柱前衍生RP-HPLC法测定胸腺五肽的氨基酸组成

胸腺五肽(thymopentin,TP5)是人工合成的五肽,对应胸腺生成素Ⅱ的32-36位氨基酸,基本序列为NH2-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-COOH,它保留了胸腺生成素的有效生物活性。TP5是一种免疫调节剂,对机体免疫功能具有双向调节作用,在临床上主要用于治疗原发性和继发性免疫缺陷,也可用作各种恶性肿瘤的辅助用药[1-3]。     

柱前衍生RP-HPLC法测定泽泻中氨基酸的含量

目的 分析不同产地泽泻中氨基酸含量及其特征性。方法 采用邻苯二甲醛(OPA)、氯甲酸芴甲酯(FMOC)联合柱前衍生RP-HPLC测定泽泻中的17种氨基酸。结果 氨基酸质量浓度与峰面积呈良好的线性关系，r均在0．99以上。不同产地泽泻中氨基酸含量有一定差别。结论 该方法适宜泽泻药材中氨基酸含量的测定。     

柱前衍生RP-HPLC法分析淡豆豉和大豆中氨基酸

目的 分析淡豆豉Sojae Semen Preparatum和大豆Glycine max中游离及水解氨基酸。方法 用0.1 mol/L HCl作溶剂超声提取得到淡豆豉和大豆中的游离氨基酸;用6 mol/L HCl水解提取得到水解氨基酸,以异硫氰酸苯酯（PITC）为柱前衍生化试剂,采用柱前衍生RP-HPLC法进行分析。结果 淡豆豉和大豆中均含有16种氨基酸,这16种氨基酸浓度在0.031～1.750 mmol/L内呈良好的线性关系,r均大于0.997 9,平均回收率91.02%～102.04%,RSD1.01%～4.81%。结论 本方法灵敏、准确,具有良好的重复性和稳定性,16种氨基酸能在样品杂质量较多的情况下得到分离,且采用普通C₁₈色谱柱成本低,可广泛应用于富含氨基酸样品的分析。     

柱前衍生化RP-HPLC法分析龟板中氨基酸

目的采用柱前衍生RP-HPLC法对龟板中13种氨基酸进行分析。方法用6mol/L HCl水解提取龟板中总氨基酸,以异硫氰酸苯酯(PITC)为柱前衍生化试剂,采用外标法,梯度洗脱的方式分析。结果13种氨基酸在40min内均可得到很好的分离,回收率(除甘氨酸外)为91.68%~106.26%,RSD为0.718%~4.386%。结论所建立的方法分离效果好、灵敏、准确、简便,且采用普通的C18色谱柱,可广泛用于含有多种氨基酸样品的分析。     

一种新的柱前衍生法测定血浆同型半胱氨酸

目的建立一种新的高效液相柱前衍生法,准确、快速测定血浆同型半胱氨酸(HCY)浓度.方法血中结合态的HCY经三丁基膦还原为游离HCY后,与衍生试剂7-氟苯唑-2-氧-1,3-二唑-4-磺酸胺(ABD-F)进行柱前衍生反应,衍生物经反相C18色谱柱,用0.15mol/L磷酸盐缓冲液(pH=4.2)与甲醇按85∶15配制的混合液洗脱.荧光检测激发λ=385nm,发射λ=515nm.结果在3.125～100.00μmol/L范围内,HCY浓度与荧光强度的线性关系良好,γ=0.9998,测定的批内、批间变异系数分别为3.13%和5.10%,高低2种浓度的回收率分别为98.5%和92.7%,健康人血浆HCY的参考值为8.12±2.72μmol/L.结论本法测定血浆HCY准确快速、特异性高、分离效果好,适用于临床血浆HCY测定的常规需要.     

柱前衍生HPLC测定阿胶中17种水解氨基酸含量

目的 建立柱前衍生高效液相色谱法(HPLC)同时测定阿胶中17种水解氨基酸含量的方法.方法 用6 mol/L盐酸溶液水解阿胶中的氨基酸,以异硫氰酸苯酯为柱前衍生试剂;用Hypersil BDS C18柱(200 mm×4.6 mm,5μm),梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为254nm,柱温为30℃.结果 17种氨基酸在60 min内均可得到很好的分离,回收率为97.4％～1 00.1％,RSD为1.6％～3.4％.结论 建立的方法可靠,可用于阿胶中17种水解氨基酸的含量测定.     

