脊髓损伤后白藜芦醇保护作用的研究进展

正白藜芦(resveratrol,Res)是一种化学名为3,5,4’-三羟基戊二烯的多酚类化合物,广泛地存在于花生、凤梨、朝槐、决明、桑子、大黄、首乌、金雀根、葡萄、虎杖、藜芦等植物中,尤以虎杖含量最高~[1]。白藜芦醇分子式为C14H12O3,相对分子质量228.25,本质是一种植物抗毒素,是葡萄属植物在外来病菌侵入、紫外线照射等不利因素影响下产生的~[2]。于1940年首次从毛叶黎芦的根部获得,其存在的形式主要有四种:顺、反式白藜芦醇及与葡萄糖结合形成的顺、反式白藜芦     

尼莫地平对大鼠脊髓损伤的作用研究

目的:研究尼莫地平(nimodipine)对大鼠脊髓损伤后继发性损害的保护作用。方法:成年SpragueDawley雄性大鼠24只,体重180～220 g,采用NYU脊髓撞击伤仪制成脊髓损伤模型后,随机分成尼莫地平(n=12)和生理盐水组(n=12)。两组大鼠受伤后1 h内分别经腹腔给予尼莫地平(1.0 mg/kg)或等量盐水治疗,3次/d,共1周。于受伤后1周和2周进行BBB评分和足迹实验对大鼠双后肢运动功能进行评估。受伤后2周,对损伤部位脊髓组织丙二醛(MDA)含量及脊髓过氧化物酶(MPO)活性进行检测;同时进行免疫组织化学检查确定损伤星形胶质瘢痕和所形成的坏死空洞,利用ED1观察活性小胶质细胞和巨噬细胞。结果:与生理盐水组比较,通过旷场试验(BBB评分)和足迹实验,脊髓损伤后大鼠尼莫地平组1周和2周运动功能明显改善(P<0.01)。与盐水组比较,伤后2周,尼莫地平组大鼠脊髓组织中MDA水平(nmol/g,25.6±9.7 vs 68.5±16.7)和MPO活性(U/g,252.2±63.9 vs 382.8±108.2)均明显降低(P<0.01);尼莫地平组空洞面积(mm2,4.45±1.28 vs 6.16±2.65)和ED1抗体免疫组化染色阳性面积(mm2,1.87±0.42 vs 2.86±1.01)也明显减少(P<0.01)。结论:尼莫地平可以减轻大鼠脊髓损伤后自由基的氧化损伤作用,减小空洞面积和炎症细胞浸润,具有促进脊髓损伤后的修复作用。     

神经再生复合剂对大鼠急性脊髓损伤后其内MDA、SOD和MPO表达的影响

目的:观察促神经再生因子复合剂N6对大鼠急性脊髓损伤后脊髓及血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及脊髓内髓过氧化物酶(MPO)表达的影响,探讨其减轻继发性损伤的作用机制及保护受损脊髓作用的最佳介入时间。方法:用改良Allen’s打击法制备大鼠急性脊髓损伤模型,假手术组打开椎板不损伤脊髓,模型组造模后不予治疗,对照组分别于脊髓损伤后10、30和60 min向腹腔注射甲级强的松龙(30 mg/kg),实验组分别于脊髓损伤后10、30和60 min向蛛网膜下腔注射促神经再生因子复合剂N6(166μg/kg)。造模后24 h取材,于各时间点测得假手术组、模型组、实验组和对照组大鼠脊髓损伤组织及血清中MDA、SOD及损伤脊髓组织的MPO活性。结果:实验组损伤脊髓组织MDA含量随着药物介入时间的延迟而增高,各时间点间MDA含量无显著性差异(P>0.05);血清MDA含量随着药物介入时间的延迟而增高,60 min与10、30 min相比有显著性差异(P<0.05);实验组损伤脊髓组织SOD含量随着药物介入时间的延迟而降低,各时间点间SOD含量无显著性差异(P>0.05);血清SOD含量随着药物介入时间的延迟而降低,60 min与10 min相比有显著性差异(P<0.05);实验组损伤脊髓组织MPO含量随着药物介入时间的延迟而增高,60 min与10 min相比有显著性差异(P<0.05)。结论:促神经再生因子复合剂N6治疗可以提高急性脊髓损伤大鼠损伤脊髓及血清SOD含量,降低损伤脊髓及血清MDA、损伤脊髓MPO的含量,从而降低急性脊髓损伤后的继发性损伤,达到保护脊髓组织的目的,且介入治疗时间越早,疗效越好。     

