包埋后的几丁质与软骨细胞体外培养的实验研究

目的 探讨几丁质作为组织工程技术中细胞培养支架的可行性。方法 采用聚乳酸、卵磷脂及多聚赖氨酸分别或工同包埋几丁质与软骨细胞体外培养,观察其产亲水性的改变、对细胞吸附力和细胞功能的影响。结果 以聚乳酸包埋的几丁质对细胞的生长有抵制作用;以卵磷脂包埋的几柄质亲水性增强;以多聚赖氨酸包埋的几丁质对细胞吸附力增强;以卵磷脂和多聚赖氨酸共同包埋的几丁质具有良好的亲水性和对细胞吸附力,并可使细胞更好地发挥功能     

卵磷脂、多聚赖氨酸和PLA包埋PGA与软骨细胞体外培养的实验研究

组织工程技术中细胞培养支架的选择是研究的焦点之一。以ＰＬＡ包埋的ＰＧＡ无纺网是应用较为广泛的支架之一。但其亲水性差，对细胞吸附力弱，是其不足之处。此实验选择了卵磷脂和多聚赖氨酸来分别和共同包埋ＰＧＡ＋ＰＬＡ，来观察其亲水性和对细胞吸附力的改变，及对细胞功能的影响。本实验证明卵磷脂具有增强支架亲水性作用；而多聚赖氨酸除具有增加支架对细胞的吸附力外，还具有促进细胞功能的作用。以卵磷脂和多聚赖氨酸共同包埋支架使细胞均匀地分布于支架纤维之间和支架表面，充分利用了支架空间，从而更好地发挥细胞的功能。所以本实验将为组织工程技术中细胞培养支架的选择提供一条新的途径。     

卵磷脂,多聚赖氨酸和PLA包埋PGA与软骨细胞体外培养的实验研究

组织工程技术中细胞培养支架的选择是研究的焦点之一，以ＰＬＡ包埋的ＰＧＡ无纺网是应用较为广泛的支架之一。但其亲水性差，对细胞吸附力弱，是其不足之处，此实验选择了卵巢脂和多聚赖氨酸来分别和共同包埋ＰＧＡ＋ＰＬＡ，来观察其亲水性和对细胞吸附力的改变，及对细胞功能的影响，本实验证明卵磷脂具有增强支架亲水性作用，而多聚氨酸除具有增加支架对细胞的吸附力强，还具有促进细胞功能的作用。以卵磷脂和多聚赖氨酸共同包埋     

碱性成纤维细胞生长因子调节兔关节软骨细胞与包埋后聚乳酸体外培养的实验研究

目的 通过碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）调节卵磷脂和多聚赖氨酸共同包埋的聚乳酸三维支架与兔关节软骨细胞的体外培养,观察bFGF对组织工程软骨细胞生长的调节作用,探寻软骨组织工程的适宜方法。方法将体外培养的第3代兔关节软骨细胞种植于卵磷脂和多聚赖氨酸包埋的聚乳酸三维支架,加入bFGF共同培养,行大体、倒置显微镜、扫描电镜及免疫组织化学观察,分析软骨组织的形成,并行统计学分析。结果通过bFGF调节的卵磷脂和多聚赖氨酸共同包埋的聚乳酸三维支架一关节软骨细胞复合物在培养过程中不仅能够保持其初始外形,而且能保持种植细胞稳定的三维均相分布,无细胞脱落现象。同时脆性亦逐渐降低,韧性增加,有弹性,表面湿润、光滑,培养2周后,逐渐形成富含Ⅱ型胶原,具有典型软骨组织结构的成熟工程化软骨。其细胞生长及胶原分泌量明显强于对照组,统计学分析有显著性差异。结论bFGF能够促进组织工程软骨细胞的增殖,并具有增强软骨细胞功能的作用。     

利用组织工程技术预制兔耳廓软骨的实验研究

组织工程化软骨的形成与许多因素有关，但其中最主要的因素是细胞培养支架的选择。以聚乳酸包埋的聚羟基乙酸无纺网是应用较为广泛的支架之一，但亲水性差，对细胞吸附力弱，细胞基质产生少是其不足之处。我们选择了卵磷脂、多聚赖氨酸及聚乳酸分别和共同包埋聚羟基乙酸，...     

