人食管鳞状细胞癌基因表达变化的cDNA芯片研究

目的 利用TaKaRa人癌基因芯片研究食管鳞状细胞癌（ESCC）和相应正常组织差异表达基因．分析基因差异表达谱,以期找到更快捷、高通量的方法来筛选与原发性食管癌发生、发展以及与食管癌临床进展相关的分子标记物。方法 应用基因芯片技术及激光捕获微切割术、T7RNA聚合酶扩增技术,对15例ESCC癌组织和正常组织的mRNA进行检测,并用生物信息学对检测结果进行分析。结果 在886个目的基因中有110条（12．42％）至少2次出现差异表达．其中56条（6-32％）基因表达上调幅度〉2．0倍,54条（6．09％）基因表达下调幅度〈0．5。结论 高通量的基因芯片技术可筛选出大量ESCC相关基因,对这些相关基因功能的验证将有助于找到ESCC发生、发展的关键基因或通路。     

甲状腺乳头状癌基因谱表达的初步研究

目的:利用基因芯片筛选与甲状腺乳头状癌发生、发展和与恶性度相关的基因。方法:分别选取高、低分化甲状腺乳头状癌组织标本,抽提、纯化mRNA,同法再纯化同患者的正常甲状腺组织的mR-NA;用Cy5荧光染料对甲状腺乳头状癌组织mRNA作探针标记,以Cy3荧光染料对正常黏膜组织的mRNA作探针标记,一同和可检测4096个基因片段的BiostarH-40s型基因芯片进行杂交得到的双色荧光标记芯片,将之分别扫描入计算机,进行结果分析。结果:高、低分化2种芯片上均有大量基因片段出现了的高/低表达的情况,高分化芯片上异常表达片段数量为低表达351条,高表达417条,低分化芯片上异常表达者为低表达410条,高表达415条。在2种芯片中均有相同表达差异趋势的基因片段中,共计有90条基因片段出现低表达,其中随恶性度增高而降低的基因有19条;有78条片段呈现高表达状态,其中随恶性度增高而表达增加的有25条。表达异常的片段功能较分散;有大量的不明功能的片段发现。结论:甲状腺乳头状癌的发生、发展不能用单一的基因变异解释,而是由多基因共同作用的结果,并且变异具有明显的个体性差异;甲状腺乳头状癌的恶性度与多个基因片段异常表达相关。很多新发现的片段的功能不明了,对于确定甲状腺乳头状癌的发生发展内在机制仍有待研究。     

肾透明细胞癌基因表达谱的研究

目的 研究肾透明细胞癌组织与癌旁正常肾组织基因表达谱的差异,揭示和发现肾透明细胞癌的肿瘤相关基因.方法 应用Agilent Human 1B寡核苷酸基因芯片,检测3例肾透明细胞癌患者的癌组织和1例肾透明细胞癌的癌旁正常肾组织的基因表达谱.结果 在检测的20 173个基因中,共筛选出差异表达基因204个,其中共同上调基因31个,共同下调基因173 个,包括6个尚未被GenBank收录的人类新基因.结论 肾透明细胞癌的发生与染色体基因结构异常相关,异常基因有相对集中区域,如3p、14q和5q等.     

喉鳞状细胞癌患者血清中miRNAs表达谱分析

目的探究喉鳞状细胞癌(LSCC)血清特异性微RNA(miRNA)的表达及其临床诊断价值。方法选择2016年1月至2019年1月莒南县人民医院耳鼻喉科收治的82例LSCC患者作为研究组,同期选择50名健康体检者作为对照组。采集两组空腹静脉血,应用miRNA表达谱芯片筛选出表达差异较大的miRNA分子,并采用实时荧光定量聚合酶链反应对表达差异较大的miRNA分子进行验证。采用受试者工作特征曲线对`选出的miRNA分子的诊断价值进行评估。结果研究组血清miR-31、miR-141、miR-149a、miR-182、miR-485-3p、miR-122、miR-33、miR-205的相对表达量显著高于对照组,而miR-133a、miR-223以及miR-145的相对表达量显著低于对照组(P <0. 05)。miR-31、miR-33、miR-205诊断LSCC的曲线下面积分别为0. 99(95%CI 0. 99～1. 00)、0. 98(95%CI 0. 95～1. 00)、0. 97(95%CI 0. 95～1. 00),差异均有统计学意义(P <0. 05)。结论 miR-31、miR-33、miR-205可作为LSCC诊断的有效生物标志物。     

