c-met在人肝细胞癌中表达的研究

应用分子杂交法，研究c-met mRNA在人肝细胞癌中的表达及其意义。Northern blot结果表明，癌组织中有16例表达，癌周肝中有12例表达。c-met在肝细胞癌组织中的表达与癌周肝组织中的表达无显著差异(P>0．05)。经统计学处理发现c-met和HCC分化程度、分期、大小、HBsAg、AFP、门静脉癌栓间无显著相关(P>0.05)。研究结果表明．c-met基因可能在肝癌形成及转移过程中起调节作用。     

肝细胞生长因子及其受体c-met在肝细胞癌中的表达与预后价值

目的研究肝癌切除前、后血清肝细胞生长因子(HGF)的动态变化及其受体c met在癌组织中的表达,探讨HGF/c met对手术切除后肝癌患者的预后价值。方法收集手术切除的25例肝细胞癌患者血清及组织标本,用酶联免疫法(ELISA)测定术前1d、术后第3、7、10天血清HGF浓度,分别用免疫组织化学及逆转录聚合酶链反应(RT PCR)方法检测肝癌及癌旁组织中c met蛋白及mRNA的表达。分析术前血清HGF水平及癌组织中c met表达程度与不同临床病理因素之间的关系及影响手术后血清HGF水平变化的因素。以20例健康献血员为正常对照组,22例慢性乙型肝炎患者及22例乙型肝炎肝硬化肝功能失代偿(ChildB或C级)患者作为慢性乙肝组和肝硬化失代偿组。结果肝癌患者血清HGF浓度高于正常对照组及慢性乙肝组[(1.03±0.09)ng/ml比(0.69±0.02)、(0.74±0.09)ng/ml,P<0.05],但与肝硬化失代偿组[(1.04±0.11)ng/ml]比较差异无统计学意义。术后HGF浓度上升高峰出现在术后第3天,术后第7、10天逐渐下降,但仍高于正常水平。术前、术后各组的血清HGF组间比较,仅术后第3天组差异有统计学意义。影响术前血清HGF水平的主要因素有:肿瘤直径>5cm、伴有结节肝硬化、门静脉癌栓、术前血清甲胎蛋白(AFP)≥400μg/L。从术前到术后第3天,大区段切除比小区段切除者的血清HGF浓度上升更明显(P=0.047)。中度和强阳性c met蛋白表达在肝癌组织中(21/25)明显高于癌旁组织(5/25)。高表达的c metmRNA见于所有肝癌组织中,在癌旁组织中仅6例有高表达。癌组织中c met蛋白表达的强度与有无合并门静脉癌栓有关,与肿瘤大小、血清AFP水平、血清HGF水平、有无肝硬化及肝癌的分化程度无相关性。但在癌旁组织,合并肝硬化组c met蛋白表达高于无肝硬化组。术后有肿瘤复发或转移的病例,其术前血清HGF水平及肿瘤组织中c met蛋白表达显著高于无复发或转移的病例。HGF水平与肿瘤组织中c met表达无相关性。结论肝癌患者有血清HGF及癌组织中c met的高表达,术后血清HGF的持续升高可能与肝癌的早期复发和转移有关。     

人肝细胞癌中nm23表达的研究

目的:研究转移抑制基因nm23mRNA在人肝细胞癌中的表达及其意义.方法:应用分子杂交及RT-PCR方法对30例人肝细胞癌中nm23表达进行研究.结果:Northern blot结果表明,阳性带位于0.8Kb处;癌组织、癌旁组织中nm23的表达结果显示:癌组织中有19例表达,癌周肝组织中有3例表达.nm23在肝细胞癌组织中的表达明显高于癌周肝组织(P0.05).结论:nm23基因可能在肝癌形成及转移过程中起调节作用.     

