rAAV介导hBDNF基因转染对急性高眼压兔眼视网膜BDNF表达的影响

目的 通过观察视网膜内源性脑源性神经营养因:F(BDNF)表达的变化,探讨玻璃体注射携带人脑源性神经营养因子(hBDNF)的重组腺伴随病毒(rAAV-BDNF)对急性高眼压兔眼神经损害的保护机制.方法 24只健康日本大耳白兔任选一眼作为造模眼(为模型组,共24眼),用生理盐水前房灌注法造成急性高眼压模型,对侧眼不作任何处理作为正常对照组(24眼).另24只健康日本大耳白兔任选一眼作为造模眼(为BDNF组,共24眼),BDNF组在造模前3d玻璃体内注射10μl rAAV-BDNF.于造模后第1、3、7、14d三组各摘除6只观察眼做病理切片,进行免疫组化染色,观察视网膜内源性BDNF表达.结果 模型组兔眼视网膜内源性BDNF表达阳性细胞数减少,BDNF组兔眼视网膜内源性BDNF表达阳性细胞数较对照组及模型组增加(P<0.05,P<0.01).结论 rAAV-BDNF基因转染通过增加视网膜内源性BDNF的表达起到神经保护作用.玻璃体注射是rAAV-BDNF转染视网膜的有效途径.

Abstract：

Objective To observe the changes in the expression of brain derived neurotrophic factor (BDNF) gene in the retina of rabbits with acute high intraocular pressure (IOP) after injection of recombinant adeno-associated virus (rAAV) vector containing human BDNF gene (rAAV-hBDNF), and investigate the neuroprotective mechanism of rAAV-hBDNF. Methods The unilateral eyes of 24 white rabbits were randomly chosen as the model group with high IOP induced by saline perfusion into the anterior chamber, and the contralateral eyes served as the control group without treatment. In another 24 white rabbits, 10 μl rAAV-BDNF was injected into the vitreous body of one of the eyes 3 days before induction of high IOP. On days 1,3,7, and 14 after perfusion, the bilateral eyes of 6 rabbits were excised for immunohistochemistry for the expression of endogenous BDNF gene in the retina. Results The number of BDNF-positive cells in the retina decreased after induction of high IOP, and injection of rAAV-hBDNF resulted in a significant increase in BDNF-positive cells as compared with the positive cell number in the high IOP model and control groups (P<0.05, P<0.01). Conclusion rAAV-mediated BDNF gene transfection can increase endogenous BDNF expression in the retina of rabbits with acute high IOP. Intravitreous injection is an effective pathway for rAAV-hBDNF gene transfection into the retina.     

重组人促红细胞生成素对急性高眼压兔视网膜bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨全身应用重组人促红细胞生成素(rhEPO)对急性高眼压兔眼视网膜bcl-2蛋白表达的影响及意义。方法在设立正常对照、急性高眼压模型对照的情况下,日本大耳白兔皮下注射rhEPO,分别于造模后第1、3、7、14天免疫组化法观察视网膜bcl-2蛋白表达。结果正常视网膜组织可见bcl-2蛋白表达,染色阳性细胞数为每高倍视野(10.5±1.2)个。模型组和EPO组兔眼视网膜bcl-2蛋白表达阳性细胞数均较正常对照组减少(P<0.05,P<0.01)。EPO组第7天、14天视网膜bcl-2蛋白表达阳性细胞数较模型组增加(P<0.05,P<0.01)。结论rhEPO可以上调视网膜bcl-2蛋白表达,这可能是rhEPO保护急性高眼压引起的兔眼视网膜神经功能损害的机制之一。     

藏红花提取液对慢性高眼压兔眼视网膜电图的保护作用

目的: 探讨藏红花提取液在慢性持续性高眼压条件下对兔眼视网膜功能的保护作用.方法: 将新西兰白兔30只随机分为对照组、高眼压组和治疗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组;高眼压组和治疗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的兔眼前房注入3 g/L复方卡波姆溶液制作成慢性高眼压模型,治疗Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ组的兔每日耳缘iv藏红花提取液,对照组仅作前房穿刺.在升高眼压前和高眼压持续1,2,4 wk共4个时间点,检测ERG的b波、Ops波的振幅. 结果: 高眼压组的b波、Ops波振幅在高眼压持续1,2,4 wk时比对照组和治疗组非常显著性降低(P＜0.01),对照组和治疗Ⅱ、Ⅲ组间差异无显著性意义(P＜0.05).结论: 慢性高眼压可导致兔眼视网膜功能损害,表现为ERG的b波、Ops波振幅进行性下降;藏红花提取液对这种视网膜功能损害有保护作用.     

