诊断超声照射后人早孕绒毛Fas/FasL蛋白表达的研究

目的 :检测诊断超声辐照与人早孕绒毛 Fas/ Fas L蛋白表达的关系。方法 :对拟进行人工流产的 2 4例早孕 (4 5～ 6 0 d)妇女随机分为 4组 :对照组为空白照射组、10 min组、2 0 min组和 30 min组。应用 Hp85 0 0彩色多普勒超声诊断仪 ,经腹对孕囊进行不同时间的持续照射 ,照射后 2 4h取材。用免疫组织化学技术检测上述各组绒毛滋养层细胞 Fas/ Fas L 蛋白表达情况。结果 :超声照射后 10 min组绒毛滋养层细胞 Fas/ Fas L蛋白表达率与对照组无差别 (P>0 .0 5 ) ;2 0 min组和 30 min组滋养层细胞表达率明显增加 ,显著大于对照组和 10 min组 (P<0 .0 0 1)。结论 :诊断超声持续照射早孕孕囊组织 >10 min可引起绒毛滋养层细胞 Fas/ Fas L 蛋白表达率增加 ,从而诱导滋养层细胞凋亡增加     

诊断超声照射对人早孕绒毛细胞Caspase-3、8蛋白表达的影响

目的　检测诊断超声辐射与人早孕绒毛Caspase- 3、8蛋白表达的关系,探讨诊断超声诱导滋养层细胞凋亡增加的机制。方法　将拟行人工流产的2 4例早孕(停经4 0～6 0 d)妇女随机分为4组:对照组、1 0 min组、2 0 min组、3 0 min组。经腹部B超对孕囊进行持续照射,2 4 h后取材。用免疫组织化学技术检测各组绒毛滋养层细胞Caspase- 3、8蛋白表达情况。结果　1 0 min组绒毛滋养层细胞Caspase- 3、8蛋白表达率与对照组无差别( P>0 .0 5 ) ;2 0 min组和3 0 m in组绒毛滋养层细胞Caspase- 3、8蛋白表达率明显大于对照组和1 0 min组( P<0 .0 5 ) ,并随辐射时间的延长而表达增强。结论　诊断超声持续照射早孕孕囊1 0 min以上可引起绒毛滋养层细胞Caspase- 3、8蛋白表达率增加,从而通过外源性途径启动滋养层细胞凋亡     

诊断级超声辐照对人早孕绒毛细胞TNF-α及其p55型受体表达的影响

目的探讨诊断级超声剂量与人早孕绒毛肿瘤坏死因子仪（TNF—α）及其p55型受体（p55 TNFR）表达的关系,探寻诊断级超声诱导滋养层细胞凋亡的机制。方法拟进行人工流产的孕45～60d妇女60例,随机分为4组：即经腹对孕囊持续辐照10min、20min、30min组和空白辐照对照组。超声辐照后24h内行人工流产后取材,用免疫组化技术检测上述各组绒毛滋养层细胞TNF—α和p55 TNFR表达情况。结果超声辐照10min组绒毛滋养层细胞TNF-α和p55TNFR表达率与对照组比较差异无统计学意义;20min组和30min组TNF—α、p55 TNFR明显增加,分别为（61．94±6．34）％、（67．38±8．77）％和（65．39±5．96）％、（74．634±7．38）％,显著大于对照组（54．26±6．48）％、（61．56±9．23）％和10min组（55．54±2．82）％、（62．75±11．84）％,P〈0．01。结论诊断级超声持续辐照早孕孕囊组织大于10min,可引起绒毛滋养层细胞TNF—α和p55TNFR表达率增加,从而诱导滋养层细胞凋亡。     

点杂交法检测诊断超声引起的人绒毛细胞DNA链的损伤

目的探讨诊断超声经腹照射子宫内胚胎是否引起人早孕绒毛细胞的DNA链的损伤及评价检测DNA单、双链断裂的方法.方法60例早孕妇女随机分为照射宫内孕囊10分钟组和未照射组(各30例),取绒毛组织后,以32P标记Alu探针打点杂交法定量检测绒毛细胞单、双链DNA.结果照射组与对照组比较,绒毛细胞单、双链DNA的量、百分含量的差异均无显著性(P＞0.05);该方法只能与人DNA杂交,可检测2.5×103个绒毛细胞分离的DNA、0.45ng的人白细胞DNA.结论该实验用诊断超声照射宫内孕囊10分钟,未引起绒毛细胞DNA单、双链断裂;所用点杂交法的特异性、敏感性与准确性高.     