喉鳞状细胞癌中VEGF表达的临床意义

目的　为探讨血管内皮细胞生长因子 (VEGF)在喉鳞状细胞癌中表达的临床意义。　方法　采用免疫组化SP法检测 60例喉癌和 10例正常粘膜VEGF的表达及VEGF和微血管密度 (MVD)的关系。结果　VEGF蛋白表达 :①正常喉粘膜组与喉癌组阳性表达率分别为 2 0 .0 % ( 2 / 10 )和 71.7% ( 4 3/ 60 ) (P<0 .0 1)。②喉癌Ⅰ级组与Ⅱ、Ⅲ级组阳性表达率分别为 57.1% ( 12 / 2 1)和 92 .3% ( 36/ 39) (P <0 .0 1)。③喉癌生存组与死亡组阳性表达率分别为 30 .0 % ( 6/ 2 0 ) ,80 .0 % ( 8/ 10 ) (P <0 .0 5)。MVD( χ±s表示 ) :①喉癌Ⅰ级组与Ⅱ、Ⅲ级组分别为 2 1.33± 14.16,4 3.67± 2 5.2 3(P <0 .0 1)。②喉癌生存组与死亡组分别为2 1 77± 11 74 ,4 0 71± 2 6 4 1(P <0 .0 5)。③喉癌VEGF蛋白表达阳性组与阴性组分别为 37 4 5± 2 4 4 5,18 88± 11 2 7(P <0 .0 1)。结论　VEGF蛋白表达和MVD和喉癌分级、预后相关 ,VEGF蛋白是喉癌重要的血管生成因子。针对VEGF蛋白的抗血管生成治疗可望成为喉癌一种新的辅助治疗方法。     

喉鳞状细胞癌细胞核DNA含量的研究

本文采用MPV-Ⅲ型显微分光光度计(microspectrophotometry,MSPM)探讨了33例喉鳞状细胞癌细胞核DNA含量的变化规律。结果发现,其胞核DNA含量总体均值及标准差为26.29±12.84;癌细胞平均DNA指数和超四倍体细胞出现率的95％正常值范围之下限各为2.02％和34.55％,以此做为诊断喉癌的DNA标准。本文探讨了喉癌的细胞分布和DNA指数、超四倍体细胞出现率、S期细胞所占的比例在反映喉癌生物学待性上的意义以及它们与喉癌病理分级之间的关系。     

PTEN和SURVIVIN在喉鳞状细胞癌中的表达及意义

目的观察PTEN和SURVIVIN在喉鳞状细胞癌中的表达,探讨与人喉鳞状细胞癌的发生发展和预后的关系及相关性。方法免疫组化法检测喉鳞状细胞癌组织中PTEN和SURVIVIN的表达,探讨其在不同分期和分化癌组织中的变化及相关性。结果 50例喉鳞状细胞癌组织中,PTEN蛋白表达阳性为24例,阳性率为48%,34例正常喉黏膜组织中PTEN阳性表达32例,阳性率94.12%,两组比较,差异显著(P<0.05),其中Ⅰ～Ⅱ期中PTEN阳性为14例,总阳性率84.47%,低于Ⅲ～Ⅳ期的35.53%(P<0.05);Ⅰ级4例,Ⅱ级13例,Ⅲ级7例,各级之间有差异(P<0.05)。50例病例中,SURVIVIN阳性表达37例,阳性率为74%,正常喉黏膜组织中阳性表达11例,阳性率32.35%,两组比较,有差异(P<0.05);Ⅰ～Ⅱ期阳性表达为23例,总阳性率45.55%,高于Ⅲ～Ⅳ期(14)例,总阳性率86.43%(P<0.05),Ⅰ级9例,Ⅱ级22例,Ⅲ级6例,各级之间有差异(P<0.05)。结论喉鳞状细胞癌组织中,PTEN蛋白表达阳性率低于正常喉黏膜组织,恶性...     

