大鼠脊髓全横断模型制作及护理措施

脊髓损伤与修复历来是神经科学领域研究的热点，其动物模型有不全和完全损伤两种，成年哺乳动物脊髓半横断后，由于对侧正常神经的代偿作用或半横切不完全以至难以保证手术的一致性，往往影响对实验结果特别是脊髓功能恢复的判定，完全性脊髓损伤常采用全横断术，即用锋利的刀片沿椎     

神经干细胞移植对脊髓全横断大鼠运动行为和大脑运动皮质Caspase-3表达的影响

目的 探讨神经干细胞移植对脊髓全横断大鼠运动行为和大脑运动皮质Caspase-3表达的影响.方法 建立成年SD大鼠脊髓全横断(SCT,T9)模型.分假手术组、SCT组、NSC移植组,每组13只动物.其中每组8只动物于NSC移植后7d时用蛋白免疫印迹法检测MC内Caspase-3蛋白的表达变化(β-actin作内参照).另5只动物于NSC移植后16周时进行后肢运动功能(BBB)评分,处死动物用免疫组织化学技术检测Caspase-3在MC的细胞定位分布.结果 与假手术组比较[(21±0)分],大鼠SCT 16周时后肢运动功能BBB评分为[(5.16±1.19)分];而脊髓内NSC移植组BBB评分为[(7.58±0.99)分],组间比较有统计学意义(P＜0.05);Caspase-3蛋白在MC运动神经元表达,免疫阳性反应物分布于细胞浆.SCT导致MC区Caspsse-3蛋白表达(0.89+0.12)较假手术组(0.61+0.10)明显上调(P＜0.05),而NSC移植明显降低MC区Caspase-3表达水平(0.76+0.11)(P＜0.05).结论 NSC脊髓内移植能有效下调皮质运动区Caspase-3表达水平,并促进SCT大鼠后肢运动功能改善.     

大鼠脊髓全横断后TrkA和NGF在运动皮质的免疫组化研究

目的 探讨脊髓全横断后神经营养因子及相应受体在运动皮质内的分布规律，为临床应用神经生长因子治疗脊髓损伤提供实验依据。方法 用免疫组化方法和图像分析技术检测脊髓全横断后不同时相运动皮质内，神经生长因子(NGF)及其高亲和性受体TrkA的表达和分布。结果 各组运动皮质中TrkA和NGF阳性神经元主要分布在第5层；脊髓全横断3d后，运动皮质内TrkA表达上调，损伤后7d到达高峰，21d回到正常水平；NGF表达在损伤后7d上调，峰值出现在损伤后7d，21d回到正常水平。结论 NGF表达增高迟于TrkA，提示在损伤早期给予外源性NGF可能有利于受损的皮质脊髓束神经元的存活与再生．     

预防使用米诺环素对胸段脊髓全横断大鼠运动功能恢复的影响

目的：观察预防使用米诺环素对脊髓全横断大鼠运动功能的作用。方法：30只雄性Wistar大鼠随机分为3组,假手术组、脊髓横断模型组和米诺环素预处理组,每组10只大鼠。米诺环素预处理组大鼠术前腹腔注射米诺环素（90mg/kg）。各组大鼠于术后1、7、14、21d应用改良Tarlov评分和BBB评分方法对大鼠后肢行为功能进行评价。第22d将所有实验大鼠处死后取损伤段脊髓,行HE染色。结果：术后第1d,脊髓横断模型组和米诺环素预处理组大鼠Tarlov评分障碍率、BBS评分比较无明显差别（P〉0.05）;米诺环素预处理组术后第7d到第21dTarlov评分障碍率明显低于脊髓横断模型组,BBB评分明显高于脊髓横断模型组（P〈0.01）。HE染色结果显示,脊髓横断模型组大鼠脊髓出现明显病理变化,米诺环素预处理组大鼠脊髓的病理变化明显减轻。结论：预防使用米诺环素可明显促进胸段脊髓横断大鼠运动功能的恢复。     