肝细胞癌门静脉癌栓中肝细胞生长因子及其受体的表达

目的研究肝细胞生长因子（HGF）及其受体C-Met在肝细胞癌门静脉癌栓中的表达,探讨HGF及C-Met的表达与门静脉癌栓形成与发展的关系。方法用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测HGFmRNA及C-MetmRNA在20例肝细胞癌门静脉癌栓及其癌旁组织、10例无门静脉癌栓形成的肝细胞癌和癌旁组织及10例正常肝组织中的表达。结果HGF及C-Met在肝癌及癌栓中的阳性表达率均显著高于正常肝组织及癌旁组织,差异有统计学意义（P〈0．05）,HGF及C—Met在癌栓中及肝癌中表达的阳性率比较差异无统计学意义（P〉0．05）,HGF与C—Met在各组织中的表达阳性率高低差异无统计学意义（P〉0．05）。HGF及C—Met在肝癌及癌栓中的表达量均显著高于正常肝组织及癌旁组织,差异有统计学意义（P〈0．05）,HGF及C-Met在癌栓中表达量显著高于其在肝癌中表达量（P〈0．05）,HGF与C-Met在各组织中的表达量差异无统计学意义（P〉0．05）。结论HGF及C-Met参与了肝癌的形成,而肝癌患者HGF及C-Met量的升高可能是肝癌发展形成门静脉癌栓的原因之一,HGF及C—Met可作为门静脉癌栓形成的监测指标。     

原发性肝细胞癌消减杂交文库构建及差异表达基因筛选

目的构建人原发性肝细胞癌（HCC）消减杂交文库，筛选差异表达基因。方法以癌组织为检测者（tester）、癌旁组织为参照者（driver），应用抑制性消减杂交（SSH）方法构建消减杂交cDNA文库，随机挑选56个阳性克隆进行鉴定、测序及同源性分析。结果文库获得130个阳性克隆，鉴定96％有200～1500bp插入片断。获得的35个基因中包括已知基因26个，功能未知基因5个，新基日4个。已知基因中包含酶、细胞信号转导、基因调控因子、转录调节因子、癌基因、抗凋亡因子及细胞的黏附与生长调节因子等相关基因。结论应用SSH方法成功构建HCC差异表达基因cDNA文库，筛选出低丰度和新基因在内的HCC差异表达基因。     

人肝细胞癌中表皮生长因子受体的免疫组化研究

表皮生长因子(EGF)和其受体(EGFR)系统功能失调和肿瘤发生及转移有关，应用免疫组化ABC法．对30例人肝细胞癌癌组织和癌旁肝组织进行了EGFR的表达和比较研究。结果显示EGFR主要定位于细胞膜；HCC癌组织EGFR表达明显低于癌旁肝组织(P<0.05)。讨论了人肝细胞癌癌组织表达EGFR的意义及其和癌基因间的关系。     

原癌基因Jun／C—myc在原发性肝细胞癌中的表达及意义

目的:探讨原癌基因JunC’C-myc在肝癌发生中的作用.方法:采用原位分子杂交技术,对15例肝癌病人癌组织、近癌组织、远癌组织及10例肝硬变肝组织.6例正常肝细胞中Jun/C-myc mRNA进行检测.结果:肝癌组织中原癌基因Jun/C-myc mRAN表达水平较近癌组织、远癌组织明显增高;近癌组织中Jun/C-myc mANR的表达水平较远癌组织、肝硬变肝组织、正常肝组织明显增高.结论:原癌基因Jun/C-myc的过量表达是肝癌发生的早期事件,与肝癌的发生有密切的关系.     

肝细胞癌抗原基因在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的　探讨肝细胞癌抗原 (HCA)基因mRNA在肝细胞癌 (HCC)组织中的表达。方法　用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法对HCC患者的癌组织和相应癌旁组织及肝硬化和正常肝组织中的 4种HCAmRNA的表达进行检测 ;结合临床病理资料进行分析。　结果　 46例HCC患者中 ,HCA90、HCA51 9、HCA52 0、HCA587基因mRNA阳性率分别是 65 2 %、76 1 %、45 7%和 32 6 % ;至少表达一种HCA者达 82 6 % ;而癌旁组织中仅HCA51 9基因有 6 5 %mRNA表达为阳性。 1 0例肝硬化和正常肝组织中 4种HCA基因均不表达。 4种HCA的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、血清AFP水平、HBV和HCV感染无显著相关性 (P >0 0 5)。在部分AFP正常的患者中存在HCA基因的表达。　结论　HCA基因在HCC中呈高比例、高特异性表达 ,为HCC免疫治疗提供了新的潜在靶位     

