FOXC2在非小细胞肺癌细胞株及组织中的表达及意义

目的:研究叉头框C2(Forkhead box c2,FOXC2)在人非小细胞肺癌(non small cell lung cancer,NSCLC)细胞株和组织中的表达水平,并探讨FOXC2与临床病理因素的相关性。方法:应用RT-PCR方法检测FOXC2在人肺癌细胞株A549和H460中mRNA水平的表达情况,并与永生化人支气管上皮细胞株16HBE进行比较;应用免疫组化(IHC)方法检测FOXC2蛋白在66例NSCLC组织和8例癌旁肺组织中的表达情况,并分析FOXC2表达与NSCLC患者临床病理因素的关系。结果:肺癌细胞株A549和H460中FOXC2的mRNA表达水平高于永生化人肺上皮细胞株,差异有统计学意义(P<0.05);FOXC2蛋白在NSCLC组织中表达高于癌旁组织,与肺癌组织淋巴结转移密切相关(P<0.05),而与患者年龄、性别、吸烟、组织学类型、分化程度和TNM分期无明显相关(P>0.05)。结论:FOXC2可能在促进NSCLC的发生和发展过程中发挥了重要的作用,有望作为评估临床肺癌患者预后的指标。     

Livin与Caspase-9在非小细胞肺癌组织中的表达

目的 检测人非小细胞肺癌(NSCLC)组织中Livin和Caspase-9蛋白的表达情况,并进行相关性分析.方法 采用免疫组化SP法分别检测58例NSCLC组织、50例癌旁肺组织、8例正常肺组织中Livin和Caspase-9蛋白的表达水平,并分别分析两种蛋白表达与NSCLC的组织类型、分化程度、临床分期和淋巴结转移之间的关系,以及两种蛋白在NSCLC中表达的相关性.结果 NSCLC组织中Livin蛋白的阳性表达率(65.5%)高于癌旁肺组织(26.0%)和正常肺组织(0%),差异有统计学意义(P<0.05);Livin蛋白在腺癌中的阳性表达率(87.5%)明显高于鳞癌(46.5%)及腺鳞癌(66.7%),在有淋巴结转移的NSCLC中的阳性率(83.3%)明显高于无淋巴结转移者(46.4%),差异均有统计学意义(P<0.05);而在不同分化程度及临床分期的NSCLC中的阳性率差异无统计学意义(P>0.05).NSCLC组织中Caspase-9蛋白的阳性表达率(31.0%)低于癌旁肺组织(82.0%)和正常肺组织(87.5%)(P<0.05);有淋巴结转移的NSCLC组织中Caspase-9蛋白的阳性表达率(16.7%)低于无淋巴结转移者(46.4%)(P<0.05);在不同组织学类型、分化程度、临床分期的NSCLC中的阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05).两种蛋白在NSCLC组织中的表达呈负相关(R2=0.1447,=0.003).结论 NSCLC组织中Livin蛋白表达增高,并与Caspase-9蛋白的表达呈负相关.     

张力蛋白1抑制非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭

目的: 探讨张力蛋白1(tensin1,TNS1)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达水平、与NSCLC患者预后的关系及其对NSCLC细胞生物学功能的影响。方法: 收集56例NSCLC患者的临床病理资料,通过电话方式进行随访,了解患者生存情况。荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测56例NSCLC标本和对应癌旁组织中TNS1 mRNA表达水平,分析其与NSCLC患者临床病理特征的关系。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,分析TNS1 mRNA与NSCLC患者预后的关系。采用qRT-PCR和蛋白质印迹法分别检测NSCLC细胞A549、H1299与正常肺支气管上皮16HBE细胞中TNS1 mRNA和蛋白表达水平;将A549、H1299细胞各分为2组,分别转染TNS1过表达质粒(pcDNA3.1/TNS1组)和相应的空载质粒(阴性对照pcDNA3.1组);MTT实验、克隆形成实验、细胞划痕、Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移、侵袭能力;蛋白质印迹法检测细胞上皮间质转化相关分子蛋白水平。结果： 与癌旁组织相比,NSCLC组织中TNS1 mRNA表达明显降低(P<0.05)。TNS1 mRNA表达量与NSCLC患者淋巴结转移及术后肿瘤转移相关(P<0.05),与年龄、性别、吸烟、病理分型、肿瘤大小、TNM分期无明显相关性(P>0.05)。TNS1 mRNA高表达患者的3年累积无病生存率和累积总体生存率均高于TNS1 mRNA低表达患者(P均<0.05)。A549和H1299细胞中TNS1 mRNA和蛋白表达量均明显低于16HBE 细胞(P均<0.01)。与对照组相比,pcDNA3.1/TNS1组A549和H1299细胞增殖、迁移、侵袭能力降低,E-钙黏蛋白表达明显上调(P<0.01),波形蛋白表达明显下调(P<0.01)。结论： TNS1在NSCLC组织及细胞中表达下调,与NSCLC患者预后相关,可抑制NSCLC细胞增殖和迁移。     

