鲍曼不动杆菌OXA-23基因和ISAba1基因检测和耐药性关系

目的 了解鲍曼不动杆菌的耐药现状及OXA-23型碳青霉烯酶介导的耐药性。 方法 收集临床分离的200株鲍曼不动杆菌,用K-B(Kirby-Bauer)法进行常见药物的敏感性实验;通过PCR(polymerase chain reaction)扩增、克隆测序等分析OXA-23基因及ISAba1基因。 结果 温州医学院附属第一医院分离的200株鲍曼不动杆菌除对头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南、多粘菌素等保持相对较高的敏感性,对其余常见抗生素的耐药率均已超过了80%;200株鲍曼不动杆菌中共检到155株携带OXA-23基因,168株携带ISAba1基因。 结论 温州医学院附属第一医院鲍曼不动杆菌耐药情况严重,大多带有OXA-23基因,该基因编码的碳青霉烯酶应为其耐药的主要原因,ISAba1常伴随OXA-23型出现。     

广泛耐药鲍曼不动杆菌 OXA 酶基因检测及 OXA-23基因分析

目的：研究台州学院医学院附属市立医院广泛耐药的鲍曼不动杆菌（Ab）苯唑西林酶（OXA酶）基因的分布特性及O X A‐23基因特点。方法对60株A b采用肉汤稀释法检测其最低抑菌浓度（M IC ）;聚合酶链反应（PCR）检测OXA酶的基因型,阳性产物进行DNA测序;对OXA‐23阳性的菌株通过BamHⅠ酶切分析OXA‐23以及周围基因的特性。结果60株Ab对15种抗菌药物同时存在13种以上耐药;全部菌株检出OXA‐2、OXA‐10、OXA‐24和OXA‐58,为普遍流行;27株检测到OXA‐51,为次要流行。普遍流行的OXA‐2以OXA‐2基因型（61．7％）和OXA‐53基因型（21．7％）为主;OXA‐10以OXA‐10基因型（53．3％）和OXA‐56基因型（23．3％）为主;OXA‐24以OXA‐24基因型（38．3％）和OXA‐33基因型（36．7％）为主;OXA‐58只有OXA‐58（100％）为唯一基因型;次要流行的27株Ab OXA‐51中有18株为OXA‐51基因型（30．0％）。另外3株Ab属于OXA‐23,都是OXA‐23基因型,有关的基因结构包含转座子 Tn2008和基因结构ISAba1‐blaOXA‐23。结论该院的OXA型β‐内酰胺酶基因型以OXA‐58与OXA‐2为主要流行,而对于3株OXA‐23及其周围基因检测表明,ISAba1与转座子 Tn2008复合基因以及ISAba1与blaOXA‐23的复合基因是其与众不同的特点。     

产OXA-23型碳青霉烯水解酶鲍曼不动杆菌基因研究

目的　了解临床分离 12株耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌的耐药情况、耐药株来源以及产碳青霉烯酶的类型。方法　收集本院对碳青霉烯类药中介或耐药的鲍曼不动杆菌 12株 ,用琼脂稀释法测定最低抑菌浓度(MIC) ,脉冲场凝胶电泳 (PFGE)分析其同源性 ,并用聚合酶链反应 (PCR)检测分析其耐药基因。结果　 12株细菌均为多重耐药株 ,有 9株对亚胺培南耐药 ,6株对美罗培南耐药。对青霉素类、头孢菌素类、复方磺胺甲唑均耐药 ,对氟喹诺酮类和酶抑制剂复合物耐药率最低。 12株PFGE图谱分为A、B(B1、B2 ) 2型 ,以A型为主要流行株 (9株 ) ,主要集中在重症监护病房 (ICU)。PCR检出 12株菌株均携带OXA 2 3基因 ,未能检出OXA 2 4基因。结论　本院碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌流行主要为医院感染所致 ,该流行株呈多重耐药 ,12株菌株均产OXA 2 3型碳青霉烯酶。     