人宫颈癌致癌基因和Pokemon在肝细胞癌中的表达及其相关性

目的 观察人宫颈癌致癌基因(HCCR)和Pokemon在肝细胞癌中的表达水平,探讨两者间的关系.方法 应用实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测41例肝癌组织、43例癌旁组织及其相应44例血液标本、3例肝硬化组织及其相应的3例血液标本以及3例正常肝组织中HCCR、Pokemon的表达水平,分析肝细胞癌(HCC)患者血液样本中HCCR、Pokemon表达水平与临床指标的关系.结果 肝癌、癌旁、肝硬化及正常肝组织HCCR阳性表达率分别为100.00%、97.67%、100.00%、100.00%;Pokemon阳性表达率分别为97.56%、97.67%、100.00%、100.00%.但HCCR、Pokemon在各类组织中的表达水平差异有统计学意义(P<0.05),肝细胞癌、癌旁、肝硬化、正常肝等组织中的表达水平呈递减趋势.肝细胞癌患者血液中HCCR、Pokemon阳性率分别为79.55%及50.00%.两者的表达水平显著相关.结论 HCCR和Pokemon可能可以做为HCC相关的肿瘤标记物.HCCR和Pokemon在肝细胞癌患者中存在某种程度的关系.     

抑癌基因PTEN在肝细胞癌中的表达及其意义

目的：探讨肝细胞癌（HCC）组织中抑癌基因PTEN蛋白的表达及其意义。方法：应用免疫组织化学SP法，检测53例HCC组织和癌周组织中PTEN蛋白的表达水平。结果：53例HCC中PTEN蛋白阳性率（52．8％）和阳性强度明显低于癌旁组织（92．5％）（P〈0．01，P〈0．05）；HCC组织中PTEN蛋白的表达与HCC的分化程度密切相关（P〈0．05），HCC分化愈差，PTEN蛋白表达愈弱；PTEN蛋白表达还与癌拴形成有关（P〈0．005）。结论：PTEN的异常表达在HCC发生、发展过程中可能起重要作用，其表达水平有可能作为反映HCC进展和预后的生物学指标。     

原癌基因c-jun、c-fos 在小鼠胚泡着床前后的表达

为了解胚泡着床前后ｃ ｊｕｎ、ｃ ｆｏｓ表达的动态变化。采用逆转录聚合酶链反应方法检测小鼠子宫内膜原癌基因ｃ ｊｕｎ、ｃ ｆｏｓ的表达。结果表明：（１）小鼠正常内膜有一定的ｃ ｊｕｎ、ｃ ｆｏｓ基因的表达；（２）胚泡着床前（孕３天）的内膜ｃ ｊｕｎ、ｃ ｆｏｓ基因的表达明显高于正常内膜（Ｐ＜０．００１）；（３）着床后，孕５与孕７天内膜ｃ ｆｏｓ、ｃ ｊｕｎ基因的表达低于着床前，至孕７天已低于正常水平（Ｐ＜０．００１）。提示原癌基因ｃ ｊｕｎ、ｃ ｆｏｓ与小鼠胚泡着床有关。     

一个新的人类肝癌相关基因的克隆和表达

目的研究和克隆新的肝癌相关基因,探索肝癌发生的分子机制。方法采用mRNA差异显示技术,分析原发性肝癌和癌旁肝组织基因差异表达情况,获得差异表达基因片断;通过筛选胎盘cDNA文库和基因组拼接,获得新基因全长cDNA;通过Northern杂交的方法,分析所获得的新基因在42对肝癌和对应癌旁肝组织中的差异表达,和在正常组织中的分布情况。结果克隆和鉴定了一个新的全长1706个核苷酸的肝癌相关基因STW-2,定位在染色体18p11.2区带上;该基因在42对肝癌组织中高表达的阳性率是78.6%(33/42),其阳性表达与肿瘤包膜的完整性、有无癌旁卫星灶相关（P＜0.05）;该基因具有较为广泛的基因表达谱。结论克隆和鉴定了一个肝癌高表达新基因全长cDNA,其高表达与肝癌细胞的浸润和转移能力有关。     

