用双向电泳及蛋白质印迹技术筛选乳腺癌相关抗原

目的：应用双向电泳及免疫印迹技术分析乳腺癌MCF-7细胞总蛋白,寻找乳腺癌相关抗原。方法：提取乳腺癌MCF-7细胞总蛋白,双向电泳技术（2-DE）对总蛋白进行分离后转膜,将健康人血清（对照组）和乳腺癌患者血清（实验组）作为一抗进行蛋白质印迹（Western blotting）分析,寻找杂交蛋白点的差异。结果：MCF-7总蛋白双向电泳考马斯亮蓝染色图谱共检测到248个蛋白质斑点,Western blotting显示实验组抗原抗体反应点23个,对照组为13个,找到10个差异蛋白点。结论：乳腺癌患者血清中的抗体表达水平有改变,这10个差异蛋白点有可能是乳腺癌相关抗原。     

乙腈预处理血清寻找肝细胞癌发病相关的蛋白质

【目的】 应用乙腈(ACN)预处理血清的方法,对肝细胞癌(HCC)患者的血清进行蛋白质组分析,寻找与HCC发病相关的蛋白质｡ 【方法】 收集原发性HCC患者和健康人的血清各12例,首先使用乙腈预处理,然后去除白蛋白和免疫球蛋白等高丰度蛋白质,再进行双向电泳(2-DE)分析,筛选HCC与健康对照血清中有显著性差异的蛋白质斑点,并进行MALDI-TOF/TOF质谱鉴定｡ 【结果】 血清经0%､20%和30%浓度的乙腈预处理后,进行2-DE分析发现蛋白质斑点的检出数量分别为532 ± 96､623 ± 102和674 ± 123;对预处理后HCC患者和正常人的血清进行差异分析,发现甲状腺素(Tetraiodo-L-Thyronine)和Proapolipoprotein的表达上调,而维生素D结合蛋白(Vitamin D-binding Protein)和铁传递蛋白(Transferrin)的表达下调｡ 【结论】 对血清样本的蛋白质组分析,应用乙腈预处理会增加与白蛋白非特异性结合的蛋白质的检出;HCC患者血清中甲状腺素等4个蛋白的表达异常与HCC相关｡     

维甲酸对甲状腺癌ASC蛋白的影响

目的探索维甲酸诱导甲状腺癌细胞的凋亡情况及凋亡相关斑点样蛋白（ASC）的表达。方法甲状腺滤泡状癌细胞株FIE-133（A组）,乳头状甲状腺癌细胞株W3（B组）,未分化甲状腺癌细胞株8505C（c组）,3组细胞用维甲酸刺激24h共同培养。流式细胞术观察细胞活性,RT—PCR和Western blotting检测ASCmRNA及蛋白的表达。采用双向电泳分离蛋白质,采用PDQuest2-DE软件分析维甲酸＋A组与A组细胞2组间差异表达的蛋白质斑点,并用Western blotting进一步验证。结果流式细胞术结果,维甲酸均导致3组细胞凋亡,A组的凋亡率强于B、C2组（P〈0．01）。RT—PCR和Western blotting检测的ASC mRNA及蛋白的表达,A、B、C3组均有表达,A组强于B、C2组（P〈0．05）。维甲酸作用A组,质谱鉴定了ASC蛋白．Western blotting验证蛋白质ASC与双向电泳的结果一致。结论为维甲酸治疗甲状腺癌的蛋白质研究提供实验资料。     

