延胡索纤溶酶的分离纯化及部分性质

目的从延胡索(Rhizoma corydalis)中分离纯化具有溶解纤维蛋白活性的单体蛋白单一组分,并对粗酶性质做初步研究。方法利用硫酸铵分级沉淀和阴离子交换色谱从延胡索中纯化纤溶酶。结果从延胡索中纯化出两种纤溶酶,表观相对分子质量分别为33 000和59 000。粗酶用丝氨酸蛋白酶抑制剂鉴定为丝氨酸蛋白酶,ED-TA对酶活没有抑制作用。延胡索纤溶酶粗酶体外溶纤性质主要表现为激酶活性,在4~50℃活性稳定,50~75℃酶活有所下降;最适pH值为8.0,在pH 3.0左右,仍能保留大部分酶活;能抵抗胰蛋白酶水解和胃蛋白酶的作用。结论延胡索纤溶酶性质稳定,有希望研发成为一种溶栓新药。     

广西菲牛蛭中一种纤溶酶的分离纯化

目的从广西菲牛蛭消化液中分离纯化出一种纤溶酶,并研究其生化性质。方法应用有机溶剂沉淀、DEAESepharoseCL-6B离子交换柱和SephadexG-75凝胶柱过滤的方法分离纯化出广西菲牛蛭纤溶酶,用纤维蛋白平板法测定其纤溶活力,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定纤溶酶相对分子质量(Mr)。结果从广西菲牛蛭中分离出一种单一组分的纤溶酶,其Mr约为42×103,在普通纤维蛋白平板和加热平板上都能溶解纤维蛋白,收率为0.43%。结论此方法成功地从广西菲牛蛭中分离出一种纤溶酶,其纤溶机理是直接溶解纤维蛋白。     

脑梗死的凝血纤溶状态和蚓激酶的作用

脑梗死时病人的血液处于高凝、低纤溶、高粘附状态。蚓激酶为蚯蚓提取物,在离体及整体状态下可溶解血栓,它可直接溶解纤维蛋白,并具有纤溶酶原激活剂的作用,脑梗死病人应用后可促进纤溶,改善凝血及血液流变学指标     

纤溶酶产生菌的筛选及酶活力的测定

利用纤维蛋白平板法筛选纤溶酶产生菌株并测定其纤溶酶活性。从土壤、豆豉、猪血粉中分别取样,分离到30株具有溶纤活性的菌株,其中来自土壤12株,豆豉10株,猪血粉8株。选择来自土壤,并与已报道的菌株菌落特征不同的34,37菌株号进行研究,测得其酶比活力分别为9.05,624U/mg.Pro。     

与止血有关的生药的研究

在中药中用于治疗血液和血管系统炎症的称之为驱瘀血药的生药很多,但是它们与出血、凝血、炎症等的哪个机构有关的研究报告却很少。为使临床上的治疗目标更明确,选择了历来作为驱瘀血药、止血药用的生药,用其50％甲醇提取物研究了对血小板凝集系统、血纤溶解系统的作用。结果:(1)有凝集抑制作用、抗血纤溶解作用的生药有牡丹皮、芍药、桂皮、大黄、艾叶、骨碎补、茜草根、苏木、地榆等。(2)只有凝集抑制作用的生药有黄连、阿胶、枳实、青皮、三棱、白芨等。(3)只有抗血纤溶解作用的生药有侧柏叶、皂角制、藕节、益母草、竹叶、槐花、地骨皮等。(4)只有尿激酶活性促进作用的生药有人参、桃仁、杏仁、水蛭、虻虫等。尚未发现有血纤维蛋白溶酶活性促进作用的     

