HPV16E7蛋白和Rb 蛋白在人喉鳞状细胞癌中的表达及相关性研究

目的:探讨HPV16E7蛋白和Rb蛋白在人喉鳞状细胞癌(鳞癌)组织中的表达及其在喉鳞癌发生和发展过程中的相互关系.方法:用免疫组织化学方法检测78例喉鳞癌、26例喉癌前病变、24例声带息肉和10例癌周正常喉组织标本中HPV16E7蛋白和Rb蛋白的表达.结果:癌周正常喉组织、声带息肉、喉癌前病变和喉鳞癌组织中HPV16E7蛋白的阳性表达率分别为0(0/10)、4.1%(1/24)、27.0%(7/26)和43.6%(34/78),Rb蛋白的阳性表达率分别为80.0%(8/10)、79.2%(19/24)、61.5%(16/26)和50.0%(39/78);HPV16E7蛋白和Rb蛋白的阳性表达率在癌周正常喉组织、声带息肉与喉鳞癌组之间均有显著性差异(P＜0.05),HPV16E7蛋白表达呈明显升高趋势,而Rb蛋白表达呈明显下降趋势.HPV16E7蛋白的阳性表达率,喉鳞癌病理Ⅲ级明显高于Ⅰ级或Ⅱ级(P＜0.05),临床Ⅲ～Ⅳ期明显高于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.05);而Rb蛋白的表达正相反,肿瘤病理Ⅲ级明显低于Ⅰ级或Ⅱ级(P＜0.05),临床Ⅲ～Ⅳ期明显低于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.05).结论:HPV16E7蛋白的表达升高和Rb蛋白的表达下降可能会导致人喉鳞癌的发生和发展;检测HPV16E7蛋白和Rb蛋白的表达可用于喉鳞癌恶性程度的评定.     

喉癌组织中HPV16及其早期区基因E6、E7蛋白的表达及意义

目的:观察喉癌组织中HPV16及其早期区基因E6、E7蛋白的表达,并初步分析其与喉癌组织临床分期、病理分级的相关性.方法:147例喉组织标本,其中喉鳞状细胞癌组织82例,非癌组织39例(声带息肉27例,距肿瘤＞1.0 cm的癌周正常组织12例),癌前病变(声带白斑)26例.免疫组织化学检测各组标本中HPV16及其早期区基因E6、E7蛋白的表达.分析喉鳞癌组织中3种蛋白表达情况与临床分期、病理分级的相关性.结果:喉鳞癌组织中HPV16蛋白及E6、E7蛋白的阳性率明显高于癌前病变组织(P＜0.05或0.01),后者高于非癌组织 (P＜0.05或0.01).非癌组织中HPV16蛋白阳性率明显高于E6、E7蛋白的表达(P＜0.05或0.01),而喉癌组织及癌前组织中三者间无显著差异.不同临床分期(Ⅰ～Ⅳ期)及不同病理分级(Ⅰ～Ⅲ级)喉癌组织中HPV16的阳性率间有显著差异(P＜0.05);而不同临床分期及病理分级间HPV16 E6、E7蛋白表达率无显著差异.结论:HPV16感染后其早期区基因E6、E7的表达可能是诱发喉癌的因素之一,应用免疫学方法抑制E7蛋白的表达对于喉癌的治疗有积极的意义,但其预防和治疗作用不应过分夸大.     

喉鳞癌组织中HPV16、18E6和HPV16E7蛋白表达及其相关性研究

目的 :探讨人乳头瘤病毒 (HPV) 16、18型E6和E7蛋白与喉鳞癌发生的关系以及两种蛋白在致病过程中的相互关系。方法 :采用免疫组化SABC方法对 5 8例喉鳞癌 ,30例癌旁组织和 30例声带息肉进行检测。结果 :在喉鳞癌和癌旁组织中的E6蛋白的表达率分别为 31 0 % (18/5 8)和 2 0 0 % (6 /30 ) ;E7蛋白的表达率分别为 32 7%(19/5 8)和 2 0 3 % (7/30 )。声带息肉组中未见E6和E7蛋白阳性表达。E6和E7蛋白表达率在喉癌组与息肉组之间 ,有颈淋巴结转移组与无颈淋巴结转移组之间均有显著性差异 (P <0 .0 1)。E6和E7蛋白在喉鳞癌中的表达结果具有明显的相关性。结论 :HPV16、18E6和HPV16E7蛋白与喉鳞癌发生、发展关系密切 ,E6与E7蛋白在致癌过程中有协同作用     

