两种羊水原位培养方法在产前诊断应用评价

目的比较产前诊断中原位培养瓶和平皿盖玻片两种培养皿进行羊水原位培养的临床效果。方法 118例在我产前诊断中心行羊膜腔穿刺术的病人,孕周为孕16周～孕23周,每例病人分别用原位培养瓶和平皿盖玻片进行原位培养,观察两种方法培养羊水细胞成功率,传代率,生长速度,细胞克隆数。结果两种方法的培养成功率均为100%,原位培养瓶的传代数8例,平皿盖玻片培养的传代数11例标本,配对样本t检验分析差异无统计学意义。原位培养瓶培养的生长速度（6.31±0.97）天、细胞克隆数（8.41±1.40）个,平皿盖玻片培养的生长速度（8.31±2.14）天、细胞克隆数（7.92±1.16）个,两种方法比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论通过实验证实,原位培养瓶和平皿盖玻片在羊水原位培养中成功率相同,但是用原位培养瓶培养羊水细胞生长速度快,细胞克隆数多,且该方法操作简单,耗时少,优于平皿盖玻片法。     

胸苷和脱氧胞苷同步化技术在羊水细胞原位培养中的应用研究

目的 探讨改良同步化法羊水细胞原位培养技术在产前诊断中的应用价值。方法 对11294例羊水标本采用原位细胞培养基础上进行改良同步化法制备并G显带,对改良同步化法与常规法进行核型分析。结果 原位培养成功率为99.94%,改良同步化法的G显带分辨率达到500～600条带水平;常规法G显带的分辨率为300～400条带。对11288例培养成功羊水细胞进行染色体核型分析,检出异常核型1137例（10.07%）,其中结构异常289例（2.56%）（包括9例复杂结构异常和19例结构异常真性镶嵌体）;数目异常832例（7.37%）（包括124例数目异常真性镶嵌体）;数目合并结构异常16例（0.14%）。结论 改良同步化法提升了染色体G显带的带纹分辨率,有效提高结构异常染色体的检出率。原位法细胞生长快,耗时少,降低假性镶嵌体。原位法培养与同步化法技术结合,提高染色体异常诊断准确性,在产前诊断中具有重要的临床诊断价值。     

改良羊水细胞培养技术在产前诊断中的应用

目的探讨改良羊水细胞染色体培养技术在产前诊断中的应用。方法对孕18～24W孕妇,实施羊膜腔穿刺术抽取羊水,将羊水细胞液直接作用于培养瓶底部,进行培养,减少了细胞大量丢失,并获得有效地细胞克隆。结果对符合产前诊断指征成功培养100例,培养成功97例,成功率为97%。可行染色体核型分析的97例中共发现3例染色体异常核型,检出率为3%。其中三体综合征1例,平衡易位1例,其他结构异常1例,各占33.33%。结论羊水细胞培养染色体核型分析,是产前诊断胎儿染色体疾病安全、有效的方法,合适的羊水细胞培养技术,可提高培养成功率。     

一种改良的羊水细胞染色体制备方法

目的 为了探索一种快速,简便,稳定的羊水细胞染色体制备方法,提高产前诊断成功率。方法 对50例15.3-29.5孕周有产前诊断指征的孕妇,抽取羊水,经细胞原位培养,加入秋水仙素3-4h后,摇动培养瓶,收获羊水细胞。结果50例羊水细胞培养成功率为100％,细胞染色体形态质量好。结论 本方法具有简便、快速、染色体带型稳定等优点,有实用价值。     

原瓶传代培养应用于羊水产前诊断中的研究

目的 应用原瓶传代培养的方法于经典的产前诊断的羊水培养方法中，以探讨建立提高培养成功率的方法。方法与结果 于羊水培养10天左右作原瓶传代培养，实验组（原瓶传代）105例，培养成功率100％，对照组（经典培养方法）120例成功率92％。结论 结果提示，原瓶传代培养可提高成功率至100％，并可获得满意的核型以供分析，确保了羊水产前诊断的准确性及临床应用性。     

3728例遗传咨询者羊水细胞产前诊断结果分析

目的探讨羊水细胞在染色体疾病产前诊断的应用价值。方法抽取孕中期孕妇羊水,采用羊水细胞原位培养、染色体制备、核型分析。结果3728例标本,培养成功率为99.5%,检出异常核型108例。结论采用羊水细胞原位培养,在产前诊断的应用中获得了满意的结果;有针对性地进行产前诊断,可有效地控制和减少出生缺陷的发生。     

