大黄酸抑制肾间质成纤维细胞激活的实验研究

目的 研究大黄酸(Rhein)抑制转化生长因子β1(TGF-β1)激活大鼠肾间质成纤维细胞(NRK-49F)作用及探讨大黄治疗肾脏病的作用机制。方法 以NRK-49F细胞为研究对象，采用细胞计数观察细胞生长，流式细胞仪分析细胞周期变化。α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)作为细胞活化指标，同时检测纤连蛋白(FN)表达的水平以评价细胞外基质合成的变化。结果 TGF-β1具有促进NRK-49F增殖的作用，大黄酸呈时间依赖性和剂量依赖性抑制该增殖作用。TGF-β1能够促进NRK-49F进入S期和G2/M期，而经大黄酸作用的细胞主要是G0/G1期细胞。大黄酸呈剂量依赖性显著抑制TGF-β1诱导的NRK-49F细胞α-SMA蛋白表达水平，同时，大黄酸还可减少TGF-β1诱导的NRK-49F细胞FN 蛋白的表达水平。结论 大黄酸能够阻止TGF-β1诱导的肾间质成纤维细胞由G0/G1期进入S期和G2/M期，抑制该细胞的增殖。同时，大黄酸还具有抑制TGF-β1激活肾间质成纤维细胞的作用，并拮抗TGF-β1导致的FN表达与合成。     

成纤维细胞与肾间质纤维化

现有的研究表明，成纤维细胞在肾间质纤维化中发挥着重要作用，本文着重概述了肾间质中成纤维细胞与细胞外基质的相互关系及其在肾间质纤维化中的作用。     

转化生长因子β1诱导肾间质成纤维细胞表型转化及其对结缔组织生长因子基因表达的影响

目的 研究转化生长因子β1（transforming growth factor beta-1,TGF-β1）诱导大鼠正常肾间质成纤维细胞（NRK-49F）表型转化过程中结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）基因表达的变化.方法 以不同浓度的TGF-β1（0、0.5、1、2、5、10 ng/ml）刺激NRK-49F细胞,分别应用MTT比色法、Western Blot、Northern Blot方法,检测TGF-β1刺激后肾间质成纤维细胞的增殖、Ⅰ型、Ⅲ型前胶原mRAN的表达、细胞表型标志物α-SMA mRNA及蛋白质表达、CTGFmRNA的表达变化.结果 1 ng/ml浓度以上TGF-β1能显著促进NRK-49F细胞增殖,上调Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达水平,诱导肌成纤维细胞表型标志α-SMA mRNA及蛋白质的表达,显著上调CTGF mRNA的表达水平（P＜0.01或P＜0.05）;以上效应均呈浓度依赖性.同时CTGF mRNA表达水平的增高与细胞表型转化的程度相一致.结论 TGF β1能诱导肾间质成纤维细胞发生表型转化,并促进了细胞增殖及细胞外基质的合成;该效应与TGF β1显著上调CTGF的基因表达一致.     

成纤维细胞与肾间质纤维化

现有的研究表明，成纤维细胞在肾间质纤维化中发挥着重要作用，本文着重概述了肾间质中成纤维细胞与细胞外基质的相互关系及其在肾间质纤维化中的作用。     

蛋白酶体抑制剂对肾间质成纤维细胞增殖、凋亡及其相关蛋白的影响

目的 探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导下的大鼠肾间质成纤维细胞（NRK-49F）增殖、凋亡及其相关蛋白的影响。 方法 用5 μg/L的TGF-β1作用于NRK-49F。不同浓度（0~5 μmol/L）MG-132预处理NRK-49F细胞后,MTT法检测细胞增殖;应用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率;DNA凝胶电泳法观察细胞的凋亡情况;Western印迹检测p53、p27、p21、caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白的变化。 结果 TGF-β1（5 μg/L）可促进NRK-49F细胞增殖,而MG-132（0.25~5 μmol/L）呈剂量依赖性地抑制这种效应,使细胞生长停滞在G1期。TGF-β1（5 μg/L）单独不能诱导NRK-49F的凋亡（3.880%±0.365%比4.723%±1.582%）,而MG-132（0.10、0.25、0.50、0.75、1.00、2.50 μmol/L）预处理可呈剂量依赖性地促进细胞凋亡（调亡率分别为8.8％、18.7％、22.8％、31.3％、37.7％、38.9％）。MG-132（2.5 μmol/L）+TGF-β1组及 MG-132（2.5 μmol/L）组在DNA电泳中呈典型的梯状条带现象。Western印迹结果显示,MG-132可剂量依赖性地激活TGF-β1诱导的细胞周期及凋亡相关蛋白p53蛋白表达,促进caspase-3的活性片段产生,Bcl-2表达下调,并能使Bax和p21表达上调,但对p27没有明显的影响。 结论 MG-132可抑制TGF-β1诱导的肾间质成纤维细胞增殖,并促其凋亡。该作用可能与MG-132对细胞周期及凋亡相关蛋白p53、p21、caspase-3、Bcl-2和Bax的调节有关,提示泛素蛋白酶体抑制剂可能成为将来防治肾间质纤维化的一个潜在的治疗手段。     