NGF和BDNF在脊髓全横断后大鼠运动皮质的表达和分布

目的：探讨脊髓全横断后神经营养因子在运动皮质内的分布规律，为临床应用神经生长因子治疗脊髓损伤提供实验依据。方法：用免疫组化方法和图像分析技术检测脊髓全横断后不同时相运动皮质内，神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达和分布。结果：各组的运动皮质中NGF和BDNF阳性神经元主要分布在第Ⅴ层；脊髓全横断后NGF和BDNF的表达均增高，NGF的表达高峰在脊髓全横断后7天，21天回到正常水平；BDNF表达在脊髓横断后21天到达高峰，28天回至正常水平。结论：脊髓损伤后大鼠运动皮质内NGF表达上调早于BDNF。     

神经干细胞与嗅鞘细胞移植对脊髓全横断大鼠后肢运动功能的影响

目的探讨神经干细胞（NSCs）与嗅鞘细胞（OECs）移植对脊髓全横断大鼠后肢运动功能的影响．方法SD大鼠行T11脊髓全横断术后，随机分为NSCs移植组、OECs移植组、联合移植组和对照组．术后将取自绿色荧光蛋白（GFP）转基因胚胎小鼠海马和新生小鼠嗅球的、经培养鉴定后的NSCs和OECs，以明胶海绵做载体分别或联合移植到各移植组动物脊髓损伤处，对照组不移植细胞，用BBB评分法评价1～8周大鼠后肢运动功能恢复的程度．8周后移植各组动物行左心室主动脉内4％多聚甲醛灌注，取横断处上下各约1mL脊髓，连续冰冻切片（片厚20tam），置于荧光显微镜下观察切片中有无绿色荧光细胞，确定NSCs及OECs的存活情况．结果NSCs及OECs细胞在移植脊髓损伤后能存活，并向周围迁移；术后3和4周末，NSCs组、OECs组和联合移植组大鼠运动功能均较对照组有明显改善（P〈0．05）；且3周时，联合移植组和OECs组比NSCs组后肢运动功能变化显著（P〈0．05）；而联合移植组和OECs组比较后肢运动功能未见显著差别（P〉0．05）．绪论NSCs、OECs和联合移植在早期均可促进脊髓全横断大鼠运动功能恢复；OECs组、联合移植组效果均优于NSCs组；联合移植对大鼠运动功能恢复在早期没有显现最佳作用．     

超早期高压氧对脊髓完全横断损伤大鼠血液生化及后肢运动功能的影响

为确保平安世博,应对实验动物可能突发的疫情,2010年5月10日下午上海市科委在浦东上海实验动物资源中心组织了实验动物应急演练,上海市科委有关部门、上海实验动物资源中心、上海市实验动物管理委员会办公室的领导、以及张江地区的上海实验动物研究中心、上海南方模式生物研究中心、葛兰素史克（中国）医药研发有限公司、上海睿智化学研究有限公司等10余家单位的40余人参加了活动。     

脊髓全横断后腹角神经元NT-3的表达

目的研究大鼠脊髓全横断后,NT-3在损伤部位相邻节段脊髓腹角神经元随时间的表达变化,为进一步探索脊髓损伤后的再生修复机制和神经营养因子治疗脊髓损伤提供实验依据。方法体重为250g左右成年SD大鼠48只,随机分为六组。分正常组、假手术组及胸10脊髓节段全横断术后1,3,7,14d组。动物到达存活时间后,应用免疫组织化学SABC法和图像分析技术检测NT-3在脊髓损伤相邻节段腹角的表达和分布。结果正常组的NT-3免疫反应阳性细胞主要分布在腹角的大神经元和少量小神经元。损伤区上段的NT-3免疫反应阳性细胞数,在脊髓腹角的表达,均于术后1d组开始明显增高并达到高峰,术后3d、7d组逐渐回落,术后14d组接近正常水平。而损伤区下段的NT-3免疫反应阳性细胞数,在脊髓腹角的表达均于术后1d组开始明显增高,术后3d组达到高峰,于7d组开始下降,到14d组接近正常水平。结论在脊髓全横断术后,脊髓腹角神经元对NT-3的需求增加,提示NT-3在脊髓修复中起重要作用。     