豆豉溶栓酶的分离纯化及其体外溶栓作用

目的：从豆鼓中分离具有纤溶活性的酶,并对其体外溶栓作用作初步研究。方法：采用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ１００和 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ５０柱层析法纯化该酶,以纤维蛋白平板法测定该酶的纤溶活性;两点法测定该酶对发色底物Ｈ２２５１的水解活性;体外试管法测定该酶对天然人血凝块的溶解作用。结果：经过两次柱层析得到在ＰＡＧＥ中呈单一区带的纤溶酶。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ初步测定其分子量为 ３６ ０００。该酶在平板中可直接溶解纤维蛋白,对Ｓ－２２５１的水解活力与牛纤溶酶相当,并能溶解天然人血凝块。结论：豆鼓中存在一种具有较强纤溶活性的溶栓酶,值得进一步深入研究。     

海洋假单胞菌纤溶酶的体外溶栓实验研究

目的确证血纤维蛋白溶酶的体外溶栓作用。方法用血纤维蛋白平板法、体外血块溶解实验研究该酶的纤溶特点及对血块的溶解作用。结果可直接水解血纤维蛋白 ,溶栓活性同蝮蛇抗栓酶类似 ,但对红细胞形态没有影响。结论血纤维蛋白溶酶是一种直接纤溶酶 ,有较强的纤溶活性     

尿激酶

本品系由男性尿中提得的一种能激活纤溶酶元的蛋白质酶而制成的粉针剂。 [作用特点] 本品是一种溶血栓药物,能激活人体内非活性的纤溶酶元转变为活性的纤溶酶,后者具有水解纤维蛋白的作用,从而使血栓溶解。本品因来自人体蛋白,故无抗原性,副作用小,并可长期多次用药。 [适应症] 用于治疗各种新鲜血栓形成     

蚓激酶重组逆转录病毒载体pLN-BCP-LK~R的构建及其在山羊乳腺组织中的表达

目的在山羊奶中表达蚓激酶。方法将含有蚓激酶基因的表达盒插入到逆转录病毒载体pLNCL中获得了蚓激酶重组逆转录病毒载体,转染泌乳期奶山羊乳腺小叶并获得暂时表达。利用脂质体转染PA317包装细胞,G418进行筛选得到阳性细胞克隆,克隆扩大培养后病毒上清感染妊娠期奶山羊乳腺小叶组织,山羊产后采奶纤维蛋白平板溶圈法检测蚓激酶活性。结果产后奶样经纤维蛋白平板溶圈法检测羊奶具有明显纤溶活性。结论蚓激酶基因已经整合到奶山羊乳腺组织并能实现相对稳定的表达。     

蚓激酶最新临床应用进展

蚓激酶是从露天红赤子爱胜蚓中提取的一种具有纤溶活力的丝氨酸蛋白酶.它可直接溶解纤维蛋白,并具有纤溶酶原激活剂的作用,病人应用后可促进纤溶,改善凝血及血液流变学指标.广泛用于心、脑血管疾病、突发性耳聋、视网膜血管疾病、血管外科疾病等多种疾病的治疗、康复和预防.现将临床应用和不良反应作一介绍.     

Recent progress on the traditional Chinese medicines that regulate the blood

In traditional Chinese medicine, the herbs that regulate blood play a vital role. Here, nine herbs including Typhae Pollen, Notoginseng Root, Common Bletilla Tuber, India Madder Root and Rhizome, Chinese Arborvitae Twig, Lignum Dalbergiae Oderiferae, Chuanxiong Rhizoma, Corydalis Tuber, and Motherwort Herb were selected and reviewed for their recent studies on anti-tumor, anti-inflammatory and cardiovascular effects. Besides, the analytical methods developed to qualify or quantify the active compounds of the herbs are also summarized.     