不同吸入浓度的七氟烷对大鼠体内组织氧化和抗氧化作用的影响

目的挥发性麻醉药可引起缺血再灌注损伤,且与氧化应激及炎症的发生相关,部分可能会加重氧化应激,部分表现出抗氧化作用。本实验为评估大鼠暴露于不同浓度的七氟烷中,肝、脑、肾、肺组织氧化应激程度。方法将实验动物分为3组:对照组(只接受空气)、高浓度七氟烷(7%)和低浓度七氟烷(2%)。经过4 h的暴露,评估大鼠相应组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、铜(Cu)、锌(Zn)的指标。结果暴露于不同浓度的七氟烷中大鼠肺组织MDA水平均较对照组明显增加,而不同浓度的七氟烷在其他组织氧化应激中和抗氧化活性表现均不同。结论高低浓度的七氟烷在体内实验中均具有抗氧化及抑制氧化应激的作用,但肺部的氧化损伤最重。     

大鼠脊髓损伤后内皮素含量的变化

将３６例大鼠随机分为６组：对照组、致伤后３０ｍｉｎ、２、４、８和２４ｈ组，以Ａｌｌｅｎ氏法制备中度（５０ｇ·ｃｍ）脊髓损伤（ＳＣＩ）模型，测定各组脊髓组织和血中内皮素（ＥＴ）含量。结果表明，ＳＣＩ后各组伤段脊髓组织ＥＴ明显升高，２ｈ达到高峰，与对照组比较均有显著性差异（Ｐ〈０．００５），血ＥＴ变化与对照组比较无显著性差异（Ｐ〉０．０５）。推测ＥＴ可能通过多种途径参与ＳＣＩ后的继发损伤。     

复方丹参注射液对大鼠急性脊髓损伤后神经再生的影响

目的　探讨丹参对急性脊髓损伤的影响及作用机制。方法给实验性脊髓损伤大鼠腹腔注射复方丹参注射液 ,观测脊髓组织学及超微结构变化。结果用药后大鼠脊髓内髓鞘断裂减轻 ,吞噬细胞清除组织降解物 ,神经元变性恢复。结论　丹参对大鼠急性脊髓损伤后神经修复及再生有促进作用     

复方丹参对脊髓损伤大鼠一氧化氮合酶神经元的影响

目的：探讨丹参治疗脊髓损伤的机制。方法：大鼠按Allen‘s法制备脊髓损伤动物模型。用复方丹参注射液腹腔注射治疗;用NADPH-d组化方法测定NOS神经元变化,并做图像分析。结果：脊髓损伤大鼠用复方丹参注射液治疗后,脊髓前角内的NOS阳性细胞增多,表达升高;而后角内几乎未见阳性细胞。结论：脊髓损伤大鼠经过复方丹参注射液治疗后,脊髓前角内NO的合成增加,但后角内NO合成下降。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对大鼠脊髓损伤后细胞自噬的影响

背景：过氧化物酶体增殖物激活受体γ受体激动剂具有抗炎和抑制神经凋亡保护作用,能在一定程度上保护脊髓神经元,对脊髓损伤后细胞自噬应激调控等产生影响。 目的：观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ对大鼠脊髓损伤后细胞自噬的影响。 方法：将60只SD大鼠分为3组,正常对照组仅做椎板切除,不损伤脊髓,腹腔注射生理盐水;其余大鼠以改良Allen法制作大鼠脊髓损伤模型,过氧化物酶体增殖物激活受体γ组腹腔注射罗格列酮;脊髓损伤组不做处理。损伤后1,3,7,       14 d为时间点并取材,对脊髓损伤区分别进行免疫组织化学法检测,并以Western Blot法检测Beclin 1/Bcl-2的表达变化,同时采用BBB评分方法观察神经功能恢复情况。 结果与结论：大鼠脊髓损伤后第3~14天,过氧化物酶体增殖物激活受体γ组BBB 评分显著高于脊髓损伤组(P < 0.05)。脊髓损伤组和过氧化物酶体增殖物激活受体γ组均见自噬相关阳性细胞表达,过氧化物酶体增殖物激活受体γ组细胞自噬程度相对降低,Beclin 1表达较脊髓损伤组降低(P < 0.05),Bcl-2表达较脊髓损伤组明显增加(P < 0.05),神经功能增强(P < 0.05)。提示过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂在一定程度上降低大鼠脊髓损伤后细胞自噬,对细胞凋亡产生拮抗作用,并在一定程度上可促进神经功能的恢复。关键词：过氧化物酶体增殖物激活受体γ;脊髓损伤;自噬;大鼠;神经功能 缩略语注释：PPARγ：Peroxisome proliferator activated receptor,过氧化物酶体增殖物激活受体γ doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.15.026     

