天然与发酵培养冬虫夏草中核苷类成分的含量及其变化

目的比较天然和人工培养冬虫夏草中核苷类成分的含量,并考察其变化.方法用高效毛细管电泳法测定天然和人工冬虫夏草中核苷类成分的含量;考察湿热对冬虫夏草中核苷类成分含量的影响.结果人工冬虫夏草的核苷含量明显高于天然冬虫夏草;新采集的天然冬虫夏草中核苷类物质含量极低,而采集日久者核苷类成分含量较高;湿热可明显增加天然冬虫夏草中核苷类物质的含量,但对人工冬虫夏草中核苷类成分的含量无明显影响.结论天然和人工冬虫夏草中核苷类成分存在一定差异,天然冬虫夏草中核苷类物质可能主要来源于大分子核苷(酸)的降解.     

不同产地人工蛹虫草子实体及冬虫夏草中核苷类成分的比较

目的 测定不同产地人工蛹虫草子实体与天然冬虫夏草中核苷类成分的含量,为人工蛹虫草的质量评价提供依据. 方法 以尿苷、腺苷、虫草素为主要评价指标,采用高效液相色谱法测定9个厂家11批人工蛹虫草样品和4种来源天然冬虫夏草中核苷类成分的含量. 结果 不同产地人工蛹虫草的核苷含量为0.265%～0.870%,冬虫夏草核苷含量为0.168%～0.250%,其中虫草素含量变化较大,而天然冬虫夏草中几乎不含或含有少量虫草素. 结论 产地不同,人工蛹虫草中核苷类成分含量不同,但明显高于天然冬虫夏草中核苷类成分含量,其中腺苷、尿苷含量较为稳定,可为人工蛹虫草的合理开发利用和质量评价提供依据.     

九州虫草的核苷类成分及不同部位两种活性成分含量的分布九州虫草的核苷类成分及不同部位两种活性成分含量的分布

目的快速测定九州虫草中的部分核苷类成分及其主要活性成分虫草素与腺苷的含量，并考察九州虫草不同部位虫草素和腺苷含量的分布。方法用高效毛细管区带电泳法确定野生和人工九州虫草中的核苷类成分,测定虫草素和腺苷的含量，并比较它们在九州虫草不同部位含量的分布。结果蒙山九州虫草中含有至少8种核苷或碱基，其中抗肿瘤活性成分虫草素的含量远高于冬虫夏草和蛹虫草,且人工栽培九州虫草中虫草素的含量又显著高于野生九州虫草。腺苷主要存在于九州虫草子座中，而虫草素则不仅在九州虫草子座中含量甚高，人工栽培九州虫草虫体中虫草素含量也较高。结论天然和人工九州虫草及其不同部位的核苷和碱基成分存在一定差异，九州虫草中的虫草素含量高，具有良好的栽培、药用与开发前景。     

九州虫草的核苷类成分及不同部位两种活性成分含量的分布

目的快速测定九州虫草中的部分核苷类成分及其主要活性成分虫草素与腺苷的含量,并考察九州虫草不同部位虫草素和腺苷含量的分布.方法用高效毛细管区带电泳法确定野生和人工九州虫草中的核苷类成分,测定虫草素和腺苷的含量,并比较它们在九州虫草不同部位含量的分布.结果蒙山九州虫草中含有至少8种核苷或碱基,其中抗肿瘤活性成分虫草素的含量远高于冬虫夏草和蛹虫草,且人工栽培九州虫草中虫草素的含量又显著高于野生九州虫草.腺苷主要存在于九州虫草子座中,而虫草素则不仅在九州虫草子座中含量甚高,人工栽培九州虫草虫体中虫草素含量也较高.结论天然和人工九州虫草及其不同部位的核苷和碱基成分存在一定差异,九州虫草中的虫草素含量高,具有良好的栽培、药用与开发前景.     