临沂地区788例孕中期羊水细胞染色体核型分析

目的分析临沂地区788例妊娠中期孕妇羊水细胞染色体核型,探讨羊膜腔穿刺的指征对产前诊断胎儿染色体病的意义。方法临沂地区788例有产前诊断指征的孕妇,在B超定位下进行羊膜腔穿刺术,抽取羊水细胞进行培养及染色体核型分析。结果发现异常核型30例,异常核型检出率为3.81%（30/788）。其中21-三体7例,46,XY,der（21,21）（q10;q10）＋211例,46,XX,der（21,21）（q10;q10）＋211例,18-三体5例,13-三体1例,47,XXX1例,47,XXY1例,平衡异位5例、倒位7例,47,XX＋mar2例。结论羊水细胞染色体检查是目前安全、有效、最可靠的产前诊断胎儿染色体病的方法。     

羊水载玻片原位培养技术的建立和临床应用

目的建立羊水载玻片原位培养技术的规范化流程,并实现临床转化。方法取10例羊水标本,采用与进口载玻片培养瓶同步培养,评价该载玻片贴壁性能。取100例羊水,探索核型处理技术中低渗、预固定、染色体分散动力学等条件,建立规范化流程。另随机选择100例羊水,该载玻片与常规塑料瓶同步培养羊水细胞,评价临床应用可行性。结果配对t检验分析不同载玻片种类的细胞克隆数和优质分裂相数,差异无统计学意义(P0.05),且该载玻片价格低廉。核型处理分析技术中显示采用1%枸橼酸钠低渗液、5%冰乙酸预固定液时,每张载玻片所获得的优质分裂相较多;选择较适分散环境温度(Temperature,T)、相对湿度(Humidity,H)组合(T=21℃,H=30%;T=21℃,H=33%),可有60%的优质分裂相用于染色体核型分析。临床应用比对试验结果显示,两者培养成功率均为100%,配对t检验分析两种方法的细胞克隆数和优质分裂相数,差异均无统计学意义(P0.05),核型符合率达100%,检出正常核型95例,异常核型5例,染色体多态性改变3例,18三体1例,mos 47,XX,+7[3]/46,XX[17]1例。结论该载玻片对羊水细胞的贴壁能力不亚于进口载玻片,且价格低廉,建立载玻片原位培养羊水细胞及核型处理分析技术规范化流程,初步临床应用显示与常规塑料瓶原位培养法获得同样效果,为高通量自动扫描捕获体系提供了基础技术平台,值得临床推广。     

全培基原位培养法应用于染色体异常的产前诊断

本室自１９８５ 年至今经过不断更新和完善，利用孕中期羊水细胞全培基原位培养法进行胎儿染色体异常产前诊断共１５００ 例，异常检出率为２ ．８％ ，成功率为９６ ％ 以上。经孕妇腹部穿刺羊膜腔采集羊水（１６２０ 周），从羊水中取出胎儿脱落细胞进行大约１０ 天培养，在适当时机收获细胞，经过低渗、固定和染色等过程原位制备染色体，核型分析常规Ｇ 显带，必要时Ｃ显带和高分辨技术，可获得较满意的诊断结果。此方法的优点是羊水细胞直接接种在塑料培养瓶内，容易贴壁生长；此法不需要像悬浮法那样反复离心、固定、滴片等复杂过程，缩短了制片时间；使用全培基既可以减少细胞污染、反复融化培基和血清，又能节省时间。     

羊水红细胞计数在产前诊断的应用

目的探讨中孕期羊膜腔穿刺后羊水中红细胞计数的结果与羊水细胞（染色体制备）培养成功率的关系。方法测定中孕期羊膜腔穿刺后羊水中红细胞计数的结果 ,根据羊水的物理性状,红细胞计数测定值与培养成功率将28例羊膜腔穿刺病例分为组Ⅰ组Ⅱ组Ⅲ组,并对各组数值进行统计学分析。结果Ⅲ组的RBC计数值显著高于其他各组（P〈0.01）。Ⅰ组中占分布最高百分比的RBC计数值〈0.2×10^12/L,0.2±10^12/L〈Ⅱ组〈0.9×10^12/L,Ⅲ组〉1.0×10^12/L。结论中孕期羊膜腔穿刺术血性羊水中红细胞计数测定有利于羊水细胞（染色体制备）培养成功率的估计。当RBC计数〉1.0×10^12/L时,血性羊水细胞培养失败的可能性大;RBC计数〈0.9-1.0×10^12/L时,血性羊水细胞培养成功的可能性较大。     

