自制RV－McAb－ELISA试剂盒与进口及国产RV－ELISA试剂盒的比较

将自制的肠道病毒单克隆抗体ＥＬＩＳＡ（ＲＶ－ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ）试剂盒与丹麦Ｄａｋｏ公司生产的及上海市卫生防疫站生产的ＲＶ－ＥＬＩＳＡ试剂盒对８８份粪样中ＲＶ的检测结果进行了比较。以ＰＡＧＥ结果为比较标准，自制试剂盒的灵敏度、特异度及Ｙｏｕｄｅｎ指数分别为９８．３％、９０％、及０．８８，明显高于丹麦Ｄａｋｏ及上海生产试剂盒；对ＲＶ核酸含量较低粪样的阳性检出率（９５．７％）也明显高于后二者；此外，自制试剂盒的阳性标本与阴性标本吸光度（Ａ，曾称光密度ＯＤ）均值之比值约是另二种试剂盒的２．２倍。结果提示，自制ＲＶ－ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ试剂盒检测ＲＶ的灵敏性和特异性优于国内外同类产品，并具有操作省时，易于目测判断结果等特点，有利于基层单位推广使用。     

HBsAg ELISA试剂盒筛检结果的评估

目的 评估部分国产与进口HBsAg ELISA试剂盒筛查血源的价值.方法 选用部分国产和进口HBsAg ELISA试剂,对中国生物制品检定所120份HBsAg临床科研组合血清样本及随机抽取400份东莞市无偿献血者血清标本为验证样本进行同步平行检测,以中国生物制品检定所组合血清及献血者HBsAg阳性并经中和试验证实者为金标准.结果采用四格表法计算两者对等指标并进行评价.结果 国产HBsAg ELISA试剂和进口HBsAg ELISA试剂的灵敏度分别为85.71%（72/84）和100%（84/84）;特异性分别为100%（436/436）和96.55%（421/436）;尤登指数分别为0.86、0.97;两种试剂重复合格率均为100%.结论 试剂的灵敏度以进口HBsAg ELISA试剂较好,但特异性比国产试剂差,两种试剂的重复性均好,两种试剂联合筛检献血者血样标本可提高临床输血的安全性.     

动物组织中盐酸克伦特罗残留ELISA检测试剂盒的研制

目的本研究采用直接竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)对动物组织中盐酸克伦特罗(CBL)残留量进行快速筛选检测。方法将CBL与蛋白质载体偶联制备了CBL-BSA和HRP-CBL结合物,以CBL-BSA免疫实验兔获得特异性抗体,并成功建立了CBL残留直接竞争ELISA检测方法及检测试剂盒。结果检测线性范围0.1-62.5 ng/mL,检测低限为0.10 ng/mL;尿、肝、肉和饲料的加标回收率为60.3%-115.0%;与英国Randox试剂盒对比测试结果无显著差异;重现试验变异系数为3.4%-7.2%;试剂盒贮藏在2-8℃5个月和30℃7 d质量稳定。结论本试剂盒具有操作简便、快速、灵敏等特点。     

检测可溶型DR5分子ELISA方法的建立及初步应用

<正> 在某些情况下凋亡参与许多病理损伤。肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)中的死亡受体(DR)参与了细胞凋亡的过程,其中包括Fas(APO-1或CD95),TNFR I,DR3,DR4,DR5等。以往研究表明,Fas对于外周淋巴细胞的凋亡有重要的意义,而TNFRI除了可诱导凋亡外,还通过调节NF-κB和AP-1转录因子的基因表达,参与免疫细胞活化和炎症应答。DR4和DR5是两种以TRAIL为配体的死亡受体,与TRAIL结合后可引起细胞凋亡。     