诊断超声照射大鼠早孕胚胎组织细胞Bcl-2表达的影响

目的 研究诊断超声照射大鼠早孕胚胎组织细胞Bcl-2表达的影响,探讨诊断超声诱导细胞凋亡的机制.方法 采用频率为3.5 MHz超声分别照射孕7 d大鼠腹部子宫体表投影区,分为照射0 min组、10 min 组、20 min 组、30 min 组,超声照射后24 h取胚胎组织,SP免疫组织化学检测Bcl-2蛋白表达水平的变化.结果 随着照射时间的延长,各组Bcl-2阳性表达率逐渐下降,与照射时间呈负相关.其中10 min组与0 min组相比差异无显著性(P>0.05),20 min组、30 min组与0 min组相比差异有非常显著性(P<0.01).结论 诊断超声持续照射大鼠早孕胚胎超过20 min使Bcl-2 蛋白水平表达下调,提示诊断超声长时间照射能抑制抗凋亡因子Bcl-2的表达,从而诱导细胞凋亡.     

大鼠卵巢经诊断超声照射后c-fos表达的研究

目的：探讨大鼠卵巢经超声照射不同次数，时间对c-fos表达的影响。方法：将30只雌性大鼠随机分为等同数6组：正常对照组，5min,10min,20min,30min和60min组，应用EUB－26黑白超声诊断仪，对大鼠卵巢相应部位予以不同时间持续照射，7天后断头处死当即取材，用免疫组织化学ABC法检测c-fos，用原位杂交方法检测c-fosmRNA表达情况。结果：诊断超声持续照射大鼠卵巢组织10min后与对照组无差异（P＞0．05），照射20min后大鼠卵巢组织c-fos表达增加并随照射时间的延长表达明显增加，与对照组差异显著（P＜0．05），而持续照射大鼠卵巢20min时c-fosmRNA与对照组无明显差异呈弱表达（P＞0．05），而持续照射30min时表达增加（P＜0．05），60min后表达明显增加（P＜0．01）。结论：诊断超声持续照射大鼠卵巢20min后使c-fos表达增加，持续照射30min后使c-fosmRNA表达增加，从而诱导大鼠卵巢细胞凋亡。     

诊断用超声对宫内早孕绒毛影响的多指标评价

目的：为了客观评价诊断用超声对宫内早孕绒毛有无影响，了解其量效关系以及损伤能否逆转。方法：应用日本产ＥＵＢ２００型实时超声诊断仪，探头频率３．５ＭＨｚ。将１２５正常早孕妇女随机分成正常对照组（Ⅰ组）、照射１０分钟（Ⅱ组）、照射２０分钟（Ⅲ组）、照射３０分钟（Ⅳ组）和照３０分钟后７～１０天取材检测。各组在人工流产后取绒毛标本检测丙二醛、谷胱甘肽过氧化酶、ＤＮＡ含量、染色体畸变率和绒毛细胞的形态学改变。结果：照射２０分钟丙二醛含量增加，谷胱甘肽过氧化酶活性下降，照射３０分钟ＤＮＡ含量下降。上述改变于７～１０天后基本恢复至正常对照组水平。染色体畸变率及绒毛细胞形态学各照射组与正常对照组无显著性差异。结论：诊断用超声对宫内早孕绒毛细胞的生化代谢和分子水平的损伤与照射时间有关，照射３０分钟以内所造成的损伤经７～１０天可恢复至正常水平。诊断用超声对早孕妇女照射１０分钟以内是安全的。     

诊断超声对人体宫内绒毛细胞DNA的影响

将６０名早期孕妇随机分成照射组（用Ｂ型超声诊断仪照射宫内孕囊１０分钟）与对照组）未经照射），均行人工流产取绒毛组织。以碱性解链作用与羟基磷灰石层析分离绒毛细胞单链、双链ＤＮＡ，并以紫外分光光度法定量。结果表明，照射组与对照组间，绒毛细胞单链、双链ＤＮＡ量及百分含量均无显著性差异（Ｐ＞０．０５），提示该实验用诊断超声未引起绒毛细胞ＤＮＡ单链、双链断裂。     

诊断超声对人早孕绒毛增殖细胞核抗原的影响

目的：探讨诊断超声对人早孕绒毛增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的影响。方法：选取１０５例孕６￣８周健康妇女,以３．５ＭＨｚ诊断Ｂ型声声波经下腹持续照射孕囊１０分钟或２０分钟或分组于照后不同时间行人工流产术取绒毛,用流式细胞仪定量检测绒毛ＰＣＮＡ表达水平。结果：早孕绒毛ＰＣＮＡ表达平均百分含量为１２．５３,与孕妇年龄、产次无关;超声照射１０分钟后２４小时及照射２０分钟后１、４、８、１６、２４小时绒毛ＰＣＮ     

