人直肠腺癌细胞系—HR-8348的建立和生物学特性

从一例男性直肠腺癌患者手术中,取得原发癌肿组织,经离体培养建成细胞系,定名为HR—8348。对本系细胞进行生物学特性的观察分析结果是:细胞在对数增殖期的倍增时间为36.05小时,细胞分裂指数在第三天达高峰,为44.5‰。细胞形态以多边形上皮样细胞为主。在电子显微镜下可见细胞核及核仁呈恶性细胞特征,细胞表面有微绒毛,细胞核形态不规则,胞浆中核蛋白体较丰富,可见分泌颗粒,在少数细胞可找见张力     

人类黑色素细胞瘤永生化细胞系的建立及生物学特性鉴定

目的 建立黑色素细胞瘤细胞系并研究其生物学特性.方法 取脑膜黑色素细胞瘤组织原代与传代培养,建立永生化细胞系并检测生物学特性,采用HE染色法、倒置显微镜与透射电子显微镜观察细胞形态及超微结构,采用细胞计数法绘制生长曲线与计算倍增时间,观察细胞染色体核型(染色体显带法)与动物成瘤性,采用SP免疫组织化学法检测Vimentin、S100、HMB45和CK蛋白表达.结果 临床病理诊断为颅内原发黑色素细胞瘤,建立的黑色素细胞瘤细胞系呈上皮样细胞生长方式,胞内有黑色素颗粒,可见细胞克隆集落;透射电子显微镜见黑色素小体,倍增时间36 h,染色体数量32～110条,细胞系裸鼠皮下移植瘤实验提示未成瘤,且免疫组织化学法染色发现细胞系表达Vimentin为阳性,HMB45、S100、CK为阴性.结论 成功建立了黑色素细胞瘤细胞系,有良性肿瘤生物学行为特征.     

人消化道癌裸鼠移植瘤株及体外细胞系的建立

目的利用裸鼠建立人消化道癌的移植瘤株.利用荷瘤鼠皮下移植瘤组织建立人消化道癌的细胞系.方法将手术切除的新鲜肿瘤组织剪碎后植入BALB/C裸鼠皮下成瘤.将荷瘤鼠皮下的肿瘤组织取出剪碎后移入培养瓶中,用含15～20%胎牛血清的1640培养基进行培养,建立体外细胞系.结果建成消化道移植瘤株6株,其中直肠癌2株,结肠癌1株,直肠癌肝转移灶1株,胃癌1株,肝细胞癌1株.建成二例细胞系,分别为直肠癌细胞系(HRC-00)和肝细胞癌细胞系(HHC98).结论建成的消化道癌移植瘤株和细胞系均具有人原发癌的结构特点及生物学行为,可作为人消化道癌的体内外研究对象.     

人直肠腺癌细胞系-HR-8348的建立和生物学特性

从一例男性直肠腺癌患者手术中,取得原发癌肿组织,经离体培养建成细胞系,定名为HR-8348。对本系细胞进行生物学特性的观察分析结果是:细胞在对数增殖期的倍增时间为36.05小时,细胞分裂指数在第三天达高峰,为44.5％。细胞形态以多边形上皮样细胞为主。在电子显微镜下可见细胞核及核仁呈恶性细胞特征,细胞表面有微绒毛,细胞核形态不规则,胞浆中核蛋白体较丰     

子宫不典型平滑肌瘤的超微结构观察

目的 了解电镜下子宫不典型平滑肌瘤细胞的超微结构特点.方法选择光镜诊断的4例子宫不典型平滑肌瘤组织标本,在电镜下观察细胞的超微结构.结果 子宫不典型平滑肌瘤的细胞排列不规则;细胞核大、核的形态极不规则、核切迹很深;核内染色质明显、可见核小体;核仁粗大明显、部分呈网状或同心圆层状分布;胞质内的细胞器较丰富、粗细肌丝排列紊乱、无明显密斑密体.结论 子宫不典型平滑肌瘤起源于平滑肌细胞,是平滑肌瘤的异常表型,呈现细胞分化不成熟和合成功能增强的恶性超微病理特点.     

