基因强化组织工程骨联合显微外科方法修复长段骨缺损的实验研究

目的评价骨形态发生蛋白2（BMP-2）基因强化的组织工程骨联合显微外科方法修复长段骨缺损的效果。方法分离培养兔骨髓基质干细胞，经BMP-2基因转染后复合异种骨支架体外构建基因强化的组织工程骨（GEB）。建立兔双侧桡骨缺损（2．5cm长）模型，采用5种方法修复。A：GEB加带血管蒂骨膜移植；B：GEB加血管束植入；C：GEB加游离骨膜移植；D：GEB；E：单纯支架。术后4、8、12周行X线、组织学、生物力学测定和微血管墨汁灌注等观察血管形成及成骨情况。结果A组血运建立最快，B组血管束早期即发出分支向移植骨内长入，C组4周时游离骨膜成活并发出微小血管，D组在BMP-2基因诱导下成骨速度和质量优于E组，12周时骨缺损部分修复，但中央区成骨不良，而E组12周时形成骨不连，缺损区内被纤维组织填充。在细胞成活率、生物力学性能、VEGF表达水平等方面，均表现为A〉B〉C〉D〉E，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论BMP-2基因强化的组织工程骨联合显微外科方法修复长段骨缺损，既提供了血运，又提供了有效的成骨诱导因子，是治疗长段骨缺损较为理想的方法。其中，带血管蒂骨膜联合移植修复效果最佳；血管束植入法血供重建较快，方便临床应用。     

血运重建加内固定治疗股骨颈骨折

目的：研究血运重建方法对股骨颈骨折的治疗作用。方法：1991年1月至2000年1月,对36例股骨颈骨折手术内同时采取血管束植入,带血管蒂、肌蒂骨膜（骨）瓣移位或移植,并对部分植入血管或移植骨瓣血管进行对接吻合连通血液循环。结果：36例1－9年随访,其中35例在2－5个月骨折愈合,单纯血管束植入术中,1例年长发生骨不愈合,2例出现股骨头缺血性坏死。结论：股骨颈骨折手术治疗中,为防止骨不愈合及股骨头缺血性坏死,可常规进行血运重建手术。在骨折端进行植入血管的对接吻合连接血运是一个提高疗效的重要方法。     

血运重建加内固定治疗股骨颈骨折

目的研究血运重建方法对股骨颈骨折的治疗作用.方法1991年1月至2000年1月,对36例股骨颈骨折手术内固定同时采取血管束植入,带血管蒂、肌蒂骨膜(骨)瓣移位或移植,并对部分植入血管或移植骨瓣血管进行对接吻合连通血液循环.结果36例1～9年随访,其中35例在2～5个月骨折愈合,单纯血管束植入术中,1例年长者发生骨不愈合,2例出现股骨头缺血性坏死.结论股骨颈骨折手术治疗中,为防止骨不愈合及股骨头缺血性坏死,可常规进行血运重建手术.在骨折端进行植入血管的对接吻合连接血运是一个提高疗效的重要方法.     

应用血管内皮生长因子基因治疗股骨头缺血性坏死的实验研究

目的：通过建立犬股骨头缺血坏死模型，探讨应用脱蛋白骨复合转染血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）基因骨髓基质细胞植入治疗股骨头缺血坏死的可行性。方法：实验选取36只成年犬，随机分为3组，每组12只。A组为脱蛋白异体骨复合转染VEGF基因的自体骨髓基质细胞；B组为脱蛋白异体骨复合未转染基因的自体骨髓基质细胞；C组单纯植入脱蛋白骨材料。采用液氮冷冻法制作狗股骨头缺血坏死模型，将细胞骨材料复合物植入缺血坏死股骨头内。应用微循环灌注方法了解股骨头内的血运情况，组织形态学观察坏死股骨头的修复情况，免疫组化方法检测VEGF的表达，骨密度仪测定股骨头的骨密度。结果：A组4周后股骨头内有VEGF表达，12周后股骨头内有大量的树枝状血管生成，大量新骨形成，骨密度增高；B、C组均无VEGF基因表达，B组有部分新骨及血管生成，C组仅见少量类骨质形成，血管再生不明显。结论：利用脱蛋白骨复合转染VEGF基因的骨髓基质细胞可促进新骨形成与血管再生，有利于促进坏死骨的修复。     

颞浅动静脉血管植入断耳回植术

颞浅动静脉血管植入断耳回植术冯一勋１王欣１刘玉怀１王戈平１沈祖尧２外伤后离断耳廓血管细小。如伴有碾挫伤则难以用小血管吻合的方法重建血循环，再植断耳。１９９３年７月～１９９６年４月，我们用颞浅动静脉血管束植入离断耳廓，头皮下埋藏，重建离断耳廓血液循环。...     