柱前衍生高效液相色谱法测定瓜蒌皮中游离氨基酸含量

目的:建立柱前衍生高效液相色谱法(RP-HPLC)测定瓜蒌皮中游离氨基酸含量的方法。方法 :采用异硫氰酸苯酯(PITC)为柱前衍生试剂,高效液相色谱法色谱柱为(Atlantis dC18 Column(3μm,4.6 mm×150 mm,Waters),流动相A:甲醇-乙腈(1∶2),流动相B:0.15 mol/L乙酸钠,流速1.0mL/min,梯度洗脱,柱温35℃,吸收波长254 nm。结果:各种氨基酸均能达到基线分离。结论:柱前衍生高效液相色谱法作为瓜蒌皮药材中游离氨基酸的测定手段之一,准确可靠。     

高效液相色谱柱前自动衍生法测定氨基酸含量

本文利用高效液相色谱柱前邻苯二甲酝酿自动衍生、自动进样程序测定脑组织中谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、牛磺酸和ｒ－氨基丁酸含量，该法的最低检出限为１０ｎｍｏｌ／ｍｌ，５种氨基酸峰面积测定值的变异系数平均为２．０±１．３％，线性相关系数平均为０．９７±０．０３。     

柱前衍生高效液相色谱法测定蚕蛹提取物中氨基酸含量

目的 用柱前衍生法测定蚕蛹提取物中氨基酸含量,方法以磺酰氯二甲胺偶氮苯(DABS-CL)作衍生剂,采用柱前衍生高效液相色谱法(RP-HPLC),YMC-Pack ODS-A柱(250mm×4.6mm,5mm),流动相A为25mol/L KH2PO2,流动相B为乙腈:甲醇=70:30;流速1.5 ml/min梯度洗脱,检测波长436nm,柱温35℃,结果各种氨基酸均具有良好的线性关系(相关系数,=0.9989～0.9999)、精密度(RSD<1.50%)、稳定性(RSD<3.50%)、平均回收率(98.83%～107.83%),测定蚕蛹提取物中氨基酸含量,其含有人体必需氨基酸占总氨基酸含量的40%以上,结论该方法简便实用,分析结果准确可靠,适用于动植物中富有氨基酸含量的测定.     

邻苯二甲醛柱前衍生反相高效液相色谱法测定CHO细胞内氨基酸浓度

用邻苯二甲醛进行柱前衍生，Hypersil AA-ODS柱分离，梯度洗脱，紫外检测，在17min内分离测定了中国仓鼠卵巢(CHO)细胞内19种氨基酸的浓度。紫外检测器的检出限为0．10～0．23μmol／L；12次连续测定25μmol／L氨基酸标准溶液的保留时间，精密度小于0．3％，面积精密度小于3％。在一定浓度范围内，氨基酸组分和内标物峰面积的比值与氨基酸浓度呈良好的线性关系，相关系数为0．9979～0．9999。用内标工作曲线法对胞内氨基酸浓度进行了定量分析，氨基酸回收率为87％～106％。     

OPA-FMOC联用柱前衍生法测定复方氨基酸注射液中氨基酸的含量

随着生物工程及医药工业的蓬勃发展,氨基酸制剂的品种越来越多,因此氨基酸分析的重要性日益增加。目前已见报道的几种方法各有其优点,但不可避免的存在这样或那样的缺陷。以异硫氰酸苯酯(PITC)作为衍生化试剂不仅毒性大,且需要专门的衍生装置在无水状态下进行;另一种衍生剂4-(二甲氨基)偶氮苯-4′-硫酰氯(Dabsyl-EL)同氨基酸反应速度相对较慢,甚至需要升高温度,对于实现自动化。本文采取OPA和FMCC为衍生化试剂,分别与一级、二级氨基酸进行定量柱前衍生化反应,再用HPLC分离测定。     

