人类免疫缺陷病毒1型感染基因诊断方法的建立

目的 建立人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)基因诊断方法。方法 随机选取80份全国送检的已确认的HIV阳性样品，从健康献血员中选取40份HIV阴性样品。分别提取人DNA和病毒RNA，再分别扩增HIV-1的gp41、pol和gag各基因区的3套反应系统，进行巢氏聚合酶链反应(nPCR)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)。将结果与血清学方法比较，观察结果是否一致。同时检测3套反应系统的敏感性、重复性和对HIV-1各亚型参考病毒株的扩增情况。结果 用3套反应系统对80份阳性样本进行nPCR检测的阳性率为：gp41反应系统88．8％；pol反应系统83．8%；gag反应系统81．3％；3套系统联合应用检出率90.0％。用RT-PCR检测阳性率为：gp41反应系统96．3％；pol反应系统91．3％；gag反应系统95．0％；3套反应系统联合应用检出率可达98．8％。阴性样品扩增均阴性，特异性为100％。3套反应系统不但可扩增HIV-1型M组的A、B、C、D、CRF01-AE、F、G、H亚型，还可扩增其N和O组毒株，且与HIV-2无交叉反应。nPCR最低检测限为1拷贝／PCR。gag和pol反应系统RT-PCR最低检测限为750拷贝／ml；gp41反应系统最低检测限为150拷贝／ml。nPCR和RT一：PCR扩增gp41、pol和gag基因区的重复性分别为：93．3％、90．0％、86．70h，和100%、96．7％、100％。结论 建立的HIV-1基因诊断方法敏感性、特异性和重复性较好，且成本低廉，适合我国HIV检测实验室应用。     

应用NucliSens Easy Q定量检测人类免疫缺陷病毒1型RNA

获得性免疫缺陷综合征（AIDS）是由人类免疫缺陷病毒（HIV）而导致的一种致死性疾病。     

人类免疫缺陷病毒感染急性期的实验室检测进展

人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染急性期患者病毒载量高,传播能力强,是HIV感染的重要传染源.绝大部分急性感染期患者没有或仅有轻微的临床症状,其筛查和诊断往往依赖于实验室检测,但由于检测存在窗口期,HIV感染的早期筛查和诊断存在一定困难.近年来,针对HIV感染急性期...     

人类免疫缺陷病毒1型耐药性检测方法及其应用进展

近年来，艾滋病临床治疗失败中的耐药性问题，已经引起了越来越多的关注。在此背景下，耐药性检测逐步成为优化艾滋病联合化疗方案的有力工具。临床医生们能够依据耐药性检测的结果，为艾滋病感染者选择具有最大疗效和最小副作用的抗病毒药物。由于人类免疫缺陷病毒不仅在免疫学和基因水平上可以将其分为两型，而且在流行病水平上，两者也存在着明显的不同。     

两种方法检测人类免疫缺陷病毒抗体性能评价

目的通过2种初筛试剂检测人类免疫缺陷病毒抗体（抗-HIV）,评价试剂的阳性检出率。方法对3 434例标本首先用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测抗-HIV,初筛阳性者再用胶体硒标试剂复检。结果 3 434例标本用ELISA共检测出48例阳性,这48例阳性标本再用胶体硒标试剂复检,只检出37例阳性。利用配对四格表资料的χ2检验,求出χ2=9.1,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论 ELISA阳性检测率较高,敏感性高于胶体硒标法。选用阳性检测率较高的ELISA试剂进行初筛,可以更好地进行艾滋病监测。     

24例人类免疫缺陷病毒抗体阳性结果分析

目的分析人类免疫缺陷病毒抗体（抗-HIV）阳性人群的分布及流行病学特点。方法对2005年1月至2008年12月21588例门诊和住院患者采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测抗-HIV的结果进行回顾性分析,并将初检和复检阳性者送重庆市疾病预防控制中心采用免疫印迹法进行确认试验,并对确认阳性者进行流行病学调查。结果在检测的21588例患者中,确认抗-HIV阳性24例,阳性率为0．11％。男女性阳性率分别为0．17％和0．06％。结论涪陵地区HIV感染者在性别上存在显著差异,男性高于女性,感染方式仍以吸毒和性传播为主。应加强对术前和用血前患者进行抗-HIV筛查,以便及时发现感染者,最大限度地避免HIV的职业暴露风险。     

