小鼠小脑皮质发育过程中细胞迁移及血管之间的相互作用

目的 探讨小鼠小脑片层化过程中血管发生与细胞迁移之间的关系。方法 不同年龄小鼠共计146只,应用免疫荧光法和5′-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）法及墨汁血管灌注技术,标记小鼠胚胎期10日（E10）至出生90日（P90）小脑的放射状胶质细胞,普肯耶细胞,颗粒细胞以及小脑内血管发生。结果 在E15左右,小脑皮质内开始出现血管网;尔后随着年龄的增长,放射状胶质细胞和血管之间相互诱导, 血管开始变得密集,我们可以观察到,外颗粒层的血管沿着放射状胶质细胞分布,但是在内颗粒层和白质,血管的走行比较紊乱,和放射状胶质细胞走行保持高度一致。结果还发现很多BrdU阳性细胞紧贴着血管迁移。结论 在小脑片层化形成的过程中,细胞迁移起着非常关键的作用,血管在小脑皮质内不仅和放射状胶质细胞相互作用,引导神经细胞的迁移,并且为神经细胞的迁移提供路径和支架。     

小鼠脊髓发育与神经细胞凋亡

目的通过观察小鼠脊髓发育过程中神经元的增殖、分化与凋亡,探讨小鼠脊髓的发育过程及其调控机制。方法取妊娠第18天(E18)至生后第90天(P90)小鼠173只,用5’-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)技术标记增殖的神经干细胞,免疫荧光法(DCX,NeuN和Caspase8)标记脊髓中的新生神经元,成熟神经元和凋亡细胞。结果在胚胎与出生早期,BrdU阳性细胞均匀分布于小鼠脊髓各部位。随着小鼠日龄的增加,脊髓神经干细胞可以分化为神经胶质细胞与神经元。其后,位于神经管侧脑室的新生神经元向中间层(未来的灰质)迁移,逐渐分化为成熟神经元。最后,神经元向脊髓中央聚集,灰质呈现典型的"H"型。随着神经元的分化,一些凋亡神经细胞出现在新生神经元与成熟神经元中。荧光双标显示,大部分的凋亡神经细胞都是新生神经元,说明神经元凋亡常常发生在新生神经元中。统计学分析表明,DCX、NeuN、Caspase-8标记的阳性细胞数均随小鼠日龄的增加而减少,说明神经元的分化和凋亡在脊髓的发育过程中逐渐减少。结论在脊髓的发育过程中存在着神经元的增殖、分化与凋亡。三者相互协同,共同调节脊髓的形成与发育。     

儿茶酚胺能神经元在雏鸡脊髓内的分布

用ＰＡＰ免疫组织化学方法对１０只白菜享雏鸡脊髓酷氨羟化酶阳性神经元的分布进行了研究。结果表明，脊髓内儿茶酚胺类，除来自脑的儿茶酚胺类神经元的下行纤维外；并有ＴＨ免疫反应阳性的神经元分布于脊髓的颈，胸和腰段。根据细胞形态和分布区域可将神经元分为３种：１．无绕中央管腹侧呈放射状分布的神经元；在腰髓的胞体为双极的圆形，其轴突细长；在胸髓的胞体为梭形，其突起粗短，两处细胞的突起均行于室管膜细胞之间，末端呈     

小鼠大脑皮质发育过程中神经细胞、胶质细胞及血管之间的相互关系

目的探讨小鼠大脑皮质发育过程中神经细胞、胶质细胞及血管发生之间的关系。方法应用免疫荧光、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)和墨汁血管灌注等技术,对胚胎受孕15d(E15)至生后90d(P90)小鼠大脑内神经干细胞、神经前体细胞、神经胶质细胞和血管进行形态学观察。结果 E15左右大脑皮质内开始出现血管网,随着年龄的增长血管分支逐渐增多,血管体密度呈现增长趋势;成年后(P60)血管密度基本稳定。大脑皮质部位小血管走行方向与放射状胶质细胞长突起延伸方向一致,呈平行分布;大量放射状胶质细胞伸出膨大的足板参与血脑屏障的构筑;增殖的神经干细胞主要沿着血管走行方向及放射状胶质细胞长突起延伸方向进行迁移。结论在大脑皮质发育过程中,神经干细胞不断增殖,并沿着血管走行方向及放射状胶质细胞长突起延伸方向进行迁移。神经细胞、神经胶质细胞参与血管壁的构成,三者之间相互诱导,共同维持血脑屏障的完整与功能调节。     

