高强度聚焦超声制备肿瘤抗原致敏树突状细胞

目的:探讨用高强度聚焦超声辐照肿瘤细胞制备肿瘤抗原致敏树突状细胞的可行性,为高强度聚焦超声开辟新的应用领域。方法:实验于2004-01/2005-04在泰安市中心医院中心实验室完成。①实验材料:BALB/C清洁级小鼠20只。CT-26肿瘤细胞为BALB/C小鼠来源的结肠癌细胞,由解放军第二军医大学免疫学研究所惠赠。②实验方法:应用白细胞介素4 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子联合诱导培养小鼠骨髓细胞。设立4组:高强度聚焦超声辐照组将CT-26细胞置于含10%小牛血清的RPMI1640培养液中,进入对数生长期后调整细胞浓度为5×109L-1,采用1000W/cm2×30s剂量辐照CT-26细胞,离心,取上清过滤除菌。冻融组将CT-26细胞调整浓度至5×109L-1,-80℃冷冻,35℃水浴复温,循环4次,裂解离心,取上清过滤除菌。单纯CT-26细胞组将CT-26细胞调整浓度至5×109L-1,细胞不经其他任何处理。空白对照组将树突状细胞与抗原按1∶10接种,培养4～6h。从小鼠脾脏制备脾细胞,分离纯化T细胞,调整浓度至2×109L-1,T细胞与上述4组负载的树突状细胞按20∶1接种,培养基中加入白细胞介素2,共孵育48h。③实验评估:对扩增培养的树突状细胞首先进行形态学观察,再采用流式细胞仪分析细胞表型。锥虫蓝染色观察高强度聚焦超声辐照后CT-26细胞拒染率和形态学变化。ELISA法检测各组致敏树突状细胞诱导T细胞分泌白细胞介素12及干扰素-γ的含量。结果:①骨髓源性树突状细胞形态及细胞表面表型分析:体外培养小鼠骨髓细胞6～8d,细胞表面出现较多毛刺样突起,拉长,为典型的树突状细胞特征。流式细胞仪检测树突状细胞表面分子CD80、CD86、H-2Kd及I-Ad呈高表达。②高强度聚焦超声辐照后细胞拒染率和形态学的变化:超声辐照剂量为1000W/cm2×30s时,无细胞存活,完全失去细胞形态,全部被撕裂成碎片。③致敏树突状细胞诱导T细胞分泌细胞因子情况:与空白对照组比较,高强度聚焦超声辐照组、冻融组、单纯CT-26细胞组分泌的白细胞介素12及干扰素-γ含量均明显升高(P均<0.05);且高强度聚焦超声辐照组、冻融组升高幅度大于单纯CT-26细胞组,但此两组比较差异无显著性意义(P>0.05)。结论:高强度聚焦超声能使肿瘤细胞灭活、破碎,其制备的肿瘤抗原可体外致敏树突状细胞,并使树突状细胞分泌白细胞介素12,诱导T细胞分泌干扰素-γ。     

高强度聚焦超声制备抗原致敏树突状细胞及其诱导细胞毒性T淋巴细胞杀伤效应的研究

目的 探讨高强度聚焦超声(HIFU)制备抗原致敏树突状细胞(DC)及其诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的杀伤效应.方法 应用小鼠重组GM-CSF和IL-4培养小鼠骨髓DC,用HIFU制备CT26肿瘤细胞抗原致敏DC疫苗,用3H-TdR法检测T细胞增殖反应的能力,标准的4 h 51Cr 释放测定法检测CTL杀伤活性.结果 HIFU组、肿瘤细胞冻融组、肿瘤上清组和PBS组的DC在体外均可以诱导CTL增殖,但HIFU组、肿瘤细胞冻融组的DC体外诱导CTL增殖能力明显高于肿瘤上清组和PBS组(P＜0.05).HIFU组和肿瘤细胞冻融组DC体外诱导的CTL对CT26结肠癌均有明显的细胞毒性作用,与肿瘤上清组DC和PBS组比较差异有统计学意义(P＜0.05),HIFU组体外诱导的CTL杀伤活性与肿瘤细胞冻融组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 HIFU制备抗原致敏DC可以诱导CTL大量增殖,并能诱导出杀伤效应较强的CTL.     