乙肝标志物ELISA检测不同方法的比较研究

目的 探讨全自动ELISA系统检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HbcAb(HBV-M)是否在重复性、准确度等方面优于手工法和半自动法,为其更好地在临床实验室开展工作提供进一步的数据和基础.方法 用以上各项指标的弱阳性质控品,分别做手工法、半自动法和全自动法的批内和批间重复性试验.另用三种方法分别检测临床血清标本,每项810人份.定性结果不完全一致的标本,HBsAg用中和法做确证试验,其余四项用化学发光法作为参考方法进行验证.结果 批内与批间重复性比较,全自动法的CV小于手工法和半自动法.三种方法检测临床标本,定性结果两两比较,均显示一致性非常好(k＞0.8,P＜0.05);进行卡方检验,除HBcAb的半自动法阳性率显著高于全自动法(P＜0.0125)外,其余项目三种方法两两比较,均无显著性差异(P ＞0.0125).经过确证/参考试验验证,全自动法、半自动法、及手工法不完全一致的标本,HBsAg17份,符合个数分别为15、9和4;HBsAb 24份,符合个数分别为17、13、7;HBeAg 9份,符合个数分别为7、2、5;HBeAb 34份,符合个数分别为19、16、19;HBcAb 36份,符合个数分别为28、15、19.结论 ①全自动法比半自动法和手工法具有更好的重复性.②三种方法有非常好的一致性,均能较好的诊断乙型肝炎.③全自动法ELISA检测HBV-M比半自动法和手工法准确度更高,可进一步提高这些项目的检验质量.     

进出口植物产品中甲霜灵残留量酶联免疫检测试剂盒的研究

目的本研究采用直接竞争ELISA法对进出口植物产品中甲霜灵残留量进行快速筛选。方法将甲霜灵转化成甲霜灵酸，利用适当的方法将其与辣根过氧化物酶(HRP)进行偶联，制备酶标半抗原。采用传统的盐析法提取IgG并建立了甲霜灵直接竞争ELISA快速检测方法。结果抑制试验表明其检测范围在(0．78—50．0)ng/mL之间，可用于进出口植物产品中甲霜灵的定量检测。该方法与气相色谱检测符合率为94％。样品的平均回收率为94％。交叉反应显示该抗体仅与甲霜灵、甲霜灵酸起反应，不与结构相似的毒草胺、甲草胺、异丙甲草胺、新燕灵和己酰甲草胺起交叉反应。结论本试剂盒具有操作简便、快速、灵敏等特点。     

乙型肝炎病毒血清学标志物五项指标(HBV-M)的检测及临床应用

目的旨在研究TRFIA、MEIA、EIA技术在乙型肝炎病毒标志物检测中的应用情况.就其结果符合程度、灵敏度及特异性的比较,探讨三种检测方法在日常工作中的可行性及相关性.方法采用Anytest-2000时间分辨荧光免疫分析仪及配套试剂对200例正常人随机抽取50例作为对照及50例乙型肝炎患者的血清同时用TRFIA法、AXSYM免疫分析仪微粒子酶免疫分析法(MEIA)及EIA法进行HBsAg,HBsAb,HBeAg,HBeAb,HBcAb五项指标(HBV-M)检测.结果 TRFIA、MEIA和EIA检测结果(定性)的阳性率、灵敏度、特异性均无显著性差异(P＞0.05).一种单一的实验方法不能完全满意地鉴定出HBV的感染,所有的实验方法都具有其特殊的应用范围和检测限度.结论TRFIA具有高灵敏度、高稳定性、高特异性和动态范围宽等诸多优点,可作为乙型肝炎病毒指标量化的一种常规方法,能为临床检测诊断与疗效监测、预后判断和科学试验及乙型肝炎疫苗免疫力、乙型肝炎高效价免疫球蛋白的作用评价和高危人群预防提供及时准确的实时信息,应用空间越来越广.     

乙型肝炎病毒血清学标志物五项指标（HBV—-M）的检测及临床应用

目的旨在研究TRFIA、MEIA、EIA技术在乙型肝炎病毒标志物检测中的应用情况。就其结果符合程度、灵敏度及特异性的比较,探讨三种检测方法在日常工作中的可行性及相关性。方法采用Anytest-2000时间分辨荧光免疫分析仪及配套试剂对200例正常人随机抽取50例作为对照及50例乙型肝炎患者的血清同时用TRFIA法、AXSYM免疫分析仪微粒子酶免疫分析法（MEIA）及EIA法进行HBsAg,HBSAb,HBeAg,HBeAb,HBcAb五项指标（HBV—M）检测。结果TRFIA、MEIA和EIA检测结果（定性）的阳性率、灵敏度、特异性均无显著性差异（P〉0．05）。一种单一的实验方法不能完全满意地鉴定出HBV的感染,所有的实验方法都具有其特殊的应用范围和检测限度。结论TRFIA具有高灵敏度、高稳定性、高特异性和动态范围宽等诸多优点,可作为乙型肝炎病毒指标量化的一种常规方法,能为临床检测诊断与疗效监测、预后判断和科学试验及乙型肝炎疫苗免疫力、乙型肝炎高效价免疫球蛋白的作用评价和高危人群预防提供及时准确的实时信息,应用空间越来越广。     