大鼠卵巢经诊断超声照射后BCL-2表达的研究

目的：分析大鼠卵巢经诊断超声照射后BCL-2表达的情况，旨在探讨大鼠卵巢细胞的凋亡情况。方法：将30只雌性大鼠随机分为6组；正常对照组，5min组，10min组，20min组，30min组和60min组，应用EUB-26黑白超声诊断仪予以不同时间持续照射，7天后断头即行取材，结果：超声持续照射大鼠卵巢10min内BCL-2呈低表达，20min时呈高表达，但随照射时间延长，BCL-2的表达随之减弱。结论：诊断超声持续照射大鼠卵巢20min后BCL-2表达增加，它在某种程度上可抑制由超声照射引起的细胞凋亡。     

Sema4A、NRP-1在复发性流产患者胎盘绒毛中的表达研究

目的 探究信号素4A(Sema 4A)、神经纤毛蛋白1(NRP-1)在复发性流产(RM)患者胎盘绒毛中的表达水平.方法 回顾性选取2018年2月至2020年2月河北中石油中心医院收治的RM孕妇50例作为研究对象(试验组),另选取同期进行正常人工流产的妇女60名作为对照组.留取患者新鲜胎盘绒毛组织并分成两份,一份提取总R...     

两种方法培养人早孕绒毛滋养层细胞的比较

背景:人早孕绒毛滋养层细胞体外培养是研究各种妊娠疾病的基础,如何获得纯度高、数量多的滋养层细胞以及如何简化实验步骤,仍是目前研究的热点。目的:寻求一种培养高纯度人早孕绒毛滋养层细胞方法。方法:取5～10周正常绒毛组织,胰酶消化和差速贴壁联合应用法与组织块培养法分别进行人早孕绒毛滋养层细胞原代培养,免疫组织化学观察细胞角蛋白7和波形蛋白的表达,进行滋养层细胞纯度的鉴定。结果与结论:两种方法均能培养出人早孕绒毛滋养层细胞,呈三角形,多边形。抗-细胞角蛋白7阳性表达,抗-波形蛋白阴性表达。胰酶消化和差速贴壁联合应用法培养细胞纯度高于组织块培养法(P<0.05)。提示胰酶消化和差速贴壁联合应用法是一种培养人早孕绒毛滋养层细胞较好的方法。     

诊断超声辐照大鼠睾丸组织对Fas＼FasL蛋白表达的影响

目的探讨诊断超声对大鼠睾丸组织生精细胞Ｆａｓ／ＦａｓＬ蛋白表达的影响。方法３２只ＳＤ雄性大鼠随机分为４组：Ⅰ组（对照组）、Ⅱ组（辐照１０ｍｉｎ组）、Ⅲ组（辐照２０ｍｉｎ组）和Ⅳ组（辐照３０ｍｉｎ组）。应用ＨＰ８５００彩色多普勒超声诊断仪对大鼠睾丸组织分别进行不同时间的持续辐照,２４ｈ后外死动物,取睾丸组织应用免疫组织化学方法观察标本中Ｆａｓ／ＦａｓＬ表达情况。结果正常对照组睾丸组织同时表达Ｆａｓ和     

绒毛组织中PDGF—BB的表达与流产发生的关系

【目的】探讨稽留流产、先兆流产绒毛组织中血小板源性生长因子（PDGF-BB）的表达与流产发生的关系。【方法】随机选取稽留流产（A组）和先兆流产（B组）各30例，正常早孕（C组）30例做对照。A组分有原因组（A1组）18例和无原N组（A2组）12例；B组分阴道流血≤1周（B1组）19例和1周〈阴道流血〈2周（B2组）11例。采用免疫组化SABC法检测并比较各组绒毛组织中PDGF-BB的表达、以CD34标记血管内皮细胞计数、微血管密度（MVD）值。【结果】A组绒毛组织中PDGF-BB表达强度、MVD值均显著低于B组和C组（P〈0．05），B组与c组比较差异无统计学意义（P〉0．05）；A1组、A2组绒毛组织中PDGF-BB表达强度、MVD值比较差异无统计学意义（P〉0．05），B1绒毛组织中PDGF-BB表达强度、MVD值显著高于B2组（P〈0．05）；三组绒毛组织中PDGF-BB的表达与MVD值均呈正相关。【结论]PDGF-BB在早孕绒毛组织中表达强弱与流产发生流血时间长短关系密切；绒毛组织中PDGF-BB的表达降低，可能引起绒毛血管发育障碍，导致稽留流产及先兆流产的发生。     