脊髓血管胚胎发生发育的解剖学研究

目的 :观察人胚胎脊髓血管的发生发育过程 ;分析胚胎脊髓血管的结构特征以及与成人脊髓血管结构的关系。方法 :采用胎龄 30d～ 2 8周的胚胎及胎儿、新生儿和成人尸体标本 ,进行解剖学观察。结果 :对脊髓血管胚胎各期的发育特征进行了描述。神经管未闭合时 ,周围的间充质内已出现了毛细血管网 ,逐渐向基板和翼板集中 ,并沿神经根走行 ,进出椎管 ,每一节段均有两对 ,左右对称。表面的毛细血管垂直向脊髓内发出分支 ,部分分化成各级动、静脉 ,并在髓内发出分支 ,构成毛细血管网。原基板外周的毛细血管网随脊髓的生长 ,形成了脊髓前动脉纵轴。颈髓前动脉多保持双干结构。脊髓后动脉为双干 ,在外侧方。胎龄 3个月以上的胎儿脊髓血管已与成人大致相仿。结论 :脊髓前动脉在胎龄 8周时 ,胸腰段就已经融合为一条。颈髓的脊髓前动脉多为双干 ,有相互靠近的趋势。胎龄 3个月以上的胎儿脊髓表面血管形态已经与成人大致相仿。脊髓血管是神经管周围间充质中的毛细血管网随着脊髓的生长 ,通过相互融合和不均衡退化等机制 ,逐渐演化过来的     

用BrdU标记技术观察大鼠脊髓上胸段灰质细胞的分化发育

目的 观察脊髓灰质细胞的分化发育,寻找脊髓移植时胎鼠脊髓取材的最佳时间。方法 用５－溴－２脱氧尿嘧啶（ＢｒｄＵ）标记ＤＮＡ,ＡＢＣ免疫细胞化学方法观察大鼠上胸段脊髓灰质细胞的增殖分化情况。结果 孕鼠于Ｅ１０ｄｅ腹腔注射ＢｒｄＵ,胎刀脊髓上胸段ＢｒｄＵ免疫反应神经元主要集中在脊髓后角,脊髓侧角的ＢｒｄＵ免疫反应神经元较少,前角仅有少量的ＢｒｄＵ免疫反应神经元;孕鼠于Ｅ１１ｄ腹腔注射ＢｒｄＵ,胎鼠脊髓     

体外培养脊髓神经元过程中关于提高细胞产率以及活性的技术探讨

为了提高用于培养脊髓细胞的产率以及活性，使实验的细胞模型有良好的一致性和可比性。实验探讨了脊髓细胞培养过程中，从取材、解剖和分散细胞等一系列步骤中维持细胞活性的内外因素。     

家兔脊髓灰质细胞构筑的研究

本研究采用14只成年和幼年家兔的各节脊髓,作脊髓灰质分层研究。所用的脊髓切片为80μm、60μm和15μm的横或矢状切片以及2μm的半薄切片。对细胞体和髓鞘染色分别采用甲苯胺蓝、坚牢焦油紫、LuXol Fast Blue及对苯二胺。此外,还用显示灰质乙酰胆碱酯酶活性的方法协助分层研究。分层研究是根据Rexed对猫脊髓灰质分层的原则。研究结果发现家兔脊髓分层基本类似于猫,但在各层的范围及结构方面仍有一定不同。     

脊髓血管构筑的生物学特征

在大量形态学研究基础上,发现脊髓血管构筑出现左右对称。     

神经干细胞移植修复大鼠脊髓半切伤的研究

目的：观察神经干细胞移植修复脊髓半切伤的疗效并探讨移植最佳时机。方法：制备大鼠T13-L1脊髓半切伤模型，取胎龄13、5d胎鼠大脑组织，体外分离、培养、诱导神经干细胞，并采用免疫细胞化学技术分别检测NSC（neural stemcell）特征性标志Nestin（巢蛋白）表达和用血清诱导分化为大量神经元NSE（neuron specific enolas）和神经胶质细胞GFAP（glial fibrillary acidic protein）表达。用明胶海绵吸附BrdU（5-溴脱氧尿嘧啶）标记好的神经干细胞悬液移植到脊髓半横断处，移植时间选择损伤后立即移植、损伤后第9、14d。观察移植后的大鼠行为的变化，通过CBS（combine behavioral score）评分和爬网格实验评价大鼠的运动功能恢复情况，并进行免疫组化鉴定，光学显微镜观察移植神经干细胞的存活和迁移。结果：在上述条件下培养及传代的细胞不断分裂增殖，形成悬浮生长的呈Nestin阳性的神经球；用血清诱导分化为大量表达NSE阳性的神经元和GFAP阳性的神经胶质细胞。与对照组相比，神经干细胞移植组明显修复了损伤结构，改善了下肢的功能，尤其是第9d移植组。结论：神经干细胞移植促进了脊髓损伤后神经结构和功能的恢复，是治疗脊髓半切伤一种有效方案，考虑综合因素移植干细胞的最佳时机应选损伤后9d左右。     