一例人体坏死股骨头血管束植入后的形态学观察

1例陈旧性股骨颈骨折不连接并股骨头坏死患者,在植入血管束14个月后因再次股骨颈骨折行股骨头置换术.作者对取出的人体股骨头标本进行形态学研究,结果见原植入的血管束在坏死的股骨头内向四周放射新生出丰富的血管;血管束植入术后坏死股骨头有新骨形成,但修复缓慢,是软骨成骨过程.认为血管束植入坏死股骨头后可大大改善股骨头的血运;软骨成骨在坏死股骨头的修复中起着重要作用.     

自体半侧腓骨髓腔内移植治疗长骨干缺损的生物力学实验研究

作者报告了用自体半侧腓骨髓腔内移植，梯形自动加压钢板固定治疗长骨干骨不连。生物力学实验证明，髓内植腓骨钢板固定组的最大扭矩、扭转强度等均明显高于不植腓骨组，固定力学效果佳。髓腔植入腓骨后，胫骨干表面及截骨面所承受的扭转应力明显低于不植腓骨组；钢板受力均匀，较不植腓骨组明显减少，设计符合等强度原理，可以减少应力集中和疲劳断裂，提高钢板的工作安全系数，且螺钉对钉孔周围骨质的挤压力显著减小。这对防止螺钉孔周围骨质坏死及螺钉松动均有一定作用。这些均为骨愈合过程创造了极有利的力学环境。实验证明了该植骨固定方法一次性充分完成长骨干不连的结构及功能重建的优越性和可行性。     

骨缺血坏死模型血管束植入的实验研究

作者以狗做实验动物,试用热盐水灼骨蒸煮游离骨、硅胶膜包骨三种方法制做骨缺血坏死模型,结果硅膜包骨法获得的模型具有典型缺血坏死骨形态,符合实验要求.作者将胫前动静脉束植人实验模型,发现缺血坏死骨能借助植入血管束的血供获得新生,新生骨出现时间最早在60天,至120～180天死骨内血管新生丰富,成骨完善;无血管束植入的对照骨,镜下呈无骨细胞、Howship陷窝散见等死骨特征.     

兔骨髓基质细胞和骨血肿块移植促进骨折愈合的研究

目的：研究骨折后骨血肿块和骨髓基质细胞的骨再生潜能，以及骨血肿块和骨髓基质细胞联合移植对骨折愈合的影响，探讨促进骨折愈合的新途径。方法：在新西兰兔胫骨上制造骨缺损模型，3d后取出骨血肿，并从股骨抽骨髓血分离出骨髓基质细胞，将骨髓基质细胞联合骨血肿块回植到实验组骨缺损区；对照组骨缺损区则单纯行骨血肿块回植。定期拍X线片和取出骨痂行组织学观察。结果：骨缺损处骨痂生成数量在实验组和对照组两组间有显著性差异，骨髓基质细胞联合骨血肿块移植组的骨痂形成数量和骨膜反应明显多于以单纯骨血肿块移植组；组织学观察：实验组成骨样细胞形成数量也明显多于对照组。结论：骨髓基质细胞有较强的骨再生潜能，骨髓基质细胞和骨血肿块联合移植比单纯骨血肿移植成骨效果更好。     

重度Perthes病显微外科治疗方法的探讨

目的：探讨重度Ｐｅｒｔｈｅｓ病显微手术治疗的最佳方法。方法：对重度Ｐｅｒｔｈｅｓ病２６８例，采用４种显微手术方法治疗，术后定期随访，其中８８例系统随访３～９年。结果：根据髋关节功能、下肢长度及Ｘ线片表现将结果分为优、良、差。优４３例，良４２例，差３例，其优良率９６６％。结论：ｃａｔｅｒａｌⅢ期行多条血管束或带血管蒂的髂骨瓣与血管束联合植入术；Ⅳ期行股骨头内坏死骨切除、有血运的髂骨瓣植入术，有腔隙时再植入松质骨与血管束，使有血运的骨替代坏死骨     