检测IL-8的ELISA间接夹心法的建立

利用抗IL-8的单克隆抗体4C3(包被抗体)和免抗IL-8多克隆抗体(第二抗体)建立了检测IL-8的间接夹心法ELISA,当包被抗体浓度为0.5μg/ml、第二抗体浓度为2μg/ml时,其检测下限可达1ng/ml。初步应用此法在部分感染病人血清中检测到明显高于正常人水平的IL-8。     

可溶性CD40酶联检测试剂盒的研制及其检测的临床意义

目的 :建立灵敏、特异和稳定的人可溶性CD4 0 (sCD4 0 )酶标检测试剂盒及探讨其检测的临床意义。方法 :采用该室制备的鼠抗人CD4 0单抗 5C11作为包被抗体 ,另一株识别不同抗原位点的单抗 3G3经生物素 (biotin)标记后作为检测抗体 ,建立双单抗夹心的人sCD4 0酶标检测方法和对各种质控参数进行优化。在此基础上测定了健康供血员、甲亢、慢性肾炎、白血病、类风湿性关节炎患者的血清、肺癌患者血清和胸水及多种多发性骨髓瘤 (MM)、淋巴瘤细胞株培养上清中sCD4 0的含量。结果 :成功地研制了人sCD4 0酶联检测试剂盒 ,其灵敏度为 15 6pg ml。该试剂盒 4℃放置 3个月 ,离散度 (CV) <± 7 9% ,回收率为 95 %～ 114 % ,提示检测方法具有良好的灵敏度、稳定性和准确性。用该试剂盒测得血清中sCD4 0含量的 95 %正常值范围 (x±s)为 10 5 0 0± 18 88pg ml,甲亢、慢性肾炎、白血病、类风湿患者的血清、肺癌患者血清和胸水中sCD4 0的含量明显高于正常对照组 (P <0 0 1)。结论 :成功地研制了检测人sCD4 0酶标检测试剂盒 ,对一些与CD4 0分子表达或信号异常的疾病患者外周血检测结果显示 ,该试剂盒在临床检测中具有潜在的应用价值     

FQ—PCR测定HBV DNA与ELISA检测HBV—M相关性分析

目的探讨HBV DNA含量与HBsAgS／CO值之间的相关性。方法分别用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）法和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测100例乙肝患者的HBV DNA含量和乙肝两对半．并记录HBsAg S／CO值。结果100例乙肝患者HBV DNA含量对数值为（4．28±1．89），HBsAg S／CO值为（15．09±6．64），两指标间作相关性分析，r=-0．0156，P〉0．05，无相关性。结论HBV DNA是判断乙肝病毒复制的较准确、较直接的抗乙肝病毒疗效观察指标，而HBsAg S／CO值的高低与疾病的严重程度及疗效无关。     

TORCH-IgM捕获法ELISA试剂盒的研制和应用

目的 为了发展TORCH近期感染的IgM酶免疫诊断技术。方法 以抗人IgM McAb包板，加待检血清、TORCH抗原，接着加酶标记的抗TORCH—McAb，最后加3，3’，5，5’-四甲基联苯胺(TNB)显色。用这种自制的捕获法ELISA(C—ELISA)试剂盒和HOPE公司的间接法ELISA(I—ELISA)试剂盒平行检测1196份孕妇血清TORCH-IgM。结果C—ELISA试剂盒检出阳性血清67份，并经其他试验证实为阳性。其中4份用I—ELISA试剂盒检测为阴性。由乳胶凝集试验诊断为类风湿因子(RF)阳性的2份血清，经I—ELISA试剂盒检测为阳性，但经C—ELISA试剂盒检测为阴性。结论 在检测孕妇TORCH—IgM方面，C—ELISA比I-ELISA有更强的敏感性和更高的特异性。C—ELISA试剂盒是诊断TORCH近期感染的良好工具。     