Dissociation between increased apoptosis and expression of the tumor necrosis factor-alpha system in term placental villi with preeclampsia

OBJECTIVE: To analyse in situ the placental expression of tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha), its receptors TNFRp55 and TNFRp75, and apoptosis in normotensive and preeclamptic pregnancies. DESIGN AND METHODS: We simultaneously analyzed the immunostaining of TNF-alpha, its receptors and apoptosis in term placentas of 15 patients with preeclampsia and 15 normotensive pregnant women as controls. RESULTS: In normotensive villi TNF-alpha and TNFRp75 were expressed more in syncytiotrophoblasts than cytotrophoblasts or stromal cells, and were almost absent in endothelial cells. TNFRp55 was expressed uniformly in all types of placental cells. Apoptosis was more marked in syncytiotrophoblasts than cytotrophoblasts. In preeclamptic trophoblasts apoptosis was exaggerated whereas expression of TNF-alpha and its receptors remained unchanged. CONCLUSIONS: Placental expression of TNF-alpha and TNFRp75 appear inter-adaptative and follow the same pattern, whereas TNFRp55 and TNF-alpha appear independent. In addition, the exaggerated apoptosis of preeclamptic trophoblasts may be dependent on factors other than the TNF-alpha system alone.     

稽留流产绒毛组织中APPL1，Nrf2 和HO-1 的水平表达与氧化应激的相关性研究

目的　探讨稽留流产绒毛组织中蛋白亮氨酸拉链基序1（leucine zipper motif 1, APPL1）、核因子E2 相关因子2（Nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2）和血红素加氧酶1（haem oxygenase 1,HO-1）的水平表达与氧化应激的相关性。方法　取46 例稽留流产并行人流术治疗者为实验组,取50 例同期正常早孕并行人工流产术者为对照组,收集两组绒毛组织标本,用放射免疫沉淀法裂解缓冲液(radio immunopreci pitation assay lysis buffer, RIPA) 提取绒毛组织蛋白。用免疫组织化学法检测绒毛组织中APPL1,Nrf2 和HO-1 蛋白表达;用Western blot 检测绒毛组织中APPL1,Nrf2 和HO-1 蛋白水平;酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）测定绒毛组织中氧化应激指标[ 超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、活性氧（reactive oxygen species,ROS）及丙二醛（malondialdehyde,MDA）] 水平。Pearson 检验分析实验组绒毛组织中APPL1,Nrf2 和HO-1 蛋白水平与氧化应激指标水平的相关性。结果　实验组绒毛组织中APPL1,Nrf2 和HO-1 表达阳性率分别为21.7%,32.6% 和26.1%,明显低于对照组的56.0%,64.0%,58.0%,差异均有统计学意义（χ2=9.442 ～ 11.759,均P＜ 0.05）;APPL1（3.2±0.9）,Nrf2（3.7±0.7）和HO-1（3.5±0.8）表达免疫组化评分亦明显低于对照组（4.6±1.4,5.5±1.7,5.1±1.3）,差异有统计学意义（t=5.772 ～ 7.187,均P ＜ 0.05）。实验组绒毛组织中APPL1（1.3±0.1）,Nrf2（0.7±0.1）和HO-1（1.1±0.1）蛋白表达水平明显低于对照组（1.6±0.2,1.1±0.0.1,1.4±0.1）,差异有统计学意义（t=9.171 ～ 19.579,均P ＜ 0.05）。实验组绒毛组织中ROS（8.4±1.5U/ml）,MDA（11.7±2.3nmol/ml） 水平明显高于对照组（3.6±0.5U/ml,5.6±0.8nmol/ml）,SOD（23.9±6.8U/ml）水平明显低于对照组（28.1±6.6U/ml）,差异均有统计学意义（t=3.070 ～ 21.381,均P ＜ 0.05）。实验组绒毛组织中APPL1,Nrf2 和HO-1 蛋白表达与ROS 水平呈负相关（r=-0.628,-0.510,-0.575,均P ＜ 0.05）;与MDA 水平呈负相关（r=-0.541,-0.489,-0.556,均P ＜ 0.05）;与SOD 水平呈正相关（r=0.359,0.423,0.408,均P ＜ 0.05）。结论　APPL1,Nrf2 和HO-1 在稽留流产绒毛组织中呈低表达,且与氧化应激指标ROS,MDA和SOD水平具有显著相关性,其三者异常表达可能通过介导氧化应激失衡进而诱导了稽留流产的发生。