CD45在克罗恩病患者血清中的表达

目的 应用蛋白质组学方法在患者血清中寻找与克罗恩病相关的蛋白质.方法 采取克罗恩病患者以及正常成人血清蛋白样本各4例,用不同的CyDye荧光染料标记后进行胶内差异双向凝胶电泳(2-D DIGE),并对获得的图谱进行分析及对差异蛋白质进行基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱鉴定.结果 通过2-D DIGE分析,发现克罗恩病患者中存在29个表达异常蛋白质点,其中胶号为973的蛋白质点,在克罗恩病患者患者血清中比正常成人组表达升高2.55倍(P<0.05),该蛋白点经质谱鉴定为CD45.结论 CD45在克罗恩病患者血清的高表达提示在克罗恩病的病程中免疫系统失衡可能起着一定作用.     

重度子痫前期初产妇血清蛋白质组学研究浅析

目的:利用蛋白质组学技术寻找敏感性高、特异性好的血清标志物作为重度子痫前期的诊断依据.方法:采用双向凝胶电泳与质谱联用的方法筛选鉴定子痫前期重度患者和健康孕妇血清中的差异蛋白质.结果:采用双向凝胶电泳共识别出13个差异蛋白质点,质谱分析鉴定出两组共有的差异蛋白为载脂蛋白、结合珠蛋白及白蛋白.结论:重度子痫前期患者血清中存在诸多差异蛋白质点,可通过进一步检测它们的水平对临床诊断提供参考.     

联用2-DE和MALDI-TOF-MS技术筛查胃癌组织和血清中的差异蛋白质

目的 分别建立肠型、弥漫型胃癌组织和血清双向凝胶电泳图谱,鉴定差异表达蛋白,从中发现有意义的胃癌肿瘤相关标志物.方法 采用双向凝胶电泳（two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis,2-DE）分离组织和血清总蛋白,经硝酸银染色,分析选取有表达差异的蛋白质点,通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS）鉴定差异蛋白.结果 获得重复性和分辨率较好的胃癌组织和血清双向凝胶电泳图谱,经MALDI-TOF-MS鉴定得到20种蛋白,在7例（58.3%）肠型胃癌组织中均有硒结合蛋白1（SBP1）表达,KIAA基因家族蛋白在弥漫型胃癌组织和血清中均有表达.结论 建立了弥漫型肠型胃癌组织和血清双向凝胶电泳图谱,获得了差异蛋白质点,为寻找胃癌的特异蛋白质作为胃癌肿瘤标志物奠定了基础.     

脑梗死肝阳化风证与阴虚风动证蛋白质组学比较研究

目的 建立脑梗死肝阳化风证与阴虚风动证血清双向凝胶电泳图谱,初步分析其差异蛋白质表达情况.方法 双向凝胶电泳(2-DE)分离脑梗死肝阳化风证与阴虚风动证血清标本,考马斯亮兰染色,PD-QUEST图像分析系统分析,从凝胶中选取分离较好的蛋白质点,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析获取肽质量指纹图谱(PMF),Mascot软件搜索SWISS-PROT数据库鉴定蛋白质,对差异蛋白质进行组间对比.结果 获得了分辨率较好的脑梗死肝阳化风证与阴虚风动证双向凝胶电泳图谱,质谱分析了29个差异蛋白质点,获取了87张肽质量指纹图谱,通过查询数据库鉴定了29个蛋白质,其中部分蛋白质与肝阳化风证及阴虚风动证发生发展有关.结论 建立了脑梗死肝阳化风证与阴虚风动证血清双向凝胶电泳图谱,并应用质谱技术鉴定了部分差异蛋白质点,为脑梗死肝阳上亢证与阴虚风动证与正常组血清双向凝胶电泳图谱血清蛋白质组数据库的建立提供了有意义的数据,并认为蛋白质组学能在脑梗死不同证型具有代表意义.     

特发性间质性肺炎蛋白质组学的初步研究

目的 应用蛋白质组学的方法筛选出特发性间质性肺炎(IIP)相关蛋白质,为阐明IIP的发病机制和预后提供理论依据。方法 收集8例通过小切口开胸肺活检获取的新鲜肺组织及5例远离肺部良性病变的肺组织,提取组织总蛋白,运用固相PH梯度(IPG)双向凝胶电泳(2-DE)技术分离组织总蛋白,图象分析软件识别差异表达的蛋白质点,运用基质辅助电离解析飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)获取肽质量指纹图谱(PMF),检索数据库鉴定差异表达的蛋白质点,明确其生物学功能。结果 建立双向电泳图谱,质谱分析鉴定出7个差异表达的蛋白质,分别为热休克蛋白70、膜联蛋白Ⅱ和触珠蛋白等。结论 建立了重复性较好的IIP与正常肺组织的双向电泳图谱,并鉴定出一些与IIP发病机制相关的蛋白质,为进一步寻找IIP特异分子标志物和靶向治疗打下坚实的基础。 【关键词】 特发性间质性肺炎 蛋白质组学 双向凝胶电泳 基质辅助电离解析飞行时间质谱     