增殖性肾小球肾炎中碱性成纤维细胞生长因子的表达及其作用

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）在人类增殖性肾小球肾炎（ＰＧＮ）中的表达及作用。方法采用原位杂交、免疫组化和放免测定方法检测肾活检组织中的ｂＦＧＦｍＲＮＡ及蛋白质表达、肾小球内细胞外基质（ＥＣＭ）面积和有核细胞数、层粘蛋白（ＬＮ）和前胶原Ⅲ（ＰＣⅢ）含量。结果在以细胞增殖和ＥＣＭ积聚为特征的ＰＧＮ组中ｂＦＧＦ表达水平、ＬＮ和ＰＣⅢ含量均显著高于非增殖性肾小球肾炎（ＮＰＧＮ）组和正常组。结论过度表达的ｂＦＧＦ参与肾小球内细胞增殖和ＥＣＭ积聚，从而影响肾小球肾炎和肾小球硬化进程。     

转化生长因子β1对肾间质成纤维细胞胶原表达的影响

目的　探讨肾间质纤维化的机制。方法　体外培养大鼠肾间质成纤维细胞,采用Ｌ３Ｈ脯氨酸掺入法测定胶原合成及ＲＴＰＣＲ 技术观察转化生长因子β（ＴＧＦβ１） 对体外培养的大鼠肾间质成纤维细胞Ⅰ和Ⅲ型胶原ｍＲＮＡ 表达的影响。结果　ＴＧＦβ１ 可促进肾间质成纤维细胞的３Ｈ脯氨酸掺入,且随着ＴＧＦβ１ 剂量的增加,３Ｈ脯氨酸掺入量增加,胶原合成增多。ＴＧＦβ１ 可促进Ⅰ和Ⅲ型胶原ｍＲＮＡ 的表达,且在ＴＧＦβ１ 浓度２ ～１０ ｎｇ／ｍｌ 时ｍＲＮＡ 的表达量与浓度呈现正相关;在６ ～４８小时内与时间呈现正相关。结论　ＴＧＦβ１ 可能通过促进肾间质成纤维细胞胶原的合成及ｍＲＮＡ 的表达而参与肾间质纤维化。     

抗Fas抗体诱人肾间质成纤维细胞凋亡

目的：检测人肾间质成纤维细胞(hRIFs)，Fas表达并以抗Fas抗体诱导hRIFs调亡，方法：分离人肾肾乳头组织培养hRIFs，以细胞形态，免疫细胞化学染色和左旋缬氨酸选择性培养基培养作细胞鉴定，采用RT－PCR，免疫细胞化学染色检测正常hRIFsFas表达，不同r干扰素浓度(r-IFN,50U/ml,100U/ml,1500U/ml和2000U/ml)与hRIFs孵育48h后，采用Northern杂交，Western印迹和流式细胞术检测Fas表达，经r-IFN预处理（500U／ml,48h)的hRIFs,加入抗Fas抗体（IgM,0.5mg/ml)作用12h，以形态学，DNA电泳和流式细胞术观察细胞凋亡，结果：培养细胞呈梭形，波形蛋白（＋），上皮细胞膜抗原（一），选择性培养基内逐渐死亡，正常hRIFs有Fas mRNA和蛋白表达，r-IFN可明显上调其表达水平，直接免疫荧光流式细胞术测定未加r-IFN的hRIFs中Fas表达阳性细胞占5．91％，上述浓度r-IFN作用后依次为59．44％，69．39%，70．06％和75．47％，呈剂量依赖性增强，抗Fas抗体可引起高表达Fas的hRIFs核固缩，核断裂，DNA电永呈现梯形结构，流式细胞术呈现二倍体凋亡细胞，对照组凋亡细胞百分数为7．09％，上述浓度度抗Fas抗体作用后依次为24．35％，27．89％，29．38％和31．21％，结论：Fas表达于hRIFs且可被r-IFN显著上调，抗Fas抗体能够诱导高表达Fas的hRIFs凋亡。     