P27和P21在喉鳞状细胞癌中的表达

目的探讨细胞周期调节因子P27和P21在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学（SP）法检测P27和P21在72例喉癌和21例正常喉粘膜中的表达。结果喉癌中P27和P21阳性表达率分别为30.6%、26.4%,与正常喉粘膜比较差异有统计学意义（P〈0.05）;喉癌的不同分化程度及是否有淋巴结转移,P27和P21在喉癌中的表达水平差异有统计学意义（P〈0.05）,但与发病部位无关（P〉0.05）。结论 P27和P21与喉癌的发生密切相关,检测P27和P21对喉癌的早期诊断、治疗及预后有重要意义。     

基因芯片筛选喉鳞状上皮细胞癌相关基因的初步研究

目的:应用基因芯片技术进行喉鳞状上皮细胞癌相关基因表达谱差异分析,筛选喉鳞状上皮细胞癌相关基因.方法:从4例喉鳞状上皮细胞癌中相同患者体内取喉鳞状细胞癌组织和癌旁正常组织,应用含有人类全基因组的基因芯片进行分析.结果:在4例喉鳞状上皮细胞癌中共同基因表达显著差异的有349条,其中112条表达上调,237条表达下调.结论:基因芯片能提供大量喉癌相关基因表达谱的信息,分析这些差异表达的基因能够阐明喉鳞状上皮细胞癌复杂的生物学特性与基因表达之间的内在联系,并识别肿瘤的标记物,为进一步研究喉鳞状上皮细胞癌发生、发展相关基因打下基础.     

喉鳞状细胞癌P53蛋白表达和基因突变

目的：探讨喉鳞癌P53蛋白表达和基因移码突变情况。方法：采用SP法检测31例喉鳞癌的P53蛋白表达；人工微切割—PCR—异源双链分析法检测ll例P53蛋白阴性标本第5、6、7、8外显子的移码突变。结果：免疫组织化学显示P53总阳性率为64．5％。T1、T2期阳性率43．8％，T3、T4期为86．7％；有和无淋巴结转移的分别为91．7％、47．4％(P＜0．05)；高分化、中分化及低分化鳞癌中P53蛋白阳性率分别为45．5％(5／11)、66、7％(8／12)、87．5％(7／8)。异源双链分析法分析1例第5外显子和1例第7外显子阳性。结论：在喉鳞癌中，P53蛋白阳性表达多见于T3及T4期肿瘤及有颈淋巴结转移者；p53基因突变率随肿瘤分化程度的降低而升高。     

微矩阵基因芯片筛选喉鳞癌相关基因的研究

目的：应用基因微矩阵方法筛选喉鳞癌相关基因。方法：按一步法抽提喉鳞癌和对照喉正常组织的总ＤＮＡ并纯化ｍＲＮＡ;将４０９６种人类基因ＰＣＲ产物用ＣａｒｔｅｓｉａｎＰｉｘｓｙｓ７５００点样仪按微矩阵排列点样于化学涂层的载玻片上,制成基因芯片;将等量的对照组织和喉鳞癌组织ｍＲＮＡ分别逆转录合成荧光分子掺入的ｃＮＤＡ－链做探针,混合后杂交上述基因芯片,经严格洗片后用ＳｃａｎＡｒｒａｙ３０００扫描仪扫描芯片     

基因表达谱芯片发现36条喉鳞癌相关基因

目的：研究探讨喉鳞癌发生、发展中相关基因群的表达和初步功能。方法：按微矩阵排列的4096种全长基因PCR产物制成BioDoor4096型微矩阵表达谱芯片;采用条件优化的一步法抽提喉鳞癌及正常组织总RNA,用Qiagen公司Oligotex mRNA离心柱分离纯化两种组织的mRNA;经逆转录合成荧光分子（Cy3/Cy5)掺入的cDNA一链制备表达谱探针,芯片杂交和严格洗片后,用SanArray3000荧光扫描仪扫描芯片荧光信号图像,利用计算机分析肿瘤及正常组织中差异表达的基因。对所获得的基因进行分子生物信息学分析。结果：在4096种基因中,喉鳞状细胞癌与正常组织间存在差异表达的基因。在所检测的4对临床标本中,发现有差异表达的基因36条（0．88％）。生物信息学分析显示,该36条差异表达基因与肿瘤的发病机制可能存在相关性。结论：喉鳞状细胞癌的发生、发展中存在多因素表达调控的改变,对于相关基因群的研究有助于认识肿瘤发病机制。     

喉癌基因的差异表达

目的从分子水平上探讨喉癌的发病机制.方法用微阵列(Microarray)技术分析了11 431个基因在喉癌组织和其临近的正常黏膜组织表达差异,用RT-PCR技术分析所得喉癌差异表达基因中一个基因在不同类型喉癌中的表达情况.结果喉癌组织和其临近的正常黏膜组织基因表达相差3倍以上者为35个,其中上调基因8个,下调基因27个;相差5倍以上者7个,皆为下调基因;上皮膜蛋白基因-1 (The epithelial membrane 1, EMP-1)是下调基因中一个基因,EMP-1在不同类型配对喉癌中皆呈低表达,明显低于相应的正常喉黏膜组织(P<0.05).结论喉癌的发生涉及多个基因参与,微阵列技术分析喉癌差异表达基因是可靠的方法.     

