (HBV) DNA replication, the covalently closed circular HBV DNA (cccDNA) can be completely cleared. To date, detecting cccDNA remains clinically challenging. The purpose of this study was to develop a nested real-time quantitative polymerase chain reaction (PCR) assay for detecting HBV cccDNA in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) and bone marrow mononuclear cells (MMNCs).

Methods  Based on the structural differences between HBV cccDNA and HBV relaxed circular DNA (rcDNA), two pairs of primers were synthesized as well as a downstream TaqMan probe. Blood and bone marrow samples were collected from hepatitis B patients and healthy controls. To remove rcDNA, samples were incubated with mung bean nuclease and the resultant purified HBV cccDNA was then amplified by nested real-time fluorescence quantitative PCR. The cccDNA levels were calculated using a positive standard.

Results  The nested real-time fluorescence quantitative PCR method for HBV cccDNA was successful, with a linear range of 3.0×10² copies/ml to 3.9×l0⁸ copies/ml. Of the 25 PBMC samples and 7 MMNC samples obtained from chronic hepatitis B or liver cirrhosis patients, 3 MMNC samples and 9 PBMC samples were positive for HBV cccDNA, while all of the 21 PBMC samples from healthy controls were negative.

Conclusion  The nested real-time fluorescence quantitative PCR may be used as an important tool for detecting cccDNA in hepatitis B patients.

     

PCR法检测HBVDNA及其与乙肝病毒标志物关系探讨

采用聚合酶链反应 (PCR)法检测 2 56例乙型肝炎患者血清中乙肝病毒 DNA(HBVDNA) ,同时用 EL ISA法检测乙肝病毒标志物 ,即 HBs Ag,抗 - HBs、抗 - HBc、HBe Ag、抗 -HBe。结果表明 HBVDNA的检出率与肝病临床类型无明显关系 ,而与乙肝病毒标志物的存在状态有关。乙肝五项病毒标志物不同组合状态 ,血清 HBVDNA检出率不同 ,以 HBs Ag(+)、抗 - HBc(+)、HBe Ag(+)的组合形式检出率最高 (94 .34% ) ,乙肝病毒标志物中出现抗体及乙肝病毒标志物全阴者仍有 HBVDNA检出     

乙型肝炎患者HBV-DNA定量检测与HBV血清学标志组合的关系

目的：了解HBV感染的不同血清学组合的HBV-DNA阳性情况。方法：对324例血清同时进行ELISA方法测定HBV-M及荧光定量PCR法检测HBV-DNA。结果：HBsAg（＋）组HBV-DNA阳性率为78.4%（254/324）,HBsAg（-）组HBV-DNA阳性率为4.8%（5/103）,两组间差异有统计学意义（P〈0.05）。HBsAg（＋）HBeAg（＋）HBcAb（＋）血清HBV-DNA阳性率为100.0%（120/120）,平均含量为1.61×107拷贝/ml;HBsAg（＋）HBeAb（＋）HBcAb（＋）血清HBV-DNA阳性率为47.0%（76/162）,平均含量为3.42×104拷贝/ml;HBsAg（＋）HBcAb（＋）血清HBV-DNA阳性率为69.0%（29/42）,平均含量为6.32×103拷贝/ml;HBsAb（＋）HBeAb（＋）HBcAb（＋）血清HBV-DNA阳性率为5.2%（5/96）,平均含量为4.12×101拷贝/ml。结论：定量PCR可真实反映HBV感染、复制及病程变化,对乙型肝炎临床诊断及治疗均有较大的指导意义。     