高强度聚焦超声破坏结肠癌细胞株的实验观察

目的：探讨用高强度聚焦超声辐照肿瘤细胞，制备肿瘤抗原的合适剂量。 方法：实验于2003-12／2004-10在泰安市中心医院中心实验室和超声治疗中心完成。实验仪器为FEP-BY01型高强度超声聚焦热疗肿瘤治疗机。CT-26肿瘤细胞为BALB／C小鼠来源的结肠癌细胞，高强度聚焦超声辐照CT-26结肠癌细胞株后，用椎虫蓝染色镜下观察不同辐照时间、不同声强辐照后细胞的拒染率和形态学的变化、MTT法测定肿瘤细胞存活率，分析高强度聚焦超声剂量与肿瘤细胞存活率的关系。 结果：①高强度聚焦超声声强与细胞存活率的关系：进行回归曲线拟合分析为指数关系，方程为y=155．41e^-0.048，R^2=0.9728，P〈O．05。②高强度聚焦超声辐照时间与细胞存活率的关系：进行回归分析为直线关系，方程为y=73．45-2．462x，R^2=0．918，P〈O．01。随着高强度聚焦超声辐照剂量的增加肿瘤细胞的存活率迅速减少，肿瘤细胞的碎片逐渐增多。超声剂量为l000W／cm^2&;#215;30s时，无细胞存活，肿瘤细胞完全失去细胞形态,全部被撕裂成碎片。 结论：高强度聚焦超声能灭活肿瘤细胞且能破碎肿瘤细胞，高强度聚焦超声制备肿瘤抗原的超声剂量为l000W／cm^2&;#215;30s。     

高强度聚焦超声治疗肝脏肿瘤

原发性肝癌是最常见的恶性肿瘤之一,全球每年约有１００万亲发病全,由于肝癌细胞一般对放、化疗不敏感,手术治疗一直是肝癌综合治疗的中心环节。但是对于中晚期肝癌,特别是伴有肝硬化、肝功能不全的病例,以及肿瘤造近门静脉、肝动脉和多发性、转移性肝癌患者,手术切除非常困难;早期肝癌伴有肝硬化肝功能失代偿时,也禁忌手术治疗,因而肝癌的实际手术切除率是很低的。近年来,国内外的学者们对肝癌的局部疗法进行了深入的研究,象激光、射频、微波、酒精注射等局部疗法,取得了一定的疗效,但临床应用是很大的局限性,且它们大多需剖腹,穿刺到肿瘤病灶内进行治疗,增加了肿瘤播散,出血等危险,限制了其临床应用范围。８０年代以来,高强度聚焦超声波（Ｈigh intensity focused ultrasound,简称ＨＩＦＵ）作为一种无创、有效、安全的治疗肿瘤新技术、正日益受到人们的注意,本文就ＨＩＦＵ治疗肝癌的机理、有效性、安全性及应用前景作一综述。     

