三七总皂苷对大鼠心室肌细胞内游离钙浓度的影响

目的:研究三七总皂苷(PNS)对大鼠心室肌细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的影响并探讨其可能机制.方法:应用激光共聚焦显微荧光技术探测细胞内游离钙浓度,结果用相对荧光强度[(FI-FI0)/FI0 (%);FI0:对照;FI:给药]表示.结果:(1)PNS ( 40、80、120 mg/L )可浓度依赖性地降低模拟缺血液中心室肌细胞[Ca2+]i的增加.(2)预先应用L型钙通道开放剂Bay k8644,可取消PNS (80 mg/L) 在模拟缺血液中的作用.(3)PNS (80 mg/L)能明显抑制无钙台氏液中由低浓度ryanodine引起的[Ca2+]i增加.结论:PNS可通过抑制电压门控性钙通道的外钙内流和减少肌浆网内钙释放从而降低[Ca2+]i.     

蓝萼甲素对小鼠脾细胞内游离钙离子浓度的影响

蓝萼甲素是由唇形科香茶菜属植物香茶菜Rabdosia amethystoieds(Benth.)Hara中分离提取出的二萜化合物。前期的实验研究表明,香茶菜能显著抑制细胞免疫反应而增加体液免疫反应。应用药理与化学密切合作的研究方法,以活性评价为导向,对香茶菜影响免疫功能的活性物质进行追踪分离,获得了具有免疫活性的化学单体蓝萼甲素。在对小鼠脾细胞增殖影响的实验中,观察到蓝萼甲素对伴刀豆蛋白A(ConA)和脂多糖(LPS)诱导的小鼠脾脏淋巴细胞增殖以及混合淋巴细胞培养反应具有抑制作用[1]。为进一步探讨蓝萼甲素对免疫功能的影响,本实验应用钙荧光指标…     

甘草次酸对豚鼠心室肌单个细胞L型钙通道的影响

目的研究甘草次酸对豚鼠心室肌单个细胞L型钙通道的影响.方法应用全细胞膜片钳技术观察甘草次酸对豚鼠心室肌单个细胞L型通道的影响.结果 10-6mmol@L-1甘草次酸灌注豚鼠心室肌细胞后可使L型钙通道电流(ICa-L)峰值增加22.51%(P＜0.05);各药物的I-V关系曲线虽有相应的下降,但其峰值电压不变.结论甘草次酸可增加ICa-L,使心肌细胞内钙浓度增加.     

党参药物血清对大鼠壁细胞内游离钙离子浓度的影响

目的:探讨党参单味药提取物对大鼠壁细胞胞内游离钙离子浓度的作用.方法:取SD大鼠连续给党参提取物5天,每天一次,末次给药后两小时心脏采血制备含药血清;将分离后壁细胞用荧光指示剂-Flou3-AM负载,然后用共聚焦显微镜检测胞内游离钙离子浓度;钙离子浓度以荧光强度(FI)表示.结果:党参药物血清高、中剂量组与对照组相比均有显著性差异(P＜0.05).结论:党参药物血清可剂量依赖性地减少胃泌素刺激的壁细胞胞内游离钙离子浓度的增高,这可能是我们以往发现它减少胃酸分泌而治疗溃疡性疾病的机制之一.     

茶黄素降低缺血再灌注损伤大鼠心室肌细胞内游离钙浓度的研究

目的研究茶黄素对大鼠心室肌细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的影响并探讨其可能机制。方法在正常台氏液和模拟缺血液中,用激光共聚焦显微镜探测[Ca2+]i,结果用相对荧光强度表示。结果茶黄素(20μmol/L)对正常台氏液中心室肌细胞内[Ca2+]i有影响,但可降低模拟缺血液中心室肌细胞[Ca2+]i的增加。应用钠钙交换体抑制剂NiCl2(100μmol/L)可模拟茶黄素(20μmol/L)在模拟缺血液中的作用。预先应用肌浆网钙泵抑制剂Thapsigar-gin(0.5μmol/L)可大部分取消茶黄素(20μmol/L)在模拟缺血液中的作用。结论茶黄素可通过抑制钠钙交换体转运和增强肌浆网钙泵活动,抑制缺血再灌注损伤中细胞[Ca2+]i的增加。     