带血管蒂骨膜、骨瓣移植和血管束植入修复骨缺损的实验研究

目的 将松质骨移植到骨缺损处,再将带血管蒂骨膜,骨瓣移植和血管束植入,以探讨不同方法对骨缺损修复过程的影响。方法 制作兔桡骨骨缺损模型,移植松质骨后,分别用带血管蒂的骨膜,骨瓣移植和血管束植入,单纯松质骨移植作对照,术后４,８,１６周进行大体标本,Ｘ线,光镜及电镜观察。结果 骨膜移植组血运建立快,成骨面积大,骨缺损修复快,质量最好。骨瓣移植组是通过带血管蒂的骨瓣移植增加了血液供应,成骨较快且好;但     

血管束、感觉神经束植入组织工程骨修复大段骨缺损的成骨研究

目的 观察血管束、感觉神经柬植入组织工程骨修复兔股骨大段骨缺损的成骨特点,探讨其对骨修复的影响. 方法 36只新西兰大白兔均制备左侧股骨干1.5 cm节段性骨缺损模型,随机分为三组(n=12),组织工程骨组(A组):自体骨髓基质干细胞复合β-磷酸三钙构建组织工程骨植入骨缺损;血管束植入组(B组):组织工程骨与血管束同时植入骨缺损;感觉神经束植入组(C组):组织工程骨与感觉神经束同时植入骨缺损.各组动物术后1、3、6个月行X线检查及影像学评分,同时每组各处死4只动物行大体及组织学观察.结果 影像学评分显示各时间点B组与C组的成骨优于A组,差异有统计学意义(P<0.05);B、C组间成骨差异无统计学意义(P>0.05).组织学观察显示新生骨多出现在血管周围,成骨方式以软骨内成骨为主. 结论血管束、感觉神经束植入组织工程骨的方法能更好地促进组织工程骨成骨及大段骨缺损修复.     

神经肽在血管神经化组织工程骨中的分布

目的 观察在组织工程骨内植入血管、神经束对大段组织工程骨成骨的]响,并探讨神经肽类物质在其中的分布.方法 36只新西兰大白兔,随机分为3组:A组,单纯组织工程骨组;B组,血管束植入组(股血管束);C组,感觉神经束植入组(隐神经柬).每只兔均在右侧股骨制造长1.5 cm的段缺性骨与骨膜缺损,钢板固定后植入3种方法制备的组织工程骨.术后4、8、12周行大体观察、X线观察、新生骨组织定量观察成骨效果,神经肽Y(NPY)及降钙素基因相关肽(CGRP)的免疫组织化学染色观察其在组织工程骨内的分布,并行半定量分析.结果 在组织工程骨内植入血管、神经后,比单纯组织工程骨的修复效果有提高,术后12周新生骨小梁占骨缺损面积的平均百分数分别为(48.67±4.21)%、(75.13±5.75)%、(73.44±2.99)%.对新生骨的组织学染色半定量分析显示3组间差异有统计学意义(F=105.735,P＜0.01),免疫组织化学染色显示神经肽类物质NPY、CGRP在B组与C组中的表达高于A组,差异有统计学意义(F=30.509及16.475,P＜0.01).结论 在组织工程骨内植人血管、神经束在早期可促进成骨,其机制可能是植入的血管、神经束在组织工程骨内发芽并分泌神经肽所致.     