肾恶性横纹肌样瘤临床病理分析及超微结构观察

目的:探讨肾恶性横纹肌样瘤(MRTK)的临床病理表现及超微结构特点。方法:用光镜、免疫组化及电镜等方法观察其病理组织学特点、免疫组化表达及超微结构。结果:光镜的典型特点是肿瘤细胞弥漫性排列,呈圆形、椭圆形及不规则形,胞质丰富,嗜酸性,部分胞质内可见透明状小体,细胞核圆形或椭圆形,核膜厚,核仁清楚,有的细胞核呈空泡状。部分核偏向一侧似浆细胞样。细胞内外见红染的包涵体。免疫组化显示肿瘤可表达多种抗原。电镜观察特异性表现是胞质内见中间丝及圆形不规则形纤维状或轮状小体。结论:肿瘤细胞弥漫排列呈浆细胞样,免疫组化多方向表达,可向神经性、上皮性、肌性等方向分化。电镜下胞质内中间丝及纤维轮状小体是特异性诊断标志。     

人小细胞肺癌多药耐药细胞系H446/VP的建立及其生物学性状

目的建立人小细胞肺癌足叶乙甙多药耐药细胞系H446/VP,进行生物学性状的研究,分析其耐药特点.方法采用高浓度反复间歇诱导的方法,建立人小细胞肺癌足叶乙甙多药耐药细胞系H446/VP,并对其光镜形态、超微结构、生长特点进行了研究;流式细胞术对细胞周期分布的变化进行了分析;采用MTT法分析其耐药谱. 结果 H446/VP的光镜形态与亲代细胞相似,但透射电镜畸形核多见,胞浆内有较多的线粒体、核糖体及滑面内质网;H446/VP的生长速度减慢,细胞倍增时间为35.7 ,比亲代细胞系长7.9 ;其细胞周期分布G0/G1期细胞增多,为65.12±1.67%,G2/M细胞为3.99±1.49%,较亲代细胞减少;MTT法耐药谱分析表明,该细胞系对VP-16的耐药倍数为17.8,除此之外,该细胞系对ADR、NVT、VCR、MMC、CDDP等药物也产生了交叉耐药,耐药倍数分别为8.9、5.4、4.7、4.4、1.7,对5-FU、MTX、CTX仍保持敏感. 结论本实验建立了稳定的人小细胞肺癌多药耐药细胞系H446/VP,可用于下游实验.     

低剂量131I标记的抗癌胚抗原抗体C50联合5-FU对结直肠癌裸鼠移植瘤生长的影响

背景与目的:癌胚抗原 (CEA)在结直肠癌组织中表达率高达 90%以上,本研究拟探讨低剂量 131I标记的抗 CEA单抗 C50( 131I- C50)及低剂量 131I- C50联合 5-氟尿嘧啶( 5- FU)对人结直肠癌移植瘤生长的影响.方法:建立表达 CEA的人 LoVo结直肠癌裸鼠移植瘤模型.接种第 9天,分别采用 5- FU、2775kBq 131I- C50及 5- FU联合 131I- C50尾静脉注射治疗荷瘤裸鼠.尾静脉给药后第 7天,每组各随机处死 2只荷瘤裸鼠,观察肿瘤细胞超微结构改变及组织病理学改变.计算各组裸鼠肿瘤体积、群体倍增时间及抑瘤率,比较接种第 30天的肿瘤体积.结果:对照组、5- FU组、131I- C50治疗组和 131I- C50联合 5- FU组接种第 30天肿瘤体积分别为 (9 765.19± 792.21)mm3、(6 533.75± 601.14)mm3、(5 413.57± 415.46)mm3和 (3 865.23± 263.57)mm3,四组之间差异均有显著性( P< 0.001);四组肿瘤群体倍增时间依次延长,分别为 3.07、3.09、3.18和 3.14天;后三组抑瘤率依次增大,分别为 30.97%、42.33%和 59.04%.结论:低剂量 131I- C50可抑制结直肠癌裸鼠移植瘤的生长,低剂量 131I- C50联合 5- FU可以增强抑制肿瘤生长的效果.     