产前诊断中羊水嵌合体形成机制的探讨

目的探讨产前诊断中羊水嵌合体形成的机制,便于临床医生在遗传咨询中正确处理羊水培养中出现的嵌合现象。方法 2004年1月至2010年4月对在中山大学附属第一医院胎儿医学中心因各种产前诊断指征就诊的患者行羊膜腔穿刺术取羊水做染色体检查,从中选取羊水染色体为嵌合体的患者穿刺脐血复查染色体,结合两者的结果探讨羊水嵌合体形成机制。结果羊水嵌合体检出33例,其中25例为假嵌合体,8例为真嵌合体,7例真嵌合体羊水结果与脐血结果一致,1例真嵌合体两者结果不一致。结论正确判断羊水培养中出现的真假嵌合体及其风险,对产前诊断和遗传咨询具有重要的意义。     

产前诊断中羊水细胞染色体嵌合体的发现与处理

目的探讨如何处理羊水细胞培养中出现的嵌合现象。方法收集2007年1月至2011年6月因各种产前诊断指征行羊膜腔穿刺及染色体检查检出为嵌合体病例共27例。统计嵌合体检出率、类型、相应脐带血分析结果,并对所有病例进行出生后随访。结果嵌合体发生率为0．69％。其中,性染色体XX／XY嵌合体11例（占40．74％）;数目异常嵌合体13例（占48．15％）;结构异常3例（占11．11％）。其中14例行脐血染色体检查,确诊为真性嵌合体1例,终止妊娠;未行脐血染色体检查13个病例中,除2例失访外,余均正常分娩,出生随访未见异常。结论产前诊断羊水细胞嵌合体多为假性嵌合体,各种类型的假性嵌合体一般预后均良好。正确处理和判断羊水细胞培养中出现的嵌合现象,对产前诊断和遗传咨询具有重要的意义。     

Chromosome mosaicism in 6,000 amniocenteses

Multiple cell-multiple flask mosaicism was found in 0.20% of 6,000 amniocenteses, and multiple cell-single flask mosaicism was found in 0.92%. Multiple cell-multiple flask mosaicism usually was found in fetal or infant tissues at delivery or elective abortion. Most multiple cell-multiple flask mosaicism involved sex chromosomes and was either 45, X/46, XY or 45, X/46, XX. Except for one fetus with 45, X/46, XX and an aortic coarctation, phenotypic abnormalities associated with sex chromosome mosaicism were not found in these patients. One normal boy has continued to show 45,X mosaicism during the first 4 years of life. Autosome abnormalities found in multiple cell-multiple flask mosaicism included del(18q) associated with fetal anomalies. Apparently normal phenotypes were associated with prenatal trisomy 17, two de novo supernumerary marker chromosomes, and monosomy 21. Since an aberrant cell line present in only one primary amniotic fluid cell culture was occasionally identified from another amniocentesis or at birth, multiple cell-single flask mosaicism involving a sex chromosome or a viable autosome abnormality cannot be assumed to be an in vitro event. Maternal cell contamination, which was found in 0.49% of amniocenteses, could have resulted in an erroneous diagnosis of fetal sex in two cases if cells from independent culture vessels were not examined.     

Prenatal cytogenetic diagnosis of the fragile X chromosome: feasibility and speed of in situ clonal method in amniotic fluid cell tissue culture.