补阳还五汤对大鼠脊髓损伤后移植神经干细胞存活、增殖与迁移的影响

目的:探讨补阳还五汤(Buyang Huanwu Decoction,BYHWD)灌胃对脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后移植胚胎神经干细胞(neural stem cells,NSCs)存活、增殖与迁移的影响。方法:将SD大鼠随机分为SCI组、NSCs移植组、NSCs移植联合补阳还五汤灌胃组。制作大鼠脊髓横断损伤模型,将BrdU标记NSCs细胞按浓度1×106/ml分别移植入移植组和联合组的脊髓横断处,损伤组用等量DMEM/F12完全培养基代替。术后联合组每天用BYHWD予以灌胃治疗1次,损伤组和移植组用生理盐水代替。各组在7、14、28 d后分别取材,用免疫荧光组织化学法检测移植在SCI处的NSCs存活、增殖和迁移情况。结果:损伤组未见BrdU标记阳性细胞;联合组各时间点BrdU标记阳性细胞数量均多于移植组各时间点,并有显著性统计学意义(P<0.05);联合组28 d时BrdU标记阳性细胞数量最多,与联合组7 d和14 d相比有显著性统计学意义(P<0.05);在联合组各时间点,BrdU标记阳性细胞向SCI处头尾端组织迁移的距离明显长于移植组各时间点。结论:脊髓横断损伤后,移植胚胎NSCs能够存活并增殖和迁移。补阳还五汤能够促进大鼠脊髓全横断损伤处移植的NSCs存活、增殖和迁移。     

Lithium enhanced cell proliferation and differentiation of mesenchymal stem cells to neural cells in rat spinal cord

Lithium has been shown to inhibit apoptosis of neural progenitor cells (NPCs) and promote differentiation of NPCs. However, there was rare data to discuss the effects of lithium on neural differentiation of mesenchymal stem cells (MSCs). Here, we investigated the potential promotion of lithium to MSC proliferation and neural differentiation in vitro and after transplanted into the ventral horn of rat spinal cord in vivo. We found that lithium possesses the ability to promote proliferation of GFP-MSCs in a dose dependent manner as verified by growth curve and bromodeoxyuridine (BrdU) incorporation assays; While in neural induction medium, lithium (0.1 mM) promotes neural differentiation of GFP-MSCs as verified by immunostaining and quantitative analysis. After transplantation of GFP-MSCs into the rat spinal cord, lithium treatment enhanced cell survival and neural differentiation after transplantation as verified by immunohistochemistry. These data suggested that lithium could be a potential drug to augment the therapeutic efficiency of MSCs transplantation therapy in central nervous system (CNS) disorders.     

神经干细胞及其在脊髓修复中的应用潜能

本文综述了近年来神经干细胞研究的进展。主要论述神经干细胞的来源、分离、培养和鉴定、神经干细胞的分化及其与其它干细胞的联系、神经干细胞增殖分化的调控,并探讨其在脊髓损伤修复中的应用潜能。     

胚胎大鼠脊髓神经干细胞的培养及鉴定

为了探讨胚胎大鼠脊髓神经管神经干细胞体外培养、鉴定的方法,本实验在解剖显微镜下机械性分离11.5 d的胚胎大鼠脊髓神经管,并制备细胞悬液,无血清培养基培养。应用免疫荧光染色方法对原代和传代细胞进行巢蛋白(nestin)鉴定;加入胎牛血清诱导其分化后分别行神经元特异烯醇化酶(NSE)、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和髓磷脂碱性蛋白(MBP)鉴定。结果显示:11.5 d胚胎大鼠脊髓神经管来源的神经干细胞经连续传代培养可形成较多克隆球,呈nestin免疫阳性;加入胎牛血清可诱导其分别向神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞分化。本实验结果提示,利用E11.5的胚胎大鼠脊髓神经管可成功培养出大量稳定增殖并有多向分化潜能的神经干细胞,可用于进一步的研究。     

Differentiation and migration of neuroblasts in the developing human spinal cord during the first half of prenatal ontogeny

Processes of differentiation and migration of neuroblasts in the developing human spinal cord were studied in the first half of its prenatal ontogeny by Golgi's method. The dynamics of development of the neuroblast from the neuroepithelial matrix cell to the fully developed neuron was studied. It is postulated that a special process of the neuroblast may play the role of channel of oriented migration of its nucleus toward the site of the final topologic position of the future neuron.Laboratory of Development of the Human Nervous System, Institute of Human Morphology, Academy of Medical Sciences of the USSR, Moscow. (Presented by Academician of the Academy of Medical Sciences of the USSR A. P. Avtsyn.) Translated from Byulleten' Éksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 87, No. 4, pp. 352–354, April, 1979.     