中药脊髓Ⅰ号对脊髓损伤后大鼠肾上腺皮质酶组织化学的影响

目的： 探讨脊髓损伤后服用中药脊髓Ⅰ号（SC-I）对脊髓损伤后大鼠肾上腺皮质细胞琥珀酸脱氢酶（SDH）和3β-羟基类固醇脱氢酶（3β-HSD）的影响。 方法： 用组织化学方法和图像分析技术观察Wistar大鼠下胸髓半横断损伤后服用SC-I而引起的肾上腺皮质细胞SDH 和3β-HSD的变化。 结果： 脊髓半横断损伤后1d组大鼠肾上腺皮质束状带和网状带细胞SDH和3β-HSD活性均显著强于正常对照组（P<0.01）；损伤后3 d组SDH和3β-HSD活性与1 d组无明显差异（P>0.05）；损伤后服用SC-I 冲剂3 d组SDH和3β-HSD活性明显弱于损伤后1 d组（P<0.05），但与正常对照组无显著差异。 结论： 脊髓损伤后大鼠肾上腺皮质分泌激素的功能增强；服用SC-I后肾上腺皮质功能逐渐正常化。     

大鼠脊髓损伤及继发损伤时脊髓诱发电位与运动诱发电位…

本文采用改良Ａｌｌｅｎ＇ｓ法，分别以５０ｇ／ｃｍ和１００ｇ／ｃｍ打击大鼠Ｔ２１３－Ｌ１脊髓，造成不同程度的脊髓损伤，分别观察伤后２４小时内的ＳｐＥＰ和ＣＭＥＰ的变化，以了解不同程度损伤对ＳｐＥＰ和ＣＭＥＰ的影响及ＳｐＥＰ、ＣＭＥＰ的变化与脊髓继发性损伤发展过程的关系。结果表明（１）两种不同程度的脊髓损伤均可造成大鼠脊髓ＳｐＥＰ，ＣＭＥＰ的明显变化，尤以ＳｐＥＰ变化明显。损伤越重，电位改变越明显，（     

脊髓挫伤速度对颈脊髓原发性损伤影响的实验研究

目的　确定脊髓挫伤速度是脊髓损伤的因素,探讨不同速度的脊髓挫伤对大鼠颈脊髓原发性损伤的影响。  方法    20只成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为快速组（500 mm/s,n=8）、慢速组（5 mm/s,n=8）和对照组（n=4）。用直径为4 mm的平头圆锥打击头在C5水平产生1.5 mm的挫伤位移。损伤后即行心脏固定,切取以挫伤部位为中心长约1.5 cm的脊髓组织。行连续矢状位冰冻切片。HE染色观察脊髓大体形态,计算出血量。β-APP免疫组化后观察轴索损伤程度。  结果　挫伤后观察到脊髓表面有一带状出血,且快速组出血带颜色更深。快速组挫伤位移为(1.50±0.05) mm,最大力为(5.3±1.2) N;慢速组挫伤位移为(1.51±0.04) mm,最大力为(2.8±0.6) N,两组间最大力的差异有显著性（P=0.001）。HE染色显示脊髓出血大部分都集中在灰质,白质相对较少。快速组脊髓总出血量、灰质出血量和白质出血量分别为0.94、0.71和0.23 mm3,慢速组分别为0.55、0.43和0.12 mm3,其中两组间总出血量和灰质出血量的差异有显著性（P＜0.05）。β-APP免疫组化观察到快速组轴索断裂比慢速组更为严重。  结论　脊髓挫伤速度是影响脊髓原发性损伤的因素,快速的脊髓挫伤导致的原发性脊髓损伤更为严重,导致更多的脊髓出血和轴索断裂。     