细胞内砷浓度与三氧化二砷治疗敏感性的关系

 目的 研究几种白血病和实体瘤细胞内三氧化二砷（As₂O₃）浓度对其治疗敏感性的影响。方法 将几种白血病细胞株和原代细胞及实体瘤细胞株分别给予特定浓度和时间As₂O₃干预后，原子荧光法测定细胞内砷浓度。流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 一定浓度和时间As₂O₃干预后，不同细胞内药物浓度不同。NB4细胞株＞APL原代＞K562细胞株＞CML原代＞HL60细胞株＞AML-M2原代＞HeLa细胞株＞肝癌腹水H₂₂细胞株＞胃腺癌SGC-7901细胞株＞喉癌Hep-2细胞株。在最低促凋亡浓度水平以上的低浓度、长时间持续干预比短期高浓度干预的细胞内砷浓度高，凋亡率大。结论 细胞内砷浓度不同可能是As₂O₃治疗敏感性不同的原因之一。     

三氧化二砷对豚鼠心室肌细胞钾电流的影响

 目的研究三氧化二砷(arsen ic trioxide,As₂O₃)对豚鼠心室肌细胞钾电流的影响,旨在探讨As₂O₃诱导QT间期延长的离子靶点。方法酶解法分离豚鼠单个心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术深入研究As₂O₃对豚鼠单个心室肌细胞动作电位时程(APD)、延迟整流钾电流(IK)和内向整流钾电流(I_K1)的影响。结果As₂O₃50和100μmol·L^-1分别使APD50从对照组的(273±78)m s增加到(456±35)m s(P<0.01)和(513±41)m s(P<0.01),使APD90从对照组的(286±82)m s增加到(468±36)m s(P<0.01)和(524±40)m s(P<0.01);实验电压为+70 mV时,50和100μmol·L^-1As₂O₃分别使I_K从对照组的(6.7±1.7)pA/pF减少至(4.9±1.6)pA/pF(P<0.05)和(4.5±1.8)pA/pF(P<0.05);在实验电压为-120 mV时,As₂O₃50和100μmol·L^-1分别使IK1从对照组的(-20±5)pA/pF减少至(-13±3)pA/pF(P<0.05)和(-11±2)pA/pF(P<0.05)。结论As₂O₃诱导QT间期延长的离子机制可能与其扰乱了心肌细胞膜离子通道间的平衡,抑制I_K和I_K1,从而导致APD延长有关。     

芪桂益脉灵对豚鼠心室肌细胞膜内向整流K离子通道的影响

1材料与方法1.1主要药品和试剂芪桂益脉灵:由黄芪、桂枝、苦参、三七、龙齿、党参、黄连、麦冬、五味子、炒枣仁等10味中药组成。水煎醇沉至含生药量为2g/ml。细胞分离试剂:胶原酶Ⅱ(美国Worthington公司),牛血清白蛋白(美国Sigma公司),牛磺酸(Sigma),HEPES(Boe-hringer),EGTA(Alorich),L—谷氨酸(上海),氯化钙(Sigma),其余化学试剂为市售分析纯。1.2心室肌细胞急性分离方法参照文献[1]进行。1.3膜片钳单通道记录技术在显微镜下选择静止、横纹清晰、折光性好、质膜完整的细胞进行实验。用NarishigePP-830型垂直拉制仪制备实验用玻璃…     

前胡E素对培养大鼠心肌细胞内游离钙离子浓度的影响

前胡Ｅ素对培养大鼠心肌细胞内游离钙离子浓度的影响吴晓冬，吴欣（南京２１０００９南京铁道医学院基础部药理教研室；南京２１０００５南京中医药大学药物研究所）前胡Ｅ素（ｐｒａｅｒｕｐｔｏｒｉｎＥ，Ｐｒａ－Ｅ）是从中药白花前胡中提取的有效成分之一，但对离体心...     