丙泊酚对脊髓横断大鼠镇静作用的影响

目的 观察丙泊酚对脊髓横断大鼠镇静作用的影响,并探讨其可能的机制.方法 30只雌性SD大鼠,随机分为三组:脊髓横断组(n=10)、假手术组(n=10)和正常对照组(n=10).静脉泵注丙泊酚,比较三组之间大鼠眼睑反射消失时丙泊酚的用量及所需的时间.结果 脊髓横断组大鼠眼睑反射消失的丙泊酚用量(6.34±0.85)mg/kg明显少于假手术组(11.24±1.09)mg/kg和正常对照组(10.76±1.14)mg/kg(P<0.0001);脊髓横断组大鼠眼睑反射消失所需时间(200±41)s也明显少于假手术组(494±46)s和正常埘照组(465±51)s(P<0.01).结论 脊髓横断可显著降低大鼠丙泊酚的镇静用量,可明显缩短大鼠眼睑反射消失时间,脊髓横断的镇静作用其可能的机制是去传人理论.     

高压氧治疗对脊髓损伤大鼠脾脏组织病理的影响

目的：探讨高压氧治疗对脊髓损伤大鼠脾脏组织病理的影响。方法：40只SD大鼠随机数字表法分为4组：空白对照组（n=10）、脊髓损伤对照组（n=10）、高压氧处理对照组（n=10）和脊髓损伤高压氧治疗组（n=10）。脊髓损伤对照组和脊髓损伤高压氧治疗组采用改良Allen’s法制作T8～T9急性脊髓损伤大鼠模型。空白对照组和脊髓损伤对照组大鼠正常饲养。不进行高压氧处理;高压氧处理对照组和脊髓损伤高压氧治疗组大鼠每间隔24h进行1次高压氧处理,每天1次,连续14d。实验结束后,取各组大鼠脾脏标本电子显微镜下进行观察。结果：空白对照组大鼠脾细胞排列整齐、规则,结构清晰,细胞核居中,呈椭圆形。脊髓损伤对照组较空白对照组大鼠脾脏淋巴细胞、网状细胞等实质细胞弥漫性减少,胞质密度不均匀。血管内红细胞淤积,脾细胞凋亡后被胶质细胞等替代。高压氧处理对照组大鼠脾细胞间隙增宽,胞浆、胞质均匀,细胞排列相对整齐、规则,结构清晰,细胞核居中,呈椭圆形。脊髓损伤高压氧治疗组大鼠脾细胞及淋巴细胞增殖旺盛．细胞核染色深,细胞排列致密且较规则,细胞间隙小。结论：高压氧治疗对大鼠脊髓损伤后脾细胞损伤具有保护作用。     

高压氧预处理诱导脊髓缺血耐受的机制

目的　探讨高压氧预处理诱导脊髓缺血耐受的机 制 .方法　 2 1只雄性新西兰大白兔 ,随机分为 3组 (每组 n= 7) :对照组 ,即常压空气组 ; HBO组 ,即单纯高压氧 (HBO)预 处理组 (1 0 0 %O2 , 2 53 . 3 k Pa, 1 h· d- 1 , 5d) ; DMTU组 , HBO 预处理条件同 HBO组 ,但于每次 HBO处理前 1 h予 50 0 mg · kg- 1 二甲基硫脲 (DMTU) iv.最后一次 HBO处理后 2 4h 采用肾下主动脉阻断法造成脊髓缺血 (2 0 min) ,观察再灌注 后 48h时的神经功能评分 ,及脊髓 (L5)病理学变化 .并同时 测定后两组动物在 HBO预处理前 2 4h,每次 HBO处理后 1 h,脊髓缺血前 1 0 min和再灌注 1 0 min时的血中丙二醛 (MDA)水平 .结果　再灌注 48h时神经功能评分 HBO组明 显优于对照组和 DMTU组 (P< 0 . 0 5) ;脊髓前角正常运动神 经元计数明显多于对照组和 DMTU组 (P<0 . 0 5) . MDA水 平各时间点两组间无显著差别 .结论　高压氧预处理所诱导 的脊髓缺血耐受的机制与氧自由基的产生有关 .     