圆柱瘤基因（CYLD）的增强表达介入Fas/FasL途径诱导人肺癌细胞株A549/H460坏死的研究

目的探讨圆柱瘤基因（CYLD）在肺癌细胞株A549/H460的表达,及增强其表达对Fas/FasL途径诱导肺癌细胞死亡的影响,并探讨其可能的机制。方法选取5例肺腺癌手术患者癌组织标本作为实验组,自身癌旁正常组织作为对照组,进行CYLD基因实时荧光PCR定量分析;肺癌细胞株A549/H460分别进行CYLD基因增强质粒转染,同样采取实时荧光定量PCR及统计学检验对转染效果进行分析;转染前后的A549/H460细胞株FasL膜蛋白刺激进行培养24 h,通过流式细胞分析细胞死亡情况。结果 5例癌组织和癌旁正常组织均有CYLD表达,且差异有统计学意义（P〈0.05）,对照组为实验组的2.53倍;CYLD基因在A549细胞的表达较转染前高1.40倍,在H469细胞则比转染前高1.83倍;A549/H460细胞的坏死率较转染前增加,尤其是在提前加入zVAD-fmk后进行Fas信号诱导坏死率增加显著。结论肺癌细胞CYLD基因的表达较正常肺组织下调,有效增强肺癌细胞株A549/H460的CYLD基因表达后,FasL膜蛋白可通过Fas信号诱导其显著坏死。     

p16与非小细胞肺癌临床病理的关系及5-Aza-CdR对肺癌A549细胞中p16表达的影响

目的 探讨抑癌基因p16在非小细胞肺癌（non-small cell lungcancer,NSCLC）组织中的表达与临床病理参数间的联系,进一步研究DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-2′-deoxycytidine,5-Aza-CdR）在人肺癌A549细胞中对p16 表达的影响。方法 采用免疫组化SP法检测76例NSCLC组织及其癌旁正常组织中p16 蛋白的表达情况,并分析不同病理参数癌组织中p16蛋白表达的差异;采用MSP法检测不同浓度（0~16 μmol/L）5-Aza-CdR处理后的A549细胞中P16基因启动子区DNA的甲基化状态,并采用Western blot 法检测5-Aza-CdR对A549细胞中p16 表达的影响。结果 76例NSCLC组织中,32例（42.11%）p16 蛋白表达阳性,低于癌旁正常组织（59例,77.63%）中阳性表达（P<0.05）;不同病理组织分级、肿瘤分化程度、临床TNM分期及有无淋巴结转移的NSCLC组织中p16 的阳性表达率差异有统计学意义（P<0.05）;在A549细胞中p16蛋白表达和非甲基化产物均呈低表达状态,5-Aza-CdR作用后,p16蛋白和其非甲基化产物表达均上调,且随着5-Aza-CdR浓度的升高呈增多趋势。结论 p16 在鳞癌、低分化、有淋巴结转移及Ⅲ~Ⅳ期NSCLC组织中低表达,提示其失活可能与NSCLC的进一步进展有关,5-Aza-CdR可诱导A549细胞中p16蛋白和非甲基化产物表达增加。     

Bcl-2在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨Bcl-2在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达水平及其临床意义.方法 选取手术切除并经病理证实的NSCLC及相应的癌旁标本51例,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)对51例NSCLC患者癌组织和癌旁正常组织的Bcl-2 mRNA表达水平进行检测;运用免疫组织化学方法检测NSCLC组织和癌旁正常组织中Bcl-2 蛋白的表达;分析Bcl-2的表达量和患者的临床特点之间的关系.结果 RT-qPCR结果显示NSCLC组织中Bcl-2 mRNA的表达水平高于癌旁正常组织,而在高、中分化组的NSCLC组织中Bcl-2 mRNA的表达水平高于低分化组(P<0.05).免疫组化显示NSCLC组织Bcl-2蛋白表达水平高于癌旁正常组织(P<0.05),Bcl-2蛋白的表达水平与NSCLC组织的分化程度及TNM分期有关,其分化程度越高或TNM分期越低,Bcl-2蛋白的表达程度也越高(P<0.05),与患者性别、年龄及是否吸烟无明显相关性.结论 Bcl-2的表达在NSCLC组织和癌旁正常组织中存在差异,Bcl-2可能与NSCLC的发生发展有关.     