骨髓基质干细胞联合血管束植入构筑血管化组织工程骨修复兔大段骨缺损

目的 研究兔骨髓基质干细胞(BMSCs)联合动静脉血管束植入异种脱蛋白松质骨(XDCB)构筑血管化组织工程骨修复兔桡骨中远段完全骨膜骨缺损的能力. 方法 从兔髂嵴捕骨髓培养制备兔BMSCs,将第5代BMSCs种植于多孔XDCB,并进行成骨诱导2周制备组织工程骨,手术中分离兔桡动、静脉血管束.动物模型为制备24只兔舣侧桡骨中远段完全骨膜骨缺损1.5 cm共48侧,分4组修复(n=12),A组为空白未治疗组,B组为单纯材料+血管束植入组(XDCB+VB),C组为组织工程骨组(XDCB+BMSCs),D组为组织工程骨+血管束植入组(XDCB+BMSCs+VB),符组交叉配对.分别于术后4、8、12周行X线片、大体解剖、组织切片、生物力学等检查,观察各组骨缺损修复效能及移植物血管化情况.结果 D组骨缺损修复效能(术后12周新骨面积比2.02%±0.16%)及血管化情况(术后12周血管面积比6.89%±0.32%)优于C组(1.50%±0.28%和3.17%±0.19%),而C组又优于B组(1.59%±0.19%和6.52%±0.23%),A组骨缺损未修复,各组结果差异有统计学意义(P<0.05).结论 BMSCs联合动静脉血管束植入构筑的血管化组织工程骨能促进成骨过程和新生骨的血管化,显著提高组织工程骨修复大段骨缺损的能力.     

Experimental study on secondary living bone graft--method of creating new donor by vascular bundle implantation to isolated bone

The purpose of this study was to demonstrate the possibility of creating a new donor for a vascularized bone graft by a vascular bundle implantation to an isolated bone. Preliminary experiments on rats were performed preliminarily in order to investigate the revascularization of bone by a vascular bundle implantation and/or by implanting in muscular tissues (experiment-1). When a vascular bundle was implanted to the intramedullary cavity of an isolated bone and then the bone was implanted in muscular tissues, the isolated bone was more readily revascularized and revitalized than under other conditions. In experiment-2, the revascularized bone was transferred to the abdominal subcutaneous space on the vascular pedicle that was an implanted vascular bundle. Histologic and fluorochrome bone labeling studies showed that the revascularized bone was kept revitalized after the transfer. These results demonstrate that muscle and vascular bundle co-operated effectively in the revascularization of bone. Vascular bundle can also act as a pedicle for transferring the revascularized bone.     

单纯血管束、神经束分别植入组织工程骨修复兔骨缺损对降钙素基因相关肽和神经肽Y表达的影响

目的 比较单纯血管、神经束分别植入组织工程骨修复兔骨缺损对神经肽降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide,CGRP)和神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)表达影响. 方法 36只新西兰大白兔,随机平均分为3组:A组为组织工程骨+股血管束植入,B组为组织工程骨+感觉神经束植入,C组为单纯组织工程骨.每只动物均在右侧股骨制作长1.5 cm的段缺性骨与骨膜缺损,钢板固定后分别用以上方法修复大段骨缺损.术后3、6、12个月行免疫组化染色检测修复骨段内的CGRP和NPY的表达,并采用图像分析软件行半定量分析. 结果 CGRP和NPY的表达量在A、B、C 3组均随时间推移而增多(P=0.000),在3个月时A组较B组多(P=0.000),但在6个月和12个月时A组和B组的表达量无明显差异(P>0.05).A、B两组在3、6、12个月时的表达最均较C组多(P=0.000). 结论 与单纯神经束植入组相比,单纯血管束植入组织工程骨修复兔骨缺损在术后3个月可以明显促进CGRP和NPY表达,但后期两组对神经肽表达的影响作用无明显差异.     

Repair of bone defect with vascularized tissue engineered bone graft seeded with mesenchymal stem cells in rabbits

This study evaluated the results of repair of the radius defect with a vascularized tissue engineered bone graft composed by implanting mesenchymal stem cells (MSCs) and a vascular bundle into the xenogeneic deproteinized cancellous bone (XDCB) scaffold in a rabbit model. Sixty-four rabbits were used in the study. Among them, four rabbits were used as the MSCs donor. Other 57 rabbits were divided into five groups. In group one (n = 9), a 1.5 cm bone defect was created with no repair. In group two (n = 12), the bone defect was repaired by a XDCB graft alone. In group three (n = 12), the defect was repaired by a XDCB graft that included a vascular bundle. In group four (n = 12), the defect was repaired by a XDCB graft seeded with MSCs. In group five (n = 12), the defect was repaired by a XDCB graft including a vascular bundle and MSCs implantation. The rest three rabbits were used as the normal control for the biomechanical test. The results of X-ray and histology at postoperative intervals (4, 8, and 12 weeks) and biomechanical examinations at 12 weeks showed that combining MSCs and a vascular bundle implantation resulted in promoting vascularization and osteogenesis in the XDCB graft, and improving new bone formation and mechanical property in repair of radius defect with this tissue engineered bone graft. These findings suggested that the vascularized tissue engineered bone graft may be a valuable alternative for repair of large bone defect and deserves further investigations.     