成纤维细胞生长因子2对凋亡成纤维细胞中S100蛋白表达的影响

目的观察热损伤后成纤维细胞凋亡模型中,外用成纤维细胞生长因子2(FGF2)对凋亡细胞S100蛋白表达的影响。方法用含体积分数5％小牛血清的DMEM溶液培养已大致融合的成纤维细胞24 h,置入45℃恒温水浴锅中孵育10 min,建立热损伤细胞模型(热损伤组,3瓶),在上述基础上立即加入FGF2(FGF2组,10μg/L,3瓶)。两组细胞继续常规培养30 min后作免疫荧光双标记,利用激光扫描共聚焦显微镜观察细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)和增殖细胞核抗原(PCNA)以及S100蛋白、磷酸酪氨酸蛋白(P-tyr)、src基因产物蛋白同源的酪氨酸激酶催化功能区-2(SH2-P)表达的变化。结果热损伤组细胞可以同时表达caspase-3蛋白和PCNA两种抗体, 其灰度值分别为140±31、52±8;FGF2组细胞亦见上述两种抗体表达,灰度值分别为75±28、131± 17,PCNA表达量与热损伤组比较,差异有统计学意义(P<0．05)。同时,热损伤组成纤维细胞S100、 P-tyr蛋白、SH2-P蛋白表达阳性,FGF2组细胞S100蛋白和SH2-P的表达明显较弱(P<0．05)、P-tyr 的表达略有减弱。结论离体情况下,热损伤可诱导成纤维细胞凋亡信号的表达;S100蛋白在 FGF2对热损伤导致的凋亡成纤维细胞的增殖和抗凋亡作用中扮演重要角色。     

核心蛋白聚糖对肾间质成纤维细胞特性作用的研究

目的 通过基因转染技术,将核心蛋白聚糖(DCN)转染成纤维细胞,观察DCN在成纤维细胞中的表达,及其表达的DCN对肾间质成纤维细胞特性的影响,探索肾脏疾病基因治疗的途径。方法 在成功构建重组逆转录病毒载体pL(DCN)SN的基础上,采用LipofectAMINE脂质体介导质粒DNA转染逆转录病毒包装细胞PA317,进行逆转录病毒的包装。以NIH 3T3细胞作为指标靶细胞进行病毒滴度测定。重组逆转录病毒在Polybrene的辅佐下感染正常大鼠肾间质成纤维细胞,并应用G418筛选。所得抗G418细胞克隆FB(LDCNSN)应用PCR和逆转录-PCR分析外源基因的整合和表达。采用Western印迹检测转基因细胞FB(LDCNSN)培养细胞上清液中DCN蛋白的检测。应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和流式细胞仪分别测定细胞增殖和细胞周期,观察DCN对肾间质成纤维细胞增殖和细胞周期的影响。结果 重组逆转录病毒载体pL(DCN)SN的质粒DNA经LipofectAMINE介导,转染PA317包装细胞。G418筛选出抗性克隆,扩增。收集含重组逆转录病毒细胞上清液,在Polybrene的辅佐下感染大鼠肾间质成纤维细胞,并获得抗G418的细胞克隆FB(LDCNSN)。PCR和逆转录-PCR分析外源基因DCN的整合和表达,电泳可见1.1kb的条带。Western印迹分析FB(LDCNSN)细胞培养上清液中DCN蛋白质,证实FB(LDCNSN)表达DCN蛋     