高效液相色谱法测定天然冬虫夏草和蛹虫草及其人工培养物中3个核苷类化合物含量

目的:建立快速分析天然冬虫夏草、蛹虫草及其发酵制品中核苷类化合物成分的高效液相色谱法,比较天然冬虫夏草和蛹虫草及其发酵制品中核苷类化合物的含量。方法:采用超声提取的方法,制备供试品溶液。色谱柱为Hypersil C₁₈柱(200 mm×4.6 mm, 5 μm),流动相为 pH 6.5磷酸盐缓冲液-甲醇(85:15),检测波长为260 nm。结果:天然冬虫夏草和蛹虫草及其人工培养物中的3种核苷类成分在25 min内达到基线分离;腺苷在5.0~80.0 μg·ml^-1范围内与峰面积呈现良好的线性关系,相关系数为0.999 3,样品回收率为99.4%;虫草素在4.37~70.0 μg·ml^-1范围内与峰面积呈现良好的线性关系,相关系数为0.999 7,样品回收率为98.3%;腺嘌呤在6.75~108.0 μg·ml^-1范围内与峰面积呈现良好的线性关系,相关系数为0.999 7, 样品回收率为98.9%。结论:天然虫草与人工虫草培养物有相似的核苷类化合物,但在含量上有较大差异。此方法简便、准确,重复性好,可作为判定天然虫草及其培养物质量的一种方法。     

RP-HPLC法测定青海不同产地冬虫夏草中核苷类成分的含量

目的:测定青海不同产地冬虫夏草中主要核苷类成分的含量并比较其差异。方法:采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定不同产地的9份样品中尿苷、鸟苷、肌苷、腺苷、虫草素的含量。色谱柱为Symmetry ShieldTMRp18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水(梯度洗脱),流速为0.2～1.2mL·min-1,检测波长为260nm,柱温为30℃。结果:5种成分的进样量分别在0.331～1.796、0.375～2.046、0.256～1.389、0.338～1.844、0.384～2.110mg范围与各自峰面积积分值呈良好的线性关系(r分别为0.9999、0.9999、0.9998、0.9997、0.9998);平均回收率分别为98.72%、101.48%、99.74%、98.46%、98.09%,RSD分别为1.96%、1.68%、1.82%、1.57%、2.74%(n均为6)。青海不同产地间冬虫夏草主要核苷类成分含量有差异。结论:本方法能有效鉴别天然冬虫夏草中的核苷类成分,而冬虫夏草化学成分与生态因子的相关性还需要进一步研究。     

冬虫夏草活性成分的含量研究概况

对中药冬虫夏草的活性成分甘露醇、核苷类、麦角甾醇、虫草多糖等的含量研究进行综述。     

液质联用法对两种虫草中核苷类成分的研究

目的优化色谱条件,在最佳条件下对蒙山九州虫草和冬虫夏草子座中核苷类化合物进行定性和定量研究,并比较两种虫草的不同。方法用高效液相色谱(HPLC)法对供试品中核苷类成分进行初步定性和定量的研究,然后用质谱(MS)法进行成分验证。结果HPLC与MS法联用能准确地对各组分进行定性和定量分析;洗脱液的最佳配比为:先以99%水+1%乙腈梯度洗脱5 min后过渡为96%水+4%乙腈至洗脱完全。结论首次将此方法用于虫草中核苷类成分的研究,发现蒙山九州虫草含有比冬虫夏草种类更多的核苷类成分,有望替代价格昂贵的冬虫夏草应用于临床。     

梅花鹿鹿茸和马鹿鹿茸中5种核苷类成分的含量比较

目的 建立HPLC测定梅花鹿鹿茸和马鹿鹿茸药材中尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、鸟苷和肌苷5种核苷成分含量的方法,并比较不同批次的梅花鹿鹿茸和马鹿鹿茸药材中5种核苷类成分含量的差异。方法 采用HPLC对15批梅花鹿鹿茸药材和15批马鹿鹿茸药材进行测定,并对测定结果进行聚类分析。结果 测定了梅花鹿鹿茸和马鹿鹿茸药材中5种核苷类成分的含量,二者中核苷类成分含量差异显著;不同产地不同养殖户的鹿茸药材中,5种核苷成分含量也存在明显差异。采用聚类分析能将不同产地的15批梅花鹿鹿茸和15批马鹿鹿茸药材分为2类。结论 不同产地梅花鹿鹿茸和马鹿鹿茸药材核苷成分的组成存在显著性差异,鹿茸药材的质量受鹿的品种、自然环境、养殖技术等因素的影响。该方法适用于梅花鹿鹿茸和马鹿鹿茸中核苷类成分的含量测定,为二者质量控制提供保证。     