We have had experience with over 300 amniotic fluid specimens for prenatal diagnosis for the fragile X chromosome [fra(X)], and the flask method of tissue culture has been routinely utilized requiring extended tissue culture periods of 3-4 weeks. The use of the in situ clonal method of tissue culture for routine prenatal cytogenetic diagnosis of amniotic fluid cells has shortened tissue culture time and resulted in more rapid reporting; however, it has not been widely employed for fra(X) prenatal diagnosis. The simultaneous use of both methods of tissue culture has resulted in the detection of 2 cytogenetically fra(X) positive cases in amniotic fluid, with more rapid reporting and satisfactory expression of the fra(X) with the in situ clonal method. Thus, the use of the in situ clonal method of tissue culture for fra(X) prenatal diagnosis in amniotic fluid cells is feasible, faster and can serve as a more rapid cytogenetic adjunct to the newer DNA testing methods.     

1406例孕妇孕中期羊水细胞培养及染色体核型分析

目的通过对具有产前诊断指征的妊娠中期孕妇进行羊水细胞培养及染色体核型分析,探讨胎儿染色体异常特点,为产前诊断提供客观的实验依据。方法对2010年1月—2011年12月于我院就诊的1406例具有产前诊断指征的孕妇,在B超引导下行羊膜腔穿刺术,抽取羊水20 ml,进行羊水细胞培养,染色体制备及胎儿染色体核型分析。结果在1406例孕妇的羊水染色体检查结果中,共检出异常核型94例,包括染色体数目异常33例,结构异常61例,胎儿染色体异常率为6.69%,其中21-三体15例,18-三体7例,特纳综合征5例、47,XXX,2例,平衡易位6例、倒位27例、嵌合体6例,其他染色体结构异常26例。结论进行羊水细胞培养染色体核型分析在产前诊断中具有重要的作用,能有效地降低染色体病患儿的出生率。     

新疆地区羊水染色体检查在产前诊断中应用价值

目的探讨羊水细胞染色体分析在产前诊断中的应用价值。方法无菌条件下,取羊水细胞培养,常规收获,G显带,镜下核型分析。结果符合产前诊断指征320例妊娠中期羊水细胞培养成功315例,成功率为98.4%,共检出异常核型13例,检出率为4.06%,其中三体综合征4例,占30.7%;性染色体异常2例,占15%,平衡易位4例,占30.7%;性染色体三体1例,部分三体1例,部分单体1例;染色体多态性18例,占5.6%。结论对具有产前诊断指征的孕妇行羊膜腔穿刺术,进行羊水细胞培养及染色体分析十分必要,羊水细胞染色体检查是目前安全、有效、可靠诊断胎儿染色体的方法。     

妊娠中期胎儿染色体病的产前诊断

目的探讨羊水细胞染色体核型分析在妊娠中期产前诊断胎儿染色体病中的必要性和安全性。方法1982年1月至2007年9月天津医科大学总医院1531例符合产前诊断指征的孕妇,于妊娠19-26周在B超引导下进行羊膜腔穿刺取羊水15-20ml,羊水细胞培养G显带进行羊水细胞染色体核型分析。结果1531例羊水细胞培养成功1492例,成功率为97.45%（1492/1531）;1492例羊水染色体核型分析,异常核型45例,异常率为3.02%（45/1492）,其中染色体数目异常21例（46.67%,21/45）,主要是21-三体综合征（10例）和18-三体综合征（5例）;染色体结构异常24例（53.33%,24/45）,异常核型的人群分布以唐氏综合征筛查高风险为主（84.44%,38/45）;遗传多态性3例;胎儿丢失率为0.65‰（1/1531）,胎死宫内率为1.31‰。羊水染色体异常核型分析结果与随访结果一致。结论羊水细胞染色体核型分析是必要的、安全可靠的,在产前诊断染色体病中起着不可替代的作用。     

Analysis of mosaic states in amniotic fluid using the in-situ colony technique

Appropriate counselling and clinical management of the pregnant woman with a mosaic amniotic fluid cell karyotype are difficult. The majority of the data on mosaicism and pseudomosaicism are derived from studies employing the flask technique for the analysis of amniotic fluid cell cultures. Since the majority of laboratories now utilize the in-situ technique, such data may not be relevant when analyzing results from the in-situ colony technique. We reviewed the incidence of mosaicism in 6339 amniotic fluid samples using the in-situ technique. Data are presented on the types of aberrations and clinical outcomes. A classification of mosaicism is presented that distinguishes mosaicism of clinical importance from that which is obviously of extrafetal origin or artifactual. This approach clarifies the significance of mosaic states detected by the in-situ colony technique and provides a rational foundation for genetic counselling and for planning clinical interventions.