两种HBV—DNA荧光定量PCR检测试剂比较

目的比较及评价两种HBV—DNA荧光定量PCR试剂特异性、灵敏度、重复性及检测结果的相关性。方法用深圳匹基生物工程有限公司生产的两种HBV—DNA荧光定量PCR试剂（试剂A,试剂B）对已知结果的质控血清、标准品及本院154份HBsAg阳性的临床标本进行平行检测,比较两种试剂检测结果的特异性、灵敏度、重复性及结果的相关性。结果试剂A与试剂B的特异性均为100％,灵敏度分别为90．91％和95．45％,符合率分别为93．33％和96．67％;对强阳性、临界阳性标本,试剂A重复性试验批内CV值为3．16％、5．61％,批间为3．18％、6．32％。试剂B批内CV值为2．11％、5．36％,批间CV为3．58％、4．59％;两种试剂对临床标本的检测结果相关性良好（r=0．93、P〈0．01）,但试剂A检测的灵敏度和符合率均低于试剂B（P〈0．01）。结论试剂B总体性能优于试剂A,适于临床使用;试剂A有待校准及（或）改进。实验室必须选择质量好且符合自己实验室要求、与本实验室仪器相匹配的试剂以保证检验质量。     

荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA的临床价值

目的：探讨荧光定量PCR（ FQ-PCR）检测乙型肝炎病毒（ HBV）-DNA的临床意义。方法：采用FQ-PCR检测265例乙型肝炎（乙肝）患者和150名健康体检者的血清HBV-DNA,并将结果与酶联免疫吸附试验测定的乙肝血清标志物进行比较。结果：不同血清标志物模式的各组均可检出 HBV-DNA 阳性,其中 HBsAg、HBeAg、HBcAb 阳性组和 HBsAg、HBeAg 阳性组的HBV-DNA阳性率和病毒拷贝数均显著高于其他血清标志物模式组和对照组（P〈0.01）。 HBV所致不同疾病类型的HBV-DNA阳性率差异均无统计学意义（P〉0.05）,但急性乙肝病毒拷贝数均明显高于其他疾病（P〈0.01）。结论：FQ-PCR检测HBV-DNA可以直接反映是否存在HBV感染,判断病毒的复制能力和传染性,指导临床用药和观察疗效,具有重要的临床意义。     

乙型肝炎病毒外膜大蛋白与HBV DNA的关系研究

目的:探讨乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒外膜大蛋白(HBV-LP)与HBV DNA的关系.方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和实时荧光定量PCR法,检测320例乙型肝炎患者血清中的HBV-LP水平及HBV DNA载量.结果:HBV-LP水平与HBV DNA拷贝数变化相一致,两者呈正相关(r=0.949);不同模式的HBeAg血清中HBV-LP与HBV DNA阳性率,差异均无统计学意义(P>0.05).结论:血清HBV-LP水平能反映乙型肝炎患者体内HBV复制程度,是判断HBV复制的血清学指标.     

乙型肝炎血清标志物定量检测与HBV-DNA定量检测的相关性及临床意义

目的定量检测乙型肝炎血清标志物与HBV-DNA（Hepatitis B virus Deoxyribonucleic acid）的相关性及临床意义;研究乙肝病毒为早期诊断、用药指征及疗效观察提供实验依据。方法用时间分辨荧光免疫分析技术（TR-FIA：Time-resolved fluorescence immunoassay）对乙肝五项定量分析;用实时荧光定量PCR技术（FQ）一PCR（Fluores-cence quantitative PCR）技术对HBV-DNA定量分析。结果 HBV-DNA的拷贝数与HBsAg（Hepatitis B surface anti-gen）、HBeAg（Hepatitis B e antigen）含量呈正相关（相关系数分别是r=0.371,P〈0.01;r=0.641,P〈0.01）,两者均随DNA拷贝数升高而升高,与HBsAb（Hepatitis B surface antibody）、HBeAb（Hepatitis B e antibody）、HBcAb（HepatitisB core antibody）呈负相关。HBV（Hepatitis B virus）感染后HBV-DNA载量与性别、年龄无关;免疫耐受期患者HBV-DNA处于中高载量水平（≥107）,免疫清除期患者HBV-DNA处于中等载量水平（104～106）,病毒残留期患者HBV-DNA处于低载量水平（〈104）。结论 HBeAg与HBV-DNA有较高正相关性,是病毒复制的指标,两者具有明显伴随关系;HBsAg是HBV外膜的组成部分,它的高表达与HBV-DNA复制呈正相关;用TRFIA技术和FQ-PCR技术联合检测,对乙型肝炎的早期诊断、传染性判断、疗效观察在临床上具有非常重要的指导意义。