高效液相色谱法同时测定人工蛹虫草子实体中核苷类成分的含量

目的:建立高效液相测定人工培养蛹虫草子实体中核苷类成分含量的方法。方法:采用KNAUER Eurospher-100 C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),以乙腈-50mmol.L-1磷酸二氢钾(7∶93)为流动相,检测波长为260nm。结果:测定3批人工培育蛹虫草中核苷类成分的含量,腺苷、腺嘌呤、虫草素的平均含量分别为0.14%,0.0095%,0.42%。结论:本方法能同时测定人工蛹虫草中多种核苷类成分的含量,具有较高的灵敏度,操作简单,可用于人工蛹虫草的质量评价。     

毛细管区带电泳法同时测定冬虫夏草中多种核苷及其碱基成分含量

目的探讨毛细管电泳法研究天然冬虫夏草用不同溶剂提取的效果及测定其中核苷及其碱基含量的可行性。方法采用Unimicro毛细管电泳仪 ,石英毛细管柱 ( 6 0cm× 75 μmI D ) ,运行缓冲液分别为 36mmol/L硼砂 1 5mmol/L磷酸二氢钠 ( pH 8 9) ,分离温度 2 0℃ ,分离电压1 5kV ,测定波长 2 5 4nm ,虹吸进样 1 5s。结果基线分离冬虫夏草不同溶剂提取的样品。腺苷、尿苷、尿嘧啶和次黄嘌呤含量分别为 0 30 %、0 2 8%、0 1 4 %、0 0 5 % ;平均回收率分别为 96 4 %、98 2 %、94 3%、95 1 % ;RSD分别为 0 89%、1 2 %、1 4 %、1 8% (n =6 )。结论该法准确 ,快速 ,灵敏度高 ,对名贵药冬虫夏草的质量控制有较重要意义。     

微量量热法研究天然虫草和人工虫草对大肠杆菌生长代谢的影响

考察天然虫草和人工虫草对大肠杆菌生长代谢的影响,评价虫草类中药的生物活性,为其质量控制提供研究基础。采用微量量热法,以指数生长期最大发热功率 (P_{1 max}) 和有效率 (E) 为指标,客观地表征天然虫草和人工虫草对大肠杆菌生长代谢的影响,并对实验结果进行聚类分析。结果显示,天然虫草和人工虫草有促进大肠杆菌生长、调节胃肠道微生态平衡的作用。与空白对照相比,当虫草质量浓度大于6.0 mg·mL⁻¹时,天然虫草对大肠杆菌生长代谢促进作用显著 (P < 0.05), 且与浓度间的量效关系良好 (r > 0.9),人工虫草的促菌作用不显著 (P > 0.05), 且与浓度无明显的量效关系 (r < 0.6),当虫草质量浓度 < 6.0 mg·mL⁻¹,促菌作用均不显著 (P > 0.05)。结果经聚类分析, 两者可较好地区分,提示微量量热法可用于评价天然虫草和人工虫草的质量, 在中药品质评价方面具有一定的应用潜力。     

Effects of sample preparation methods on the quantification of nucleosides in natural and cultured Cordyceps

Sample preparation is the first and very important step, which can greatly influence the repeatability and accuracy of the analysis. To date, several sample preparation methods with different solvents have been used for quantitative determination of nucleosides in Cordyceps, but their data are greatly various. In this study, five nucleosides, including adenosine, guanosine, inosine, uridine and cordycepin, in Cordyceps were determined using three extraction methods i.e. organic solvent pressurized liquid extraction, boiling water extraction and ambient temperature water extraction and high performance liquid chromatography (HPLC)-diode array detection (DAD). The similar results were obtained when organic solvent pressurized liquid extraction and boiling water extraction were applied. However, the amounts of nucleosides in natural C. sinensis and cultured C. militaris extracted with ambient temperature water were greatly increased except those of adenosine in natural C. sinensis and cordycepin in cultured C. militaris. In addition, the amount of investigated nucleosides in cultured C. sinensis had no obvious variation among the three extraction methods. The results suggest that sample preparation has significant effect on the quantification of nucleosides in Cordyceps.     