晚期外阴肿瘤的高强度聚焦超声治疗实验研究

目的 :探讨高强度聚焦超声 (HIFU)治疗外阴 VX2 肿瘤的有效性和安全性。方法 :实验兔分 3组 ,于移植肿瘤后 14 d,A组 (n=2 0 )按受假照治疗 ,B组 (n=2 0 )接受 HIFU治疗 ,C组 (n=2 0 )接受手术治疗。分别在治疗后的即刻、 1天、 7天、 14天、 2 1天 ,从 B组中任选三只兔取活检观察其病理学变化。在 HIFU治疗后观察兔的体重及精神状况 ,局部肿瘤的消长情况 ,外阴形态 ,记录兔生存时间。结果 :靶区内组织出现凝固性坏死 ,靶区外的组织不受损伤。 A、 B、 C 3组的中位生存时间分别为 (5 7± 3.87)天、 (12 0± 8)天、 (70± 5 )天 ,B、 C两组的治愈率分别为 90 %和 6 0 % ,B、 C两组较 A组的生存时间有明显增加 (P<0 .0 5 ) ;B、 C两组比较 ,HIFU组的生存质量明显优于手术组 (P<0 .0 5 ) ,而且 HIFU组的双腹股沟淋巴结的转移明显低于手术组 (P<0 .0 5 )。结论 :HIFU能有效安全地治疗晚期兔外阴肿瘤。该技术将为临床外阴肿瘤的保持外阴完整性治疗提供一种全新的治疗手段。     

高强度聚焦超声破坏结肠癌细胞株的实验观察

目的:探讨用高强度聚焦超声辐照肿瘤细胞,制备肿瘤抗原的合适剂量。方法:实验于2003-12/2004-10在泰安市中心医院中心实验室和超声治疗中心完成。实验仪器为FEP-BY01型高强度超声聚焦热疗肿瘤治疗机。CT-26肿瘤细胞为BALB/C小鼠来源的结肠癌细胞,高强度聚焦超声辐照CT-26结肠癌细胞株后,用椎虫蓝染色镜下观察不同辐照时间、不同声强辐照后细胞的拒染率和形态学的变化、MTT法测定肿瘤细胞存活率,分析高强度聚焦超声剂量与肿瘤细胞存活率的关系。结果:①高强度聚焦超声声强与细胞存活率的关系:进行回归曲线拟合分析为指数关系,方程为y=155.4le-0.048,R2=0.9728,P<0.05。②高强度聚焦超声辐照时间与细胞存活率的关系:进行回归分析为直线关系,方程为y=73.45-2.462x,R2=0.918,P<0.01。随着高强度聚焦超声辐照剂量的增加肿瘤细胞的存活率迅速减少,肿瘤细胞的碎片逐渐增多。超声剂量为1000W/cm2×30s时,无细胞存活,肿瘤细胞完全失去细胞形态,全部被撕裂成碎片。结论:高强度聚焦超声能灭活肿瘤细胞且能破碎肿瘤细胞,高强度聚焦超声制备肿瘤抗原的超声剂量为1000W/cm2×30s。     

高强度聚焦超声治疗肿瘤的实验和临床研究现状

高强度聚焦超声(high intensity focused ultrasound，HIFU)是近年来发展起来的以尖端技术为基础的新设备。超声波具有较好的方向性、组织穿透性和可聚焦性。当超声波在体内聚焦后，通过其高热效应、空化效应等，能较准确地杀灭靶区组织细胞，因此HIFU正日益成为治疗和辅助治疗多种肿瘤的新方法，为无创外科学的进步带来了很大的希望。现已成为广大研究者关注的焦点和重点。本文重点对HIFU在临床各相关系统的实验及临床研究现状进行综述。     

