微量元素硒对黄曲霉毒素B1诱发大鼠肝癌的影响

短期给予Wistar雄性大鼠曲霉毒素B1（AFB1）诱发肝癌模型，同时饮用含硒量分别为3ppm和6ppm的饮水，在第18、30、38、52和79周分批处死动物，用组织学定量的方法观察硒对肝细胞增生灶、酶改变灶和肝癌 发生的影响。实验证明硒具有明显的抑癌作用，硒的抑癌作用主要是抑制给致癌剂期增生灶的形成及增大，而不能抑制停用致癌剂后已形成的增生灶的增大，也不能促其消退。硒还有抑制增生灶癌变的作用。6ppm硒组的动物出现慢性硒中毒，抑癌作用比3ppm硒组差。     

肝局灶性结节性增生三例

肝局灶性结节性增生三例范长玲林汉良例１男，３９岁。右上腹隐痛６个月。Ｂ超、ＣＴ检查发现“肝左叶占位性病变”、“胆囊增大”。门诊以“原发性肝癌？”、“慢性胆囊炎”于１９９５年８月２１日入院。体检：肝功能正常、甲胎蛋白阴性。术中见肝左叶包膜下直径约２ｃｍ...     

大鼠再生肝对二乙基亚硝胺启动作用的敏感性

目的比较再生肝和正常肝对二乙基亚硝胺（ＤＥＮ）启动作用的敏感性。方法以２／３肝叶切除后８周末的大鼠为实验组,正常大鼠为对照组,作如下比较：肝重、常规组织学检查及３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验;用修改的Ｓｏｌｔ－Ｆａｒｂｅｒ模型,通过对ＧＧＴ阳性癌前病灶的体视学测量,观察肝脏对ＤＥＮ的启动效应;在体内和体外（无血清原代培养肝细胞）经ＤＥＮ攻击后,以核酸原位缺口标记方法观察肝细胞ＤＮＡ的损伤程度。结果２／３肝叶切除后８周末的实验组肝脏的修复过程已完成,未见肝细胞继续增生的表现;经ＤＥＮ攻击后,实验组肝癌前病灶在数密度和体积密度上都显著高于对照组;无论在体内或体外接受ＤＥＮ攻击后,实验组肝细胞ＤＮＡ的损伤程度都显著大于对照组。结论即使再生过程已经完成,再生肝仍比正常肝具有较高的致癌敏感性,这与再生肝肝细胞在ＤＥＮ攻击后其ＤＮＡ损伤较重相关。     

脂多糖对化学诱癌大鼠抗氧化系统的选择性损害作用

目的：观察脂多糖对化学诱癌大鼠抗氧化系统的影响。方法：用０３ｇ／Ｌ硫代乙酰胺给大鼠饮用６个月,诱发肝硬化癌变模型。大鼠在实验前作脾切除造成肠源性内毒素血症或／和在肝硬化形成时给予外源性脂多糖。结果：无论是外源性或／和肠源性内毒素均可提高肝硬化大鼠内毒素血症水平和肝癌发生率增加趋势。肝内丙二醛（ＭＤＡ）含量、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性不同程度地增高、而谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）和过氧化氢酶（ＣＡＴ）活性呈降低趋势,并与ＭＤＡ浓度呈明显负相关（Ｐ＜００５）。结论：抗氧化酶类代谢紊乱、特别是ＣＡＴ活性降低可能与肝硬化癌变的发生发展有关     

大鼠肝卵圆细胞体外培养过程中癌基因的表达变化及其意义

目的研究大鼠肝卵圆细胞体外培养过程中癌基因的表达变化与细胞转化的关系。方法用化学致癌剂３′ＭｅＤＡＢ诱发ＳＤ大鼠肝卵圆细胞增生,采用Ｐｅｒｃｏｌ密度梯度离心法将肝卵圆细胞进行分离和体外长期培养。在培养过程中,通过ＲＮＡＤＮＡｓｌｏｔｂｌｏｔ杂交方法,动态观察Ｈａｒａｓ、Ｋｉｒａｓ和ｃｍｙｃ癌基因的表达变化。结果卵圆细胞在培养过程中倍增时间逐渐缩短,非整倍体染色体数目增加,在软琼脂中生长的克隆增多。ｃｍｙｃ、Ｋｉｒａｓ和Ｈａｒａｓ的表达在细胞培养和转化的不同阶段均表现同步关系,即同时升高或降低。结论癌基因的表达反复升高与细胞转化过程相关联,而且,卵圆细胞的转化有赖于多个癌基因激活     