可口革囊星虫(Phascolosoma esculenta)纤溶酶PFE的分离纯化

目的从可口革囊星虫中分离纯化纤溶酶,并初步研究其酶学性质。方法实验以纤维蛋白平板法检测纤溶活性,采用匀浆、抽提离心、G-25脱盐、DEAE梯度洗脱等方法从可口革囊星虫中分离纯化出纤溶酶PFE,并进一步研究pH、温度、金属离子及抑制剂对该酶活性的影响。结果分离纯化得到纤溶酶PFE,SDS-PAGE法测得相对分子质量为35kDa左右。此外,其酶学性质研究结果表明:PFE的最适反应pH为7.4,酶活力在pH6.6～9.0时相对稳定;PFE在20～40℃条件下,酶活力保持相对稳定。Fe3+对酶活性有强烈的抑制作用,Ca2+、Mg2+、Fe2+、K+、EDTA和β-巯基乙醇对酶活性均具有一定的抑制作用。结论可口革囊星虫中存在纤溶酶PFE,此酶可直接降解纤维蛋白,具有重要的临床开发价值。     

Fibrinolytic enzyme(s) in western diamondback rattlesnake (Crotalus atrox) venom

Western diamondback rattlesnake (Crotalus atrox) venom has been shown to have significant fibrinolytic activity and no visible fibrinogen clotting activity. The fibrinolytic enzyme(s) estimated by fibrin plate assay, exhibited optimal activity at pH 7·5. Molecular sieve chromatography on Sephadex G-100 revealed that fibrinolytic activity was equally distributed between two protein peaks having mol. wts of 60,000 and 21,500.     

Vasoactive intestinal polypeptide (VIP) stimulates fibrinolytic system in the rat

We have studied the fibrinolytic effect of VIP in rats. Intravenous injection of VIP enhanced blood fibrinolytic activity in a dose-related manner. The euglobulin fraction obtained from intact rat plasma incubated with VIP did not produce an increase in fibrinolytic activity, while dextran sulfate (DS) and urokinase (UK) showed the activity. VIP solution placed on a plasminogen-rich fibrin plate did not show fibrinolysis. VIP had neither a plasminogen activator nor plasmin activity. VIP may release plasminogen activators into the blood.     

一种新型蚯蚓纤溶酶组分的部分性质研究

目的获得一种高效的溶栓药物。方法从赤子爱胜蚓 (Eiseniafoelida)中共提取 6种纤溶酶组分 ,分别命名为F1～F6。取F1用Lowry法测定蛋白质浓度 ,SDS PAGE鉴定纯度及表观相对分子质量 (Mr) ,纤维蛋白平板法测定其纤溶活性 ,测定其水解BAEE(Nα 苯甲酰 L 精氨酸乙酯盐酸盐 )、血浆纤溶酶特异性底物ChromozymPL(苄氧羰酰甘氨酰脯氨酰精氨酰对硝基苯胺盐酸盐 )及组织型纤溶酶原激活剂Chromozymt PA(N 甲磺酰苯丙酰甘氨酰精氨酰对硝基苯胺盐酸盐 )的活性 ,并进行N端氨基酸序列测定。结果F1纯度为 10 0 % ,表观Mr 为 2 85 0 0 ,总纤溶活性为 6 5 .5 1× 10 3 mm2 /mg ,水解BAEE的米氏常数 (Km)为 2 .80 87× 10 -2 mol/L。对chromozymPL及chromozymt PA的亲和力较低。F1的N端氨基酸序列为IIGGSNASPGEFPWQ ,且对天然凝血块有较强的溶解作用。结论F1为纯度很高的单一组分 ,纤溶活性较高。     

少棘蜈蚣纤溶活性蛋白的抗血栓作用

目的研究少棘蜈蚣(Scolopendra subspinipes mutilans L.Koch)纤溶活性蛋白的抗血栓作用。方法采用离子交换层析和分子筛等制备法从少棘蜈蚣中纯化到蜈蚣纤溶酶(Scolopendra subspinipes mutilans L.Koch fibrinolyti cenzyme,SSFE),用纤维蛋白平板检测酶活力,常规方法检测了SSFE溶血性和出血性,进行了SSFE体外溶栓和体内溶栓实验,并检测了凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶时间(APTT)和凝血酶时间(TT)3个标准化指标。结果PAGE显示SSFE为单一组分,具有纤溶活性;证明SSFE无致出血性且无致溶血活性,低、中、高剂量SSFE使小鼠APTT和TT均明显延长,中剂量SSFE对PT有延长作用,而高剂量作用不明显。结论蜈蚣纤溶酶具有抗血栓作用。     