下咽癌相关血浆肿瘤标志物的蛋白质组学筛选

目的分析下咽癌患者与健康人血浆中差异表达的蛋白质组,筛选潜在的与下咽癌诊断密切相关的血浆肿瘤标志物。方法取下咽癌患者与健康人空腹血浆标本各6例分别等量混合成2组样本,去除血浆高丰度蛋白后,利用双向电泳(2-DE)进行分离,经软件分析后找出表达量变化2倍以上的差异蛋白点,接着利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)进行差异蛋白质鉴定,然后利用Western blotting对α2-HS-糖蛋白的表达量进行验证。结果下咽癌患者与健康人血浆相比较,筛选出表达量差异2倍以上的差异蛋白点共11个,其中表达上调的有5个,表达下调的有6个,进行质谱分析后,表达上调的蛋白有α2-HS-糖蛋白、结合珠蛋白;表达下调的蛋白有免疫球蛋白κ链C结构域、载脂蛋白A1。Western blotting结果表明,α-2-HS-糖蛋白的表达上调,与双向电泳结果一致。结论下咽癌患者与健康人血浆的蛋白质表达谱表现出一定差异,这些差异蛋白有可能成为下咽癌患者早期诊断的特异性血浆肿瘤标志物。     

人原发性肝癌相关抗原的蛋白质组学初步研究

目的 检测肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的相关抗原,并予以验证.方法 分别提取15例HCC组织及其癌旁组织总蛋白.Western blot分别检测各总蛋白与其HCC患者自体血清的杂交情况.双向电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)技术将15例混合总蛋白中的各蛋白进行分离与染色.图像分析法比对染色胶上HCC组织及其癌旁组织蛋白的表达差异,基质辅助激光解吸/电离飞行时间二级质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization-time-of-flight with two mass analyzers for tandem mass spectrometry,MALDI-TOF MS/MS)技术及生物信息学网络数据库分别对表达差异蛋白予以分析鉴定与检索匹配,免疫组织化学与Western blot分别检测该差异蛋白在人HCC组织及其癌旁组织中的变化情况.结果 2-DE染色胶图像分析比对结果显示,HCC及其癌旁组织蛋白表达差异斑点共90个,MALDI-TOF MS/MS与数据库对其中19个蛋白斑点分析鉴定与检索匹配发现15个蛋白表达上调,4个蛋白表达下调.免疫组织化学与Western blot检测结果显示,与对照比较,上调蛋白中的DnaJ同源B亚家族成员11 (dnaJ homolog subfamily B member 11,DNAJB11)在HCC组织中的表达明显增强,下调蛋白中的蛋白酶体亚基α3 (proteasome subunit alpha type 3,PSMA3)在HCC组织中的表达则相反.结论 人原发性肝癌相关抗原DNAJB11在HCC组织中的表达上调,PSMA3在HCC组织中的表达下调.     

运用蛋白质组学技术研究结肠粘膜、腺瘤及腺癌组织蛋白的差异表达

 ［目的］通过比较结肠正常粘膜、腺瘤、腺癌组织之间的蛋白质组表达差异，寻找结肠腺癌相关的蛋白质，筛选结肠癌早期诊断的分子标志物。［方法］运用比较蛋白质组学技术，对8例结肠癌患者（伴有腺瘤）的正常粘膜、腺瘤、腺癌组织提取的总蛋白进行双向电泳（2-D），分析凝胶图片选择两两间差异表达超过2倍的蛋白质进行MALDI-TOF/TOF质谱分析和生物学信息分析。［结果］成功建立结肠正常粘膜、腺瘤、腺癌的双向凝胶电泳图谱，在凝胶电泳图谱中平均蛋白质斑点数分别为3066 、2986和3289，其中两两间表达差异超过2倍的斑点共有31个，质谱分析和数据库检索共鉴定出18种蛋白质，包括keratin 8、S100A6、protein disulfide isomerase等。从功能分析，这些差异蛋白与癌细胞的发生、增殖、分化、转移等相关。结论 比较蛋白质组学能较好地提示结肠腺癌与腺瘤及正常组织间的蛋白质表达差异，而对相关差异表达蛋白的研究有可能为结肠癌的早期诊断和治疗提供新的分子靶向。     