高压氧结合电针治疗对脊髓损伤后大鼠膀胱功能的影响

目的观察高压氧结合电针治疗对脊髓损伤(SCI)后大鼠神经源性膀胱功能的影响及机制分析。方法将雌性SD大鼠60只,随机分为对照组、高压氧组及高压氧结合电针组(结合电针组),每组20只。所有大鼠用Allen′s重物撞击法制造SCI模型,其中对照组不接受任何治疗,高压氧组及结合电针组在造模成功12h后每天接受高压氧治疗或高压氧结合电针治疗1次。各组大鼠分别于术后24h,3、7、14d在乌拉坦麻醉下尿道置管行尿流动力学检查后处死。观察比较3组大鼠脊髓中及膀胱组织中神经型一氧化氮合酶(nNOS)表达及尿流动力学指标。结果在各时间点上,高压氧组及结合电针组脊髓及膀胱组织中nNOS表达明显高于对照组(P<0.01),结合电针组脊髓及膀胱组织中nNOS表达明显高于高压氧组(P<0.05);尿流动力学结果结合电针组显著优于高压氧组及对照组(P<0.05)。结论高压氧结合电针治疗对SCI后大鼠的神经元具有保护作用,并能很好改善大鼠的膀胱功能。     

家兔脊髓横断自体免疫变化的实验研究

目的　探讨脊髓横断 (SCT)后自体免疫反应的变化及其意义。方法　采用生物素 亲和素 (ABC)染色法、间接酶联免疫吸附法 (ELISA)及微量血清 (CH5O)溶血法分别检测脊髓下胸段 (T10～ 12 )完全横断后血清中抗脊髓抗体、损伤局部免疫复合物、血清中髓鞘碱性蛋白抗体及总补体活性。结果　SCT后第 5天 ,血清中出现抗脊髓抗体 ,第 7天横断局部出现免疫复合物 ,此时血清及脑脊液中开始产生髓鞘碱性蛋白抗体 (MBPAb) ,其Dλ 值伤后明显升高 (P <0 .0 1 )。上述变化持续至伤后 2 0d。血清补体于伤后第 3天开始升高 ,7d达高峰 ,9～ 1 4d显著下降。病理检查发现伤后 3d开始有白细胞及淋巴细胞浸润。结论　SCT后动物运动功能毫无恢复 ,而其自体免疫发生了明显改变 ,这可能是影响中枢神经系统损伤 (CNS)后神经再生和功能恢复的因素之一。     

人CD34+脐血干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤

目的:探讨人脐血来源的CD34 干细胞治疗脊髓损伤的可行性,为脊髓功能障碍性疾病的临床治疗打下基础.方法:用密度梯度离心及免疫磁珠法分离出人CD34 脐血干细胞,在含有B27、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、人重组干细胞因子(rhSCF)的营养液中培养,用核荧光染色剂Hoechst33258标记细胞;制作大鼠脊髓横断模型,造成大鼠下肢瘫痪,在脊髓损伤3 d移植荧光标记的CD34 脐血干细胞,观察移植后的动物行为变化、脊髓组织形态学变化等.结果:脊髓损伤大鼠移植CD34 脐血干细胞5～6 d可见瘫痪大鼠的后肢肌力开始恢复,10～15 d后可出现爬行,3～4周后后肢活动活跃;对照组瘫痪的肢体未见恢复.脊髓移植区肉眼可见有增生的组织充填,镜下有大量神经胶质原纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶阳性的细胞,移植区Hoechst33258荧光标记阳性细胞增生.结论:移植的CD34 脐血干细胞可在移植部位增殖,并使脊髓横断大鼠运动功能恢复,有望成为治疗脊髓损伤的有效手段.     