产OXA-23型碳青霉烯水解酶鲍曼不动杆菌基因研究

目的了解临床分离12株耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌的耐药情况、耐药株来源以及产碳青霉烯酶的类型。方法收集本院对碳青霉烯类药中介或耐药的鲍曼不动杆菌12株，用琼脂稀释法测定最低抑菌浓度(MIC)，脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析其同源性，并用聚合酶链反应(PCR)检测分析其耐药基因。结果12株细菌均为多重耐药株，有9株对亚胺培南耐药，6株对美罗培南耐药。对青霉素类、头孢菌素类、复方磺胺甲噁唑均耐药，对氟喹诺酮类和酶抑制剂复合物耐药率最低。12株PFGE图谱分为A、B(B1、B2)2型，以A型为主要流行株(9株)，主要集中在重症监护病房(ICU)。PCR检出12株菌株均携带OXA-23基因，未能检出OXA-24基因。结论本院碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌流行主要为医院感染所致，该流行株呈多重耐药，12株菌株均产OXA-23型碳青霉烯酶。     

多重耐药鲍曼不动杆菌OXA-23基因与qacE△1基因检测的研究

目的对本院分离的多重耐药鲍曼不动杆菌(MRAB)OXA-23和qacE△1耐药基因进行检测分析。方法收集2009年1月至2010年12月分离的85株多重耐药鲍曼不动杆菌,用聚合酶链反应(PCR)方法检测OXA-23和qacE△1耐药基因并测序,序列与基因库比对。结果 85株耐药菌中OXA-23、qacE△1基因的阳性率依次为55.3%、81.2%。其中58株耐亚胺培南MRAB OXA-23、qacE△1基因的阳性率为75.86%、84.48%;而其余27株亚胺培南敏感MRAB两个基因的阳性率分别为11.11%、74.07%。结论 OXA-23基因存在与鲍曼不动杆菌耐亚胺培南密切相关,qacE△1基因检测结果提示这些菌株81.2%携带Ⅰ类整合子,是本组细菌多重耐药表型的主要原因之一。     

鲍曼不动杆菌耐药表型及碳青霉烯酶OXA基因分析

目的 检测鲍曼不动杆菌耐药表型及碳青霉烯酶OXA基因型.方法 用VITEK32鉴定出174株不动杆菌,用K-B纸片检测抗生素的耐药性,用琼脂稀释法测定抗生素的最小抑菌浓度(MIC),用多重PCR方法测定碳青霉烯酶OXA23类,OXA24类,OXA51类和OXA58类基因.结果 检出鲍曼不动杆菌146株(83.91%),耐亚胺培南的鲍曼不动杆菌46株(31.50%).鲍曼不动杆菌呈现出多重耐药性,亚胺培南、奈替米星、左氧氟沙星、头孢吡肟和哌拉西林/他唑巴坦的敏感率分别为70.69%,48.85%,44.83%,43.68%,44.83%.亚胺培南的MIC值为16～64μg/ml;耐亚胺培南鲍曼不动杆菌OXA基因主要为OXA23类,检出率为82.61%,且以OXA23/OXA51类基因为主(60.87%),检出OXA23/OXA58类1株,未测得OXA24类.结论 鲍曼不动杆菌呈现出多重耐药性,以OXA23/OXA51型碳青霉烯酶为主.     