肿瘤转移抑制基因nm23在人肝细胞癌中的表达

为探讨ｎｍ２３－ＨＩｍＲＮＡ表达水平与人肝细胞癌转移倾向的相关性，同时进行定位分析，采用地高辛标记的ｎｍ２３－ＨＩ反意ｃＲＮＡ探针进行原位杂交的方法，对人肝细胞癌及癌旁肝组织中肿瘤转移抑制基因ｎｍ２３－ＨＩｍＲＮＡ进行检测。初步研究结果表明：原位杂交染色阳性者为胞浆型颗粒状或团块状。ｎｍ２３－ＨＩｍＲＮＡ表达水平与人肝细胞癌转移倾向呈负相关（Ｐ＜０．０５）。ｎｍ２３－ＨＩｍＲ－ＮＡ表达水平与肝癌的大小、肝脏疾病背景等临床病理指标无关（均Ｐ＞０．０５）。     

AMACR／P504S可用于区分肝细胞癌、异型增生肝细胞与良性非异型增生性肝细胞

AMACR/P504S是诊断前列腺癌的一个辅助指标,在前列腺腺癌中P504S呈胞质弥漫或顶端粗糙颗粒状染色。已有的研究表明AMACR/P504S可在多种正常组织和恶性肿瘤包括肝细胞癌中表达。为了研究AMACR/P504S在良性非异型增生肝组织、肝细胞异型增生和肝细胞癌中的不同表达,作者采用免疫组化方法检测了20例肝细胞癌及其相应的癌旁肝组织中AMACR/P504S的表达。结果发现所有20例肝细胞癌均表达AMACR/P504S,其中16例染色呈粗糙的颗粒状,4例呈细腻的斑点状和粗糙的颗粒状。17例阳性表达于肿瘤细胞基底旁,3例为基底旁和弥漫分布。在所有20例…     

不同代谢活化条件对N-亚硝胺类化合物细菌回复突变结果的影响

目的 检测N-亚硝基二甲胺(NDMA)和N-亚硝基二乙胺(NDEA)的致突变风险,探讨不同肝微粒体S9混合液对N-亚硝胺类化合物致突变结果的影响.方法 将鼠疫伤寒杆菌TA97、TA98、TA100、TA102、TA1535、TA1537和待测化合物分别与SD大鼠、CD-1小鼠和人的肝脏S9混合液混合后于37℃预培养1 ...     

肝脏局灶性结节性增生的诊断与治疗

目的:探讨肝脏局灶性结节性增生(focal nodular hyperplasia,FNH)的临床诊断和治疗。方法:回顾性分析18例经病理组织学检查确诊的FNH的临床病理、影像学检查、外科治疗及随访资料。结果:18例FNH,影像学检查诊断率较低,其中彩超确诊率44.4%(8/18),CT66.7%(12/18),MRI88.8%(16/18),手术切除病灶效果好,随访1年未发现复发病例。结论:目前CT和MRI是FNH诊断的重要手段,对影像检查疑为FNH又暂不同意手术探查病人可考虑定位穿刺活组织检查,但对穿刺未能定性成功及不能排除恶性肿瘤者应手术治疗。     

