rAAV介导BDNF基因转染对急性高眼压兔眼神经损害的保护作用

目的 通过检测视网膜电图b.波(ERG-b)、计数视网膜节细胞(RGC)、测量内层视网膜(IRL)厚度、电镜观察RGC超微结构变化等,探讨玻璃体注射携带人脑源性神经营养因子(hBDNF)重组腺伴随病毒(rAAV-BDNF)埘急件高眼压兔眼神经损害的保护作用.方法 24只健康日本大耳白兔任选一眼作为造模眼(为模型组,共24眼),用生理盐水前房灌注法造成急性高眼压模型,对侧眼不作任何处理作为正常对照组(24眼).另24只健康日本大耳白兔任选一眼作为造模眼(为BDNF组,共24眼),BDNF组在造模前3 d玻璃体内注射10μl rAAV-BDNF.于造模后第1、3、7、14 d三组各摘除6只观察眼做病理切片,进行RGC计数、IRL厚度测量.三组中第14天结束观察的各6只观察眼,在实验开始前(基线)及造模后第1、3、7、14天,分别检测ERG-b波.另选5只兔用于观察RGC的超微结构,其中1只不做任何处理;另4只兔单眼造模(模型组2只,BDNF组2只),第7天处死.结果 造模前三组的ERG-b波的振幅值无显著性差异(P>0.05).模型组和BDNF组ERG-b波振幅值在造模后第1天均降至最低水平,与基线比较差异有显著性(P<0.01);以后逐渐恢复,但第14天均未能恢复至基线水平(P<0.01).实验结束时BDNF组ERG-b波振幅值高于模型组(P<0.01).模型组兔眼视网膜RGC数量减少,IRL厚度变薄.BDNF组兔眼视网膜RGC数量和IRL厚度的变化与模型组相似,但其程度均较模型组轻(P<0.05,P<0.01).电镜观察可见急性高眼压引起了RGC的损害,而BDNF组损害较轻.结论 玻璃体注射rAAV-BDNF可以显著改善急性高眼压引起的ERG-b波及视网膜结构的损害,具有神经保护作用.     

BDNF对实验性急性高眼压兔眼视网膜神经节细胞的保护作用

目的探讨脑源性神经营养因子(Brain-Derived Neurotrophic Factor,BDNF)对实验性急性高眼压(Hyper-intraocular Pressure,HIOP)兔眼视网膜神经节细胞(RGCs)的保护作用。方法将16只健康中华大耳白兔随机等分为实验组(BDNF)和空白对照(PBS)组,用前房灌注法建立右眼实验性急性HIOP模型,左眼作为正常对照。于灌注前,在BDNF组和PBS组右眼玻璃体腔内分别注射BDNF 3.75μg或等量0.1 mol/L磷酸缓冲液(PBS),第14d让实验兔安乐致死。实验兔致死前48 h以辣根过氧化物酶(HRP)逆向标记双眼RGCs,视网膜铺片后以3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB)法呈色,计数下半视网膜距视盘边缘2 mm、4 mm、6 mm处的RGCs密度。结果距视盘边缘2 mm4、mm、6 mm处,正常对照组的RGCs密度分别为1619±377个/mm2、771±232个/mm2、358±122个/mm2;BDNF组的RGCs密度为1304±246、669±283、283±93个/mm2,距视盘边缘2 mm6、mm处,BDNF组与正常对照组RGCs密度的差异有非常显著性意义(均P<0.01);PBS组的RGCs密度分别为1002±410个/mm2、627±211个/mm2、264±107个/mm2,与正常对照组RGCs密度的差异均有显著性意义(均P<0.05);距视盘边缘2 mm处,BDNF组与PBS组的RGCs密度的差异有显著性意义(P<0.05)。结论BDNF可提高实验性急性高眼压兔眼RGCs的存活率,对RGCs具有保护作用。     

BDNF对大鼠急性高眼压后视网膜电图的影响

在大鼠玻璃体内注射脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）或正常羊血清（对照）,观察对急性高眼压后视网膜电图的影响。急性高眼压后３天,实验组视网膜电图ｂ波恢复程度明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）。提示ＢＤＮＦ能促进急性高眼压后视网膜电生理功能的恢复     