人乳头瘤病毒16 E7 (HPV16E7)逆转录病毒载体的构建

目的 构建人乳头瘤病毒16型E7基因片段（HPV16E7）的逆转病毒载体。方法 PCR扩增HPV16cDNA全长的E7片段，并用酶切，连接等方法将HPV16E7亚克隆到逆转录病毒载体pLXSN上，然后再用酶切，测序进行鉴定，通过Genbank的数据库分析软件对PV16E7进行同源性分析。结果 经酶切分析，测序证明，从HPV16cDNA克隆的300bp的HPV16E7与逆转录病毒载体发生了基因重组，HPV16E7基因片段与数据库中的原HPV16cDNA的E7有高度的同源怀。结论 构建了含HPV16E7的逆转录病毒载体，为人关节软骨细胞的基因转染打下了基础。     

宫颈鳞癌中HPV16E7蛋白表达与微血管计数间的相关性

目的　探讨宫颈鳞癌中人乳头状瘤病毒 16E7(HPV16E7)蛋白表达与肿瘤血管形成间的相互关系。方法　采用免疫组化 L SAB法对 80例宫颈鳞癌组织进行研究。结果　 HPV16E7蛋白表达阳性率为 63.75 % ,其组织中微血管数为 2 1.5 3± 8.82 / 2 0 0 X;阴性表达率为 37.2 5 % ,其组织中微血管数为 2 0 .2 7± 7.14/ 2 0 0 X,P>0 .0 5 ,相关系数为 0 .0 4,表明两者间无明显相关关系。结论　 HPV16E7与肿瘤微血管形成在宫颈癌发病过程中无明显协同作用     

人喉鳞癌组织中HPV16E7、CyclinD1和Rb蛋白的表达

目的:探讨喉鳞癌组织中人乳头瘤病毒(HPV)16型E7、CyclinD1和Rb蛋白表达的变化.方法:采用免疫组织化学SABC法检测80例喉鳞癌、30例声带息肉组织中HPV16E7、CyclinD1和Rb蛋白的表达状况.结果:声带息肉组织中HPV16E7未见表达,喉鳞癌组织中的表达率为34/80(P＜0.000 1);声带息肉与喉鳞癌组织中Cy-clinD1的表达率分别为2/30和42/80(P＜0.000 1),Rb的表达率分别为25/30和42/80(P＜0.05).HPV16E7与CyclinD1的表达与临床分期、淋巴结转移情况和5 a生存率有关(P＜0.05或0.01).喉鳞癌组织中HPV16E7与Rb的表达相关(P＜0.01).结论:HPV16感染和Rb、CyclinD1的异常表达与喉鳞癌发生、发展有关.HPV16E7与CyclinD1可作为判定喉鳞癌预后的指标.     