LAMP法检测耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌OXA-23基因的研究

目的建立一种简便、快速、特异、灵敏的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)OXA-23基因分子检测方法,并用于临床标本检测,以便了解产OXA-23酶CRAB的耐药分布状况。方法运用环介导等温扩增技术(LAMP),利用PrimerExplorer 4.0软件设计一套特异引物检测CRAB的OXA-23基因。通过优化LAMP检测方法的实验条件,应用SYBR Green I作为LAMP反应荧光显色物质,然后通过肉眼目测或电泳检测比较结果。同时,应用LAMP检测该院自2013年12月至2014年3月收集分离的41株多重耐药鲍曼不动杆菌。结果 CRAB的OXA-23基因菌株LAMP反应电泳产生了阶梯状条带,而其他不同菌株和阴性对照没有条带;向扩增产物中加入1μL SYBR GreenⅠ,CRAB的OXA-23基因菌株LAMP扩增产物的颜色由橙色变为绿色,而其他不同菌株和阴性对照仍为橙色;并检测出CRAB的OXA-23基因菌株纯培养物的灵敏度达到了5cfu/μL。对41株我院分离的多重耐药鲍曼不动杆菌进行LAMP检测,检出OXA-23基因32株,检出率为78.04%。结论该院分离的CRAB OXA-23基因的携带率较高,对常用抗菌药物有非常高的耐药率;本研究建立的LAMP技术检测CRAB OXA-23基因是一种简便、快速、特异、灵敏的耐药鲍曼不动杆菌检测方法,适于基层单位推广使用,对临床医生合理选择抗生素具有重要意义。     

耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的OXA酶基因研究

目的 研究广东省中山市中医院分离耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)耐药性、苯唑西林(OXA)酶基因及流行特性。方法 收集广东省中山市中医院2012年7月至2013年12月临床分离40株CRAB,采用纸片扩散法(K-B法)药敏试验,改良Hodge试验筛查碳青霉烯酶;用聚合酶链式反应(PCR)法对β-内酰胺酶基因oxa-23、oxa-24、oxa-51和oxa-58进行扩增、序列分析。结果 40株CRAB对16种药物中,对多黏菌素和米诺环素敏感性最高,耐药率小于或等于5.0%;改良Hodge试验阳性29株(占72.5%);所有菌株均被检测到含有oxa-51基因(占100.0%),oxa-23基因为38株(占95.0%),未检出oxa-24和oxa-58基因。结论 oxa-51及oxa-23基因是广东省中山市中医院流行CRAB的主要基因型。     

OXA-23基因和外膜蛋白介导鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药的机制分析

目的分析碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌(CRAB)的耐药性、耐药基因及外膜蛋白的表达情况。方法收集徐州医学院附属医院CRAB 64株,药敏试验采用琼脂稀释法,改良Hodge试验和酶粗提取液水解底物法检测碳青霉烯酶,EDTA-Na2双纸片协同试验检测金属β-内酰胺酶,PCR法检测主要的碳青霉烯酶基因,PCR产物进行DNA测序分析,肠杆菌科基因间重复一致性序列PCR(ERIC-PCR)进行同源性分析,接合试验探讨耐药基因的可传递性,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析菌株外膜蛋白的表达。结果 64株CRAB仅对多黏菌素B保持良好的敏感性(100%);改良Hodge试验结果为阴性,酶粗提液水解底物法结果显示弱阳性;EDTA-Na2双纸片协同试验呈阴性;与敏感菌株相比,CRAB全部扩增出OXA-23基因;同源性分析将其分为4型,Ⅰ型为主要流行株(40株),其中30株来源于重症监护病房(ICU);接合试验未获成功;外膜蛋白分析发现,CRAB主要改变为缺失相对分子质量(Mr)27 000的蛋白质条带和出现Mr 30 000新蛋白质条带。结论本院ICU病区存在CRAB的克隆流行,其耐药机制可能与OXA-23基因的表达及外膜蛋白的缺失与新增有关。     

多重耐药鲍曼不动杆菌中OXA碳青霉烯酶基因的研究

目的 调查我院院内分离的多重耐药鲍曼不动杆菌中OXA碳青霉烯酶基因的存在情况,为临床合理使用抗菌药物和控制院内感染的发生提供科学依据.方法 用WalkAway 96 PLUS NC31复合板鉴定菌种,用微量稀释法和K-B纸片扩散法测定菌株的药敏情况,PCR法检测OXA23、OXA24、OXA48、OXA55、OXA58、OXA60、OXA64、OXA66基因在46株院内分离的多重耐药鲍曼不动杆菌中的存在情况,对部分阳性基因进行测序.结果 46株多重耐药鲍曼不动杆菌中,41株(89.1%)OXA23组基因阳性,其余基因检测均阴性.结论 我院院内分离的多重耐药鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药的主要原因之一是产OXA23组碳青霉烯酶.     

