雷公藤内酯醇靶向Th17-IL-17通路预防鼠微创前列腺癌

目的证明雷公藤内酯醇靶向Th17-IL-17通路预防鼠微创前列腺癌。方法在Pten阴性模型鼠上,在6~12周期间用雷公藤内酯醇处理,以DMSO作为空白对照。所有小鼠在12周龄处死,剖检。所有小鼠在12周龄时进行前列腺表型分析。结果雷公藤内酯醇治疗可降低Pten阴性小鼠微侵袭前列腺癌的形成。雷公藤内酯醇干预组的前列腺增生减少,细胞凋亡增加,血管生成减少,以及炎症细胞浸润也减少。经上皮细胞-间充质转化(全名Epithelial-Mesenchymal Transition,简称EMT)标记实验检测,与对照处理组比较,雷公藤内酯醇治疗前列腺组织中有较弱的EMT表型。结论首次证实雷公藤内酯醇可靶向Th17-IL-17通路预防鼠微创前列腺癌模型。     

雷公藤内酯醇调控COX2/PGE2轴抑制Th17细胞分化的研究

雷公藤内酯醇（TPT）是雷公藤的主要活性单体, 用于治疗类风湿关节炎（RA）。该研究在体外用不同浓度（0,10,50,100 nmol·L^-1）TPT干预RA患者的滑膜成纤维细胞（RASFs）后,用qRT-PCR检测环氧化酶（COX）的mRNA表达,ELISA法测定前列腺素E2（PGE2）的水平。进一步添加或不添加外源性PGE2,用TPT干预的RASFs与健康志愿者CD4⁺T细胞共培养,流式细胞术检测产生IL-17和IFN-γ的CD4⁺T细胞亚群。结果显示,TPT以剂量依赖的方式抑制RASFs 的COX2的mRNA表达以及PGE2的分泌（P<0.05）;TPT预处理的RASFs呈剂量依赖性抑制Th17细胞分化,而外源性PGE2能逆转TPT预处理的RASFs抑制Th17细胞分化（P<0.05）。综上表明TPT通过抑制COX2下调RASFs分泌PGE2,进而抑制Th17细胞分化。     

HPLC法测定雷公藤内酯醇生物贴中雷公藤内酯醇

目的建立雷公藤内酯醇生物贴的质量标准,雷公藤内酯醇生物贴中雷公藤内酯醇的定量测定方法。方法雷公藤内酯醇生物贴经甲醇超声提取。色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(3∶7),检测波长为220 nm。结果雷公藤内酯醇在5~120μg/mL,线性关系良好(r=0.9981)。平均回收率96.5%(n=9)。RSD3%。结论本方法重现性好,灵敏度高。     

雷公藤氯内酯醇研究进展

雷公藤氯内酯醇是从雷公藤值物中分离得到的环氧二萜内酯化合物，足雷公藤中的主要活性物质，本文从生源、半合成、药理等三个方面对该化合物进行全面介绍。     

HPLC法检测雷公藤药材中雷公藤内酯醇的含量

目的：建立测定雷公藤药材中雷公藤内酯醇含量的方法。方法：雷公藤醇提物经中性氧化铝层析柱洗脱,采用HPLC法检测雷公藤内酯醇含量。色谱柱：PhenomenexLunaC18（4．6mm×250mm,5m）;流动相：甲醇-水;梯度洗脱：0min（甲醇40％）-30min（甲醇50％）;流速1．0mL·min^-1;检测波长218nm;柱温：35℃。结果：雷公藤内酯醇与其他成分分离效果良好,25～400μg·ml^-1范围内有良好的线性关系,平均回收率为98．17％。结论：该方法准确、灵敏,可作为雷公藤药材中雷公藤内酯醇的定量分析方法。     