脑源性神经营养因子在正常兔眼视网膜的表达

目的 :观察脑源性神经营养因子 ( brain- derived neurotrophic factor,BDNF)在兔眼视网膜组织中的表达。方法 :利用 BDNF抗体通过免疫组织化学方法 ,观察免疫反应物质在兔眼视网膜组织中的分布。结果 :BDNF在兔眼视网膜神经节细胞 ( retinal ganglioncell,RGC)、内核层细胞、外核层细胞均有表达。结论 :RGC不仅是 BDNF的靶细胞 ,其自身也表达 BDNF。旁分泌、自分泌方式产生的 BDNF也参与了 RGC的调节     

重组人促红细胞生成素对急性高眼压兔眼视网膜缺氧诱导因子1α表达的影响

目的 观察重组人促红细胞生成素(rhEPO)对急性高眼压兔跟视网膜缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响,探讨国产rhEPO保护视网膜神经功能的机制.方法 在设立正常对照、模犁对照的情况下,日本大耳白兔皮下注射国产rhEPO,分别于缺血再灌注(生理盐水前房灌注法造成急性高眼压)后第1、3、7、14天免疫组化法观察视网膜HIF-1α基因表达.结果 正常兔眼视网膜无HIF-1α表达.模型组兔眼视网膜HIF-1α表达阳性细胞数较正常对照组明显增加(P<0.01),EPO组兔眼视网膜HIF-1α表达阳性细胞数变化与模型组相似,但较模型组显著减少(P<0.01).结论 国产rhEPO能够下调视网膜HIF-1α的表达.下调视网膜HIF-1α的表达可能是rhEPO对视网膜缺血冉灌注损伤的保护机制之一.     

兔慢性高眼压模型的建立

目的:建立一种持续时间较久的慢性高眼压动物模型.方法:新西兰白兔10只左眼为对照眼,右眼为模型眼.模型眼前房注入3g/L复方卡波姆溶液制作成慢性高眼压模型,对照眼只作前房穿刺.每日测量眼压;在高眼压模型前和高眼压持续1,2及4wk共4个时间点,检测ERG的b波、Ops波的振幅;高眼压持续4wk后检测视网膜节细胞(retinalganglioncells,RGCs)数目的变化.结果:①模型眼的眼压(4.47±1.41)kPa,明显高于对照眼(2.08±0.25)kPa(t=4.798,P=0.001).②高眼压持续1,2及4wk后,对照眼b波的振幅为(211.49±57.22,207.86±51.89,201.77±56.47)μV,Ops波的振幅为(77.45±24.08,73.61±8.87,79.66±21.94)μV;模型眼b波的振幅为(149.08±20.55,121.12±27.99,81.82±77.66)μV,Ops波的振幅为(50.09±9.77,39.99±8.98,33.12±7.67)μV;二者间b波、Ops波的振幅有非常显著性差异(P值均为0.000),模型眼b波和Ops波的振幅在高眼压前和高眼压持续1,2及4wk时有非常显著性差异(P值均为0.000),并且随高眼压持续时间的延长有进行性降低的趋势(P值分别为0.001,0.000).③慢性高眼压持续4wk后检测RGCs数目对照眼为(302.30±23.99)/10mm和模型眼为(89.20±10.86)/10mm,有非常显著性差异(t=23.685,P=0.000).结论:从眼压、视网膜功能和形态来衡量,兔眼前房注射3g/L复方卡波姆溶液是一种理想的慢性高眼压模型.     