儿童鲍曼不动杆菌产IMP-4及OXA-23型碳青霉烯酶分子流行病学

目的 研究武汉地区儿童分离CRAB中获得性碳青霉烯酶分子流行病学特征.方法 收集2008年12月至2009年5月期间武汉市儿童医院急救科、新生儿内科、心胸外科、骨外科、呼吸内科及肾内科住院患儿分离的非重复CRAB 40株,使用生物梅里埃公司生产的GNS-142检测菌株的MIC值,PFGE分析耐药菌株的同源性.采用PCR扩增KPC、IMP、GIM、SPM、SIM、OXA-23、VIM 7种获得性碳青霉烯酶基因及整合酶基因,测序确定基因型,质粒接合转移试验分析细菌耐药性的转移方式,Southern blot试验定位耐药基因.结果 40株CRAB对庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星、环丙沙星、左氧氟沙星、复方磺胺甲(口恶)唑的敏感率分别为20%、5%、93%、93%、95%及23%;PFGE分型共检出11种克隆株,其中A型29株,B型2株,C～K型各1株.11株同时产IMP-4型MBL及OXA-23酶,26株只产OXA-23酶;未检出GIM、SPM、SIM、KPC和VIM型碳青霉烯酶基因.36株鲍曼不动杆菌携带Ⅰ类整合子(Int1).Southern blot表明Int1、IMP-4及OXA-23型定位于细菌染色体上.未见质粒接合转移试验阳性菌株.结论 A型克隆耐药株为本地区最常见CRAB菌株,OXA-23酶及IMP-4型是CRAB中主要的获得性碳青霉烯酶类型,其中以OXA-23型最为常见,Int1介导的OXA-23及IMP-4基因的水平传播及A型耐药克隆株的传播是本地区鲍曼不动杆菌中碳青霉烯类耐药性传播的主要方式.     

喹诺酮耐药鲍曼不动杆菌52株的基因分型

目的:利用聚合酶链式反应(PCR)技术分析广东省中医院喹诺酮耐药鲍曼不动杆菌耐药基因的种类,并进行多基因聚类分析,了解我院鲍曼不动杆菌的流行病学情况。方法:利用Primer Premier5软件设计11对喹诺酮耐药基因,利用PCR技术对52株喹诺酮耐药鲍曼不动杆菌进行分析,并利用Cross Checker和ntsys软件进行多基因聚类分析。结果:PCR扩增结果:52株均有parC基因和parE基因、48株有gyrA基因、40株有gyrB基因、10株有Aac(6′)-Ib基因、1株有qnrA基因,其余未检出;多基因聚类分析显示,主要还是以染色体介导的耐药性基因突变为主。结论:52株鲍曼不动杆菌耐抗菌药物种类广泛,耐药水平高;ICU或许已成为耐药鲍曼不动杆菌传播的一个重要枢纽。     

鲍曼不动杆菌临床分离株消毒剂抗性基因研究

摘要 目的 了解鲍曼不动杆菌临床分离菌株消毒剂抗性基因携带情况。方法 采用PCR 扩增技术,对山东省部分医院临床分离的鲍曼不动杆菌消毒剂抗性基因（qacA/B）携带情况进行检测。 结果 23株临床分离的鲍曼不动杆菌均未检出qacA/B基因。临床分离鲍曼不动杆菌中,有91.30%菌株染色体携带qacEΔ1-sul1基因,有95.65%菌株质粒携带qacEΔ1-sul1基因。结论 本研究中临床分离的鲍曼不动杆菌菌株qacA/B基因携带率极低,而qacEΔ1-sul1基因携带是普遍现象,提示鲍曼不动杆菌易在菌株之间进行抗性基因传播。     