Porcine small intestinal submucosa as a carrier for skin flap prefabrication

The feasibility of porcine small intestinal submucosa (SIS) as a carrier in skin flap prefabrication was examined in this study. Thirty-eight rats were randomly divided into five groups. The saphenous vascular bundle was used as the vascular carrier. In group 1 (n = 8), an arteriovenous fistula was made by anastomosis of distal saphenous artery and vein. A SIS patch (1.5 x 2 cm2) was placed underneath the vascular bundle. In group 2 (n = 8), the vascular bundle was isolated and laid over the SIS patch. The distal saphenous vessels were ligated when the flap was raised. In group 3 (n = 8), an arteriovenous fistula was made without SIS implant. In group 4 (n = 8), the flap was raised with only the vascular bundle with the distal end ligated. After 2 weeks of maturation, the flap was raised with only the vascular bundle. In group 5 (n = 6), SIS was implanted and the flap including the SIS patch was raised and replaced without the vascular pedicles. The survival of the flaps and histology were evaluated at 5 days after flap replacement. The results showed that the average survival area in group 1 was 99% +/- 3% and the survival area in group 2 was 86% +/- 16%. The mean survival areas in group 3 and 4 were 60% +/- 9% and 25% +/- 10%, respectively. No flap survival was observed in the group 5. These were significantly lower than in groups 1 and 2 (p < 0.05, p < 0.01). Histology showed that SIS patch was incorporated into the adjacent connective tissue and increased amounts of neovascularization were seen between the collagenous sheets and dermis. In conclusion, this study demonstrated that porcine SIS can incorporate into the adjacent tissue and induce angiogenesis in flap prefabrication. This biomaterial can provide a scaffold for supporting and enhancing the survival of vascular prefabricated skin flap.     

血管束植入组织工程骨修复兔股骨缺损对血管内皮生长因子表达的影响

目的 探讨血管束植入组织工程骨修复兔股骨缺损对局部血管内皮生长因了(VEGF)表达的影响.方法 将兔自体骨髓基质下细胞经诱导后与β-磷酸三钙材料复合,植入制备的兔股骨缺损处,其中实验组在材料侧槽中植入股骨的动静脉血管束,对照组则单纯植入组织工稗骨,分别于术后2、4、8、12周通过形态学检测新生骨量,免疫组织化学方法检测新生骨中VEGF的表达量.结果 随着时间进展,各组成骨量逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.05),并且从第4周开始实验组成骨量高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);符时问点实验组新生骨中VEGF的表达最均高于对照组,差异有统汁学意义(P<0.05),且4周时达到最人值.结论 血管束植入组织工程骨可明显增加新生骨中VEGF的表达并能促进骨缺损的修复.     

血管束植入组织工程骨修复兔股骨缺损对血管内皮生长因子表达的影响

目的 探讨血管束植入组织工程骨修复兔股骨缺损对局部血管内皮生长因了(VEGF)表达的影响.方法 将兔自体骨髓基质下细胞经诱导后与β-磷酸三钙材料复合,植入制备的兔股骨缺损处,其中实验组在材料侧槽中植入股骨的动静脉血管束,对照组则单纯植入组织工稗骨,分别于术后2、4、8、12周通过形态学检测新生骨量,免疫组织化学方法检测新生骨中VEGF的表达量.结果 随着时间进展,各组成骨量逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.05),并且从第4周开始实验组成骨量高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);符时问点实验组新生骨中VEGF的表达最均高于对照组,差异有统汁学意义(P<0.05),且4周时达到最人值.结论 血管束植入组织工程骨可明显增加新生骨中VEGF的表达并能促进骨缺损的修复.