BDNF对大鼠急性高眼压后视网膜电图的影响

在大鼠玻璃体内注射脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）或正常羊血清（对照），观察对急性高眼压后视网膜电图的影响。急性高眼压后３天，实验组视网膜电图ｂ波恢复程度明显高于对照组（Ｐ〈０．０１）。提示ＢＤＮＦ能促进急性高眼压后视网膜电生理功能的恢复。     

病毒载体介导BDNF基因表达在大鼠神经元AD模型中的作用

目的 探讨重组腺伴随病毒（rAAV）载体介导表达人脑源性神经营养因子（hBDNF）基因以及表达的hBDNF对β淀粉样蛋白（Aβ）诱导的AD模型神经元保护效应的机制。方法 使用分子克隆技术克隆了hBDNF基因,并且构建了携带hBDNF基因的rAAV病毒载体（AAV-hBDNF）,使用病毒载体转染Aβ诱导损伤的海马神经元。使用MTT检测和流式细胞仪分析观察细胞凋亡变化,同时使用免疫细胞化学技术检测了BDNF蛋白以及Bcl-2抗凋亡蛋白的表达,使用激光共聚焦显微镜观察细胞内游离钙离子浓度（[Ca^2＋]）i的变化。结果 结果显示重组病毒对培养的海马神经元进行了有效的转染,BDNF蛋白表达水平明显增高,表达的BDNF对Aβ诱导的神经元损伤有显著的保护效应,在BDNF治疗组表现出抗凋亡蛋白Bcl-2的表达增高和有效地维持了[Ca^2＋]i平衡。结论 表达的BDNF通过抑制Aβ依赖的细胞内钙超载和增加抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,有效地保护神经元抵抗Aβ神经毒性引起的凋亡。     

急性高眼压t-PA表达的实验研究

目的:探索血浆组织型纤溶酶原活化因子(t-PA)在青光眼视网膜中的表达变化、可能的作用以及脑源性神经营养因子(BDNF)对其的影响。方法:采用前房灌注法建立兔急性高眼压模型,在玻璃体内注射BDNF或BSS液,用免疫组织化学法检测视网膜t-PA的蛋白表达与定位,用Westernblot分析检测视网膜t-PA的蛋白表达。结果:t-PA与β-actin灰度比值,正常对照组为(57.95±3.79)%、BSS组为(89.36±3.59)%、BDNF组为(66.66±2.16)%;BSS组与正常对照组和BDNF组相比,t-PA表达明显升高(P<0.05)。高眼压后视网膜上t-PA的免疫组化染色明显增强,神经纤维层、RGCs层呈强阳性染色。结论:t-PA与青光眼的病理过程有相关性,BDNF可能部分通过抑制t-PA的表达发挥神经元保护作用。     

腺病毒介导脑源性神经营养因子基因转染在大鼠视网膜中的表达

目的 :研究腺病毒介导脑源性神经营养因子 (brain derivedneurotrophicfactor,BDNF)基因转染在活体大鼠视网膜的表达 .方法 :将BDNF腺病毒注入大鼠玻璃体内 ,于不同时间点免疫荧光染色检测表达 ;酶联免疫吸附实验 (enzymelinkedimmunosorbentassay ,ELISA)检测转染因素、损伤因素对视网膜表达BDNF的影响 .结果 :免疫荧光染色显示 3d节细胞即出现绿色荧光 ,可持续 4wk ,对照组荧光着色细胞数、荧光强度均低于各时间点转染组 ;ELISA显示经BDNF转染各组在各时间点表达均显著高于非转染组 (P <0 .0 1 ) ,损伤非转染组在 3d和 1wk时高于正常组 (P <0 .0 1 ) .结论 :腺病毒介导BDNF基因转染可在大鼠视网膜有效表达 ,损伤可以导致早期的BDNF表达升高     