雷公藤内酯醇对多发性骨髓瘤U266细胞组蛋白去甲基化酶的调节作用

目的 研究雷公藤内酯醇对多发性骨髓瘤U266细胞组蛋白去甲基化酶的影响,探讨其表观遗传调控作用.方法 采用MTT法检测细胞增殖活性:Annexin V-FITC/PI双标法流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR法检测U266细胞组蛋白赖氨酸去甲基化酶1 (LSDI) mRNA、组蛋白去甲基化酶(JMJD2B)mRNA表达的变化;激光共聚焦显微技术观察LSDI亚细胞定位情况及蛋白量的变化;Western blotting法检测在雷公藤内酯醇干预下LSD1和JMJD2B蛋白表达的变化.结果 雷公藤内酯醇以剂量、时间相关方式抑制U266细胞增殖,与细胞培养24 h的IC50为153.2 nmol/L;以剂量相关方式诱导U266细胞凋亡,雷公藤内酯醇80 nmol/L作用U266细胞24 h后,细胞出现典型的凋亡形态学改变,总凋亡率达32.9％.;以剂量相关方式抑制JMJD2B蛋白的表达,同时促进LSD1蛋白表达.结论 雷公藤内酯醇在抑制U266细胞增殖、诱导其凋亡的同时,明显改变LSD1、JMJD2B的表达,其诱导U266细胞凋亡和抗肿瘤效应可能与其调节LSD1、JMJD2B表达有关.     

HPLC法检测雷公藤超声提取物中雷公藤内酯醇的含量

目的：建立雷公藤超声提取物中测定雷公藤内酯醇含量的方法。方法：雷公藤超声提取物经中性氧化铝层析柱洗脱,采用HPLC法检测雷公藤内酯醇含量。色谱柱：大连江申公司C 18柱（4.6mm×250mm,5μm）;流动相：乙腈-水（25∶75）;检测波长：218nm;流速：1.0m l.min^-1;柱温：30℃;结果：雷公藤内酯醇与其他成分分离效果良好,线性范围为0.96-11.52μg/m l（r=0.9997）,平均回收率为97.82%。结论：该方法准确、灵敏,可作为雷公藤超声提取物中雷公藤内酯醇的定量分析方法。     

雷公藤微囊片中雷公藤内酯醇的含量测定

雷公藤微囊片主要有效成分为雷公藤内酯醇(以下简称T—d)。有关该成分的定量分析有报道用薄层扫描法,但薄层扫描仪在国内尚无法普及,测定波长用218nm,干扰因素较多;或用kedde试剂显色后扫描,显色剂的用量,颜色均匀度等等,都会影响测定结果。为此,我们改用薄层比色法,结果较满意,现报道如下。     

雷公藤内酯醇对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　探讨雷公藤内酯醇对血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的影响及作用机制。方法　体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞 ,通过3 H -TdR掺入试验 ,观察雷公藤内酯醇对血清诱导的细胞增殖的影响 ;采用流式细胞技术 ,观察该药对细胞增殖周期的影响。结果　雷公藤内酯醇在 (0 .5～ 4 )× 10 -5g/L的浓度范围内 ,以一种剂量依赖性的方式抑制了血清诱导的VSMC增殖 ;雷公藤内酯醇可显著增加细胞周期中G0 /G1期细胞百分含量 ,减少S期细胞的百分含量 ,阻断细胞由G0 /G1期向DNA合成的S期转化 ,作用呈剂量依赖性。结论　雷公藤内酯醇可能通过影响细胞周期的转化而抑制VSMC的增殖。     

雷公藤内酯醇研究进展

雷公藤内酯醇具有抗肿瘤,抗炎,免疫调节,抗生育等活性,广泛用于治疗肿瘤,肾炎,哮喘等疾病,但是在运用过程中也存在多种不良反应.综述了近几年来雷公藤内酯醇的药理研究,含量测定方法及不良反应的研究概况.     

芪玄抑甲宁对甲亢大鼠的Th17细胞相关因子的调控影响

目的:研究芪玄抑甲宁对甲亢大鼠Th17细胞相关因子的调控影响。方法:将雌性SD大鼠随机分成空白组(生理盐水组)和模型组,以尾静脉注射小肠结肠炎耶尔森氏菌造模,模型组大鼠随机分为模型组、芪玄抑甲宁14.4 g/kg、7.2 g/kg、3.6 g/kg剂量组和甲巯咪唑组(3mg/kg)。用酶联免疫法检测大鼠血清中IL-17、IL-6、TGF-β水平,免疫组化法和Real-time PCR法检测甲状腺组织中IL-17、IL-17R和IL-17mRNA、IL-17RmRNA的蛋白表达。结果:芪玄抑甲宁(14.4 g/kg)可以明显降低甲亢大鼠血清中IL-17、IL-6和TGF-β的水平,回调甲亢大鼠甲状腺组织中IL-17、IL-17R和IL-17mRNA、IL-17RmRNA的蛋白表达水平。结论:芪玄抑甲宁对Th17细胞的相关因子具有调控影响,这可能是芪玄抑甲宁治疗甲亢的重要作用机制之一。     