人肝细胞肝癌与正常肝组织内C／EBP的分布及其mRNA丰度分析

以兔抗增强子结合蛋白（ＣＣＡＡＴ／ＥｎｈａｎｃｅｒＢｉｎｄｉｎｇＰｒｏｔｅｉｎ，Ｃ／ＥＢＰ）多肽抗体，用ＡＢＣ法对１８例人正常肝组织、５例新生儿肝组织及７９例肝细胞肝癌（其中４０例带有癌旁肝组织）中Ｃ／ＥＢＰ进行免疫组化定位，同时运用Ｃ／ＥＢＰｃＤＮＡ探针对３例人正常肝组织、１例新生儿肝组织、１０例肝细胞肝癌（其中８例含配对的癌旁肝组织）进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析。免疫组化结果显示，Ｃ／ＥＢＰ弥漫分布于分化成熟的肝细胞浆及肝细胞核中（胞浆含量更丰富），在肝癌分化差（或分化低）的组织细胞中含量低或检测不到，并和癌的分级存在一定相关性。所有增生的胆管上皮细胞也呈阳性。Ｃ／ＥＢＰｍＲＮＡ丰度（表达量）和免疫组化结果基本相符。以上结果进一步证实Ｃ／ＥＢＰ在维持肝细胞分化状态中担负重要作用。     

鼻咽癌组织中潜伏膜蛋白1的表达对癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨治疗前鼻咽癌组织中潜伏膜蛋白１（ＬＭＰ－１）的表达对癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 收集未经治疗的鼻咽癌活检组织标本５５例,采用原位分子杂交和免疫组化检测ＥＢＵ病毒编码的小ＲＮＡｓ和ＬＭＰ－１以及癌细胞增殖细胞核抗原指数和癌组织中凋亡要关基因产物ｂｃｌ－２的表达,以末端标记原位细胞死亡指数（ＴＵＮＥＬ ｉｎｄｅｘ ＴＩ）表示癌细胞的凋亡程度。结果（１）５５例末治疗鼻咽癌组织中２７例呈ＬＭＰ     

实验性大鼠肝脏癌变过程中生长抑素受体2表达的意义

目的：研究生长抑素受体2（SSTR2）在肝癌癌变过程中的表达和分布，探讨SSTR2在肝癌发生过程的作用。方法：二乙基亚硝胺溶液(DENA)诱发SD大鼠发生肝癌，RT-PCR和免疫组化检测肝硬化肝组织、肝癌中SSTR2的mRNA和蛋白表达，比较不同时期肝组织中SSTR2-mRNA和蛋白的表达。结果：DENA诱癌8周后，可见肝癌形成。诱癌8周时，癌旁肝组织SSTR2-mRNA明显高于正常肝脏（1.794±0.212 vs 0.950±0.138,P<0.05），随着诱癌时间的延长，SSTR2-mRNA的表达逐渐增强，到16周时到最高（2.053±0.169），随后逐步下降（22周时低至1.468±0.107），而肝癌组织SSTR2-mRNA表达只为1.219±0.249。免疫组化检测SSTR2蛋白表达发现，SSTR2主要位于胞浆和细胞膜，SSTR2蛋白表达的变化与SSTR2-mRNA的变化一致。结论：SSTR2在实验性肝硬化早期表达逐步升高，随着肝硬化的加重和肝细胞癌变的发生，SSTR2表达逐渐下降。SSTR2表达下降可能与肝细胞癌发生、发展密切相关。     