急性高眼压兔眼视网膜中过氧亚硝基阴离子的表达及葛根素对其表达的影响

目的探讨过氧亚硝基阴离子在急性高眼压兔眼视网膜中的表达及其损伤机制,并评价葛根素对其表达的影响。方法27只新西兰大白兔,随机分为正常对照组、模型组及治疗组(耳缘静脉注射葛根素),通过前房灌注建立急性高眼压模型,观察视网膜形态学变化,采用原位缺口末端标记法检测高眼压后6、12、247、2 h视网膜中凋亡细胞,应用免疫组织化学方法检测视网膜中过氧亚硝基阴离子的表达。结果模型组6 h时神经纤维层和内丛状层明显水肿,24 h视网膜变薄、神经节细胞变性、核固缩;凋亡细胞于6 h时少量表达,24 h达到高峰,72 h减少;过氧亚硝基阴离子的表达趋势与凋亡细胞一致。治疗组视网膜水肿及神经节细胞变性、核固缩程度较轻;细胞凋亡及硝基酪氨酸的表达趋势同模型组,但表达均明显低于模型组(P<0.05)。结论急性高眼压兔眼视网膜中过氧亚硝基阴离子的表达增多,并参与介导神经节细胞凋亡,葛根素通过其抗氧化作用抑制过氧亚硝基阴离子的表达,在一定程度上保护神经节细胞。     

脑源性神经营养因子在正常兔眼视网膜的表达

目的 :观察脑源性神经营养因子 ( brain- derived neurotrophic factor,BDNF)在兔眼视网膜组织中的表达。方法 :利用 BDNF抗体通过免疫组织化学方法 ,观察免疫反应物质在兔眼视网膜组织中的分布。结果 :BDNF在兔眼视网膜神经节细胞 ( retinal ganglioncell,RGC)、内核层细胞、外核层细胞均有表达。结论 :RGC不仅是 BDNF的靶细胞 ,其自身也表达 BDNF。旁分泌、自分泌方式产生的 BDNF也参与了 RGC的调节     

Oligo基因芯片筛选视网膜慢性高眼压损伤差异表达基因的初步数据分析

目的 采用35 000点的高密度Oligo基因芯片对大鼠慢性高眼压导致视网膜损害的6个时间点(7、35、60、90、180、360 d)的基因表达情况加以研究,探讨慢性高眼压影响下视网膜基因表达改变的情况.方法 将基因分成"活动"基因和"差异"基因:在"活动"基因中,要求6个时间点中最大Ratio值/最小Ratio值的...     

急性高眼压后大鼠视网膜突触囊泡素的表达变化

目的 研究急性高眼压后大鼠视网膜突触囊泡素(synaptophysin, SYN)的表达变化.方法 SD大鼠左眼眼压升高至闪光视网膜电图b波消失并维持60 min,右眼为正常对照,动物存活1、3、7、14、21 d后处死,冰冻切片行SYN免疫组织化学及原位杂交检测.结果 正常情况下SYN蛋白分布于视网膜内、外网层,外网层染色较深,急性高眼压后SYN阳性产物除外网层分布外,还出现于外核层的内侧部分,存活7 d时,阳性产物在外网层及外核层的分布范围最宽,至14 d时又恢复至与正常相似的分布模式.SYN mRNA阳性产物主要分布存在于内核层与节细胞层的神经元胞体,急性高眼压后1、3、7 d时内核层SYN mRNA阳性细胞数逐渐增多,均高于正常水平,14 d时又恢复至正常水平.结论 急性高眼压后大鼠视网膜SYN的表达先增强后减弱,且出现空间分布的改变,提示急性高眼压损伤后视网膜内突触溃变前可能存在突触功能增强的时期.     

重组人促红细胞生成素对急性高眼压兔视网膜bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨全身应用重组人促红细胞生成素(rhEPO)对急性高眼压兔眼视网膜bcl-2蛋白表达的影响及意义。方法在设立正常对照、急性高眼压模型对照的情况下,日本大耳白兔皮下注射rhEPO,分别于造模后第1、3、7、14天免疫组化法观察视网膜bcl-2蛋白表达。结果正常视网膜组织可见bcl-2蛋白表达,染色阳性细胞数为每高倍视野(10.5±1.2)个。模型组和EPO组兔眼视网膜bcl-2蛋白表达阳性细胞数均较正常对照组减少(P<0.05,P<0.01)。EPO组第7天、14天视网膜bcl-2蛋白表达阳性细胞数较模型组增加(P<0.05,P<0.01)。结论rhEPO可以上调视网膜bcl-2蛋白表达,这可能是rhEPO保护急性高眼压引起的兔眼视网膜神经功能损害的机制之一。     