高强度聚焦超声制备肿瘤抗原致敏树突状细胞及其体外诱导T细胞产生IFN-γ的研究

目的 探讨采用高强度聚焦超声（HIFU）辐照肿瘤细胞制备肿瘤抗原致敏树突状细胞（DD）和制备DD肿瘤疫苗的可行性。方法 （1）采用1ng／ml IL-4和10ng/ml GM-CSF联合诱导小鼠骨髓细胞产生DC，并用流式细胞仪检测DC的CD80、CD86、H-2K^d和I-A^d表达情况；（2）固定辐照时间或超声声强，应用不同声强或辐照时间的HIFU辐照CT26细胞株后，用台盼蓝染色、MTT法检测活肿瘤细胞数，同时用台盼蓝染色观察肿瘤细胞的形态学变化，分析HIFU剂量与肿瘤细胞存活率的关系，了解剂量-效应关系；（3）固定辐照时间和超声强度，HIFU辐照CT26细胞悬液，制备肿瘤细胞抗原并致敏DC，致敏DC与T细胞共孵育48h后提取上清液，通过ELISA法检测上清中IL-12、γ干扰素（IFN-γ）的含量，并与冻融组、单纯CT26、对照组进行比较。结果 （1）采用IL-4和GM-CSF联合诱导小鼠骨髓细胞可培养出典型的DC；（2）固定辐照时间，随着HIFU辐照剂量的增加肿瘤细胞的存活率迅速减少，肿瘤细胞的碎片逐渐增多，当声强为1000W／cm^2，辐照30s时，无细胞存活，肿瘤细胞失去正常形态，全部被撕裂成碎片；（3）通过ELISA法检测HIFU、冻融及单纯CT26组上清液中IL-12、IFN-γ的含量显著高于对照组（P均〈0．05），HIFU及冻融组上清液中IL-12、IFN-γ的含量高于单纯CT26组（P均〈0．05），但HIFU、冻融组之间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 HIFU能灭活肿瘤细胞并能使肿瘤细胞破碎，HIFU制备的肿瘤抗原可体外致敏DC，并可使DC成熟分泌大量IL-12，同时诱导T细胞分泌大量IFN-γ。     

高强度聚焦超声治疗胰腺肿瘤

目的 探讨高强度聚焦超声治疗无法切除的胰腺肿瘤。方法 高强度聚焦超声治疗5例胰腺肿瘤后，定期随访评价患者临床受益反应、生存时间并对1例治疗后患者进行肿瘤组织穿刺活检观察其病理学变化。结果 5例中4例出现临床受益反应，1例活检组织光镜下表现为纤维结缔组织中可见少量淋巴细胞浸润、坏死纤维化，呈慢性炎表现。目前所治疗的5例病人均存活(3～14个月)。结论 高强度聚焦超声治疗无法切除的胰腺肿瘤安全、有效，为临床提供一种新的无创性治疗方法。     

高强度聚焦超声治疗恶性骨肿瘤的实验研究

目的 探讨高强度聚焦超声（HIFU）治疗恶性骨肿瘤的可行性。方法 12只VX2移植性骨肿瘤兔接受HIFU治疗,采用超声检查、组织病理学方法观察HIFU治疗后移植性骨肿瘤的变化。结果 HIFU治疗后骨内、外肿瘤组织的回声增强,肿瘤组织凝固性坏死。结论 HIFU治疗兔移植性VX2骨肿瘤是可行的。     

高强度聚焦超声辐照猪胰腺实验研究

目的探讨改善胰腺HIFU辐照超声通道的方法,并了解不同能量HIFU辐照对猪胰腺组织的损伤及对胃肠道的影响。方法以2头新鲜离体猪胰腺和16头在体猪胰腺体部为靶目标,活体实验中,HIFU辐照前在12头猪胃内放置球囊并注入800~1200ml脱气水,分别以高、中、低能量HIFU进行辐照,4头猪未放置球囊并以中等能量辐照,通过光镜和电镜检查观察胰腺病理损伤程度,并观察副损伤发生情况。结果胃内放置水囊后高能量组4头猪胰腺凝固性坏死程度最重,1头发生皮肤烧伤,2头结肠坏死或穿孔,4头胃黏膜损伤;中等能量组4头猪胰腺凝固性坏死程度较轻,1头发生结肠坏死;低能量组胰腺组织凝固性坏死不明显,但电镜下可见细胞器损伤,1周后出现胰腺坏死现象,未发生皮肤、胃及结肠损伤;未放置水囊组4头猪中只有1头光镜下见胰腺点状坏死,皮肤、胃及结肠的损伤较放置水囊组明显加重。结论通过胃内放置水囊的方法可有效改善猪胰腺HIFU超声通道,高能量HIFU辐照猪胰腺更易发生凝固性坏死,但对胃、结肠的损伤较重;中低能量HIFU可引起猪胰腺发生多种形式损伤或坏死,损伤程度相对较轻,但相对安全。     