原发性肝癌组织中明胶酶A基因表达增强

目的　了解基质降解对原发性肝癌的作用。方法　 33例原发性肝细胞癌患者术中取癌组织及癌旁组织 ;提取组织总RNA ;用逆转录共扩增定量PCR方法测定明胶酶A (MMP2 )基因表达水平。结果　肝癌组织明胶酶A基因表达水平 (3 2 0± 0 34 )明显高于癌旁的肝硬化组织 (0 70±0 16 )及正常肝组织 (0 34± 0 0 7)。肝癌患者MMP2 基因表达水平与血清AFP浓度、肿瘤大小无关。结论　明胶酶A在原发性肝癌的进展中可能起重要作用。     

FHIT、FN和PTEN在肝癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨脆性组氨酸三联体基因蛋白(fragile histidine triad,FHIT)、纤黏连蛋白(fibronectin,FN)、张力蛋白同源基因蛋白(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)在肝癌组织中的表达及与患者预后的关系.方法 应用免疫组化方法检测138例肝癌组织标本的FHIT,FN,PTEN的表达情况,分析表达与患者临床病理因素的关系.差异检验采用Log-rank检验.结果 FHIT,FN,PTEN在肝癌组织中的表达与癌旁组织比较差异有统计学意义(分别x2=5.968,7.380,4.962,均P＜0.05),与肿瘤大小,分化程度,肿瘤数目,淋巴结转移,癌栓形成等比较差异有统计学意义(P＜0.05),FHIT,FN表达阳性患者组较阴性患者组生存时间短(分别x2=4.443,9.867;均P＜0.05),而PTEN表达阳性患者较阴性患者生存时间长(分别x2=4.199,P＜0.05).结论 FHIT,FN,PTEN在肝癌组织中存在异常表达,FHTT,FN表达提示患者预后不良,PTEN表达提示患者预后较好.     

刺五加叶皂甙对肝癌癌基因表达的调节作用

目的 探讨刺五加叶皂甙（ＡＳＳ）抑制宿主肝癌生长和转移的作用机制。方法 给ＢＡＢＬ／ｃ小鼠腹腔内注射Ｈｅｐ Ｇ２肝癌细胞，１０ｄ后给予ＡＳＳ腹腔注射，８周后处死小鼠，取瘤称重。用免疫组织化学方法检测ＡＳＳ对移植肝癌组织ｎｍ２３－Ｈ１和ｐ５３基因蛋白表达的影响及抑瘤率，观察ＡＳＳ对肝癌细胞在小鼠腹腔生长和转移的抑制作用。结果 当ＡＳＳ剂量为０．２５，１．００ｍｇ／ｋｇ体重时，抑瘤率分别为４５．４３％     

人类新的肝癌高表达基因HCCA3的克隆、鉴定及其临床病理学意义

目的 克隆新的肝癌相关基因并探索其在肝癌发生发展中的作用机制。方法 采用mRNA差异显示技术，分析肝癌和癌旁组织差异表达基因谱，获得的差异表达基因片断作为探针，筛选胎盘cDNA文库，以获得全长cDNA序列。通过Northern印迹杂交的方法，分析所获得的新基因在42例肝癌组织中的表达情况，并分析其临床和病理学意义。结果 克隆了一个新的肝癌相关基因，命名为HCCA3，该基因的全长cDNA 1706 bp，编码一个264个氨基酸的蛋白质，在人类肝癌中广泛表达(78．6％，33／42)，并与肝癌的浸润转移密切相关。结论 HCCA43是一个新的人类基因，在肝癌中的异常高表达可能对肝癌的发生发展具有重要的促进作用。     