柱前衍生化反相高效液相色谱法测定蝉蜕中3种氨基酸含量

目的 建立柱前衍生化反相高效液相色谱法测定蝉蜕中天冬氨酸、酪氨酸和缬氨酸3种氨基酸含量的方法。方法 采用酸水解法制备氨基酸样品溶液,以异硫氰酸苯酯柱前衍生化后进行高效液相色谱分析。采用Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm),梯度洗脱,流动相A为0.1 mol/L醋酸钠缓冲液- 乙腈(93∶7),流动相B为乙腈- 水(4∶1),流速1.0 mL/min,柱温为43 ℃,检测波长254 nm,进样量20 μL。结果 氨基酸衍生溶液在36 h内保持稳定,3种氨基酸在线性范围内峰面积与浓度的相关系数均大于0.999 0,加样回收率(n＝6)分别为95.62%、101.26%和100.00%。结论 所建立的检测方法稳定可靠,精密度和重复性良好,可用于蝉蜕中天冬氨酸、酪氨酸、缬氨酸含量测定。     

柱前衍生化HPLC测定中药材氨基酸的含量

目的:建立中药材有效成份氨基酸柱前衍生HPLC分析测定方法。方法:从常见中药材党参和山楂中提取氨基酸,邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生,反相高效液相色谱分离测定,以保留时间定性,面积外标法定量。结果:水解温度108℃,提取24 h,可有效提取药材中的氨基酸;梯度洗脱程序为(t,C%):(t:保留时间C:甲醇):(0,0);(9,30);(16,45);(25,60);(28,65);(32,80),二种药材中的十六种氨基酸得到较好分离和定性定量结果,其中天冬氨酸和胱氨酸的平均加样回收率分别为101.0%和94.4%。结论:采用HPLC柱前衍生分离分析党参和山楂中十六种氨基酸的方法灵敏、简便、快捷、高效,适于推广应用,可为解决中药材氨基酸分离测定难题提供参考。     

柱前衍生化RP-HPLC测定铁皮石斛鲜品中的氨基酸的含量

目的测定铁皮石斛鲜品中氨基酸的含量。方法样品以异硫氰酸苯酯（PITC）为衍生化试剂衍生后进行HPLC分析。采用CAPCELLPAKC18SG300（250ram×4．6mm,51a,m）色谱柱,柱温为250（：;流动相A为0．05mol／L醋酸钠缓冲液（以醋酸调pH值至6．5）-乙腈（1：1）,流动相B为0．05mol／L醋酸钠缓冲液（以醋酸调pH值至6．5）,梯度洗脱,流速为0．6ml／rain;检测波长为254nm。结果15种氨基酸浓度在0．077-2．042μg范围内呈良好的线性关系（r：0．9994-0．9999）,平均回收率为94．3％-107．7％。结论本方法灵敏、准确,具有良好的重复性和稳定性,可用于铁皮石斛中氨基酸的检测。     

邻苯二甲醛柱前衍生反相高效液相色谱法测定氨基酸类神经介质

目的：建立测定神经中枢氨基酸类介质的方法。方法：邻苯二甲醛柱前衍生,ODS（C18）柱分离,pH6．0醋酸盐缓冲溶液与甲醇二元梯度洗脱,荧光检测。结果：仅在9min内就分离测定了大鼠脑中5种氨基酸介质的含量。在一定浓度范围内,氨基酸的峰面积与其浓度呈现良好的线性关系,相关系数在0．9978－0．9999之间。结论：本方法适用于神经药理学的研究。     

柱前衍生HPLC法测定五谷虫中脂肪酸含量

目的 建立HPLC法测定五谷虫中脂肪酸含量的方法.方法 采用2-溴代苯乙酮作为衍生化试剂,三乙醇胺作为催化剂对脂肪酸进行衍生化使其产生紫外吸收,利用HPLC法进行含量测定.色谱条件为Agilent-C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);检测波长254 nm;流动相为水∶甲醇=10∶90;柱温为20 ℃;体积流量为1 mL/min,进样量为20 μL,内标为十七烷酸.结果 在上述色谱条件下,各脂肪酸衍生物均达到基线分离.亚油酸的含量为131.0 mg/L,软脂酸的含量为194.8 mg/L,油酸的含量为100.6 mg/L,硬脂酸含量为36.6 mg/L.结论 该方法稳定,重现性好,可用于五谷虫脂肪酸含量测定.     