特发性间质性肺炎蛋白质组学初步研究

目的应用蛋白质组学的方法筛选出特发性间质性肺炎(IIP)相关蛋白质,为阐明IIP的发病机制和预后提供理论依据。方法收集8例通过小切口开胸肺活检获取的新鲜肺组织及5例远离肺部良性病变的肺组织,提取组织总蛋白,运用固相PH梯度(IPG)双向凝胶电泳(2-DE)技术分离组织总蛋白,图象分析软件识别差异表达的蛋白质点,运用基质辅助电离解析飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)获取肽质量指纹图谱(PMF),检索数据库鉴定差异表达的蛋白质点,明确其生物学功能。结果建立双向电泳图谱,质谱分析鉴定出7个差异表达的蛋白质,分别为热休克蛋白70、膜联蛋白Ⅱ和触珠蛋白等。结论建立了重复性较好的IIP与正常肺组织的双向电泳图谱,并鉴定出一些与IIP发病机制相关的蛋白质,为进一步寻找IIP特异分子标志物和靶向治疗打下坚实的基础。     

后纵韧带骨化症患者后纵韧带组织的蛋白质组学

[摘要]目的采用蛋白质组学方法分析、寻找后纵韧带骨化症(OPLL)的特异性蛋白标志。方法采用荧光差异双向电泳法研究OPLL患者及正常人韧带组织的双向电泳图像。采用飞行时间质谱进行鉴定并分析差异表达的蛋白质点。结果两组样本均得到约1 100个蛋白质点,50个点表达有改变。切胶获得45 个蛋白质点的肽段样本,质谱鉴定为21个蛋白质或肽段。其中15个血液蛋白,其余6个蛋白中4个表达下调;2个表达上调。RT-PCR检测表明烟酰胺腺嘌呤二核苷酸依赖的激素脱氢酶, 伴肌动蛋白相关锚定蛋白及Ⅵ型胶原蛋白mRNA变化与电泳结果一致。结论这些差异表达蛋白可能是OPLL的特异表达蛋白。     

大鼠减体积肝移植术后肝脏细胞骨架差异蛋白的表达变化

目的 利用蛋白质组学及相关技术研究大鼠减体积肝移植术后肝脏参与细胞骨架差异蛋白的表达变化.方法 实验首先用改良法建立Lewis-Wistar大鼠减体积肝移植模型,然后在术后1,3和7d获取移植术后肝脏组织,最后应用蛋白组学技术与预先获取的供、受体原肝脏组织建立双向凝胶电泳图谱,再利用串联质谱(MS-MS)分析及数据库对胶上差异表达的蛋白质点进行鉴定.结果 本次实验中所有蛋白质点采用变化倍数大于10倍为标准进行差异蛋白点的选择,结果总共发现了72个差异点,应用串联质谱分析和数据库等对差异质点进行分析和鉴定,发现有32个蛋白的功能比较明确,其中有3个差异表达的蛋白在减体积移植术后肝脏参与细胞骨架的过程,表达变化比较明显,差异蛋白质点总数占所有差异表达质点的7％.结论 应用蛋白质组学的技术研究大鼠减体积肝移植术后肝脏病理生理过程中细胞骨架差异蛋白的变化,对于进一步研究细胞骨架蛋白在肝移植术后肝脏病理生理过程中的作用及作用机理有重要的意义.     

荧光差异双向凝胶电泳筛选肾透明细胞癌及癌旁组织中的差异表达蛋白

目的 寻找肾癌相关肿瘤标记物,用于肾癌临床诊断、药物治疗靶点的选择及预后监测.方法 采用荧光差异双向凝胶电泳技术筛选15例肾透明细胞癌及癌旁正常肾组织差异表达蛋白质点.统计学采用t检验进行定量比较,以两组蛋白含量比值在1.5倍及以上,P<0.05,被认为是差异表达蛋白质点.用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱或串联质谱技术进行差异表达蛋白质点鉴定.结果 共筛选分离出27个差异表达蛋白质点,经质谱技术共成功鉴定了26种蛋白质,11种蛋白质在肾癌组织中上调,15种蛋白质下调.其功能覆盖细胞活动的多个方面,其中线粒体短/支链特异性酰基辅酶A脱氢酶、醛糖1-表异构酶、PRDX4、CAPG、β-防御素107、微纤丝相关糖蛋白4等6种蛋白是我们首次采用蛋白质组学技术成功筛选的肾癌差异表达蛋白质,并发现了1个预测蛋白(UCRIL).结论 荧光差异双向凝胶电泳在肾癌组织中获得较好的筛选效果,新筛选的差异表达蛋白有望成为肾癌分子生物学标记物,为后续研究提供了实验依据.     

新生儿神经管畸形的血清蛋白组学研究

目的 寻找神经管畸形新生儿血清中异常表达的蛋白质。 方法 通过二维凝胶电泳分离神经管畸形新生儿及正常新生儿血清,用PDQuest图像软件比较电泳图谱中的异常蛋白质点,用MALDI TOF/ TOF串联质谱仪分析蛋白质,所得的质谱图通过GPS软件在Mascot数据库中检索并鉴定蛋白质。结果 筛选出35个表达差异的蛋白质点,其中有8个蛋白质点表达上调,27个蛋白质点表达下调。选取四个蛋白质点进行鉴定,其中结合珠蛋白前体表达升高, HP protein, 血清载脂蛋白A-1前体及immunoglobulin heavy constant gamma 1三种蛋白表达均降低。 结论 神经管畸形可以导致血清中多种蛋白的的异常表达。