鲍曼不动杆菌OXA-51样碳青霉烯酶基因分型与耐药性研究

目的 研究鲍曼不动杆菌中OXA-51样碳青霉烯酶基因分型及与抗菌药物耐药的相关性.方法 纸片扩散法检测174株鲍曼不动杆菌对头孢他啶、头孢曲松、阿米卡星、环丙沙星的耐药性,琼脂稀释法检测亚胺培南和美罗培南的最低抑菌浓度(MIC值);PCR扩增碳青霉烯酶VIM、IMP、OXA-23、OXA-24、OXA-51和OXA-58相关基因;对ONA-51阳性菌株进行测序和基因分型.结果 所有菌株均未检出OXA-24、OXA-58、IMP及VIM基因;15.5%(27/174)的菌株OXA-23阳性,72.4%(126/174)的菌株OXA-51阳性,其中15.5%(27/174)菌株同时产OXA-51样酶和OXA-23酶,126株OXA-51样酶阳性菌株中,82.5%(104/126)为OXA-66型,非OXA-66基因型占17.5%(22/126),本次研究发现的8个新基因型;OXA-66型的耐药性明显高于其他基因型.结论 OXA-66为本地区分离鲍曼不动杆菌产生的OXA-51样碳青霉烯酶的主要基因型;OXA-66与碳青霉烯抗生素的低水平耐药有关,且可能与其他抗菌药物的耐药性相关,临床分离鲍曼不动杆菌中发现新的OXA-51样碳青霉烯酶基因.     

产OXA-23鲍曼不动杆菌的基质辅助激光解析电离飞行时间质谱检测研究

目的应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱快速检测产OXA-23鲍曼不动杆菌。方法 125株泛耐药鲍曼不动杆菌及110株碳青霉烯类敏感鲍曼不动杆菌为研究对象,用PCR和测序方法检测OXA基因。美罗培南与鲍曼不动杆菌37℃孵育2h后,上清液进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱检测,统计学分析各质谱峰的ROC曲线。结果 125株泛耐药鲍曼不动杆菌均携带OXA-23基因。碳青霉烯类敏感鲍曼不动杆菌的质谱峰质荷比（m/z）为384m/z,406m/z,428m/z,而泛耐药鲍曼不动杆菌的质谱峰为358m/z,380m/z,402m/z,406m/z,424m/z,428m/z,446m/z,468m/z。质谱峰358m/z与380m/z的ROC曲线下面积（AUC）均为0.99。通过质谱峰的变化鉴定产碳青霉烯酶鲍曼不动杆菌,灵敏度与特异度均为100%。结论基质辅助激光解析电离飞行时间质谱可以快速、准确检测碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌,指导临床合理使用抗菌药物。     

鲍曼不动杆菌98株耐药分析

鲍曼杆菌是一类有荚膜、无动力、需氧、革兰阴性非发酵杆菌,广泛存在于水、土壤、医院环境、人体皮肤,是临床常见的条件致病菌。近年来,随着临床广谱抗生素的广泛应用,该菌的多重耐药现     