子宫颈鳞状细胞癌中Aurora-A、MCM7和HPV16 E7的表达及病理学分析

目的探讨子宫颈鳞状细胞癌中Aurora-A、MCM7和HPV16 E7的表达及病理学情况。方法分析2013年2月~2015年4月浙江省湖州市德清县中医院病理科收集的手术切除宫颈新鲜标本90例的病理学情况,依据宫颈病变分级标准进行分组:正常组(20例)、宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ组(20例)、CINⅡ组(15例)、CINⅢ组(15例)、宫颈鳞癌组(20例)。采用免疫组化法检测Aurora-A、MCM7和HPV16 E7蛋白表达情况;观察并比较Aurora-A、MCM7和HPV16 E7蛋白在宫颈不同病变、临床分期、病理情况的宫颈组织中的表达;观察Aurora-A、MCM7和HPV16 E7蛋白与宫颈鳞癌病理分期的相关性。结果鳞癌组Aurora-A、MCM7和HPV16 E7蛋白阳性表达率均高于正常组、CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Ⅱa~Ⅱb期宫颈鳞癌组织中Aurora-A、MCM7和HPV16 E7蛋白阳性表达率均高于Ⅰa~Ⅰb期宫颈鳞癌组织,低分化宫颈鳞癌组织中Aurora-A、MCM7和HPV16 E7蛋白阳性表达率均高于高分化、中分化宫颈鳞癌组织,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Aurora-A、MCM7和HPV16 E7蛋白阳性表达率均与宫颈鳞癌病理分期呈正相关(r=0.305、0.306、0.304,均P<0.05)。结论 Aurora-A、MCM7和HPV16 E7蛋白在宫颈癌、癌前病变中具有重要的意义,各蛋白联合检测可以为宫颈癌诊断及预后评价提供可靠的理论依据。     

p16，Rb蛋白在子宫颈鳞状细胞癌组织中的表达

OBJECTIVE: To study the aberrant expression and coexpression of protein p16 and Rb in cervical squamous carcinomas, and to evaluate whether these alterations provide causative information. METHODS: The expressions of p16 and Rb protein were detected by treptavidin-peroxidase(S-P) immunohistochemical methods. RESULTS: 1. The p16 protein expression was mainly found in cytoplasm. The positive rate in carcinoma, CIN and normal cervix were 43.1%(25/58), 62.5%(5/8) and 70%(14/20), respectively; the positive expression were decreased in lower grade and clinical advanced cases(P < 0.05). 2. The Rb protein expression was detected in nucleus. The positive rate of Rb protein were 37.9%(22/58), 75%(6/8) and 85(17/20) in tum. The difference of the expression of Rb protein between the cervical squamous carcinoma and the normal cervix was significant(P < 0.05). The positive expression were increased in lower grade cancers(P < 0.05), and decreased in advanced cases(P > 0.05). 3. The positive rates of p16 and Rb protein in cervical squamous carcinoma showed an inverse correlation (vs = -0.4301, P < 0.01). CONCLUSIONS: 1. The abnormal p16 and Rbn expression might play an important role in the tumor genesis and the development of cervical squamous carcinoma. 2. Loss of function of both tumor suppressor genes may be an advanced event in cervical squamous carcinomas and might involve a bad prognosis.     

HPV16E7基因和P16~(INK4A)蛋白在宫颈病变中的表达及其临床意义

目的:检测宫颈病变组织中HPV16E7基因和P16INK4A蛋白的表达,分析基因表达变化的临床意义。方法:入选慢性宫颈炎和CINⅠ^Ⅱ患者81例、CINⅢ、宫颈浸润性鳞癌患者57例,采用PCR扩增技术检测宫颈病变组织HPV16E7基因表达,采用免疫组化方法检测宫颈病变组织P16INK4A蛋白表达,用SPSS软件行等级相关分析和χ2检验。结果:⑴HPV16E7特异性片段阳性率在慢性宫颈炎、CINⅠⅡ患者81例、CINⅢ、宫颈浸润性鳞癌患者57例,采用PCR扩增技术检测宫颈病变组织HPV16E7基因表达,采用免疫组化方法检测宫颈病变组织P16INK4A蛋白表达,用SPSS软件行等级相关分析和χ2检验。结果:⑴HPV16E7特异性片段阳性率在慢性宫颈炎、CINⅠ^Ⅱ中分别为17.0%、26.5%,在CINⅢ及宫颈浸润性鳞癌中分别为61.5%和74.2%;HPV16E7分布在慢性宫颈炎、CINⅠⅡ中分别为17.0%、26.5%,在CINⅢ及宫颈浸润性鳞癌中分别为61.5%和74.2%;HPV16E7分布在慢性宫颈炎、CINⅠ^Ⅱ和CINⅢ、宫颈浸润性鳞癌间差异具有统计学意义(P<0.001);⑵P16INK4A蛋白的表达在慢性宫颈炎、CINⅠⅡ和CINⅢ、宫颈浸润性鳞癌间差异具有统计学意义(P<0.001);⑵P16INK4A蛋白的表达在慢性宫颈炎、CINⅠ^Ⅱ分别为10.6%和30.0%,在CINⅢ和宫颈浸润性鳞癌中分别为96.0%和100%;P16INK4A蛋白的表达在慢性宫颈炎、CINⅠⅡ分别为10.6%和30.0%,在CINⅢ和宫颈浸润性鳞癌中分别为96.0%和100%;P16INK4A蛋白的表达在慢性宫颈炎、CINⅠ^Ⅱ和CINⅢ、宫颈浸润性鳞癌间差异具有统计学意义(P<0.001);⑶在HPV16E7特异性片段表达阳性的宫颈病变组织中,P16INK4A蛋白的表达均是阳性。宫颈病变组织中P16INK4A蛋白与HPV16E7的表达有相关性(r=0.482,P<0.001)。结论:HPV16E7和P16INK4A蛋白与宫颈上皮内瘤变和宫颈癌的发生具有相关性,HPV16E7和P16INK4A蛋白可能是宫颈上皮内瘤变和宫颈癌的早期预测指标。     