骨髓间充质干细胞移植联合高压氧治疗兔脊髓冲击伤

目的 利用兔骨髓间充质干细胞联合高压氧治疗兔脊髓冲击伤,评价其治疗效果是否优于其两种治疗方法单独应用的效果.方法 建立T9-T10段大白兔脊髓冲击伤模型,通过Reuter、改良Tarlov评分和体感诱发电位选择脊髓损伤程度相同的48只大白兔,随机分为4组,每组12只.12 h后对各组分别作空白对照、高压氧治疗、骨髓间充...     

带血运的组织并胚胎脊髓移植对损伤脊髓的修复作用

目的 探讨带蒂的大网膜、椎旁肌并胚胎脊髓移植对损伤脊髓的修复作用。方法 采用大鼠脊髓半切洞损伤模型,将动物分为胚胎脊髓移植 大网膜组、胚胎脊髓移植 椎旁肌组、胚胎脊髓移植组、损伤对照组。移植后1、2、4、8、12周,进行HE、Nissl、嗜银染色、电镜检查和免疫细胞化学检查,观察移植存活、分化及其宿主之间的关系。结果 提供血运的胚胎脊髓移植到损伤的脊髓后,移植物膛逐渐增大,充满损伤的洞腔,并可在宿主脊髓内继续分化发育,与宿主脊髓形成部分纤维和血管联系。结论 带蒂的大网膜和胚胎脊髓组织联合移植能较好地修复损伤的脊髓。     

地塞米松局部应用对犬完全性脊髓横断伤再生的影响

目的　观察地塞米松局部应用对犬完全性脊髓横断伤再生的影响。方法　将 9条杂种犬分为两组 ,胸10平面造成 4～ 5mm的脊髓缺损 ,实验组 6条犬 ,将饱和状态下地塞米松组织液凝块植入脊髓缺损处。对照组 3条犬 ,仅植入组织液凝块。术后对两组犬的行为学进行评分 ,并用摄像机记录。术后 5个月心脏灌流固定 ,石腊包埋 ,切片。选用神经中丝抗体 (anti-neurofiblament ,NF)对桥接区组织内神经轴突进行标记 ,计算两组NF的阳性表达率。 6号犬和 9号犬桥接区组织同时行电镜观察。结果　实验组行为学评分明显高于对照组 ,有显著性差异 ( 0 .0 1

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大鼠脊髓横断伤后大脑运动皮质的再生反应的实验研究

目的研究成年SD大鼠大脑运动皮质在脊髓横断伤后的再生反应。方法在胸9水平完全横断脊髓，术后1、3、5、7和14d，取大鼠大脑运动皮质和脊髓分别进行GAP-43mRNA组织原位杂交和NF200免疫组化。结果大鼠在脊髓横断伤后出现大脑运动皮质GAP-43mRNA表达，主要分布在大脑运动皮质的V、Ⅵ层；脊髓横断伤组在术后14d内，脊髓断端白质内NF200的表达逐渐由稀疏至消失。结论实验揭示了大鼠脊髓横断后，皮质脊髓束神经元在两周内不会出现数量减少；并发现大脑运动皮质在皮质脊髓束横断后能出现短时间的再生反应。     

睫状神经营养因子对大鼠创伤性脊髓水肿的影响

目的 :观察睫状神经营养因子 (CNTF)对大鼠创伤性脊髓水肿的影响及其可能的作用机制。　方法 :采用改良Allen打击法致SD大鼠T8脊髓损伤 ,分别于术前及术后 3天用干湿法测定脊髓组织水含量、用原子吸收分光光度计测定脊髓组织中Ca2 的含量。　结果 :脊髓损伤后局部组织含水量、Ca2 含量均显著增加 (P <0 .0 1) ,用CNTF治疗后水含量、Ca2 含量有明显下降 (P <0 .0 1) ,但和正常组相比仍有明显差异。　结论 :CNTF可能是通过阻止Ca2 内流、稳定细胞内外Ca2 平衡而起到减轻创伤性脊髓水肿的作用。