高强度聚焦超声致香猪外阴损伤的研究

目的 观察高强度聚焦超声（ＨＩＦＵ）对香猪外阴的损伤作用及愈合过程。旨在为外阴营养不良探索新的治疗方法。方法 对５只小型香猪的外阴进行ＨＩＦＵ（频率９．８４ＭＨｚ,声强１１０９Ｗ／ｃｍ＾２）连续扫描定位损伤,ＨＩＦＵ辐照后即刻、３ｄ、７ｄ、１４ｄ、２１ｄ、３０ｄ行彩超、病理检查、动态监测其损伤变化情况。结果 ＨＩＦＵ可准确定位损伤靶区组织。其相临表面皮肤组织不受损伤。ＨＩＦＵ后靶区超声影像学变化与     

高强度聚焦超声治疗子宫肌瘤疗效探讨

目的 探讨高强度聚焦超声（HIFU）治疗子宫肌瘤的近期疗效。方法 在超声诊断仪监控下应用FEB-BY02型高强度聚焦超声治疗系统对72例子宫肌瘤患者进行限形治疗，评价HIFU治疗效果。结果 治疗后63例声像图可见瘤体内部回声增强，37例肿块缩小或消失，临床症状改善（如经期缩短，经量减少等）。结论 HIFU治疗子宫肌瘤近期疗效高，安全、副作用小。     

高强度聚焦超声治疗乳腺癌的可行性研究

目的　探讨高强度聚焦超声 (HIFU )对乳腺癌实验性治疗的可行性和有效性。方法　应用重庆医科大学医学超声工程研究所自行研制生产的JC型高强度聚焦超声肿瘤治疗系统对 2 3例拟行改良根治手术乳腺癌患者术前 1～ 2周行HIFU治疗。术后测定HIFU治疗靶区大小 ,并对靶区组织作光镜、电镜和NADH 黄递酶组织化学检查。结果　①乳腺癌包块直径平均 ( 3.10± 0 .79)cm ,体积 ( 16 .80± 13.40 )cm3 ;HIFU靶区直径 ( 6 .2 4± 0 .2 6 )cm ,体积 ( 12 4.49± 47.84)cm3 ,靶区边界超过乳腺癌包块 1.5～ 2 .2cm[平均 ( 1.80± 0 .5 8)cm]。无论是靶区径线还是体积均显著大于乳腺癌包块 ( P <0 .0 0 1) ,靶区超范围完全覆盖乳腺癌包块。②HIFU靶区内多数乳腺癌细胞呈典型凝固性坏死 ;部分肿瘤切片行常规HE染色显示细胞形态无明显变化 ,难以判断是否坏死 ,但电镜和NADH 黄递酶组织化学检查证实其仍为坏死细胞 ,即非典型坏死 (NTN)。结论　①HIFU靶区完全覆盖乳腺癌包块 ,符合外科手术原则 ,HIFU治疗乳腺癌是可行的 ;②HIFU靶区内乳腺癌细胞形态不一致 ,但都是坏死细胞 ,HIFU治疗乳腺癌是有效的。     

高强度聚焦超声对血管作用的研究进展

高强度聚焦超声技术作为一种非侵入性的治疗方法,已广泛应用于临床治疗.本文就高强度聚焦超声对血管作用的机制、影响因素及实验研究进展作一综述.     