原位胶原凝胶对大鼠脊髓损伤后功能恢复的影响

目的研究脊髓损伤后原位形成胶原凝胶对神经功能恢复的影响。方法15只健康雌性SD大鼠随机分为胶原组、对照组和假手术组．Allen撞击法制作脊髓损伤模型。用微量注射器将胶原溶液注入损伤部位,在体温作用下让其原位形成凝胶,对照组注入PBS溶液,每周进行运动评分,6周后取脊髓组织进行免疫荧光染色,观察损伤部位的胶质瘢痕和轴突生长情况。结果胶原组大鼠第5周起BBB评分显著高于对照组,免疫荧光显示损伤部位胶质瘢痕少于对照组,且长入损伤部位的轴突也多于对照组。结论原位形成的胶原凝胶能抑制损伤部位胶质瘢痕的形成,并能促进轴突再生长入损伤部位。证明胶原是一种较好的能用于修复脊髓损伤的可注射材料。     

Effects of motor imagery training after chronic,complete spinal cord injury

Abnormalities in brain motor system function are present following spinal cord injury (SCI) and could reduce effectiveness of restorative interventions. Motor imagery training, which can improve motor behavior and modulate brain function, might address this concern but has not been examined in subjects with SCI. Ten subjects with SCI and complete tetra-/paraplegia plus ten healthy controls underwent assessment before and after 7 days of motor imagery training to tongue and to foot. Motor imagery training significantly improved the behavioral outcome measure, speed of movement, in non-paralyzed muscles. Training was also associated with increased fMRI activation in left putamen, an area associated with motor learning, during attempted right foot movement in both groups, despite foot movements being present in controls and absent in subjects with SCI. This fMRI change was absent in a second healthy control group serially imaged without training. In subjects with SCI, training exaggerated, rather than normalized, baseline derangement of left globus pallidus activation. The current study found that motor imagery training improves motor performance and alters brain function in subjects with complete SCI despite lack of voluntary motor control and peripheral feedback. These effects of motor imagery training on brain function have not been previously described in a neurologically impaired population, and were similar to those found in healthy controls. Motor imagery might be of value as one component of a restorative intervention.     

Metallothionein-II improves motor function recovery and increases spared tissue after spinal cord injury in rats

After spinal cord injury (SCI), a complex cascade of pathophysiological processes rapidly damages the nervous tissue. The initial damage spreads to the surrounding tissue by different mechanisms, including oxidative stress. We have recently reported that the induction of metallothionein (MT) protein is an endogenous rapid-response mechanism after SCI. Since the participation of MT in neuroprotective processes after SCI is still unknown, the aim of the present study was to evaluate the possible neuroprotective effect of exogenously administered MT-II during the acute phase after SCI in rats. Female Wistar rats weighing 200-250g were submitted to spinal cord contusion by means of a computer-controlled device (NYU impactor). Rats received several doses of MT-II (3.2, 10 and 100μg) at 2 and 8h after SCI. Results of the BBB scale were statistically analysed using an ANOVA of repeated-measures, followed by Tukey's test. Among the three doses tested, only 10 and 100μg were able to significantly increase (p<0.05) BBB scale scores eight weeks after SCI from a mean of 7.88 in the control group, to means of 12.63 and 10.88 for the 10 and 100μg doses of MT-II, respectively. The amount of spared tissue was also higher in the groups treated with 10 and 100μg, as compared to the control group values. Results from the present study demonstrate a significant neuroprotective effect of exogenously administered MT-II. Further studies are needed in order to characterize the mechanisms involved in this neuroprotective action.     