Urotensin-II expression in the mouse spinal cord

Urotensin-II (UII), a 12 amino acid peptide, was discovered in the teleost fish neurosecretory cells located in the caudal portion of the spinal cord and which project to a neurohemal gland called the urophysis. The distribution of UII and of its prepro-UII mRNA is not limited to fish and was found for example in the rat spinal cord. In view of the potential interest of obtaining transgenic mice, we have therefore characterized the distribution of mouse pro-UII mRNA and UII immunoreactivity, by in situ hybridization and immunohistochemistry, respectively, in the mouse spinal cord. A population of UII-like immunoreactive cell bodies was located in the ventral horn of the different segments. These cells displayed all the features of motoneurons, as confirmed by a double immunohistochemical labelling showing the co-occurrence of UII and vesicular acetylcholine transporter, and by electron microscope immunocytochemistry. Retrograde labelling of motoneurons innervating the bulbocavernosus penile muscle showed that some of them contained UII. In situ hybridization histochemistry revealed that pro-UII mRNA was located in some ventral horn neuronal perikarya. The pro-UII mRNA-containing cell bodies possessed the same motoneuron characteristics, confirming the results of the immunohistochemical studies and showing that the gene of mouse UII is expressed in a subpopulation of motoneurons in the spinal cord. Our results support the assumption that UII peptide characterized as endocrine in fish is also expressed within mammalian motoneurons.     

背侧抑制性轴突导向蛋白的表达与鸡胚脊髓神经嵴细胞迁移的空间及时间相关性

目的:探讨正常鸡胚脊髓发育过程中背侧抑制性轴突导向蛋白的表达时间和表达部位与鸡胚脊髓神经嵴细胞迁移过程的相关性。方法:应用原位杂交、免疫组织化学等方法,观察鸡胚脊髓内背侧抑制性轴突导向蛋白的表达时间和表达部位及神经嵴细胞迁移路径,同时比较两者在时间和空间分布上的相关性;应用免疫组织化学、电穿孔的方法在正常鸡胚一侧脊髓内过表达背侧抑制性轴突导向蛋白,观察背侧抑制性轴突导向蛋白过表达对鸡胚脊髓内神经嵴细胞迁移的影响。结果:正常鸡胚脊髓发育过程中,背侧抑制性轴突导向蛋白的表达时间早于神经嵴细胞开始迁移的时间。背侧抑制性轴突导向蛋白表达由颅侧向尾侧呈节段性分布,而神经嵴细胞在节段性分布的背侧抑制性轴突导向蛋白之间进行迁移;电穿孔过表达背侧抑制性轴突导向蛋白引起相邻部位神经嵴细胞迁移路径的异常。结论:背侧抑制性轴突导向蛋白的表达时间和表达部位与脊髓神经嵴细胞的迁移密切相关。     

大鼠脊髓发育过程中神经干细胞的分化

目的:研究正常大鼠脊髓发育过程中神经干细胞的分化规律。方法:应用免疫荧光染色技术,检测Nestin、NeuN、MAP2、GFAP、CNPase阳性细胞在大鼠胚胎期及生后脊髓内的分布及变化情况。结果:胚胎发育早期,脊髓中央管、灰质、白质均可检测到Nestin阳性细胞,生后Nestin阳性细胞数量逐渐减少。大鼠脊髓神经元的发生呈现明显的背腹模式,孕14d(E14)脊髓内可检测到NeuN阳性细胞,E16 NeuN阳性细胞逐渐增多,腹侧NeuN阳性细胞核体积较大,分布较稀疏,背侧神经元细胞核体积较小,分布较密集。MAP2染色结果与NeuN一致。胶质细胞的分化、成熟在生后初期进行,P4可检测到GFAP及CNPase阳性细胞,主要分布于脊髓白质内,P30在脊髓灰质内可检测到GFAP阳性细胞,细胞分支较多且短。结论:正常大鼠脊髓发育中神经干细胞的分化呈现一定规律性,向神经元方向化较早且呈明显的背腹模式,胶质细胞的分化较晚。