P53蛋白在喉鳞状细胞癌和不典型增生中的表达及临床意义

目的 :探讨 P53蛋白表达在癌前病变早期定性诊断的价值和在喉癌发生中的作用机理。方法 :应用 P53单克隆抗体 ( DO- 1 )对 1 9例喉癌鳞状细胞癌、34例喉粘膜不典型增生上皮和 1 7例声带息肉进行免疫组织化学染色。结果 :显示 P53蛋白阳性物质位于癌细胞核内和转化的细胞核内。在 1 9例喉癌中 P53蛋白表达阳性者 1 4例 ,表达率为 73.68%;在 34例不典型增生上皮中有2 0例 P53蛋白表达阳性 ,表达率为 58.82 %,在 1 7例声带息肉中未见有 P53蛋白的表达。结论 :P53蛋白免疫组化可以做为临床上癌前病变早期定性诊断和喉癌早期诊断的指标之一     

喉癌组织中TSLC1基因启动子过甲基化及mRNA表达

目的:探讨TSLC1基因启动子区过甲基化与喉癌的关系.方法:采用甲基化特异性PCR和RT-PCR法分析喉部正常粘膜、声带息肉、喉癌细胞Hep-2和喉癌组织中TSLC1基因启动子区过甲基化及其mRNA表达状况.结果:40例喉癌组织中,有21(52.5%)例TSLC1基因启动子区过甲基化,其在各病理分级、临床分期和分型之间差异无统计学意义(P＞0.05),而在N分级(N0和N1)之间差异有统计学意义(P＜0.05).喉癌细胞Hep-2也显示TSLC1基因启动子区过甲基化.RT-PCR结果显示,TSLC1 mRNA在所有甲基化的喉癌组织和喉癌细胞Hep-2中均无表达,而喉部正常组织,声带息肉组织和非甲基化的喉癌组织中均有表达.结论:喉癌组织中TSLC1基因启动子区过甲基化与其mRNA失表达有关,可能是喉癌发生、发展的原因之一,可作为喉癌诊断和预后分析的检测指标.     

Tumstatin治疗喉鳞癌的实验研究

目的 探讨肿瘤抑素(Tumstatin)对喉鳞癌细胞(Hep-2)的治疗作用.方法 用Hep-2细胞株进行传代培养,台盼蓝法观察Tumstatin和顺铂对不同培养时间细胞的生长抑制情况;MTT法检测不同浓度的Tumstatin对Hep-2细胞存活率的影响,光镜观察细胞形态的变化;电镜和3′-原位末端标记法(TUNEL)检测Hep-2细胞凋亡的发生和形态学改变.结果 ①随着药物对Hep-2细胞作用时间的延长,细胞生存率明显降低,存在时间依赖性;②MTT检测显示,Tumstatin对细胞的增殖的抑制效应具有剂量依赖性;③光镜观察发现,药物作用组细胞出现病变;④电镜和TUNEL染色证实,Tumstatin对Hep-2细胞的抑制作用是以促进细胞凋亡为主.结论 Tumstatin可能通过促进细胞凋亡发挥抗肿瘤的作用.     

Expression and significance of PTEN and PCNA in human laryngeal squamous cell carcinoma

TumorsuppressedgenePTEN(phosphotaseandten sionhomologdeletedfromchromsome 10 )wasidentifiedbythreedifferentgroupsin 1997 PTENismutatedinsporad icbrain ,breastandprostatecancer.ThenormalexpressionofPTENcansuppresstumorcellsinvading ,metastasisandgrowth.TheabnormalexpressionofPTENwillresultinPTENproteindecreasingordisappearing .Proliferatingcellnuclearantigen (PCNA )isanauxiliaryproteinofDNApolymerase ,whichisexpressedinG1stageofcellcircle ,getstotheclimaxinSstage ,anddecreasesinG2 -…