两株人乳癌细胞系的建立及其生物学特性的研究

由裸鼠异种接种成功,并经4次传代的两份不同来源的人乳癌组织中分离培养出两株在体外能长期传代培养的人乳癌细胞系.分别命名这两株细胞系为:BICR-y-9601和BI-CR-y-9602.核型分析表明,所有的染色体均为人染色体.BICR-y-9601细胞的染色体数为亚二倍体,其中63%的细胞染色体数在44～5O之间,其中染色体为48条的细胞最多.BICR-y-9602细胞的染色体数为亚三倍体,80%的细胞具有50～58条染色体.该两株细胞表现出不同的生物学特性,其中BICR-y-9601细胞主要为半贴壁生长的圆球型细胞,其倍增时间为25小时.BICR-y-9602细胞为贴壁生长的多形性的细胞,其倍增时间为30小时.同时,我们用FACS分析了这两株细胞所处的细胞周期的情况.扫描电镜结果显示这两     

人鼻咽癌顺铂耐药细胞系建立及其与凋亡关系的研究

目的:建立耐顺铂(DDP)人鼻咽鳞癌耐药细胞系HNE1/DDP,探讨其与凋亡的关系.方法:以DDP为诱导刺,采用浓度递增法诱导建立人鼻咽癌耐药细胞系HNE1/DDP,测定药物敏感性,绘制细胞生长曲线和分析细胞周期分布,TUNEL法测定凋亡指数,免疫细胞化学法检测凋亡相关蛋白p53、Bc1-2和Bax的表达.结果:成功建立DDP耐药细胞系HNE1/DDP,耐药指数为5.57;细胞增殖减慢,倍增时间较亲代延长(41.85h vs 37.44h),P=0.035;细胞周期分布改变,G0/G1期细胞增多,S期、G2/M期细胞减少;TUNEL法显示,耐药细胞较亲本细胞凋亡减少,凋亡细胞指数分别为3.80±0.26和21.43±0.11,x2=13.211,P=0.001;免疫细胞化学法显示,其Bax表达减少,阳性细胞指数分别为1.52±0.16和16.05±5.11,x2=11.966,P=0.001.结论:建立了稳定的人鼻咽癌耐药细胞系HNE1/DDP,其耐药机制与凋亡减少有关.     

丁酸钠对人大肠癌细胞株SW1116动力学影响和超微结构改变的初步研究

用丁酸钠处理人大肠编辑部中细胞株ＳＷ１１１６，观察其对瘤细胞增殖动力学影响及超微结构的发迹经丁酸钠处理后的细胞用流式细胞仪检测可见Ｇ０／Ｇ１期细胞百分比增加，增殖指数下降，将诱导后细胞种植裸鼠皮下，瘤块形成受到抑制电镜观察诱导后细胞，超微结构呈良好分化改变。     

双歧杆菌对小鼠黑素瘤B16细胞增殖和细胞周期的影响

目的：探讨双歧杆菌对小鼠恶性黑素瘤B16细胞的增殖及细胞周期的影响。方法：用MTT比色法测定B16细胞活力,用H-E染色法观察B16细胞形态,用流式细胞术测定B16细胞周期。结果：1×10^9cfu/ml的双歧杆菌作用B16细胞24h后,细胞增殖抑制率为36.69%;1×10^8cfu/ml的双歧杆菌作用B16细胞72h后,抑制率为63.47%;由此可见,双歧杆菌对B16细胞具有显著的增殖抑制作用。经双歧杆菌处理后,B16细胞核浆比例下降,细胞变小,核仁减少,说明B16细胞胞质和细胞核都趋于成熟化;经双歧杆菌处理后B16细胞周期阻滞于G1期[对照组和处理组G1期细胞比例分别为（41.22±1.15）%和（67.25±3.13）%],但凋亡作用不明显[处理组凋亡率为（1.87±0.04）%]。结论：双歧杆菌通过影响细胞周期抑制B16细胞的生长。     