高浓度氨基酸对大鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质合成的影响

目的 观察高浓度氨基酸、高糖、高浓度氨基酸高糖混合物对系膜细胞增殖及细胞外基质合成的影响。 方法 采用噻唑蓝（MTT）法、流式细胞仪法观察甘露醇（13.3 mmol/L）、高浓度氨基酸(较DMEM氨基酸浓度高1.5~6倍，渗透浓度13.3 mmol/L)、高糖（30.5 mmol/L）、高浓度氨基酸高糖混合物分别对系膜细胞增殖的影响；RT-PCR方法检测转化生长因子β1（TGF-β1）、Ⅳ型胶原(ColⅣ)和纤连蛋白（FN）mRNA的表达水平； 酶联免疫法检测TGF-β1水平；Western印迹法及放射免疫法测定ColⅣ、FN蛋白表达。 结果 （1）高浓度氨基酸、高糖、高浓度氨基酸高糖混合物均能刺激系膜细胞增殖，且具有时间依赖性，作用48 h时细胞增殖最明显；而高浓度氨基酸高糖混合物刺激细胞增殖作用最强。（2）高浓度氨基酸高糖混合物与细胞作用48 h，能明显影响细胞周期，使G0/G1期细胞减少，S期细胞增加。（3）高浓度氨基酸、高糖、高浓度氨基酸高糖混合物均能上调系膜细胞TGF-β1的基因表达；促进 TGF-β1蛋白合成增加[单位ng&#8226;ml－1&#8226;（105细胞）－1]（3023±85、3163±80、3321±85比1506±63，均P < 0.05)。（4）高浓度氨基酸、高糖、高浓度氨基酸高糖混合物均能上调系膜细胞ColⅣ、FN的基因表达；促进ColⅣ蛋白合成增加[单位ng&#8226;ml－1&#8226;（105细胞）－1]（16.78±2.56、18.65±2.56、22.83±2.45比10.22±2.54，均P < 0.01)；也可促进FN蛋白合成增加(18.47±2.34、13.58±3.13、17.98±2.56比8.22±2.54，均P < 0.05)。结论 高浓度氨基酸有类似于高糖样促系膜细胞增殖作用，可能通过TGF-β1通路促进细胞活性增加，细胞外基质分泌增多，且与高糖有协同作用。     

Assessment of extracellular matrix components in renal biopsy specimens showing various degrees of mesangial expansion

Background. Compositional changes in the extracellular matrix (ECM) and the role of transforming growth factor β₁ (TGF-β₁) in the process of mesangial expansion have been widely investigated in experimental animals, but much less attention has been focused on such changes in human renal biopsy specimens, particularly in regard to quantitative studies. Methods. In 28 biopsy specimens with varying degrees of mesangial expansion, we performed conventional ECM staining and immunohistochemical staining for ECM components, including cellular fibronectin containing extra domain A (EDA(+)cFn), tenascin, and type IV collagen, as well as investigating mRNA and protein expression of TGF-β₁. Results for ECM components stained were evaluated quantitatively. Results. By multiple regression analyses, mesangial expansion, as quantitated by conventional silver, but not by periodic acid Schiff (PAS) staining, correlated well with EDA(+)cFn accumulation. In specimens with increased mesangial expansion estimated by silver staining, the ratio of the EDA(+)cFn-positive area to the silver-positive area was greater than the ratio of the type IV collagen-positive area to the silver-positive area; the type IV collagen-positive area, however, was always larger than the EDA(+)cFn-positve area. In glomeruli with moderate mesangial expansion, expression of TGF-β₁ mRNA and protein was enhanced. Where mesangial expansion was severe, TGF-β₁ protein and mRNA expression was decreased in the mesangial area but increased in neighboring epithelium and endothelium. Conclusion. Our results indicate that silver staining, but not PAS, reflects the accumulation of mesangial ECM proteins and that while the proportion of EDA(+)cFn is altered in the course of ECM expansion, type IV collagen remains the major ECM component. Expression of TGF-β₁ was suppressed at sites of massive mesangial ECM accumulation. Received: May 12, 1999 / Accepted: June 7, 1999     

CCN3 inhibits deposition of extracellular matrix of glomerular mesangial cells via promoting the expression of microRNA-29a