利用组织工程技术再生软骨组织的实验研究

目的 在有免疫力的动物体兔体内探索组织工程化软骨生成的影响因素。 方法 经不同物质修猸的聚羟基乙酸支架与软骨细胞体外培养,观察基质产生情况,并将细胞支架复合物体内回植,观察软骨的生成,并进行组织学及超微结构评价。结果 以孵磷脂、多聚赖氨酸及聚乳酸共同修饰的聚羟基乙酸与软骨细胞体外培养,结果基质产生旺盛,体内回植后软骨生成良好。 结论 细胞支架复合物体外培养期间有基质产生,是组织工程化软骨生成的前提     

经胶原包埋、修饰的聚羟基乙酸与软骨细胞体外培养的实验研究

目的：探讨经胶原包埋、修饰后的聚羟基乙酸（poloyglycolic acid简称PGA）作为组织技术中细胞培养支架的可行性；方法：将用胶原包埋的PGA和没有包埋的PGA分别与软骨细胞共同置于二氧化碳培养箱中培养，观察二者的亲水性，对细胞的吸附能力和细胞分泌基质的能力进行比较；结果：以胶原包埋的PGA和没有包埋的PGA亲水性没有明显的差异，二者亲水性均不强，而前者对细胞的吸附能力和细胞在其上面生长、分泌基质的能力明显增强；结论：以胶原包埋、修饰的PGA作为组织工程技术中细胞生长的支架，具有很大的应用前景。     

海螵蛸与兔软骨细胞组织的生物相容性

目的 探讨海螵蛸作为新生兔关节软骨体外细胞培养支架材料的可行性.方法 消化分离新生兔关节软骨细胞,接种于自制海螵蛸片支架上培养,从倒置相差显微镜和扫描电镜观察其亲水性和对细胞的吸附力.结果 预湿海螵蛸支架的亲水性优于未预湿海螵蛸支架,使软骨细胞更易扩散至支架孔隙.软骨细胞-支架复合体培养1周后,细胞开始在预湿海螵蛸支架上黏附、伸展、增殖;2周后细胞融合成片,布满整个支架孔隙并产生基质.结论 海螵蛸多孔支架与兔软骨细胞具有良好的生物相容性,可以作为软骨组织工程中细胞培养支架的新材料.     

几丁糖作为软骨细胞培养支架的实验研究

目的：探讨几丁糖作为组织工程技术中软骨细胞培养支架的可行性。方法：采用几丁糖无纺网作为细胞培养支架,使用前首先用10%多聚赖氨酸包埋以增加其对软骨细胞的吸附性,然后把几丁糖支架与软骨细胞一起进行体外培养,在倒置显微镜下观察几丁糖对软骨细胞生长的影响。结果：包埋后的几丁糖支架与软骨细胞一起进行体外培养,在倒置显微镜下观察几丁糖对软骨细胞生长的影响。结果：包埋后的几丁糖支架与软骨细胞一起体外培养10d,软骨细胞数目增加约6倍,并且与几丁糖支架牢固结合不易丢失。结论：几个糖无纺网经10%多聚赖氨酸包埋后,对软骨细胞吸附性增强,并且几丁糖具有良好的生物学特性,因此几丁糖符合组织工程对细胞培养支架的要求。有可能成为组织工程中一种良好的细胞培养支架。     

胶原凝胶包埋软骨细胞复合聚磷酸钙纤维/左旋聚乳酸支架异体移植修复兔关节软骨缺损

目的探讨胶原凝胶包埋软骨细胞复合聚磷酸钙纤维／左旋聚乳酸(CPPf／PLLA)支架异体移植修复兔关节软骨缺损的有效性和可行性。方法将胶原凝胶包埋的软骨细胞接种CPPf/PLLA支架构建的复合物体外培养3周，行倒置显微镜和扫描电镜观察，并将复合物异体移植入兔关节软骨缺损，术后4、8、12周取材，从大体、组织学和Ⅱ型胶原免疫组织化学对再生软骨组织进行评价。结果复合物体外培养3周，细胞被大量基质包裹，在支架内分布均匀；新形成的组织为透明软骨样组织、表面光滑且与周围组织整合良好、基质内有Ⅱ型胶原分布。结论胶原凝胶包埋软骨细胞接种CPPf／PLLA支架的方法能提高细胞一支架复合物构建质量，胶原凝胶复合CPPf／PLLA支架可作为软骨细胞载体修复关节软骨缺损。     

壳聚糖作为组织工程软骨支架的实验研究

目的 探索壳聚糖作为组织工程技术中软骨细胞培养支架的可行性。方法 消化分离猪耳郭软骨细胞，接种于自制壳聚糖、壳聚糖-胶原复合多孔支架上培养，从光镜和扫描电镜观察其亲水性和对细胞吸附力，MTT检测软骨细胞在壳聚糖、壳聚糖-胶原上的黏附率及壳聚糖、壳聚糖-胶原复合多孔支架对细胞的增殖、功能的影响。结果 软骨细胞能够在壳聚糖、壳聚糖-胶原支架上黏附、伸展、增殖和发挥正常功能，MTT测得细胞黏附率分别为81.25%和87.50%，MTT测得软骨细胞在壳聚糖-胶原支架中的增殖能力较强。结论 壳聚糖、壳聚糖-胶原复合多孔支架与软骨细胞具有较好的相容性，壳聚糖-胶原复合多孔支架更适合作为软骨组织工程中的细胞培养支架。     