人肝细胞癌细胞系-HHC-98的建立及生物学特性

目的利用人肝细胞癌的裸鼠皮下移植瘤组织在体外建立一人肝细胞癌细胞系HHC-98,并对其一般生物学特性进行研究.方法将剪碎的癌组织移入培养瓶中,用加有15%～20%胎牛血清的1640培养液建成该细胞系,采用电镜观察细胞的超微结构,采用流式细胞术分析DNA含量及细胞周期分布,采用放免分析和免疫组化方法检测甲胎蛋白表达,利用染色体G显带方法进行遗传学分析.结果 HHC-98具有上皮细胞特有的桥粒结构和张力原纤维,形态为典型的上皮细胞形态,其G-6PD同功酶与人肝细胞癌细胞BEL-7402和BEC-7405相同.无血清培养48小时后,培养液中AFP呈现阳性.免疫组化染色细胞AFP及CEA表达均阳性.染色体检测HHC-98细胞均为异倍体,染色体结构异常复杂,从核型分析中发现有5个恒定出现的异常染色体,其中明确的为4q+.该细胞经皮下及腹腔接种均可使裸鼠致瘤.结论 HHC-98具有人肝细胞癌的生物学特性,可作为人肝细胞癌体外研究的对象.     

FTEN在肝癌中表达缺失的意义及其体外转染对人肝癌细胞系的作用

目的探讨PTEN表达与肝细胞癌发生、发展的关系,观察体外转染外源性PTEN对肝癌细胞的生长、细胞周期和超微结构的影响.方法检测PTEN在肝癌组织和肝癌细胞系中的表达缺失情况,以观察该基因与肝癌病理分级、转移和预后的关系.将含PTEN的反转录病毒载体及空载体转入人肝癌细胞系HHCC,观察转染前后细胞的生长、超微结构、细胞周期及裸鼠致瘤能力改变情况.结果肝癌中PTEN表达缺失率为30.16%(19/63),显著高于正常肝组织0(0/8)和肝硬化组织7.15%(1/14).随着恶性程度的增高,PTEN表达缺失率随之增加.PTEN表达缺失与转移及预后显著相关.PTEN在人肝癌细胞系hHCC中也不表达.将抑癌基因PTEN转入后,hH-CC细胞生长明显受到抑制,细胞超微结构失去部分恶性表型特征,细胞周期由G1→S0期受抑制,并出现凋亡峰,体外成瘤能力下降.结论抑癌基因PTEN失表达多见于肝细胞肝癌进展期,并与肝细胞肝癌分化程度、是否转移以及临床预后相关;体外PTEN的转入可以明显地抑制HHCC生长、体外成瘤能力.     

诱导方法对多药耐药细胞系A549/Gem建立的影响

目的:探讨诱导方法对多药耐药细胞系A549/Gem建立的影响.方法:以A549细胞为原代细胞,采用4种方法,建立多药耐药细胞系A549/Gem-1、A549/Gem-2、A549/Gem-3和A549/Gem-4(统称A549/Gem).比较其诱导前后耐药指数和耐药谱、形态学特征、倍增时间、细胞周期分布及TPS、SCC、CEA、CYFRA21-1、ERCC1和RRM1 mRNA表达的变化.结果: 4种细胞对吉西他滨的耐药指数分别为 38.277、12.268、115.297和25.679,均获得多药耐药性,但耐药谱差别较大.其中,A549/Gem-1和A549/Gem-4细胞的G0-G1期细胞比例较A549细胞降低.A549/Gem细胞的倍增时间较A549细胞缩短,形态学变化显著,CEA、TPS、SCC和CYFRA21-1表达变化不大,RRM1和ERCC1 mRNA相对表达量增多.结论:A549/Gem细胞获得多药耐药性,诱导方法对其建立影响较大.     

磷灰石纳米粒子体外致肝癌细胞的胀亡

[目的]研究磷灰石纳米粒子体外抗肝癌作用的机理。[方法]采用形态学观察和MTT法检测磷灰石纳米粒子作用于人肝癌细胞系Bel-7402的量效和时效关系。流式细胞仪分析细胞周期的时相变化。透射电镜下观察细胞超微结构的改变。[结果]磷灰石纳米粒子在体外对人肝癌细胞系Bel—7402具有明显的抑制作用，并呈现良好的量效和时效关系。肝癌细胞的生长阻滞于G1期。细胞体积增大，胞质空泡化，染色质凝集，脑浆溶解。[结论]磷灰石纳米粒子具有体外抗肝癌作用，细胞增殖阻滞于G1期，阻断细胞周期的进展，导致癌细胞胀亡。     