人组织激肽释放酶单克隆抗体的制备及其ELISA检测试剂盒的建立

目的 制备人组织激肽释放酶(human tissue kallikrein,HK)单克隆抗体(McAb),并研制检测人尿中HK含量的ELISA试剂盒.方法 以一段HK特异多肽和血蓝蛋白(KLH)的耦联物作为抗原免疫BALB/c小鼠,并采用杂交瘤技术制备抗HK的单克隆抗体.然后建立快速检测HK含量的间接竞争ELISA试剂盒.结果 获得了8株可分泌抗HK的杂交瘤细胞株,其产生的抗体效价为1:25 600;经1:1600倍稀释后的竞争抑制率为0.88;经纯化后的纯度为100%,其标准曲线对线良好(r=0.990).结论 成功制备了高效价、高特异性和高纯度的抗HK的单克隆抗体.同时建立了一种可以快速检测人尿中HK含量的ELISA试剂盒.

Abstract：

Objective To prepare monoclonal antibody(McAb) against human tissue kallikrein (HK) and develop an ELISA kit allows for the in vitro quantitative determination of human tissue kallikrein in urine. Methods To generate a monoclonal antibody specific for TK, the synthetic TK peptide consisting of 12 amine acids(12P), was fused to keyhole limpet hemocyanin(KLH) and used for immunization. Using hybridoma screening, monoclonal secreting cell lines were identified and used to generate ascites in BALB/c mouse. Antibody was purified by affinity column chromatography. 12% SDS-PAGE and Western blot were used to visualize the purified antibody. This kit employs indirect competitive ELISA technique and BiotinAvidin System. 12P was fused to bovine serum albumin(BSA) and has been pre-coated onto a microplate at first. Standards and samples were added to the appropriate microplate wells with a biotin-conjugated McAb croplate well. A TMB substrate solution is added to each well. The enzyme-substrate reaction is terminating by the addition of a sulphuric acid solution and the color change is measured spectrotometrically at a wavelength of 450 nm. The concentration of tissue kallikrein in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve. Results 8 hybridoma cell lines secreting mAbs special to HK,SDS-PAGE and Western blot demonstrated successful preparing and purification of McAb( 100% ). The linearity of this ELISA kit is demonstrated(r =0. 990). The range of detection of the assay is 0.008 μg/ml to 0. 5 μg/ml. The assay remained stable, with no change in the values measured, over five cycles of freezing and thawing. Conclusion 8 McAbs against HK have been prepared successfully and possess high titer and specificity. The development of an ELISA kit for detecting HK can meet the needs of detection of HK in urine samples.     

可溶性gp130酶联检测试剂盒的研制及其运用

目的 :建立灵敏、特异、稳定和简便的人可溶性gp130 (sgp130 )酶标检测试剂盒。方法 :采用本室制备的鼠抗人gp130单抗T2作为包被单抗 ,另一株识别不同抗原位点的单抗T12经生物素 (biotin)标记后作为检测抗体 ,建立双单抗夹心的人sgp130酶标检测方法 ,并分别测定了 40例健康供血员、40例甲亢及 47例慢性肾炎患者血清中sgp130的含量。结果 :成功地研制了人sgp130酶联检测试剂盒 ,其灵敏度为 10ng/ml。该试剂盒 4℃放置 3个月 ,离散度 (CV) <± 7 6 %,回收率为95 %～ 111%,提示检测方法具有良好的灵敏度、稳定性和准确性。用该试剂盒测得的血清中sgp130含量的 95 %正常值范围为5 36 92～ 2 87 88(ng/ml) ,甲亢及慢性肾炎患者血清中sgp130的含量分别为 937 16± 2 17 5 9和 80 6 4 5± 138 4 7(ng/ml) ,明显高于正常对照者 (P <0 0 1)。结论 :建立的人sgp130酶标检测试剂盒 ,能够对血清中sgp130进行准确定量 ,可为临床gp130相关性疾病的辅助诊断、疗效估价和判断预后提供有价值的生物学参数 ,具有良好的运用前景。     