Enzymatic Histochemistry of Retina with Experimental Intraocular Pressure Elevation in Rabbits

ＥｎｚｙｍａｔｉｃＨｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｏｆＲｅｔｉｎａｗｉｔｈＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＩｎｔｒａｏｃｕｌａｒＰｒｅｓｓｕｒｅＥｌｅｖａｔｉｏｎｉｎＲａｂｂｉｔｓＹＡＮＧＺｈｉ－ｋｕａｎ（杨智宽）；ＤＵＳｕ－ｈｕａ（杜蜀华）（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎ...     

急性闭角型青光眼持续高眼压的手术治疗

目的:探讨持续高眼压状态下急性闭角型青光眼手术治疗的方法和疗效。方法:对使用多种药物3天不能控制眼压(≥40 mmHg)的56例(56眼)患者施行小梁切除术。术前尽量降低眼压,术中少量、缓慢、多次释放房水,使用可调整缝线,术后恢复前房防止眼压过低。结果:未出现脉络膜上腔爆发性出血和恶性青光眼。术后患眼视力0.01～0.1 16眼,0.1～0.8 40眼,均好于术前高眼压状态下视力(P0.01)。术后眼压≤21 mmHg 48眼。较术前明显降低(P0.01)。术后3例脉络膜脱离,2例滤过过强致前房迟缓形成,2例滤过不畅致高眼压,均经过治疗后恢复。结论:持续高眼压急诊行小梁切除术是可行而且必要的。     

大鼠青光眼慢性高眼压视网膜组织的二维凝胶电泳分析

目的应用二维凝胶电泳对SD大鼠青光眼慢性高眼压视网膜组织的蛋白进行初步分析.方法分离大鼠青光眼慢性高眼压视网膜组织,以对侧眼视网膜组织为对照,经样本初处理后,进行二维凝胶电泳和凝胶银染色,然后分析电泳图谱,观察蛋白的分离效果,对比、分析其表达蛋白质点的差异,寻找SD大鼠视网膜中与慢性高眼压相关的蛋白质.结果用化学裂解法结合超声波粉碎,可以裂解视网膜神经组织,使其大部分蛋白质得到溶解,成功建立对大鼠青光眼慢性高眼压眼及对照眼视网膜组织进行样本处理、二维凝胶电泳的基本方法和条件,得到两组视网膜组织的二维凝胶电泳图谱.各组织蛋白在小胶上均能显示120～290个左右的斑点.两组视网膜组织的凝胶图谱呈现出9个斑点的差异.结论二维凝胶电泳可以有效分离、显示视网膜特异表达蛋白质.通过双向电泳,我们发现SD大鼠视网膜蛋白质表达与对照眼相比有质和量的差异.     

Protective effect of adenovirus-mediated BDNF gene expression on spinal axon following in rats after spinal cord injury

The routine treatments of spinal cord injury are palliative in Practice at Present. Their goal is only to preventthe secondal injeq and the complications, and then thepatients to adapt new life style under palalysis condition.The sprouting and the Plasticity of the neims in foe centlal nervous system (CNS) Of malnlnals has been ProVedll]. It is wen known that the neurntrOPhins facilitatethe renovation and regenerahon of the ne~ns in CNS after injuries. HoweVer the c~ive effect Of the ne…     

手术治疗持续高眼压状态下的原发性急性闭角型青光眼

目的探讨急性闭角型青光眼高眼压状态下手术治疗的可行性。方法37例（39眼）高眼压难以控制的急性闭角型青光眼患者在高眼压状态下进行小梁切除联合虹膜周边切除手术,观察术后恢复情况。结果39眼手术均顺利完成,术中无严重并发症发生。术后随访半年以上,15眼视力不同程度提高,35眼术后眼压控制良好,4眼因晶状体膨胀明显,房角开放不理想,术后眼压仍维持在25～30mmHg,行白内障摘除术后眼压控制。结论对于药物治疗不能有效控制眼压的急性闭角型青光眼患者,在持续高眼压状态下进行手术治疗是可行的。