两种检测血清HIV1 RNA方法的对比研究

目的 探讨Magene磁珠法提取核酸和巢式核酸扩增HIV1 RNA在诊断人类免疫缺陷病毒(HIV)感染中的应用价值.方法 对HIV1 2抗体阴性的梅毒感染者、有输血/手术史的住院患者和HIV1 2抗体阳性的艾滋病(AIDS)患者、HIV携带者、健康体检者采用上述方法检测血清HIV1 RNA.结果 32例HIV1 2抗体阴性者血清中未检出HIV1 RNA;4例AIDS和1例HIV携带者血清HIV1 RNA呈阳性,2例单一酶联免疫吸附试验检测血清中HIV1 2抗体阳性者和10例健康体检者未检出HIV1 RNA.结论 磁珠法提取核酸结合巢式核酸扩增能检出AIDS和HIV携带者血清中的HIV1 RNA及排除假阳性.     

人类免疫缺陷病毒确证试验抗体不确定原因分析

目的分析并了解人类免疫缺陷病毒(HIV)确证试验(免疫印迹法,即WB法)抗体不确定原因。方法收集2012年1～9月共经WB法确证试验的79例患者中的5例不确定结果进行分析。结果 5例不确定患者最终1例转阳,1例排除,另有3例继续观察。结论疾病感染初期、自身免疫性疾病、怀孕、非特异性反应、EB病毒等都可能引起HIV确证试验结果不确定。     

人类免疫缺陷病毒感染抗体检测窗口期血清的检出

目的　搜索高危人群中HIV抗体“窗口期”样品。方法　使用HIV抗体检测、HIV 1 p2 4抗原检测和病毒载量检测等多种方法对 1 580份高危人群血清和血浆进行筛查。结果　发现 1份样品抗体检测为阴性 ,p2 4抗原检测为阳性 ,病毒载量HIV 1RNA含量极高 ,拷贝数为每毫升 41万 (RT PCR法 )和 76万 (NASB法 )。结论　该份样品HIV抗体水平极低 ,用国内目前使用的进口和国产HIV抗体检测试剂均不能检出 ,确定其为 1份处于HIV感染抗体窗口期的样品     

逆转录聚合酶链反应在艾滋病患者HIV-1毒株env基因的序列测定和亚型分析中的应用

目的 了解深圳地区艾滋病患者中Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)毒株各亚型的感染情况，及其不同亚型对患者疾病进程的影响。方法 采用巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法对26例艾滋病患者血浆中的HIV-1毒株的env基因片段进行扩增，并对扩增片段进行序列测定和分析，同时检测其CD4^ 细胞计数与血浆病毒载量。结果 基因系统树显示深圳地区26例艾滋病患者的HIV-1毒株env基因序列，B亚型12例，其中1例与欧美B亚型序列十分接近，11例与中国云南B亚型序列十分接近；循环重组亚型AE(CRFD1-AE)13例，均与泰国AE亚型序列十分接近。比较B、AE亚型感染患者的CD4细胞计数与病毒载量之间的差异无统计学意义。结论 深圳地区艾滋病患者中以HIV-1毒株以B亚型和循环重组亚型AE最常见，尚未观察到B、AE亚型对艾滋病进展的影响。     

Effect of RANTES on the infection of monocyte-derived primary macrophages by human immunodeficiency virus type 1 and type 2

The effect of β chemokines on human immunodeficiency virus type I (HIV-1) infection of primary macrophages is controversial, and their effect on HIV-2 infection of these cells has not yet been documented. We examined the effect of synthetic and recombinant regulated-on-activation, normal T cell-expressed and -secreted (RANTES) on HIV-1 and HIV-2 infection of primary monocyte-derived-macrophages (MDM) that were obtained as the adherent cells of 5-day cultures of blood mononuclear cells (PBMC), followed by 2-day culture without peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) nor added cytokines. These MDM expressed CD4, CCR5 and CXCR4, the major coreceptors for HIV macrophage- and T cell-tropic isolates, respectively. Infection of MDM from different donors with HIV-1 or HIV-2 macrophagetropic strains was reproducibly inhibited by RANTES. This inhibition depended on RANTES continuous presence in culture during and after infection. Treatment of MDM with RANTES just before or during, but not after, exposure to virus did not protect MDM from infection. When RANTES was added after MDM had been infected, and was continuously maintained in culture thereafter, no inhibition occurred and limited enhancement of infection could be observed. These data indicate that RANTES inhibits HIV-1 as well as HIV-2 infection of MDM, likely at a post-binding step, and support the role of CCR5 as the major coreceptor for HIV-1 and HIV-2 entry into primary macrophages.     