A型肉毒杆菌神经毒素重链干预大鼠脊髓损伤后蛋白表达的初步研究

目的:初步观察大鼠脊髓损伤模型基础上局部注射小剂量A型肉毒杆菌神经毒素重链(BoNT/A HC)后对局部蛋白表达谱的影响,为探讨BoNT/A HC干预在体神经损伤后相关蛋白表达及其干预神经再生机制提供实验基础。方法:复制大鼠单侧腰段脊髓损伤模型;采用SDS-PAGE及双向电泳观察不同剂量BoNT/A HC(2μg、4μg、6μg和8μg)对脊髓损伤后局部(包括损伤部位及其近头端部分脊髓组织)蛋白表达谱的干预作用。结果:大鼠单侧腰段脊髓损伤2 d时局部脊髓组织结构明显破坏崩解,损伤波及左侧脊髓灰质及白质;脊髓损伤局部SDS-PAGE及考马斯亮蓝染色显示,于损伤同时局部一次性注射不同剂量BoNT/A HC后,某些蛋白表达与单纯损伤组相比明显不同,而与正常组基本一致;双向电泳结果进一步显示,损伤局部注射6μg BoNT/A HC后2 d和20 d时,在不同等电点及不同蛋白分子量水平上,有10余种蛋白表达与单纯损伤组明显不同,呈向正常转化的趋势。结论:大鼠脊髓损伤局部注射BoNT/A HC一定时间可影响损伤局部蛋白表达谱的变化,这种变化呈现由损伤造成的蛋白表达变化被转向正常的趋势。     

BMP7蛋白对大鼠急性脊髓损伤后神经元修复作用的研究

目的探索骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein 7,BMP7)是否具有促进大鼠急性脊髓损伤后神经元修复的作用。方法实验大鼠分为阴性对照组(negative control,NC)和BMP7实验组,以Allen's打击法建立大鼠脊髓损伤模型,BMP7组大鼠每天在脊髓损伤处注射50ng BMP7蛋白,连续7天,NC组对应注射等体积的0.9%氯化钠注射液。两组大鼠分别于术后6小时、3天、1周、2周、4周、8周进行HE染色以观察脊髓损伤处病理学改变;两组大鼠分别于术后6小时、3天、1周、2周、4周、8周进行免疫组化实验以检测损伤节段脊髓神经丝蛋白200(neurofilament protein 200,NF200)、胶质纤微酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)及突触素(Synaptophysin,SYP)蛋白表达水平。结果 HE染色结果表明两组大鼠造模后脊髓损伤处神经元数量减少,神经突触数量减少,尼式体淡染且数量减少,组织中可见空洞形成,1周后,BMP7实验组大鼠脊髓损伤处尼式体染色逐渐加深,神经突触数量增多,变化较NC组明显。免疫组化结果表明BMP7实验组大鼠NF200阳性表达细胞数造模3天后逐渐增多,至第4周时达到高峰,且在1周、2周、4周及8周时均大于NC组;BMP7实验组及NC组术后GFAP阳性表达细胞数变化均不明显,且两组阳性细胞数差异不显著;BMP7实验组大鼠SYP阳性表达细胞数造模3天后逐渐增多,且在1周、2周、4周及8周时均大于NC组。结论 BMP7蛋白可以促进大鼠脊髓损伤后神经元的修复。     

骨髓间质干细胞修复大鼠脊髓损伤的效果的实验研究

目的研究骨髓间质干细胞（Bone marrow stromal cells，BMSCs）用于修复大鼠脊髓损伤（spinal cord injury，SCI）的效果。方法30只成年SD大鼠按改良Tuszynsl法建立大鼠脊髓完全横断伤模型，损伤水平位于T9，损伤24h后随机分为对照组、实验组，实验组经尾静脉注射BMSCs，对照组经静脉注射PBS。利用BBB（Basso-Beetle-Bresnahan）评分法进行后肢运动功能评价，并进行斜板实验。结果实验组运动功能改善，实验组与对照组的BBB评分比较差异有统计学意义（P〈0．05），实验组的神经功能恢复较快。其中实验组大鼠在注射BMSCs后35d时后肢能支撑身体站立行走。斜板实验结果2组相比有显著性差异（P〈0．05）。结论骨髓间质干细胞移植组大鼠脊髓功能恢复优于对照组，说明骨髓间质干细胞用于修复大鼠SCI作用显著。     