熊脱氧胆酸对离体豚鼠心室肌收缩力及电活动的影响

本实验用离体豚鼠右心室乳头肌为标本,采用张力传惑器记录心肌收缩力,常规玻璃微电极细胞内记录动作电位,首次观察了熊脱氧胆酸(UDCA)对心肌收缩力及电活动的影响。结果表明:UDCA0.55mg/ml 作用30 min,可使心肌收缩力由给药前的143.5±25.9mg 降低至91.9±17.3mg(P<0.001),并可使动作电位时程缩短(n=3),与熊胆的作用一致。表明熊胆中对心肌电及机械活动作用的主要有效成分为 UDCA。本结果为 UDCA 代替熊胆治疗某些心血管疾病提供了实验依据。     

JAK,PTPs抑制剂钙拮抗剂对As2O3引起的[Ca2+]i变化的影响

 目的　研究蛋白酪氨酸激酶 (JAK)、蛋白酪氨酸磷酸酶 (PTPs)抑制剂和Ca²⁺通道阻滞剂对As₂O₃致人脑皮层神经元和白血病细胞的胞浆 [Ca²⁺]_i变化的影响。方法　Fluo-3/AM荧光探针标记胞浆游离Ca²⁺,激光共聚焦显微镜实时测定不同浓度As₂O₃干预后胞浆[Ca²⁺]_i 的变化及JAK PTPs抑制剂和Ca²⁺通道阻滞剂对As₂O₃引起的胞浆[Ca²⁺]_i 变化的影响。结果　As₂O₃升高胞浆[Ca²⁺]_i,并被Ca²⁺通道阻滞剂不完全抑制。1μmol·L^-1的As₂O₃使NB4胞浆[Ca²⁺]_i明显增高,而对神经元胞浆[Ca²⁺]_i 影响不明显。JAK抑制剂genistein能浓度依赖性抑制As₂O₃触发的[Ca²⁺]_i 升高。给药后 280s的总抑制率均值分别为NB4:(6.7± 2.9)%,(25.6±2.5) %和(52.2±3.5)%;皮层神经元:(7.8±3.1)%,(18.1± 2.8) %和(51.3±3.3)%。结论　As₂O₃对不同细胞的胞浆[Ca²⁺]_i 升高程度不同。JAK,PTPs参与As₂O₃触发的钙池操纵性Ca²⁺内流。Ca²⁺通道阻滞剂参与了As₂O₃触发的电压门控性Ca²⁺内流。     

冬虫夏草对豚鼠心室肌细胞胞浆钙离子浓度及L-型钙电流的影响

目的　研究冬虫夏草 (Codycepssinensis,CS)水提液对豚鼠单个心室肌细胞胞浆内钙离子浓度 ([Ca2 ]i)及L 型钙电流 (ICa L)的影响。方法　酶解法分离豚鼠单个心室肌细胞 ,应用激光扫描共聚焦显微镜联合全细胞膜片钳技术测定豚鼠心室肌细胞 [Ca2 ]i以及ICa L的变化。结果　应用 0 1mg/mL (生药浓度 )冬虫夏草水提液 ,在静息状态下对 [Ca2 ]i 无影响 ;对 6 0mmol/LKCl诱导的胞浆 [Ca2 ]i升高有促进作用 ,峰值荧光强度在 12 0s时由12 0 4 3± 2 38 4增加至 185 5 2± 32 1 0 (n =6 ,P <0 0 5 )。膜片钳研究结果表明 ,冬虫夏草水提液可明显促进ICa L,使ICa L从 (- 15 1± 2 3)pA/ pF增加到 (- 19 7± 3 2 ) pA/pF (刺激电压为 10mV ,n =8,P <0 0 1)。 结论　冬虫夏草水提液促进心肌细胞钙内流 ,是该药治疗缓慢型心律失常的机制之一。     