HPV16、18E6基因在喉癌组织中的表达

目的 检测HPV16、18E6基因在喉癌中的表达，探讨其在喉癌发病过程中的作用。方法 应用RT－PCR、琼脂糖凝胶电泳方法检测30例声带息肉组织及48例喉癌组织。结果 30例声带息肉组织中6．67％（2／30）有HPV16、18E6基因表达，48例喉癌组织中87．5％（42／48）扩增HPV16E6基因，79．17％（38／48）有HPV18E6基因表达。HPV16、18E6基因与喉癌的临床分型、病理分化程度、临床分期无明显关系（P＞0．05），与淋巴结转移有关（P＜0．05）。结论 HPV16、18E6基因与喉癌的发生密切相关，是喉癌恶性转化的关键，预示着喉癌有较强的增殖能力及转移能力。     

肿瘤转移抑制基因KAI1在宫颈癌的表达及其与HPV感染的关系

目的探讨肿瘤转移抑制基因KAI1在宫颈癌中的蛋白表达以及人乳头瘤病毒(HPV)16E6、E7和HPV18E6/E7感染对其表达的影响。方法采用免疫组化SP法检测70例浸润性宫颈癌、15例原位癌、20例正常宫颈组织中KAI1蛋白的表达,采用PCR扩增-琼脂糖凝胶电泳法检测浸润性宫颈癌组织中HPV16E6、E7和HPV18E6/E7的DNA状况。结果宫颈浸润癌及原位癌组织中的KAI1蛋白表达与正常宫颈上皮中的表达相比明显下调(P<0.05),原位癌与浸润癌中的表达差异无统计学意义;HPV16E6、E7和HPV18E6/E7在浸润性宫颈癌中的阳性率分别为67.1%、54.3%和12.9%,HPV16E6、E7和HPV18E6/E7感染与宫颈癌中的KAI1蛋白表达无相关性。结论肿瘤转移抑制基因KAI1在宫颈癌中呈下调表达,HPV16E6、E7和HPV18E6/E7感染不影响其表达。     

HPV16E7基因的原核克隆及表达

目的:探讨从喉癌组织中HPV16 E7蛋白的原核克隆及表达.方法:采用PCR方法扩增HPV16 E7基因,经BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切后插入相同酶切pET28a(+)载体,转化JM109感受态细胞,并进行阳性克隆筛选.经IPTG对重组质粒进行蛋白诱导表达,SDS-PAGE和Western blot检测目标蛋白表达情况.结果:成功构建了原核表达质粒pET28/E7、HPV16 E7融合蛋白在BL21(DE3)菌株中高效表达.结论:HPV16 E7融合蛋白的表达为进一步深入研究HPV16E7蛋白的生物学特性及其致细胞转化的作用机制奠定了基础.     