Bcap—37人乳腺癌细胞系对血卟啉衍生物（HPD）的吸收,分布与排泄

本文报道了Bcap—37人乳腺癌细胞系在体内及体外对血卟啉衍生物(HPD)的吸收、分布与排泄。~3H—HPD经腹腔注入载瘤裸鼠体內后48—72小时,其体内分布含量依次为肝脏>脾脏>肾脏>小肠>肿瘤>皮肤>肌肉>脑组织>血液,表明HPD在体内不同器官的分布有差异性,对Bcap—37乳腺癌细胞有一定的亲和力,但并非特异性集聚于肿瘤组织。体外观察到HPD主要分布于Bcap—37乳腺癌细胞胞质内,细胞核对HPD无明显摄取,提示胞质内一些细胞器是光敏损伤的靶部位。     

冬凌草甲素诱导人食管癌SHEE细胞凋亡及其线粒体改变

目的:研究冬凌草甲素(oridonin, ORI)诱导人食管癌SHEE细胞凋亡的效应及其机制.方法:用不同浓度ORI分别作用人食管癌SHEE细胞株不同时间,噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞生长抑制率;透射电镜观察细胞超微结构及改变;原位末端标记/碘化吡啶(TUNEL/PI)双染流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期.结果:ORI对SHEE细胞的生长有显著的抑制作用,64μg/ml的ORI作用24h、48h及72h对SHEE细胞生长的抑制率分别为78.7%、89.5%及91.7%;32μg/ml的ORI作用2h后,电镜下可见线粒体在细胞核出现变化之前已发生形状改变,作用8h后,线粒体内部结构消失,细胞核呈细胞凋亡的典型改变;作用24h后,流式细胞仪检测凋亡率为47.7%,细胞周期图像显示明显的凋亡峰.结论:ORI可诱导SHEE细胞凋亡,其机制可能与线粒体凋亡途径有关.     

人支气管上皮细胞恶变过程中生物学特性及超微结构的研究

目的:探讨烟草特异性亚硝胺(NNK)诱发人支气管上皮细胞(BEAS-2B)恶性转化过程中生物学特性及超微结构变化情况.方法:以500μg/ml的NNK处理BEAS-2B细胞24小时后,细胞在体外连续传代培养,在此过程中观测细胞生物学特性及超微结构的变化情况.结果:第5代细胞显示抗血清生长,细胞在裸鼠体内不成瘤.与对照细胞相比,细胞及细胞核形态、细胞器形态及数量无显著变化;第15代细胞在半固体琼脂中克隆形成率(0.032%)为对照细胞(0.0023%)的13.9倍,细胞在裸鼠体内不成瘤.细胞超微结构显示转化细胞特征;第25代细胞在裸鼠体内成瘤,组织学证实为鳞癌(Ⅰ～Ⅱ级).细胞超微结构显示具有明显的肿瘤细胞特征.结论:浓度为500μg/ml的NNK可成功诱发BEAS-2B细胞恶性转化,在此过程中,细胞超微结构及生物学特性逐步改变,提示人支气管上皮细胞恶性转化过程是一个多步骤、多阶段的发展过程.     

棱术合剂诱导人胃癌细胞凋亡实验研究

目的:研究棱术合剂对胃癌细胞凋亡的诱导作用,进一步阐明棱术合剂治疗胃癌的作用机理。方法:选用棱术合剂,顺铂与人胃癌细胞系BGC823 共同孵育48 小时后,应用光镜、电镜进行形态学观察,提取细胞总DNA 经琼脂糖凝胶电泳,分析电泳条带。细胞DNA 经碘化丙啶染色后,用流式细胞仪分析细胞周期变化,测定凋亡指数,增殖指数。结果:细胞经棱术合剂、顺铂处理后,染色质浓缩,致密,深染,沿核膜下凝聚,可见凋亡小体形成,细胞DNA 电泳呈现梯度状条带,细胞周期分析G1 峰前二者均出现明显的细胞凋亡峰,凋亡指数分别为43 % 、45 % ;增殖指数分别为33 % 、32 % 经统计学处理,二者无显著性差异。结论:棱术合剂可诱导人胃癌细胞系BGC823 发生细胞凋亡