As2O3对人骨肉瘤细胞的体外效应

 目的研究三氧化二砷(As₂O₃)对人骨肉瘤细胞U20S的生物学效应及其机制。方法利用MTT法观察As₂O₃对U20S 细胞的生长抑制作用;Annexin V-FTTC+PI双参数检测细胞凋亡;流式细胞仪测定经不同浓度As₂O₃处理后U20S细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、凋亡相关蛋白Fas和Bcl-2阳性细胞百分率及细胞内钙离子(IECa²⁺)含量变化。结果As₂O₃可显著抑制U20S细胞生长,且剂量-效应和时间-效应关系显著(P<0.05),其24,钙和72 h的IC₅₀值分别为10.66,2.43和0.46 μmol·L^-1。U20S细胞经As₂O₃处理后可发生凋亡。As₂O₃能显著增加Fas蛋白表达和IECa²⁺含量(P<0.01),下调PCNA蛋白表达(P<0.01),对Bcl-2表达无影响(P>0.05)。结论As₂O₃在体外可显著抑制人骨肉瘤细胞U20S生长并引起凋亡,其机制可能与上调Fas表达和IECa²⁺含量及降低PCNA蛋白表达有关。     

益心酮调控细胞膜钙通道的实验研究

目的 :观察中药益心酮片调控细胞膜钙通道的特性 ,从细胞和亚细胞水平探讨其改善心肌缺血再灌注损伤的作用机理。方法 :采用大鼠主动脉平滑肌细胞模型 ,用放射性⁴⁵Ca跨膜流动测定技术分别观察益心酮片对溢流钙通道 (LC)、受体调控钙通道 (ROC)和电压依赖钙通道 (PDC)Ca²⁺ 内流的影响。结果 :益心酮片对LCCa²⁺ 内流无明显影响 ,对ROC和PDCCa²⁺ 内流有明显抑制作用。结论 :益心酮可以抑制慢通道Ca²⁺ 内流 ,且抑制作用呈现剂量依赖关系。     

粉防己碱对培养乳鼠心肌细胞内游离钙的影响

 目的：观察粉防己碱（Tet)对培养大鼠心肌细胞内游离钙（[Ca2+]i)的影响。方法：运用Ca2+指示剂Fura-2作 为细胞内钙离子的荧光探针，利用AR-CM-MIC阳离子測定系统，检測培养乳鼠心肌细胞内游离钙的浓度 [Ca2+]i。结果：在细胞外液钙浓度为1.8mmol/L时，心肌细胞静息[Ca2+]i为80.3士6.9mmol/L。在细胞外液钙浓度为1.8-5.4mmol/L时，粉防己碱（Tet)对细胞静息[Ca2+]i无明显影响。Tet1-100Mmol/L剂量依賴的抑 制高钾和H202引起的[Ca2+]i的升高，Tetl0μmol/L能对抗去甲肾上腺素引起的[Ca2+]i,升高。对搏动细胞，Tet 能抑制细胞外高钙引起的收缩期[Ca2+]i瞬间的变化，减慢搏动頻率。结论:Tet对高K+、去甲肾上腺素、H202及高 钙引起的[Ca2+]i,增高的抑制作用可能是其抗心肌缺血机理之一。     

枸杞糖肽对缺氧及KCl诱导的心肌细胞钙超载的影响

目的:研究枸杞糖肽(LbGp)对低氧心肌细胞内钙浓度([Ca²⁺]_i)的影响,以及对KCl诱导的心肌细胞钙超载的影响。方法:采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养,建立心肌缺氧模型,实验分3组:正常对照组;缺氧模型组:细胞缺氧6h;枸杞糖肽预处理组:加入枸杞糖肽,再行缺氧6h。MTT法检测细胞活力。以Fluo/AM荧光指示剂负载,通过激光扫描共聚焦显微系统和Flou3/AM荧光指示剂标记技术,观察枸杞糖肽对缺氧心肌细胞游离钙含量的影响。加入终浓度60mmol·L^-1KCl溶液,动态观察KCl刺激后心肌细胞[Ca²⁺]_i的动态变化及LbGp预处理后对KCl诱导的钙超载的影响。结果:心肌细胞缺氧时间延长,损伤随之加剧,缺氧枸杞糖肽组心肌细胞荧光密度均较模型组显著降低(P<0.01),50μg·mL^-1LbGp最为明显,[Ca²⁺]_i明显减少。枸杞糖肽组加入KCl溶液后[Ca²⁺]_i荧光强度曲线升高,但与模型组比较,幅度明显减小,25,50,100μg·mL^-1LbGp且呈现量效关系。结论:低氧导致心肌细胞钙超载,而枸杞糖肽能减轻钙超载。亦能对抗KCl诱导的心肌细胞钙超载。机制之一是枸杞糖肽作用于L型钙通道。     