白血病细胞蛋白质组学研究技术体系的建立

目的：建立白血病细胞HL60蛋白质组学研究的技术体系。方法：提取白血病细胞HL60的蛋白质，建立固相pH梯度双向电泳图谱，应用图像扫描仪及图像分析软件获得蛋白质斑点的数字化和匹配性信息，对需鉴定的HL60细胞的蛋白斑点A，经胶内酶切后，行基质辅助激光解吸／电离飞行时间质谱(MALDI-TOF—MS)分析，将检测出的肽质量数输入质谱数据库获得需鉴定的蛋白质信息。结果：成功构建出HL60细胞的双向电泳图谱，并用MALDI—TOF—MS成功鉴定出HL60细胞的一个蛋白质点。结论：HL60细胞蛋白质组学研究体系的建立，为进一步研究白血病的蛋白质组学奠定了基础。     

运用蛋白质组学技术研究结肠黏膜、腺瘤及腺癌组织蛋白的差异表达

【目的】通过比较结肠正常黏膜、腺瘤、腺癌组织之间的蛋白质组表达差异，寻找结肠腺癌相关的蛋白质，筛选结肠癌早期诊断的分子标志物。【方法】运用比较蛋白质组学技术，对8例结肠癌患者（伴有腺瘤）的正常黏膜、腺瘤、腺癌组织提取的总蛋白进行双向电泳（2-D），分析凝胶图片选择两两间差异表达超过2倍的蛋白质进行MALDI-TOF／TOF质谱分析和生物学信息分析。【结果】成功建立结肠正常粘膜、腺瘤、腺癌的双向凝胶电泳图谱，在凝胶电泳图谱中平均蛋白质斑点数分别为3066、2986和3289,其中两两间表达差异超过2倍的斑点共有31个，质谱分析和数据库检索共鉴定出18种蛋白质，包括keratin 8、S100A6、protein disulfide isomerase等。从功能分析，这些差异蛋白与癌细胞的发生、增殖、分化、转移等相关。【结论】比较蛋白质组学能较好地提示结肠腺癌与腺瘤及正常组织间的蛋白质表达差异,而对相关差异表达蛋白的研究有可能为结肠癌的早期诊断和治疗提供新的分子靶向。     

下咽癌相关血浆肿瘤标志物的蛋白质组学筛选

目的分析下咽癌患者与健康人血浆中差异表达的蛋白质组,筛选潜在的与下咽癌诊断密切相关的血浆肿瘤标志物。方
法取下咽癌患者与健康人空腹血浆标本各6 例分别等量混合成2 组样本,去除血浆高丰度蛋白后,利用双向电泳（2-DE）进行分
离,经软件分析后找出表达量变化2倍以上的差异蛋白点,接着利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF/TOF）
进行差异蛋白质鉴定,然后利用Western blotting 对α2-HS-糖蛋白的表达量进行验证。结果下咽癌患者与健康人血浆相比较,
筛选出表达量差异2倍以上的差异蛋白点共11 个,其中表达上调的有5个,表达下调的有6个,进行质谱分析后,表达上调的蛋
白有α2-HS-糖蛋白、结合珠蛋白;表达下调的蛋白有免疫球蛋白κ链C结构域、载脂蛋白A1。Western blotting结果表明,α-2-HS-
糖蛋白的表达上调,与双向电泳结果一致。结论下咽癌患者与健康人血浆的蛋白质表达谱表现出一定差异,这些差异蛋白有可
能成为下咽癌患者早期诊断的特异性血浆肿瘤标志物。
     

糖尿病肾病大鼠血浆差异表达蛋白的质谱分析

目的 探讨应用比较蛋白质组学分析糖尿病肾病大鼠血浆的差异表达蛋白,寻找和糖尿病肾病发生相关的蛋白质.方法 建立糖尿病肾病(DN)大鼠模型,将DN模型组和正常组大鼠血浆采用双向凝胶电泳(2-DE)技术分离血浆蛋白,经PD-Quest软件分析结合人工对比确认差异蛋白点,MALDI-TOF/TOF鉴定差异表达的蛋白. 结果 成功建立2-DE血浆蛋白图谱,经质谱鉴定出8种差异蛋白,这些差异蛋白主要与氧化应激、炎症反应及脂质代谢紊乱等相关. 结论 双向电泳质谱技术可有效筛选糖尿病肾病相关蛋白,为进一步早期诊断提供依据.