Identification and determination of nucleosides in Cordyceps sinensis and its substitutes by high performance liquid chromatography with mass spectrometric detection

Cordyceps sinensis (Cs) is a well-known traditional Chinese medicine (TCM) and Cordyceps mycelia (Cm), a cultured Cordyceps, is a substitute for Cordyceps sinensis. The most important active components in them are nucleosides. A high selective, sensitive and accurate high performance liquid chromatography method with photodiode array detection (DAD) and mass spectrometric detection has been developed for simultaneous separation, identification and quantification of nucleosides in Cs and Cm using a mobile phase including (A) ammonium acetate (40 mM, pH 5.2) and (B) methanol with a gradient system on a 2.0 mm x 150 mm Shimadzu VP-ODS column. The presence of each nucleoside in Cs and Cm was ascertained by comparison of MS data, UV spectra and retention time with standards. LC/ESI-MS in selective ion monitoring (SIM) mode were used for the quantification of nucleosides in Cs and Cm. 2-Chloroadenosine was used as internal standard for this assay. The precisions and accuracies were in the range of 1.5-5.3% and -3.5 to 5.0%, respectively. The limits of detection and quantification for nucleosides were in the order of 0.1-0.6 microg ml(-1) and 0.5-2.0 microg ml(-1), respectively. The recoveries were in the range of 92.0-107.0%. With the developed method, the concentrations of nucleosides in Cs and Cm from different sources were determined. Cs, characterized with far lower concentration of adenosine and cordycepin than Cm, can be very easy to distinguish from Cm. This reliable method would be useful for the study and quality control of Cordyceps sinensis and its substitutes.     

工厂化培育北冬虫夏草子实体替代野生虫草的药效学研究

目的探讨工厂化培育的北冬虫夏草子实体的动物体内药效学参数。方法健康ICR小鼠或Wistar大鼠分成空白对照组、模型组和给药组,予北冬虫夏草子实体和野生虫草持续给药后,分别检测各组负重持续游泳时间和常压耐缺氧时间、小鼠脾淋巴细胞增殖和NK细胞活性、对CCl4引起的小鼠急性肝损伤的保护作用、对庆大霉素引起的大鼠急性肾损伤的保护作用。结果高剂量北冬虫夏草子实体可延长小鼠持续游泳和常压耐缺氧的平均存活时间至29.05%和31.08%;增加小鼠脾淋巴细胞增殖和NK细胞的活性;明显降低庆大霉素诱发的小鼠肾损伤导致的尿液异常,对BUN和Cr的缓解率分别为71.09%和44.96%,对CCl4诱发的小鼠转氨酶升高,特别是ALT的缓解率为37.82%。结论工厂化培育的北冬虫夏草子实体在保护肝、肾损伤、耐缺氧、抗疲劳以及增强免疫力方面与同剂量野生冬虫夏草相当,值得进一步开发。     

高效液相色谱法测定蛹虫草人工固体培养物中核苷类化合物的含量

目的建立高效液相色谱法测定蛹虫草人工固体培养菌皮中核苷类化合物的含量。方法采用pH 6 .5磷酸盐缓冲液 甲醇 (85∶15 )为流动相 ,流速为 1.0ml/min ,检测波长为 2 6 0nm。结果蛹虫草人工固体培养物菌皮中主要成分虫草素在 4 .0 3～ 10 0 .8μg/ml范围内线性关系良好 ,回归方程为A =39.5 8C - 0 .0 342 ;尿苷在 3.6 8～ 92 .0μg/ml范围内线性关系良好 ,回归方程为A =2 4 .32 9C - 0 .0 0 2 7;腺苷在 3.84～ 96 .11μg/ml范围内线性关系良好 ,回归方程为A =18.0 12C - 0 .0 2 35。结论人工固体培养菌皮中核苷类成分的含量随培养时间发生一定的变化 ,高效液相色谱法可用于蛹虫草人工培养物中核苷类化合物的测定 ,为控制其质量提供了简便易行的方法。     

哈萨克民间用药新疆虫草和冬虫夏草的生药学研究

目的:对新疆虫草和冬虫夏草的生药学特征进行研究.方法:对新疆虫草和冬虫夏草的性状、显微特征与薄层色谱进行实验观察.结果:冬虫夏草表皮细胞含有毛,而新疆虫草不含有毛,其他菌丝体组织、气门,油滴、子座横切面子囊壳形状完全与冬虫夏草亦不一致.薄层色谱分析结果表明两者均含有腺苷成分.结论:实验结果将为新疆虫草和冬虫夏草的鉴定和区别提供科学依据.