检测HIV-1准种的终点有限稀释PCR技术的建立

R共获得65条c2-v3-c3准种序列、101条p17准种序列;HIV-1前病毒水平介于1.34～53.76拷贝/106个PBMC之间.c2-v3-c3及p17核苷酸序列系统进化树分析表明,不同患者的序列分开、同一患者的序列特异聚集在一起.氨基酸序列比对分析表明,HIV-1感染早期患者体内HIV-1准种序列比较单一,随着感染时间的增加,HIV-1准种趋于复杂化.结论 本研究建立的独特终点有限稀释PCR技术检测HIV-1准种灵敏度高、特异性好、高通量,可用于低水平病毒载量HIV-1感染者HIV-1准种研究.     

聚合酶链反应检测SEN病毒的方法学探讨

目的探讨聚合酶链反应(PCR)扩增SEN病毒(SENV)核酸的优化条件。方法将标本分别以Acupure DNA／RNA提取法(方法1)、SDS-蛋白酶K方法(方法2)及裂解液提取’兀V核酸法(方法3)抽提SENV DNA模板，并用3组针对SENV DNA不同区的引物进行扩增，比较不同模板提取方法、不同扩增引物及不同体积标本对SENV DNA检出率的影响。结果在191份血清中，方法1、方法2和方法3提取核酸后可分别检测出15份、9份和7份。采用方法1提取SENV DNA的基础上，采用2组套式引物分别扩增出15份和11份，一次PCR引物仅检出2份SENV DNA阳性标本；应用引物2扩增至少需要50μl血清。结论不同引物扩增方法和不同模板提取方法可能是影响SENV DNA检出率重要因素。     

Evaluation of a dipstick method for the detection of human immunodeficiency virus infection

Serology has been a fundamental tool to prevent post-transfusional infection with human immunodeficiency virus (HIV) and for epidemiological surveys, the first step to attempt control of the pandemia. Enzyme immunoassay is in widespread use. Nevertheless, simpler methods are needed in many countries, where laboratory facilities and trained personnel are limited, and HIV prevalence is high. The evaluation of a simple and noninstrumented HIV antibody test is presented here. The test employs synthetic antigens of HIV-1 and HIV-2 attached to the teeth of a polystyrene comb, which fit into the wells of standard microtiter plates where samples are diluted. Captured antibodies are developed with colloidal gold-labeled Protein A. Three seroconversion panels plus 662 samples were tested, including HIV-1 and HIV-2-infected individuals, normal blood donors, and a noninfected baby born to a seroreactive mother. When compared with enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and Western blot, the dipstick showed 100% sensitivity and 98.7% specificity. The simplicity of result evaluations and excellent reagent stability make the dipstick suitable for small blood banks and for epidemiological surveys.     

粪便DNA抽提方法的比较研究

目的 比较国际主要微生态实验室4种常用的核酸抽提方法获得的粪便DNA的质量.方法 采用针对目的细菌(总细菌、类杆菌-普氏杆菌属组、双歧杆菌、肠杆菌科细菌及肠球菌)16s rDNA的特异性引物及实时定量PCR方法,分析QIAamp(R)粪便DNA试剂盒法(QIA法)、FastDNA(R) Kit试剂盒法(Fast法)、酚-氯仿-玻璃珠击打法(酚-氯仿-玻珠法)及QIAamp(R) DNA粪便试剂盒+玻璃珠击打法(QIA+玻珠法)4种方法抽提获得的10份人粪便DNA的质与量.结果通用引物特异性扩增粪便总DNA,发现4/10份由酚-氯仿-玻珠法获得的粪便DNA中存在PCR抑制剂,过柱纯化后PCR抑制现象消失.实时定量PCR检测粪便总细菌量,以QIA法与QIA+玻珠法获得的量最高(分别为12.16±0.18,12.05±0.48),而Fast法与酚-氯仿-玻珠法获得的粪便细菌量(分别为11.26±0.40,11.21±0.16)与QIA法相比显著低下(均P＜0.05).采用QIA法(11.63±0.23,8.68±0.51)及QIA+玻珠法(11.67±0.56,8.77±0.56)抽提获得的粪便类杆菌-普氏杆菌及肠杆菌科细菌的DNA量显著高于Fast法(10.67±0.47,7.39±0.51)及酚-氯仿-玻珠法(10.65±0.33,7.40±0.18)(均P＜0.05).对于双歧杆菌,酚-氯仿-玻珠法获得的量显著低下.但对肠球菌而言,以Fast法获得的量最高.结论 实时定量PCR检测结果表明,QIA法及QIA+玻珠法获得的粪便DNA质与量总体上优于Fast法及酚-氯仿-玻珠法,但根据不同的目的细菌群对象可以选择不同的方法.     