Genistein调节肝癌细胞PTEN和survivin蛋白表达的实验研究

目的探讨genistein对肝癌HepG2细胞株PTEN和survivin蛋白表达的影响及在诱导凋亡中的作用。方法以肝癌HepG2细胞培养72 h为对照组,实验各组以60μmol／L的genistein作用于HepG2细胞不同时间后,应用同位素试剂盒检测细胞IP3含量,Western-blotting分析细胞PTEN和survivin蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果对照组IP3含量为(29．2±0．6)pmol／106 cells,PTEN蛋白与内参Actin蛋白灰度和面积之积的比值V-PTEN／V-actin为0．12±0．001, survivin蛋白与内参actin蛋白灰度和面积之积的比值V-survivin／V-actin为0．63±0．06,细胞凋亡率为2．6％±0．1％。Genistein作用于肝癌Hep G2细胞12 h、24 h、48 h、72 h后IP3分别为(12．0±1．4) pmol／106cells、(7．5±0．8)pmol／106cells、(5．6±0．5)pmol／106cells、(3．3±0．6)pmol／106cells; V-PTEN／V-actin分别为13．13±0．20、19．17±1．09、28．51±2．18、41．12±3．80;V-survivin／V-actin分别为0．36±0．13、0．33±0．03、0．23±0．04、0．18±0．04;细胞凋亡率分别为2．7％±0．2％、7．4％±0．5％、20．5％±2．0％、30．7％±1．6％。与对照组相比,genistein作用于肝癌Hep G2细胞12 h后各时相IP3和survivin蛋白显著降低,24 h后各时相细胞凋亡率显著增高。结论Genistein能减少IP3生成,上调PTEN基因表达,下调survivin基因表达,诱导肝癌细胞凋亡。     

PTEN与hTERT在肝细胞肝癌中的表达及其相关性研究

目的　研究肝细胞肝癌组织中PTEN与hTERT的表达及其意义 ,并探讨两者在肝细胞肝癌中表达的相关性。方法　应用免疫组织化学 (SP法 )和半定量逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)分析 5 8例肝细胞肝癌及对应癌旁组织中PTEN蛋白及PTENmRNA、hTERT蛋白及hTERTmRNA的表达情况 ,并探讨两者表达的相关性。结果　PTEN蛋白明确定位于肝细胞胞浆内。PTENmRNA和PTEN蛋白在肝细胞肝癌中的阳性率分别为 41.3 8% (2 4/ 5 8)、44 .83 % (2 6/ 5 8) ,明显低于癌旁肝组织的阳性率 10 0 % (5 8/ 5 8) ,差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。hTERT蛋白主要表达于肝细胞胞浆内 ,偶见核内表达。hTERTmRNA和hTERT蛋白在肝细胞肝癌中的阳性率分别为82 .76% (4 8/ 5 8)和 87.93 % (5 1/ 5 8) ,明显高于癌旁组织中的阳性率 2 4.14 % (14 / 5 8)、2 7.5 9% (16/5 8) ,差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。相关分析显示 ,PTEN与hTERT在肝细胞肝癌中的表达呈负相关 (P <0 .0 5 )。结论　PTEN、hTERT在肝细胞肝癌的发生发展中起重要作用 ,有可能成为肝细胞肝癌的重要分子生物学检测指标 ,且两者表达呈负相关 ,提示PTEN可能在肝细胞肝癌的发生发展过程中对hTERT的活化起着调控作用。     

RASSF1A基因在肝癌组织中的表达及其临床意义

目的观察人肝癌组织RASSF1A的表达情况。方法应用半定量反转录聚合酶联反应技术检测62例人中晚期肝癌及其癌旁正常组织中RASSF1A的表达情况。结果69．4％（43/62）的肝癌组织中RASSF1A表达缺失，而癌旁组织中仅30．6％（19／62）该基因表达缺失，两者差异有统计学意义（P〈0．05）。结论中晚期肝癌中RASSF1A表达处于失活状态，其可作为一种有潜在应用价值的生物分子指标来用于肝癌的早期发现、早期诊断以及预后的判断。