高强度聚焦超声治疗症状性子宫肌瘤的初步临床研究

目的　探讨将高强度聚焦超声 (HIFU )用于临床子宫肌瘤治疗的方案、安全性和初步疗效。方法选择具有手术切除子宫适应证的已生育的育龄期症状性子宫肌瘤患者作为治疗对象 ,采用JC 1型高强度聚焦超声肿瘤治疗系统 ,在B超定位并监视下 ,从体外将高强度超声聚焦于子宫肌瘤内 ,通过治疗头的三维组合移动适形治疗方案 ,使焦点逐渐覆盖整个肌瘤区域 ;治疗前后观察随访患者临床症状、体征、化验指标以及子宫肌瘤的超声影像的变化。结果　 6例患者的 6个肌瘤接受了HIFU治疗 ,治疗后瘤体内回声较前增高、不均 ,肿瘤内血流信号明显减少或消失 ,随着时间延长 ,瘤体边界逐渐模糊 ,体积逐渐缩小。随访 4～ 12个月 ,平均 (7.4± 2 .6)月 ,瘤体体积治疗前为 (14 8.3± 5 4.2 )cm3 ,随访末为 (4 9.2± 3 1.0 )cm3 ,缩小 63 .2 % (P <0 .0 5 )。 5例患者治疗后症状、体征改善或消失。治疗后未出现严重的副作用。结论　HIFU治疗子宫肌瘤可能是一种安全有效的方法 ,值得进一步研究。     

高强度聚焦超声治疗晚期胰腺癌20例临床研究

目的 探讨高强度聚焦超声（HIFU）治疗晚期胰腺癌的疗效、并发症及安全性。方法 用FEP－BY01型HIFU肿瘤治疗机治疗晚期胰腺癌20例。结果 经HIFU治疗后89％的患者疼痛症状显著缓解，治疗后的肿瘤组织回声出现不同程度的增强，但肿瘤大小无明显变化。3例发生了轻型胰腺炎和局部腹膜炎，2例出现了糖尿病，1例发生了脂肪泻。未发生皮肤烧伤、出血、胰瘘和胃肠穿孔等并发症。结论 HIFU可以作为晚期胰腺癌的一种安全有效的局部治疗方法。     

超声造影评价高强度聚焦超声消融治疗子宫肌瘤疗效的初步应用

目的探讨超声造影评价高强度聚焦超声治疗子宫肌瘤疗效的有效性。方法11例子宫肌瘤患者(12个病灶)分别在高强度聚焦超声治疗前3天、治疗后1个月、3个月及6个月采用常规二维超声、彩色多普勒超声及超声造影观察肌瘤大小、血流及造影改变。结果子宫肌瘤治疗后体积缩小明显,治疗后1个月、3个月及6个月体积缩小率分别为39．21±19．68%、55．58±25．69％、74．15±29．66％(P<0．05);肌瘤内部及周边的血流消失或基本消失:时间-强度曲线显示正常子宫肌层治疗前后造影剂灌注未见明显改变, 11个病灶治疗后呈持续造影剂无灌注或低灌注状态,余1个病灶边缘动脉期有小片状造影剂灌注。所有患者治疗后临床症状改善明显,少有并发症发生。结论超声造影是评价高强度聚焦超声治疗子宫肌瘤疗效的一种有效、简便的方法。     

高强度聚焦超声治疗肝癌的近期疗效评价

目的评价高强度聚焦超声(HIFU)治疗肝癌的近期效果.方法对临床病理确诊的6例肝癌患者,选择了8个病灶接受HIFU治疗,根据治疗前后磁共振(MRI)、血清肿瘤标记物和临床症状的变化等评估近期疗效.结果 MRI表现:病灶由治疗前的T1WI低信号、T2WI高信号,变成治疗后的T1WI高信号、T2WI低信号(病灶完全覆盖)或高低不一的混杂信号(病灶部分覆盖),呈现完全或部分凝固性坏死的特征性表现;动态增强扫描显示病灶由治疗前的信号强化,变成治疗后的信号强化减少或消失.患者治疗后血清肿瘤标记物有不同程度的下降、肝区疼痛有不同程度的缓解;所有患者治疗后未出现重要脏器功能明显异常和邻近组织脏器损伤等严重并发症.结论 HIFU治疗肝癌局部疗效明确,且安全、可行,为临床无创性治疗肝癌提供了一种新的手段.