链霉菌产生的新型纤溶酶的纤溶性质和溶栓作用

目的旨在进一步确证纤溶活性的蛋白酶SW-1的溶栓作用和性质。用体外加热平板法、试管凝块法和在体内对大鼠静脉血栓溶解及对纤溶因子的作用等实验,发现SW-1在体外可直接降解纤维蛋白,而无激活纤溶酶原的作用。在体内,SW-1对大鼠静脉血栓有显著的溶解效果,与同剂量尿激酶的溶栓作用相当。给药(iv)30min后,SW-1引起大鼠血浆中纤溶酶、纤溶酶原水平提高,纤维蛋白原水平下降,而对组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)、α₂-纤溶酶抑制剂无显著影响。提示SW-1是一种具有纤溶活性的蛋白酶,而不是纤溶原激活剂。     

白唇竹叶青蛇(Trimeresurus albolabris)毒降纤酶的分离纯化以及性质

目的从白唇竹叶青蛇(T.albolabris)毒中分离纯化无出血作用的降纤活性组分,探讨其理化性质及部分生物功能。方法用DEAE-SephadexA-25,SephadexG-100和CM-SephadexC-50三步色谱法进行分离纯化。SDS-PAGE和HPLC鉴定其纯度和相对分子质量,平板法测定其降纤活性。结果从白唇竹叶青蛇毒中分离纯化获得单一的降纤组分,能迅速水解纤维蛋白原或纤维蛋白原Aα链,缓慢水解Bβ链,而对γ链无作用,SDS-PAGE鉴定其相对分子质量为56000。EDTA能抑制其纤维蛋白原水解活性,而PMSF、β-巯基乙醇对其活性无影响,提示该组分为单链α金属蛋白酶。结论从白唇竹叶青蛇毒中分离纯化得到1种无出血作用且降纤活性强的新蛇毒降纤酶。     

N-V蛋白酶体内外纤维蛋白溶解活性的实验研究

目的研究NV蛋白酶对纤溶系统的影响。方法采用纤维蛋白平板法,观察NV蛋白酶体外溶解纤维蛋白的活性。通过一次静脉给药后不同时间测定家兔纤维蛋白原(Fg)、D二聚体(DDimer)的含量及血浆优球蛋白溶解时间(ELT),观察NV蛋白酶对正常家兔纤维蛋白溶解活性的影响。通过测定家兔凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT),观察NV蛋白酶对凝血功能的作用。结果NV蛋白酶具有体外溶解纤维蛋白的活性,测定效价为30000kU·g-1。NV蛋白酶(6000U·kg-1体重,15000U·kg-1体重)可明显减少DDimer、Fg含量,缩短ELT,对PT、APTT无明显影响。结论NV蛋白酶具有纤维蛋白溶解活性,对凝血功能未见有影响。     

地鳖纤溶活性蛋白对S180和H22荷瘤小鼠肿瘤的抑制及诱导细胞凋亡作用

目的研究地鳖虫纤溶活性蛋白(fibrinolytic proteinsof Eupolyphaga sinensis,EFP)对肿瘤细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法采用纤溶平板法检测了EFP纤溶活性;采用流式细胞术检测了EFP高、中、低浓度对小鼠S180和H22实体瘤组织细胞凋亡的诱导作用;采用免疫组织化学法检测了Caspase-3的表达;采用TRAP-PCR银染法检测了腹水瘤组织端粒酶活性。结果 EFP对S180和H22实体瘤有一定的抑瘤作用,对H22和S180腹水瘤细胞端粒酶活性有一定降低作用,可提高Caspase-3表达水平,诱导细胞凋亡。结论 EFP具有诱导S180和H22肿瘤细胞凋亡作用。