西洋参茎叶皂甙对培养大鼠心肌细胞钙通道阻断作用的初步观察

 西洋参茎叶皂甙（100，300，500μg/ml）可剂量依赖性使培养大鼠心肌细胞动作电位的波幅、波宽、阈电住、最大舒张电位，最大除极速度及复极50%水平的动作电位波宽一致性减小。与二氯化锰（0.1μg/ml）和异搏定（1μmol/L）比较可产生相似作用。钙离子（200mmol/l）可翻转西洋参茎叶皂甙（300μｇ/ml）的作用。初步观察表明，该药可能具有钙通道阻断作用。     

神经节苷脂对染砷人脑皮层神经元的保护作用

 目的研究神经节苷脂对As2O3体外干预的皮质神经元的保护作用及可能机制。方法将人原代脑皮质神经细胞分为 5组,空白对照组、5 μmol·L^-1 As₂O₃干预组和5μmol·L^-1 As₂O₃加神经节苷脂50,100,200 μg·L^-1组,Fluo-3/AM荧光探针标记皮质神经元胞浆钙([Ca²⁺]i),激光共聚焦显微镜实时测定[Ca²⁺]_i的变化。磷基转移法测定细胞膜和胞浆的蛋白激酶C(PKC) 的活性。流式细胞仪检测细胞凋亡百分比。结果 5 μol·L^-1的As₂O₃,作用3 min,[Ca²⁺]_i开始升高,并随时间延长逐渐明显,As₂O₃加神经节苷脂200 μg·L^-1,作用9 min,[Ca²⁺]i才开始升高,且程度远没有As2O3组明显。5 μmol·L^-1的As₂O₃组的 PKC活化程度明显高于As₂O₃加神经节苷脂组,以细胞膜相明显。24 h凋亡率分别为:As₂O₃组78.5%,As₂O₃加神经节苷脂 200μg·L^-1组13.5%。结论神经节苷脂抑制As₂O₃引起的皮质神经元的[Ca²⁺]i升高和PKC活化,抑制细胞凋亡。并通过对细胞膜靶点的保护来实现对神经细胞的保护作用,这进一步证明砷剂最初的作用靶点是细胞膜。     

三氧化二砷对宫颈癌Hela细胞免疫抑制作用的影响

目的探讨三氧化二砷(As2O3)预处理对宫颈癌Hela细胞免疫抑制作用的影响。方法以经As2O3预处理的宫颈癌Hela细胞再培养上清(As-S)为研究对象,MTT法检测其对PHA诱导的外周血单核细胞增殖及CTL细胞毒作用的影响,FCM分析外周血T淋巴细胞亚群表型的影响,ELISA法检测5种免疫抑制因子的含量;并对As-S中免疫抑制因子含量及其免疫抑制功能进行相关分析。结果 As-S对PHA诱导的PBMC增殖抑制和CD25+细胞亚群增殖抑制与TGF-β1正相关,而As-S对CD4+CD25+细胞亚群增殖抑制与TGF-β1负相关,IL-4与CD4+CD25+表达亦存在正相关。结论 As2O3通过调节多种免疫抑制分子的分泌,促进CD4+CD25+Treg细胞生成减少,恢复CD4+T细胞的抗瘤功效及CTL细胞的杀瘤活性。     

葛根素对大鼠心肌细胞L型钙离子通道的影响

目的 :观察葛根素对大鼠L型钙离子通道的作用。方法 :恒流Langendorff灌流 ,I型胶原酶解分离 ,全细胞膜片钳技术记录离子电流。结果 :2.4 mmol·L^-1葛根素可以抑制单个大鼠心室肌细胞L型钙离子通道电流 ,且成时间依赖性 ;葛根素可以促进L型钙通道电流 电压 (I-V)曲线的上移。结论 :葛根素可以抑制大鼠心室肌细胞的L型钙离子通道电流 ,并提示葛根素的抗心肌缺血和抗心律失常作用可能与抑制L型钙离子通道电流有关。