人乳腺癌细胞系中上皮型钙黏连蛋白表达对其黏附和增殖的影响

目的 探讨上皮型钙黏连蛋白(E-cadherin,E-cad)表达对MDA-MB-231人乳腺癌细胞黏附力及增殖的影响.方法 采用脂质体转染方法将携带有E-cad基因的重组真核表达质粒E-cadpcDNA3转染入E-cad阴性MDA-MB-231人乳腺癌细胞系,通过G418筛选,Western blot法鉴定出E-cad过表达的阳性单克隆细胞株.分别通过三种不同的黏附试验检测E-cad转染前后细胞自身黏附、与基质黏附及与其他细胞黏附能力的变化:免疫沉淀法检测表达的外源性E-cad能否与内源性连环蛋白(β-catenin,β-cat)发生相互作用.Western blot检测E-cad表达后细胞内β-cat、细胞周期蛋白(cyclin)D1蛋白的表达变化;MTT法检测细胞的生长和增殖能力状况;流式细胞仪检测转染E-cad前后细胞凋亡变化情况.免疫细胞化学直接二步法检测β-cat定位变化.结果 通过稳定转染,获得了稳定表达E-cad的两个细胞株Ecad-231-7和Ecad-231-9.MDA-MB-231细胞在不贴壁培养时大部分呈单细胞状态,而两个表达E-cad的细胞株都形成大细胞团;MDA-MB-231、Ecad-231-7和Ecad231-9与HCT116细胞共孵育30 min后的平均黏附率分别为39.0%、60.0%和59.5%.MDA-MB-231细胞在EDTA作用5 min后的平均脱落率为37.4%,Ecad-231-7和Ecad-231-9细胞分别下降为4.2%和7.2%,即E-cad表达后乳腺癌细胞的自身黏附力、与基质的黏附力及与其他细胞的黏附力均增强;且细胞内过表达的外源性的E-cad与β-cat结合,使细胞内cyclin D1表达下降,细胞增殖受到抑制.常规培养48 h后MDA-MB-231、Ecad-231-7和Ecad-231-9细胞的凋亡率分别为1.9%、2.0%和2.1%,E-cad表达对细胞的凋亡没有明显影响.二步法染色显示胞质内β-cat增加.结论 成功建立了稳定表达E-cad蛋白的单克隆细胞株Ecad-231-7和Ecad-231-9.表达的E-cad通过β-cat-cyclinD1途径增强癌细胞黏附力、抑制癌细胞增殖.

Abstract：

Objective To investigate the role that E-cadherin (E-cad) plays on cell adhesion and proliferation of human breast carcinoma. Methods E-cad expression vector was transfected into an E-cadnegative human breast carcinoma MDA-MB-231 cells. G418 was used to screen positive clones. E-cad,β-catenin (β-cat) and cyclin DI expressions of these clones were confirmed by Western blot. Their cell-cell and cell-matrix adhesion abilities were detected. E-cad/β-catenin interaction was confirmed by immunoprecipitation. Cell proliferation was evaluated by MTT. Cell apoptosis was analyzed by flow cytometry. Direct two-step immunocytochemistry was used to detect the localization of β-cat. Result E-cad ( + ) cell strains Ecad-231-7 and Ecad-231-9 were established. When cultured in ultra-low-binding dishes Ecad-231 cells grow in suspension while Ecad-231-7 and Ecad-231-9 cells grow in large clamps. When MDA-MB-231, Ecad-231-7 and Ecad-231-9 respectively. The average detachment rates by EDTA for 5 min are 37.4%, 4. 2% and 7.4% respectively. So E-cad expression enhanced hemotypic and heterotypic cell-cell adhesion and cell-matrix adhesion. Forced exogenously expressed E-cad could combine with endogenous β-cat, whereas down stream cyclin D1 expression was significantly decreased, as evidenced by Western blot. The rates of cell apoptosis of MDA-MB-231, Ecad-231-7 and Ecad-231-9 were 1.8%, 2. 0% and 2.1%. Expression of E-cad had no obvious effect on the apoptosis of tumor cells with regular culture.β-cat increased in the cytoplasma. Conclusions Two monoclonal tumor cell strains ( Ecad-231-7 and Ecad-231-9) stably expressing E-cad were successfully established. E-cad could enhance adhesion and inhibit proliferation of human breast carcinoma cells through a pathway involving β-cat and cyclin D1.     