兔眼高眼压模型的建立

目的：建立长期、稳定且易于眼压测量的高眼压模型。方法：健康新西兰白兔24只，随机分为三组，即空白对照组、生理盐水组和高眼压组，每组8只。高眼压组用红细胞悬液眼前房注入法制做兔眼高眼压模型。结果：造模后眼压逐渐升高，第8d时达高峰，为34．20＋2．26mmHg，持续1d后，眼压缓慢下降，至第11d，眼压下降至20．08＋6．22mmHg，维持近15d，眼压降至正常。空白对照组和生理盐水组眼压基于正常水平。形态学观察，视细胞内外节断裂，视网膜神经节细胞（RGC）明显空泡并且排列稀疏、细胞体积大小不一，核仁不清或无，核内染色质稀少且分布不均。神经纤维层高度水肿。结论：此模型易于制做且便于眼压测量，这将为RGC损伤保护方法的研究奠定一定的基础。     

Cop 1对实验性高眼压性青光眼视神经的保护作用

目的 观察Copolymer 1(Cop 1)对大鼠高眼压模型视神经的保护作用,为Cop 1在抗青光眼视神经萎缩的临床应用提供实验室依据.方法 将30只成年Wistar大鼠用Shareef-Sharma法制作双眼高眼压模型,在眼压升高的第3周,在Cop 1模型组(n=15)大鼠的后脚皮内注射100 μg Cop 1和等体积的Freund 完全佐剂(CFA)混合乳化液;在模型对照组(n=15)大鼠后脚皮内注射等体积的PBS和CFA混合乳化液,6 d后用Fluorogold进行视网膜神经节细胞(RGC)逆行性染色,1 d后取出视网膜,比较两组RGC密度的差异.另取6只正常大鼠(未做高眼压模型)作空白对照组.结果 Cop 1模型组视神经和视网膜切片的HE染色显示视神经大量淋巴细胞聚集,Cop 1模型组和模型对照组RGC的损失率分别为10.24%±3.75%和29.00%±6.92%;Cop 1模型组的RCG密度显著高于模型对照组(P＜0.05),但与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05).结论 Cop 1皮内注射能减少高眼压对RGC的损害.     

多聚物1诱导自身免疫对大鼠高眼压模型视神经的保护作用

目的 探讨多聚物1诱导自身免疫对大鼠高眼压模型视神经的保护作用及其机制.方法 高眼压大鼠随机分为2组,分别皮下注射200μg多聚物1和同等剂量的磷酸盐缓冲液(PBS).荧光金逆行标记视网膜神经节细胞(RGC),在荧光显微镜下进行计数.免疫组织化学方法 观察T细胞在视神经及视网膜的聚集情况.结果 多聚物1组免疫后17、24、31 d RGC存活数目(个/mm2:2617±17、2588±206、2394±15)均多于PBS组(个/mm2:2357±37、2277±340、2129±17,P<0.01、0.05、0.01).免疫后10、17、24、31 d视网膜上聚集的T细胞数多聚物1组(个/mm2:11.3±2.8、36.7±5.2、33.9±3.0、21.4±5.9)也均多于PBS组(个/mm2:4.7±3.6、19.7±2.4、15.3±4.0、13.3±4.4,均P<0.01).结论 多聚物1对大鼠高眼压模型的视网膜神经节细胞RGC有保护作用;高眼压造成的损害引起视网膜处T细胞的聚集,多聚物1能增加聚集于视网膜上的T细胞数量,这可能与多聚物1的视神经保护作用有关.     

原花青素对小鼠视网膜光化学损伤的保护作用

目的 观察原花青素对视网膜先化学损伤后感光细胞的保护作用.方法 24只昆明小鼠随机分为3组:A组为正常对照组;B组为光化学损伤模型对照组;C组为原花青素给药组.C组在造模前三天开始灌胃给原花青素混悬液(400mg/kg/d),B和C组先暗适应12小时,然后在自制的光损伤箱内光照12小时,连续光照3天.在造模后第7天,将每组的8只小鼠进行光镜观察视网膜形态学,并采用计算机图像分析技术,对各实验组小鼠视网膜厚度及视网膜外核层厚度进行定量测量结果光照第7天后,三组视网膜厚度和视网膜外核层厚度相比均具有显著性差异(p＜0.01).结论 原花青素对视网膜光化学损伤具有一定的保护作用.