Objective To investigate the effects of nephroblastoma over-expressed protein (CCN3) on the formation of extracellular matrix (ECM) induced by transforming growth factor -β1 (TGF-β1) in human mesangial cells (HMCs) and its underlying signal transduction mechanism related with microRNA-29(miRNA-29). Methods HMCs were pretreated with different doses of exogenous CCN3 (5 μg/L, 50 μg/L and 500 μg/L) or transfected with pcDNA3.1(+)-CCN3 before exposed to TGF-β1(2 μg/L), to observe the expression of fibronectin (FN), type Ⅰ collagen (COLⅠ) and miRNA-29a, b and c. The mimics or inhibitor of the miRNA-29a were transfected into HMCs to analyze whether miRNA-29a affect CCN3. The expressions of FN mRNA, COLⅠmRNA and miRNA-29 family were detected by real time PCR. The protein expressions of FN and COLⅠ were detected by Western blotting and cell immunofluorescence. Results (1) Compared with the normal control group, the expressions of FN and COLⅠ were up-regulated in TGF-β1 group, while the expressions of miRNA-29a, b, c were down-regulated in TGF-β1 group (all P＜0.05). (2) Compared with the TGF-β1 group, the expressions of FN and COLⅠ were decreased when pretreated with the different doses of exogenous of CCN3 or transfected with pcDNA3.1(+)-CCN3 (all P＜0.05). Meanwhile, the expression of miRNA-29a was significantly increased when pretreated with 50 μg/L and 500 μg/L CCN3 or transfected with pcDNA3.1(+)-CCN3 (all P＜0.05); whereas miRNA-29b and c had no statistical difference (all P＞0.05). (3) Compared with TGF-β1+CCN3 group, the expressions of FN and COLⅠ were decreased in CCN3+TGF-β1+miRNA-29a mimics group (all P＜0.05), whereas the expressions of FN and COLⅠ in CCN3+TGF-β1+miRNA-29a inhibitors group were increased (all P＜0.05). Conclusions CCN3 reduces the TGF-β1-induced production of ECM by the up-regulation of miRNA-29a.     

重组人核心蛋白多糖固相拮抗转化生长因子β1对瘢痕成纤维细胞的刺激作用

目的模拟人体内核心蛋白多糖和转化生长因子β1(TGF-β1)接触方式,观察核心蛋白多糖固相拮抗TGF-β1刺激瘢痕成纤维细胞的效果.方法制备成纤维细胞胶原网格(FPCL)体外三维培养模型,将其分为4组.对照组向FPCL中加入培养液;核心蛋白多糖组向FPCL中混入终浓度2 mg/L的重组人核心蛋白多糖,再加入培养液;TGF-β1组向FPCL中加入含5 μg/L TGF-β1的培养液;TGF-β1+核心蛋白多糖组向FPCL中混入终浓度2 mg/L的重组人核心蛋白多糖,然后加入含5μg/L TGF-β1的培养液.在培养12、24、48、72、96 h时观察各组FPCL的收缩情况,并用蛋白质印迹法与逆转录聚合酶链反应分别检测FPCL中瘢痕成纤维细胞Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白及mRNA表达水平.结果各培养时相点下,TGF-β1组FPCL收缩比对照组明显增强,核心蛋白多糖组FPCL收缩则比对照组明显减弱.TGF-β1组的PAI-1、α-SMA的蛋白及相应mRNA表达水平(3 482±211、4 320±272;0.89±0.15、0.56±0.11)显著高于对照组(1 764±147、1 699±146;0.29±0.06、0.21±0.06,P＜0.01);其余两组相应检测指标与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论重组人核心蛋白多糖混入胶原凝胶,可显著抑制TGF-β1对瘢痕成纤维细胞的刺激作用,表明在体外核心蛋白多糖具有拮抗TGF-β1的作用.提示皮肤组织损伤后,由于创面机械性缺少核心蛋白多糖,TGF-β1活性上调,可能是瘢痕增生的一个重要因素.     

intermedin对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的 观察intermedin( IMD)对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的影响.方法 雄性Wistar大鼠40只,按随机数字表法分为假手术组(n=10,行左输尿管分离术)、模型组(UUO,n=10)、氯沙坦组(n=10)和IMD组(n=10),后3组行左输尿管结扎术.各组大鼠分别于术后第14、21天随机选取5只,腹主动脉采血并留取梗阻侧肾组织之后处死.HE、Masson染色观察肾组织病理变化;比色法测定血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)及新鲜肾组织羟脯氨酸(Pro)含量;免疫组化方法检测肾组织中转化生长因子β1 (TGF-β1)、IMD的表达水平,并进行半定量分析.结果 与假手术组相比,不同时间点UUO组血BUN、Scr、肾组织Pro含量及TGF-β1、IMD的阳性表达均显著升高(P＜0.05);与UUO组相比,氯沙坦组血BUN、Scr、肾组织Pro含量及TGF-β1、IMD表达均降低(P＜0.05),IMD组除IMD表达增加外,其余均降低(P＜0.05).结论 IMD可减轻UUO肾间质纤维化,改善肾功能,其机制可能与拮抗纤维化炎性介质TGF-β1有关.     