抑癌基因PTEN在肝癌组织中的突变及其对肝癌细胞增殖和凋亡的调控作用

目的 探讨抑癌基因PTEN在人原发性肝癌组织中的突变及其对肝癌细胞增殖和凋亡的调控作用。方法 （1）聚合酶链反应（PCR）-单链构象多态性（SSCP）法和序列分析法检测42例人原发性肝癌组织中抑癌基因PTEN第5、8外显子的突变。（2）脂质体介导的基因转染法将野生型PTEN基因、突变型PTEN基因的真核表达载体pEGFP-wt-PTEN、pEGFP-PTEN;G129R分别转染不表达内源性PTEN蛋白的人肝癌细胞系HHCC,G418筛选稳定表达PTEN蛋白的克隆,MTT比色实验分析测定细胞的增殖能力。以未转染基因的HHCC细胞和转染空载体pEGFP-C1的HHCC细胞为对照。（3）TNF-α诱导上述细胞凋亡,流式细胞仪测定凋亡细胞比例;Western印迹法检测细胞内磷酸化Akt（Ser473）的表达。结果 （1）在4例肝癌组织中检测出PTEN基因第5外显子的异常突变条带（9．5％,4／42）。（2）转染野生型PTEN基因的HHCC细胞生长明显抑制,而转染突变型PTEN基因的HHCC细胞的增殖能力与对照组比较差异无统计学意义。（3）TNF-α诱导分别转染野生型、突变型PTEN基因、空载体的HHCC细胞和未转染基因的HHCC细胞凋亡,细胞凋亡率分别为13．8％、8．1％、4．6％、3．3％,与转染空载体的HHCC细胞比较,转染野生型PTEN基因的HHCC细胞凋亡率增高（P〈0．05）;而转染突变型PTEN基因的HHCC细胞凋亡率差异无统计学意义（P〉0．05）。Western印迹检测显示未经基因转染的HHCC细胞内源性Akt水平较低;HHCC细胞经TNF-α作用,其内源性Akt水平增高;转染野生型PTEN基因,可降低TNF-α诱导的肝癌细胞内信号分子Akt（Ser473）的磷酸化水平。结论 （1）首次发现原发性人肝癌组织中抑癌基因P1EN发生突变;（2）野生型PTEN基因可抑制肝癌细胞增殖,而突变型PTEN基因丧失对肝癌细胞增殖的调控作用;（3）野生型PTEN基因可降低TNF-α诱导的肝癌细胞内重要的信号分子Akt（Ser473）的磷酸化水平,即野生型PTEN基因通过抑制TNF-α诱导的肝癌细胞Akt磷酸化（活化）而抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。     

人肝纤维化相关细胞的研究

应用免疫组化及核酸分子杂交技术研究人肝纤维化中与细胞外基质（ＥＣＭ）沉积有关的细胞。结果显示慢性肝病组ＥＣＭ均增高，尤其是活动性慢性肝病者ＩＩＩ型胶原及其ｍＲＮＡ更为突出，该组ＩＩＩ型胶原前肽（ＰＩＩＩＰ）的免疫组化及原位杂交阳性细胞亦明显增多，主要位于间质与实质交接处。免疫组化及电镜证明这些胶原生成细胞主要是与贮脂细胞相关的间质细胞，其增生程度与炎症细胞浸润密切相关。     

肝结节性再生性增生的临床病理形态观察

目的：探讨肝脏结节性再生性增生的临床病理特点及诊断要点和需进行鉴别诊断的疾病。方法：收集9例肝脏结节性再生性增生,分析、总结其临床病史、病理改变特点。结果：肝脏结节性再生性增生是非肝硬化门脉高压的一个重要原因,多与自身免疫疾病,恶性肿瘤或服用某些药物等有关。临床以门脉高压为主要表现,但肝功能正常或仅轻度异常。病理学检查肝脏内弥漫分布无纤维分隔的小的再生结节,其门静脉分支有不同程度阻塞性改变,提示本病形成与门脉分支的局灶性阻塞致其抽供应的部分肝组织的慢性缺氧有关。结论：肝脏结节性再生性增生有其特点,诊断时应与肝硬化、局灶结节性增生、肝细胞腺瘤等疾病鉴别。     

乳腺增生病组织学分类及其与乳腺癌关系的研究

以纤维组织增生为指标将乳腺增生病分成小叶增生、纤维腺病和纤维硬化三个组织类型，每型又有单纯性或复合性病变，后者含导管上皮细胞不典型增生等。增生病变的进展与年龄增长相关。纤维硬化型患者年龄与癌周伴乳腺增生病的患者年龄相近。三种类型的增生病增殖细胞核抗原阳性表达水平逐步递增；纤维硬化型增殖细胞核抗原阳性表达与癌平行。纤维硬化型导管和不典型增生的导管管周肌上皮和基底膜扭曲、断裂、不完整绕管的改变提示在临床上应密切随访。     