沉默APE1对非小细胞肺癌细胞的放射敏感性的影响研究

目的 研究脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶-1（APE1）对非小细胞肺癌细胞放射敏感性的影响。方法 采用免疫组化染色检测手术标本切片（非小细胞肺癌组织20例及癌旁组织5例）中APE1的表达,Western blot与实时荧光定量（qRT）-PCR检测非小细胞肺癌细胞系（A549,H460,H1299）及肺正常上皮细胞系中APE1的表达;Western blot检测辐照A549与H460细胞0~6 Gy后APE1的表达;构建沉默APE1的A549与H460稳定细胞株后,Western blot检测其辐照6 Gy后APE1的蛋白表达;细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成率;CCK-8检测细胞增殖;细胞术流式检测细胞凋亡。结果 非小细胞肺癌组织及细胞系中APE1的表达明显上调;辐照能诱导非小细胞肺癌细胞APE1的表达,且表达随辐照剂量增高而上调;沉默APE1能有效地抑制辐照诱导A549与H460细胞中APE1的表达;成功构建沉默APE1的A459、H460稳定细胞株;沉默APE1联合辐照进一步抑制了非小细胞肺癌细胞克隆形成率、细胞增殖率,同时促进细胞凋亡（ PAPE1可增强非小细胞肺癌细胞的放射敏感性。     

LRRK2、PPBP基因在非小细胞肺癌组织中的表达及其与预后的相关性分析

目的:探讨LRRK2、PPBP基因在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其与预后的关系.方法:收集100例NSCLC临床样本,分析LRRK2、PPBP基因在癌旁组织与癌组织中的表达情况,分析LRRK2、PPBP基因在NSCLC组织中的表达与临床病理特征的关系及与NSCLC患者预后的相关性.结果:NSCLC组织中LRRK2蛋白低于癌旁组织(P<0.05),PPBP蛋白的相对表达量均高于癌旁组织(P<0.05);LRRK2蛋白在不同分化程度及不同TNM分期NSCLC组织中的相对表达量差异有统计学意义(P<0.05),LRRK2蛋白在癌组织中的表达量与NSCLC患者肿瘤直径、病理类型、淋巴结转移无关(P>0.05);PPBP蛋白在是否淋巴结转移及不同TNM分期NSCLC组织中的相对表达量差异有统计学意义(P<0.05),LRRK2蛋白在癌组织中的表达量与NSCLC患者肿瘤直径、病理类型、分化程度无关(P>0.05).多因素Cox回归分析显示TNM分期(OR=2.855)、LRRK2(OR=0.217)、PPBP蛋白(OR=2.812)是影响NSCLC患者预后的独立危险因素(P<0.05).生存分析显示LRRK2低表达组1年的生存率高于LRRK2高表达组(P<0.05),PPBP高表达组1年的生存率高于PPBP低表达组(P<0.05).结论:LRRK2、PPBP基因在非小细胞肺癌组织中明显高表达,其表达量与患者TNM分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移及患者预后相关,有望成为NSCLC诊治的新靶点.     

非小细胞肺癌组织中RASSF1 A蛋白的表达

目的:检测非小细胞肺癌(NSCLC)组织中RASSF1A蛋白的表达.方法:采用Western Blot检测96例NSCLC患者癌组织及相应的癌旁正常肺组织中RASSF1A蛋白的表达.结果:①在NSCLC组织中,RASSF1A失表达或低表达率达60.4%(58/96),而相应的癌旁正常肺组织均正常表达,2者比较,差异有统计学意义(P<0.05).②RASSF1A表达下调或缺失与肿瘤的病理分期和淋巴结转移有关(P<0.05),但与患者的性别、年龄、是否吸烟,肿瘤的组织学类型及分化程度无关(P>0.05).结论:RASSF1A在中国人NSCLC组织中有较高比例的表达下调或缺失,该蛋白低表达或阴性表达可能促进NSCLC的发生、发展及淋巴结转移.     

剪接因子SRSF9在肺癌中的表达量变化及意义

目的检测剪接因子SRSF9在临床肺癌样本以及肺癌细胞系中m RNA以及蛋白水平的表达差异情况,并结合受试者工作特征曲线(ROC曲线)探讨其临床诊断价值。方法实时荧光定量PCR检测64例经病理诊断确诊为肺癌患者的癌组织及癌旁组织和肺癌细胞系A549、H1299以及人胚肺正常二倍体细胞系KMB17中剪接因子SRSF9mRNA的表达量。Western blotting检测肺癌细胞系A549、H1299和人胚肺正常二倍体细胞系KMB17中剪接因子SRSF9蛋白水平的表达量差异。绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析剪接因子SRSF9,评价SRSF9表达水平对肺癌的诊断价值。结果肺癌组织中SRSF9表达量为(3.85×10-3,2.81×10-3)高于癌旁(3.05×10-3,1.35×10-3),P <0.05。肺癌细胞系A549、H1299的SRSF9mRNA水平表达量分别为(7.1×10-3±2.96×10-4)、(1.49×10-2±1.55×10-3),均高于在KMB17中的表达量(5.42×10-3±5.15×10-4),P<0.05。H1299、A549中剪接因子SR... 更多