活性氧在脊髓损伤中的作用及损伤机制

目的研究脊髓损伤(SCI)后脊髓组织中丙二醛(MDA)的动态水平变化和神经细胞凋亡及其凋亡相关因子表达的变化,探讨活性氧(ROS)在SCI后的作用及其分子机制。方法成年雄性大鼠132只,用改良的Allen法复制大鼠急性SCI模型,致大鼠脊髓(T10)中度挫伤,采用化学比色法测定不同时间段受损脊髓组织的MDA含量;免疫组织化学法分析受损脊髓组织区域凋亡相关因子Caspase-3、Bcl-2和Bax的表达变化;荧光原位缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡。结果SCI后6h,脊髓组织中MDA含量明显增高并维持到损伤后5d,期间在6h和3d出现两次高峰,7d基本恢复正常;SCI后6h脊髓组织中凋亡细胞开始增多,3d达高峰,以后逐渐减少,各时间点与假手术组比较有显著性的差异;Bcl-2和Bax蛋白损伤后6h开始有较多的表达,以后快速增多,5d达高峰,然后逐渐回落。Caspase-3蛋白在损伤后6h开始增多,3d达高峰,以后逐渐减少。3种凋亡相关因子在各时间点与假手术组比较有显著性差异;甲基强的松龙(MPSS)治疗组与SCI组比较:MDA含量、凋亡细胞数、凋亡因子Caspase-3和Bax表达减少,Bcl-2表达增加,并且在部分时间点有显著性差异。结论在SCI后ROS可能通过促进Caspase-3表达和降低Bcl-2/Bax之间的比值诱导神经细胞凋亡,从而加重了SCI继发性损伤。     

Differential time-course of the increase of antioxidant thiol-defenses in the acute phase after spinal cord injury in rats

Spinal cord injury (SCI) is a world-wide health problem. After traumatic injury, spinal cord tissue starts a series of self-destructive mechanisms, known as the secondary lesion. The leading mechanisms of damage after SCI are excitotoxicity, free radicals’ overproduction, inflammation and apoptosis. Metallothionein (MT) and reduced glutathione (GSH) are low-molecular-weight, cysteine-rich peptides able to scavenge free radicals. MT and GSH participation as neuroprotective molecules after SCI is unknown. The aim of the present study is to describe the changes of MT and GSH contents and GSH peroxidase (GPx) activity in the acute phase after SCI in rats. Female Wistar rats weighing 200–250 g were submitted to spinal cord contusion model, by means of a computer-controlled device (NYU impactor). Rats receiving laminectomy were used as a control group. Animals were killed 2, 4, 12 and 24 h after surgery. MT was quantified by the silver-saturation method, using atomic absorption spectrophotometry. GSH and GPx were assayed by spectrophotometry. Results indicate an increased MT content by effect of SCI, only at 4 and 24 h, as compared to sham group values. Meanwhile, GSH was found decreased at 4, 12 and 24 h after SCI. Interestingly, GPx activity was raised at all time points, indicating that this enzymatic defense is activated soon after SCI. Results suggest that thiol-based defenses, MT and GSH, are differentially expressed by spinal cord tissue to cope with the various processes of damage after lesion.     

大鼠急性脊髓损伤后神经细胞凋亡及Fas和Cathepsin D的表达

目的探讨大鼠急性脊髓损伤后神经细胞凋亡及Fas、Cathepsin D的表达。方法 78只成年健康Sprague-Dawley(SD)大鼠,使用改良Allen氏法制作急性脊髓损伤模型,采用HE染色、原位末端脱氧核糖核酸转移酶介导DUTP标记法(TUNEL)对损伤脊髓组织进行标记;免疫组化方法测定Fas、Cathepsin D的表达变化。结果正常组、假手术组TUNEL、Fas、Cathepsin D阳性细胞较少见,损伤组TUNEL阳性细胞8 h明显增多,3 d达到高峰,7 d明显降低。Fas阳性表达的细胞也在8 h开始增高,3 d达到高峰,7 d下降。Cathepsin D阳性细胞数则在脊髓损伤后3 d明显增多,5 d达高峰,至观察时间点结束,未有明显衰减。结论 Fas、Cathepsin D均参与了脊髓继发性损伤的调节。