取向聚乙醇酸聚乳酸共聚物支架的制备及初步实验观察

目的 研制聚乙醇酸聚乳酸共聚物(PLGA)材料的纵向取向支架,观察体外生物相容性、细胞在支架内分布等特性,探讨其作为关节软骨组织工程支架的可能性.方法 相分离法制备纵向取向PLGA支架,等离子改性、胶原包埋处理,体外接种关节软骨细胞,在环境扫描电镜下观察细胞生长、分布情况.结果 研制的PLGA取向支架生物相容性明显提高,细胞沿纵向管道垂直排列,细胞分布均匀,单侧加载细胞进入深度可达2.5 nlln.结论 取向支架能明显改善细胞在载体内的分布,细胞纵向排列接近关节软骨细胞排列方式.     

Adhesive growth of pancreatic islet cells on a polyglycolic acid fibrous scaffold

BACKGROUND: The use of cultured pancreatic islet cells for diabetes treatment offers several advantages. In theory, cultured cells show greater purity and lower immunogenicity. However, cultured islet cells display a low survival rate in vitro. In the present study we grew islet cells on a polyglycolic acid (PGA) fibrous scaffold to promote cell adhesion, growth, and viability during prolonged culture. METHODS: Islets isolated from Wistar rat pancreata were digested with collagenase and purified by the Ficoll method. Cells were grown in culture with or without PGA scaffolds. Islet cell purity was determined using a dithizone stain; viability and survival rates were determined using an AO-PI stain. The insulin-secretion index was detected using radioimmunodetection and the growth on an adhesive scaffold analyzed using an inverted microscope and scanning electron microscope (SEM). RESULTS: In contrast to the scaffold-free control group, cells cultured on PGA scaffolds exhibited improved morphology, less cell death, and prolonged survival times. Cell viability and survival rates were significantly increased in scaffolded cells when compared to control cells (P < .05). Increased insulin secretion was observed in the culture solution of scaffolded cells following stimulation with low glucose (5.6 mmol/L) versus high glucose (16.7 mmol/L). The secretion indices of the two groups were significantly different (P < .05). Islet cell growth, as observed under SEM, was tightly circumvolute, adhesive, and three-dimensional. CONCLUSIONS: The present results demonstrated that islet cells can successfully grow and survive in culture on a PGA scaffold. These cells exhibited enhanced viability, survival, and insulin secretion.     

淋巴管内皮细胞与PGA的相容性研究

目的研究人淋巴管内皮细胞(Lymphatic endothelial cells,LEC)与可吸收生物材料聚羟基乙酸(Polyglycolic acids,PGA)的相容性,为组织工程化淋巴管的构建奠定基础。方法采用免疫磁珠分离法,从幼儿包皮组织中分离出LEC,扩增至第3代,与PGA混合培养,形成细胞-生物材料复合物。每两天换液1次,观察细胞形态和黏附生长状况。体外培养1周后,行电镜观察和RT-PCR检测。结果复合物体外培养1周后,LEC黏附在PGA支架上,细胞分泌大量基质。RT-PCR提示Podoplanin、LYVE-1、VEGFR-3和Prox-1均呈阳性表达,LEC表型未发生改变。结论 LEC与PGA有良好的细胞相容性,PGA可作为组织工程化淋巴管构建的支架材料。     

明胶杂化三维聚乳酸支架研究

目的 克服聚乳酸材料的疏水性,制备表面特性和孔隙结构均符合组织工程需要的细胞支架.方法 应用改进的溶液浇注/粒子沥滤技术,制备孔隙完全连通的三维聚乳酸细胞支架,碱液预处理支架表面,浸润明胶溶液,戊二醛蒸汽交联支架上的明胶,获得杂化改性支架;用扫描电镜等对改性后的支架进行结构与性能表征.结果 圆柱形多孔聚乳酸支架,在杂化改性后吸水率增加约2倍,由改性前的(1164.2±172.9)%上升到(2637.7±527.8)%,亲水性显著增强;杂化改性后,明胶均匀分布在支架孔隙表面,支架孔隙形态、连通性基本没有变化.结论 明胶杂化能显著提高聚乳酸细胞支架的亲水性,改性过程不影响支架的孔隙结构和形态,可以制备出亲水性好、内部结构可控、孔隙率高、孔隙连通性好的组织工程细胞支架.