柱前紫外衍生-高效液相色谱法测定全氟辛酸

目的 建立污水和尿液中全氟辛酸(PFOA)的柱前紫外衍生-高效液相色谱测定方法.方法 样品中的PFOA与四丁基氢氧化铵形成的离子缔合物被甲基叔丁基醚萃取后,与ω-溴苯乙酮在乙腈中衍生成具有紫外吸收的物质,高效液相色谱-紫外可见检测器检测.结果 方法检出限可达7.0 μg/L;相对标准偏差(RSD) ＜10%;样品的回收率在85.3%～116%之间.结论 本法适用于测定水样及尿液中的全氟辛酸.     

柱前紫外衍生-高效液相色谱法同时测定功能食品中八种糖醇和糖

目的 建立功能食品中赤藓糖醇、木糖醇、半乳糖醇、山梨醇、甘露醇、麦芽糖醇,以及葡萄糖和三氯蔗糖的柱前紫外衍生-高效液相色谱同时测定方法。 方法 食品中的糖醇等经水提取后,与苯甲酰氯反应生成紫外衍生物,衍生物经C18柱分离,柱温为30 ℃,甲醇-水梯度洗脱,流速1.00 mL/min,检测波长为232 nm。 结果 所测8种物质的标准曲线线性良好（r>0.999）,检出限低于2.2 μg/mL,加标回收率为89.6%~117.0%,日内相对标准偏差小于5%。 结论 该方法衍生反应简便快速、所需试剂经济易得,本法不需特殊检测器,易于推广,适用于功能食品中多种糖醇的同时测定。     

新型荧光试剂柱前衍生高效液相色谱定量分析小鼠脑脊液中氨基酸类神经递质

目的 采用新合成的荧光试剂柱前衍生氨基酸类神经递质,建立其测定方法,并测定小鼠脑脊液中氨基酸类神经递质的含量。方法 以1,3,5,7-四甲基-8-苯基-（4′-O-（N-琥珀酰亚胺乙酸酯））-二氟化硼-二吡咯甲烷（TMPAB-OSu）作为柱前荧光衍生试剂,在pH 8.8的硼酸-硼砂缓冲溶液中,30℃衍生反应5 min后获得稳定的荧光衍生产物,在反相色谱柱上,采用梯度洗脱进行5种氨基酸类神经递质标准品衍生物的分离检测,荧光激发波长为497 nm,检测波长为509 nm。结果 5种氨基酸类神经递质的线性范围为0.01~1.2 μmol/L,线性回归系数均大于0.998 1,检出限为1 nmol/L（S/N=3∶1）。小鼠脑脊液中天门冬氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、γ-氨基丁酸和丙氨酸的含量分别为0.06、0.20、0.26、0.03和0.07 μmol/L,标准加入回收率为96%~104%,RSD为0.7%~2.9%。结论 该方法的灵敏度高、重现性好,为小鼠脑脊液中氨基酸类神经递质的分析检测提供了一种新方法。     

氨基酸的柱前衍生高效液相色谱分析在中草药研究中的应用

中药中含有大量的多种人类所需的氨基酸,它不仅是人类补充营养的重要来源,更在发挥药效时起着不可或缺的作用。因此,氨基酸分析是中药有效成分分析的重要组成部分。早期的氨基酸分析是通过离子交换树脂分离,再进行柱后衍生化反应,衍生物以紫外检测器检测,但该方法的分析时间长、操作复杂、灵敏度低,且仪器价格昂贵,严重限制了它的推广应用。近年来,随着色谱法的迅猛发展,分析速度、灵敏度以及自动化程度不断提高,氨基酸分析方法也有了长足的进步,不论是检测手段,还是衍生方法都趋于完善。本文主要介绍分析中药中氨基酸应用较广的几类反相高…