没药提取物对人成纤维细胞增殖与胶原mRNA表达影响的实验研究

目的 观察没药提取物对人皮肤Fb生物学特性的影响,探讨其促进创面愈合的可能机制. 方法 从人正常包皮组织中分离并培养Fb,取第3～5代细胞用于实验.(1)将Fb接种至96孔板,按随机数字表法分为对照组,1×10-4、1 ×10-3、1×10-2、1 ×10-1、1、10、1×102 g/L没药水提取物组以及上述7种浓度的没药醇提取物组.对照组用含体积分数0.25％小牛血清的DMEM培养液(简称低浓度血清培养液)培养,各浓度没药水及没药醇提取物组分别用含相应终浓度2种没药提取物的低浓度血清培养液培养.培养48 h,用倒置相差显微镜观察细胞形态,噻唑蓝法测定各组Fb增殖活性(以吸光度值表示).(2)将Fb分别接种于培养瓶和培养皿中,均按随机数字表法分为2组:1 g/L没药水提取物组,用含终浓度1 g/L没药水提取物的低浓度血清培养液培养;对照组,采用低浓度血清培养液培养.培养72 h,分别采用流式细胞仪、实时荧光定量PCR法检测Fb周期与Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达.对数据进行LSD-t检验. 结果 (1)各组细胞均呈长梭形生长,1 g/L没药水提取物组细胞融合较对照组更显著.1×10-3、1×10-2、1×10-1、1、10 g/L没药水提取物组Fb吸光度值分别为0.378±0.032、0.402±0.007、0.390±0.038、0.453±0.036、0.390±0.037,均高于对照组的0.332±0.044,t值分别为2.24、2.93、2.69、5.73、2.71,P值均小于0.05.1×10-4、1×102 g/L没药水提取物组吸光度值分别为0.312±0.048、0.154±0.009,前者与对照组比较,差异无统计学意义(t=2.84,P＞0.05);后者显著低于对照组(t =7.17,P＜0.05).1×10-3、1 ×10-1、1、10、1×102 g/L没药醇提取物组Fb吸光度值显著低于对照组(t值为2.30～24.79,P值均小于0.05).(2)1 g/L没药水提取物组G0/G1期细胞百分比为(74.3±6.3)％,明显少于对照组的(82.2±7.9)％,t=6.77,P＜0.05;S期及G2/M期细胞百分比分别为(16.6±3.4)％、(9.1±1.6)％,明显多于对照组的(13.3±2.3)％、(4.5±0.8)％,t值分别为7.53、6.34,P值均小于0.051 g/L没药水提取物组Fb中Ⅰ型胶原mRNA相对表达量(0.89±0.08)与对照组(1.00±0.06)比较,差异无统计学意义(t =1.17,P＞0.05);Ⅲ型胶原mRNA相对表达量(1.38±0.12)显著高于对照组(1.00±0.05,t=3.81,P＜0.01). 结论 没药水提取物能显著促进Fb增殖,加快Fb细胞周期进程,上调Fb中Ⅲ型胶原mRNA表达,可能与其促进创面愈合的机制相关.     

金雀异黄素对高糖培养下大鼠系膜细胞外基质产生及TGF-β分泌的影响

目的探讨金雀异黄素对体外高糖培养下大鼠系膜细胞（MC）、细胞外基质（ECM）的产生及转化生长因子β（TGF-β）分泌的影响。方法实验分组：对照组：低糖DMEM培养液（不含金雀异黄素）;实验组：高糖DMEM培养液（分别含金雀异黄素0、1μmol／L、5μmol／L、10μmol／L、30μmol／L、50μmol／L）,各组分别培养12、24、36、48h。ELISA法检测细胞培养上清液Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白及TGF-β的含量,RT-PCR法检测TGF-βmRNA的表达。结果在实验的48h内,高糖可促进MC合成Ⅳ型胶原及纤维连接蛋白,分泌TGF-β;高浓度的金雀异黄素（≥5μmol／L）可显著抑制ECM的产生及TGF-β分泌,作用具有时间、剂量依赖效应;且可抑制MCTGF-μmRNA的表达。结论在体外高糖条件下,一定浓度的金雀异黄素可抑制ECM的产生,并从蛋白和基因水平抑制MCTGF-β的表达。