可溶性CD40配体酶联检测试剂盒的研制及其运用

目的 :建立灵敏、特异和稳定的人可溶性CD4 0配体 (sCD4 0L)酶联检测试剂盒。方法 :采用鼠抗人CD4 0L单克隆抗体 1B1为包被抗体 ,识别人CD4 0L不同位点的单克隆抗体 4F1经琥珀酰羟基生物素 (BNHS)标记后为检测抗体 ,建立双抗体夹心的人sCD4 0L酶联检测方法。在此基础上 ,测定 2 0 0例健康供血员血清和血浆中sCD4 0L的含量。结果 :成功研制人sCD4 0L酶联检测试剂盒 ,灵敏度为 0 5ng ml。该试剂盒 4℃放置 3个月 ,离散度 (CV) <± 6 9% ,回收率为 94 7%～ 10 4 8% ,提示该检测系统具有良好的灵敏度、稳定性和准确性 ,与国外商品化试剂盒的分析结果相似。应用该试剂盒测得的健康供血员血清和血浆sCD4 0L含量分别为 9 5 6± 4 71、2 98± 1 13ng ml。结论 :研制成灵敏、特异和稳定的人sCD4 0L酶标检测试剂盒 ,能够对血清和血浆中sCD4 0L进行准确定量分析 ,并首次证实血清和血浆中sCD4 0L水平的差异性     

抗磺胺嘧啶单克隆抗体的制备及其ELISA检测试剂盒的建立

目的 :制备抗磺胺嘧啶 (SD)的单克隆抗体 (mAb) ,并研制SD快速检测试剂盒。方法 :以SD BSA的偶联物作为抗原免疫BALB/c小鼠 ,采用杂交瘤技术制备抗SD的mAb。并用抗SDmAb和SD HRP酶标抗原 ,建立一种可检测样品中的游离SD分子的竞争法ELISA。结果 :获得 5株可分泌抗SDmAb的杂交瘤细胞 1A1、1B8、1E4、2C1和 3D9。其中 1A1、1B8和 1E4为IgG1,2C1和 3D9为IgG2。试剂盒的半数抑制率 (I5 0 )为 9.3μg/L ,理论最低检出量达到 0 .6μg/L ,对于不同样品中SD的回收率均高于 60 %。除与SD反应以外 ,该试剂盒对其他磺胺类药物检测的交叉反应均小于 3 %。结论 :成功地制备了抗SD的mAb ,并建立了一种可快速检测各种样品中SD的竞争ELISA试剂盒     

Detection of IgE in the sera of rodents: comparison of the applicability of ELISA and RIA

RIA and ELISA were compared for their ability to detect IgE in different rodent species. With a sheep anti-rat IgE antibody good correlation (P less than 0.001) between the 2 assay methods for IgE was found in rats. RIA failed to detect the IgE of Mastomys natalensis while ELISA proved to be a suitable test. However, both tests failed to measure IgE in sera of Nile rats.     

The study of IgG subclass profiles of anti-hbc in populations with different status of HBV infection

To study IgG subclasses for the hepatitis B virus （HBV） core antigen （anti-HBc） in different populations, a comparison was made between 104 chronic carriers （60 male and 44 female） and 434 recovered individuals （247 male and 192 female）. Biochemistry analyses of AST （aspartate aminotransferase） and ALT （alanine aminotransferase） were also performed. Among the 104 chronic carriers, 21 patients were found to be ALT and AST abnormal （〉 25 IU/ml）. After comparing these ALT and AST abnormal patients with other ALT and AST normal chronic carriers, no statistical difference was observed in the OD values of the anti-HBe （p 〉 0.05）. The ELISA results showed the anti-HBc IgG subclass pattern was IgG1 〉 IgG3 〉 IgG4 in chronic carriers and IgG3 〉 IgG1 〉 IgG4 in recovered individuals （p 〈 0.05）. This result suggests the IgG1/IgG3 ratio may be related with HBV status. However, in spite of the different anti-HBc IgG1/IgG3 patterns demonstrated in different populations, both anti-HBc IgG1 and IgG3 concentrations were significantly higher in chronic carriers （p 〈 0.05）. Therefore, both the anti-HBc IgG1/IgG3 ratio and their amounts differed. They may play a significant role in chronic carriers and recovered individuals. The anti-HBc IgG subclass profiles of chronic carriers were not changed regardless of liver inflammation, and were independent of sex and age.     