攀枝花地区耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌OXA基因型及分子流行病学分析

目的通过研究攀枝花地区临床分离的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的耐药性及碳青霉烯酶OXA类型,了解该地区耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的耐药机制及分子流行病学特征。方法收集2014年1月至2015年5月攀枝花地区两所三甲医院临床分离的127株鲍曼不动杆菌;采用KB法检测21种抗菌药物敏感性,比较碳青霉烯类鲍曼不动杆菌耐药组和敏感组的耐药率;采用聚合酶链反应(PCR)检测OXA基因;最后采用肠杆菌基因间一致重复序列聚合酶链反应(ERIC-PCR)进行分子分型及同源性分析。结果 66株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌对多黏菌素B、米诺环素、头孢哌酮/舒巴坦的耐药率最低,分别为15.2%、22.7%、24.2%,对其余18种抗菌药物耐药率均高于80.0%,耐药率明显高于敏感组菌株;OXA-23和OXA-51基因的检出率分别为92.4%、98.5%,OXA-24和OXA-58基因未检出;ERIC-PCR分子分型主要可分为A、B、C、D 4个型,以B型为主。结论攀枝花地区耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌耐药非常严重,OXA-23、OXA-51基因为该地区耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌重要基因型,B型为主要流行株。     

鲍曼不动杆菌基因同源性分析

目的探讨我院2001年8月至2002年3月临床分离到鲍曼不动杆菌是否存在基因同源性。方法用脉冲场凝胶电泳分析对这一时期的鲍曼不动杆菌进行分型，明确其是否为同一菌株的克隆。结果25株鲍曼不动杆菌有7株对碳青霉烯类等多种抗生素耐药，脉冲场凝胶电泳将其分为：A型2株，A1型2株，A2型1株。A1型与A2型之间的相似系数达94．6％，它们与A型的相似系数达84．9％，其余2株各有独特的脉冲场凝胶电泳分型；18株对碳青霉烯类敏感的鲍曼不动杆菌之间无同源性依据。结论5株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌有高度同源性，菌株1767极可能是此次医院感染的源头。     

一株同时产OXA-23型碳青霉烯水解酶和PER-1型超广谱β-内酰胺酶的鲍曼不动杆菌

目的　分析多重耐药鲍曼不动杆菌对 β 内酰胺耐药的原因及其耐药基因的转移方式。 方法　用等电聚焦电泳试验和三维试验分析多重耐药鲍曼不动杆菌临床菌株所产 β 内酰胺酶 ,并进行初步分类 ,用聚合酶链反应 (PCR)扩增和产物测序方法确认 β 内酰胺酶基因 ,用PCR扩增整合子全可变区和质粒接合实验来判定其耐药基因的转移方式。结果　该临床菌株产超广谱 β 内酰胺酶 ,经分子生物学方法证实有blaPER 1基因 ,同时还有blaOXA 2 3 基因和aacA4基因。结论　发现一株产OXA 2 3型碳青霉烯酶和可转移的PER 1型超广谱 β 内酰胺酶的鲍曼不动杆菌 ,blaPER 1基因位于质粒上     

鲍曼不动杆菌OXA型碳青霉烯酶基因型检测分析

目的了解鲍曼不动杆菌OXA型碳青霉烯酶基因型的存在状况。方法应用聚合酶链反应(PCR)检测OXA-23、OXA-24、OXA-51和OXA-58基因,对PCR产物进行DNA直接测序,同时采用PCR对ISAba1和ISAba3插入序列进行检测,对PCR产物进行直接测序。除分别对OXA-23和ISAba1进行检测外,在两个基因之间再设计一对引物进行扩增,获得ISAba1与OXA-23之间的全长DNA序列。结果收集温州医科大学附属第一医院住院患者临床分离的200株鲍曼不动杆菌,用PCR方法共检到OXA-23基因阳性菌株155株,阳性率为77.5%,其中与插入序列ISAba1同时阳性143株,阳性率为71.5%,本次试验未检到OXA-24基因阳性菌株;200株鲍曼不动杆菌均携带OXA-51基因,阳性率为100%,其中和OXA-23基因同时阳性155株,阳性率为77.5%;OXA-58基因阳性菌株共检出8株,阳性率为4.0%,插入序列ISAba3阳性共检出12株,阳性率为6.0%,其中有8株ISAba3和OXA-58同时阳性,阳性率为4.0%。结论产OXA-23型碳青霉烯酶是该院鲍曼不动杆菌耐碳青霉烯类抗生素的主要原因。