小干扰RNA靶向沉默CXCR2基因抑制肝癌细胞的增殖

目的 研究CXCR2-小干扰RNA（siRNA）基因体外抑制肝癌细胞增殖的作用.方法 将CXCR2-siRNA以脂质体转染法转染肝癌细胞hepG2,24h后荧光显微镜观察细胞荧光含量.采用RT-PCR及免疫印迹法分别检测正常肝Chang细胞、未转染肝癌hepG2细胞以及转染CXCR2-siRNA基因后hepG2细胞在转染24、48、72h后的CXCR2 mRNA和蛋白表达水平.以未转染的hepG2细胞为对照,CCK8法检测转染CXCR2-siRNA的hepG-2细胞在转染24、48、72 h后的增殖.以未转染的hepG2细胞为对照,检测转染CXCR2-siRNA 24 h后hepG2细胞与Transwell小室孵育24h时的侵袭能力.结果 CXCR2-siRNA转染hepG2 24 h后镜下可见大量绿色荧光,转染率为80％.hepG2细胞CXCR2mRNA和蛋白表达水平高于Chang细胞（mRNA：1.69±0.22比0.63±0.31,蛋白：1.93±0.25比0.84±0.29,均P＜0.05）.转染CXCR2-siRNA24和48 h后hepG2细胞CXCR2mRNA表达量低于未转染的hepG2细胞（0.75±0.24、0.83±0.21比1.78±0.25,均P＜0.05）,72 h后CXCR2-siRNA虽然仍能抑制hepG2细胞CXCR2mRNA的表达,但与未转染的hepG2细胞相比差异并无统计学意义（1.35±0.18比1.78±0.25,P＞0.05）.转染CXCR2-siRNA24和48 h后的hepG2细胞CXCR2蛋白表达低于未转染的hepG2细胞（0.91±0.25、1.16±0.23比1.98±0.31,均P＜0.05）,转染72 h后蛋白水平有所上升,与对照组相比差异无统计学意义（1.71±0.18比1.98±0.31,P＞0.05）.转染CXCR2-siRNA 24、48、72 h后hepG2细胞mRNA和蛋白表达差异均无统计学意义.与未转染的hepG2细胞相比,转染CXCR2-siRNA 24、48、72 h后hepG2细胞增殖受到抑制（均P＜0.05）.转染CXCR2-siRNA的hepG2细胞对Transwell小室的侵袭能力明显低于未转染的hepG2细胞[（36±5）个腐倍视野（＆#215;200）比（526±9）个府倍视野（＆#215;200）,P＜0.05].结论 siRNA沉默CXCR2基因体外可有效抑制肝癌细胞的增殖.     

MicroRNA-100对肝癌细胞增殖活力和细胞周期的影响

 目的：探讨microRNA-100(miR-100) 对肝癌细胞增殖活力和细胞周期的影响及其可能机制。方法：通过脂质体介导将人工合成的miR-100模拟物及其阴性对照转染人肝癌HepG2细胞,用细胞计数试剂盒8(CCK-8)方法检测转染后HepG2细胞的增殖活力,用流式细胞术判定细胞周期分布,并进一步用实时荧光定量RT-PCR和Western blotting分析Polo样激酶1(Plk1)的表达水平。结果：荧光显微镜下观察到经阳离子脂质体介导的细胞转染效率大于85%。转染miR-100模拟物的实验组细胞的增殖抑制率在24、48和72 h分别为(43.5±12.2)%、(46.5±3.7)%和(52.1±0.2)%,均显著高于对照组细胞（P<0.01）,并且在72 h实验组细胞增殖指数（35.8±1.4）低于阴性对照组（39.2±1.0）和单纯脂质体组（40.7±2.0）(P<0.05)。同时与对照组相比,实验组细胞Plk1　mRNA和蛋白表达水平在转染miR-100后 72 h明显降低（P<0.05)。结论：miR-100可抑制肝癌细胞增殖,其机制可能与其下调Plk1的表达有关。