HPV16/18-E6、p53和MDM2蛋白在人喉鳞癌中的表达及相关性研究

目的:探讨HPV16/18-E6、p53和MDM2蛋白在人喉鳞状细胞癌(鳞癌)组织中的表达及其在喉鳞癌发生和发展过程中的相互关系.方法:用EnVision免疫组织化学法检测72例喉鳞癌、24例喉癌前病变、15例声带息肉和8例癌周正常喉组织标本中HPV16/18-E6、p53和MDM2蛋白的表达并比较,对喉鳞癌与临床病理因素进行相关性分析.结果:癌周正常喉组织、声带息肉、喉癌前病变和喉鳞癌组织中 HPV16/18-E6蛋白的阳性表达率分别为0(0/8)、6.7%(l/15)、12.5%(3/24)和 37.5%(27/72),p53蛋白的阳性表达率分别为0(0/8)、13.3%(2/15)、25.0%(6/24)和52.8%(38/72),MDM2蛋白的阳性表达率分别为0(0/8)、6.7%(l/15)、37.5%(9/24)和70.8%(51/72),HPV16/18-E6、p53和MDM2蛋白的阳性表达在声带息肉、喉癌前病变与喉鳞癌组之间均有显著性差异(P＜0.05).HPV16/18-E6蛋白和MDM2蛋白的阳性表达在病理Ⅰ～Ⅲ级肿瘤之间呈明显升高趋势,有显著性差异(P＜0.05).HPV16/18-E6蛋白的阳性表达与临床分期和淋巴结转移明显相关(P＜0.05).p53蛋白阳性表达与HPV16/18-E6蛋白、MDM2蛋白阳性表达有显著正相关性(P＜0.05).结论:HPV16/18-E6、MDM2蛋白的过表达和p53的失活与人喉鳞癌的发生发展密切相关.     

Interaction among Rb/p16, Rb/E2F1 and HDAC1 proteins in gallbladder carcinoma

The mechanism and interaction among Rb/p16, Rb/E2F1 and HDAC1 proteins in gallbladder carcinoma were investigated. By using the immunoprecipitation method, the interactions among Rb, p16, E2F1, HDAC1 proteins in gallbladder carcinoma cell line （Mz-ChA-1） were studied. It was found that there were Rb and E2F1 proteins in the precipitates with anti-HDAC1, and there were HDAC1 and E2F1 proteins in the precipitate with anti-Rb. It was concluded that there are specific interactions among Rb, HDAC1 and E2F1 proteins in gallbladder carcinoma, indicating the existence of the direct Rb/E2F1/HDAC1 signal transduction pathway. There is no direct relationship between p16 proteins with Rb, HDAC1, and E2F1 proteins.     

人乳头瘤病毒16 E7基因的原核表达及表达条件的优化

目的:构建pET-28a(+)-HPV16 E7原核表达质粒,并对其表达条件进行优化,为进一步研究HPV16E7致病机制及HPV疫苗提供相应的技术平台。方法:应用基因重组技术,构建pET-28a(+)与HPV16 E7(标准株和湖北株)的原核表达重组质粒,用PCR、限制性内切酶酶切和核酸序列检测对重组质粒DNA进行鉴定,将其转入宿主菌E.coliBL21(DE 3)进行诱导以表达蛋白;SDS-PAGE及Western blot检测鉴定表达蛋白的分子量及特异性。优化诱导表达的条件,如温度、IPTG浓度、适用的培养基,探讨不同温度下蛋白的表达形式;纯化回收HPV16 E7蛋白。结果:PCR、限制性内切酶酶切和核酸序列检测证实重组质粒中插入的目的基因,其DNA大小、方向、插入位点和阅读框架均正确;HPV16 E7(标准株)蛋白得到高效原核表达,最佳表达条件:表达HPV16 E7的工程菌BL21(DE 3)的最佳诱导温度是37℃,诱导剂IPTG的浓度为0.3-0.4 mmol/L,最佳培养基为1.5倍LB。结论:pET-28a(+)-HPV16 E7标准株和湖北株重组载体构建成功,人乳头瘤病毒16 E7标准株获得高效原核表达。