套式聚合酶链反应检测巨细胞病毒的初步研究

目的建立套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）加限制性酶切分析方法检测人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）。方法在ＨＣＭＶ直接早期蛋白ＥｃｏＲＩＪＤＮＡ片段内，自行设计两对引物，建立套式ＰＣＲ检测ＨＣＭＶＤＮＡ，同时结合病毒分离检测临床标本。结果２３例新生儿肝炎综合征患儿中，１０例病毒分离及套式ＰＣＲ均阳性；１例病毒分离阴性，但套式ＰＣＲ阳性。对５８例妊娠早期孕妇血标本进行检测，套式ＰＣＲ阳性率为９％，病毒分离阳性率则为７％。结论套式ＰＣＲ加限制性酶切分析是一种临床检测ＨＣＭＶ的快速有效手段，值得临床推广。     

肺鳞状细胞癌中人乳头瘤病毒感染的研究

目的通过观察肺鳞状细胞癌及癌旁肺组织中人乳头瘤病毒（humanpapillomavirus，HPV）的感染、分布、存在状态及与临床病理资料间的关系，探讨HPV感染在肺鳞状细胞癌发病中的作用。方法用共有引物PCR检测120例肺鳞状细胞癌及癌旁肺组织中HPV的感染率，用多重PCR对阳性标本的HPV6/11．16．18分型，用原位杂交方法观察HPV在肺鳞癌组织中的分布及存在状态。结果肺鳞癌组织HPV感染率（35％）显著高于癌旁肺组织（67％）（P＜0．01），HPV在肺鳞癌组织中可能以游离和整合两种状态存在并可在肺鳞癌组织中表达，早期（Ⅰ期）肺鳞癌HPV感染率（44.3％）显著高于进展期（Ⅱ～Ⅲ期）肺鳞癌（25．4％）（P＜0．05），重度吸烟组HPV感染率（44．7％）显著高于非吸烟组（18．2％）（P＜0．01）。结论HPV感染在肺鳞癌的发病中可能起一定作用，肺鳞癌组织中HPV感染与吸烟有关。     

骨髓增生性疾病JAK2~(V617F)突变检测方法的比较研究

目的研究较好的检测骨髓增生性疾病(MPD)患者中JAK2~(V617F)点突变的方法。方法分别应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)、等位基因特异性聚合酶链式反应(AS-PCR)检测16例慢性粒细胞白血病(CML)、22例真性红细胞增多症(PV)、26例原发性血小板增多症(ET)、12例慢性特发性骨髓纤维化(IMF)外周血单个核细胞基因组DNAJAK2~(V617F)点突变,结果经测序鉴定。结果测序证实经AS-PCR检测PV的阳性率为72.7%,比PCR-RFLP的阳性率(50%)检测提高22.7%;ET的阳性率为42.3%,比PCR-RFLP的阳性率(34.6%)检测提高7.7%。其中经PCR-RFLP检测的阳性样本全部包含在AS-PCR检测的阳性样本之中,二者结果均与测序结果相符。结论 AS-PCR与PCR-RFLP相比检测敏感性高,且操作简便、快捷,更具有临床大规模检测的应用价值。     

巨细胞病毒即刻早期基因mRNA检测方法的建立

目的建立快速简便的逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）方法检测人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）即刻早期（ＩＥ）基因ｍＲＮＡ。方法设计合成跨越ＨＣＭＶＩＥ基因内含子区的一对引物，分别用ＲＴＰＣＲ和ＰＣＲ技术扩增ＨＣＭＶｍＲＮＡ和ＤＮＡ，用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定阳性产物。结果ＨＣＭＶＩＥ基因ｍＲＮＡ表达在感染后６小时即可出现，并持续到感染后至少９６小时，ＲＴＰＣＲ检测的最低敏感性为１００ｆｇ总ＲＮＡ，其他病毒和细胞ＲＮＡ不能被扩增。结论ＲＴＰＣＲ技术检测ＨＣＭＶｍＲＮＡ敏感、特异，有望应用于临床作为ＨＣＭＶ活动性感染的早期诊断方法