初乳HBV-DNA定量检测对乙肝产妇哺乳的指导价值

目的 探讨初乳HBV-DNA定量检测对乙肝产妇哺乳的指导意义.方法 选择住院分娩产妇325例,依据乙肝五项血清学指标分为五组感染模式.其中A组（65例）：乙肝HB、HBeAg和HBcAb均为阳性;B组（9例）：乙肝HBsAg、HBeAg、HBeAb和HBcAb均为阳性;C组（152例）：乙肝HBsAg、HBeAb和HBcAb均为阳性;D组（47例）：乙肝HBsAg、HBcAb为阳性;E组（52例）：乙肝五项指标全阴性为对照组.采用化学发光法检测产妇HBV标志物,同时采用实时荧光定量PCR检测产妇血清和初乳HBV-DNA载量,对相关数据进行组间卡方检验分析.结果 A组血清和乳汁HBV-DNA阳性率分别为100.00％（65/65）和83.08％ （54/65）,乳汁HBV-DNA载量平均为3.82 ×104copies·ml-1;B组血清和乳汁HBV-DNA阳性率分别为100.00％ （9/9）和77.78％（7/9）,乳汁HBV-DNA载量平均为1.26×104copies·ml-1;C组血清和乳汁HBV-DNA阳性率分别为17.10％（26/152）和1.97％ （3/152）,乳汁HBV-DNA载量平均为2.31×103copies·ml-1;D组血清和乳汁HBV-DNA阳性率分别为44.68％（21/47）和23.40％（11/47）,乳汁HBV-DNA载量平均为6.17×103copies·ml-1;E组血清和乳汁HBV-DNA阳性率均为0（0/52）,乳汁HBV-DNA载量为＜1.0×103copies·ml-1.A组与B组乳汁HBV-DNA阳性率（83.08％、77.78％）明显高于C组（1.97％）,差异有统计学意义（x2值分别为135.26和115.31,P ＜0.05）;产妇乳汁HBV-DNA与血清中HBV-DNA水平呈正相关.结论 血清乙肝免疫学检测呈HBsAg和HBeAg双阳性的产妇不宜哺乳,血清呈HBsAg、HBeAb和HBcAb阳性但同时乳汁HBV-DNA阴性者宜谨慎哺乳.     

HBV subtype as a marker of the clinical course of chronic HBV infection in Japanese patients

Hepatitis B virus (HBV) genotype C is predominant in Japan. However, many HBV subtypes are involved in each genotype, and the clinical manifestations in the patients associated with each subtype remain unknown. Therefore, we investigated the relationship between HBV subtype and clinical aspects of chronic HBV infection. The subtype of 237 patients with chronic HBV infection, including 74 asymptomatic carriers, was determined. The subtypes of 110 HBV carriers undergoing long-term follow-up management were determined twice to detect subtypic changes. The clinical features of the patients were also studied with regard to presence or absence of subtypic change. The subtypic distribution in the 237 HBV carriers was as follows: subtype adr, 161 (68%); subtype adw, 25 (11%); subtype adwr, 12 (5%); subtype ar, 24 (10%); subtype adyr, 4 (2%); and unclassified, 8 (3%). The proportion of asymptomatic carriers in patients with subtype adw was significantly higher than those in patients with subtype adr (56% vs. 28%, P < 0.05). In addition, the proportion of HCC in patients with subtype adwr was significantly higher than those in patients with subtype adr (25% vs. 6%, P < 0.05). The prevalence of subtype adr in 74 asymptomatic carriers tended to decrease with age (82% in carriers aged < or =35 years vs 43% in those aged > or =61 years, P < 0.05). The subtypic change and the course of chronic HBV infection had no significant correlation. These results suggest that HBV subtypes are associated with the clinical course of chronic HBV infection.