溃结灵对溃疡性结肠炎大鼠Th17分化的调节机制研究

目的:探讨溃结灵对溃疡性结肠炎(UC)大鼠Th17细胞分化相关因子的影响,从而揭示其作用机制。方法:采用雄性SD大鼠制作由三硝基苯磺酸(TNBS)所导致的溃疡性结肠炎模型,溃结灵高、中、低剂量以及柳氮磺胺吡啶(SASP)对溃疡性结肠炎大鼠给予治疗,治疗结束后采集结肠粘膜,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠结肠粘膜中白细胞介素6(IL-6)、转化生长因子β1(TGF-β1)的含量;采用荧光定量PCR检测大鼠结肠组织IL-6、TGF-β1、孤独核受体t(RORγt)、信号转导子与转录激活子3(STAT3)mRNA的表达;采用Western blot法检测结肠粘膜RORγt、STAT3蛋白表达。结果:溃结灵高剂量(18.3g/kg)和中剂量(9.2g/kg)可明显减少溃疡性结肠炎大鼠结肠的溃疡个数和溃疡面积。大鼠结肠粘膜中,模型组IL-6的含量及mRNA表达明显高于正常组,溃结灵高剂量组(18.3g/kg)和柳氮磺胺吡啶组(0.5g/kg)低于模型组;模型组TGF-β1的含量及mRNA表达明显低于正常组,溃结灵高剂量(18.3g/kg)和柳氮磺胺吡啶组(0.5g/kg)高于模型组。模型组结肠粘膜中RORγt、STAT3蛋白表达及mRNA表达明显高于正常组,溃结灵高(18.3g/kg)、低(4.6g/kg)剂组和柳氮磺胺吡啶组(0.5g/kg)的蛋白表达及mRNA表达低于模型组。结论:溃结灵可能通过调节溃疡性结肠炎大鼠结肠粘膜内与Th17分化相关的IL-6、TGF-β1、RORγt、STAT3的表达,从而抑制炎症反应,治疗溃疡性结肠炎。     

In vitro synergistic cytotoxic effect of triptolide combined with hydroxycamptothecin on pancreatic cancer cells

Pancreatic cancer is a devastating disease characterized by low sensitivity to conventional chemotherapeutic treatment that has a poor prognosis. Therefore, novel effective chemotherapeutic regimens need to be developed. In this study, we analyzed the combined cytotoxic effect of triptolide and hydroxycamptothecin (HCPT) on pancreatic cancer cell line PANC-1 by using 3-(4.5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxy-methoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium, inner salt (MTS) and fluorescence- activated cell sorting (FACS) assays. Our results showed that the sensitivity of a combined therapy using triptolide and HCPT was higher than that of triptolide or HCPT alone and that activation of caspase-9/caspase-3 and inhibition of nuclear factor-kappaB (NF-κB) signaling pathway may contribute to the synergistic cytotoxic effect of this combination therapy. Therefore, our observations provided evidence supporting the clinical applications of the combination chemotherapy using triptolide and HCPT for treating pancreatic cancer.     

润燥灵对干燥综合征模型小鼠Th17/Treg细胞的影响

目的:探讨润燥灵对免疫诱导性干燥综合征(SS)模型小鼠外周血辅助性T细胞17(Th17)和调节性T细胞(Treg)的影响。方法:将90只C57bl/6j小鼠随机分成为正常组、模型组、润燥灵36g/kg组、润燥灵18g/kg组、润燥灵9g/kg组和泼尼松0.2g/kg组,每组15只,除正常组外,其余各小鼠采用免疫诱导法建立SS模型,造模第5 w开始灌胃给药,每周测量小鼠饮水量,给药4 w后眼球取血,断颈处死,分离颌下腺,HE梁色后病理检测,PCR检测颌下视黄醇类核内受体(RORγt)和转录因子叉头框蛋白3(Fox P3)的表达,流式细胞术检测Thl7细胞和CD4~+CD25~+T细胞的含量。结果:与模型组比较,润燥灵36g/kg组和润燥灵18g/kg组小鼠饮水量增加,颌下腺淋巴细胞浸润减少。PCR法结果显示,与正常组比较,模型组RORγt m RNA和Fox P3 m RNA表达量升高;与模型组比较,润燥灵36gkg、润燥灵18g/kg和泼尼松0.2g/kg组RORγt m RNA和Fox P3 m RNA表达量降低。流式细胞术结果显示,与模型组比较,润燥灵36gkg组和泼尼松0.2g/kg组CD4~+/CD4~+CD25~+T比值降低。结论:润燥灵能够抑制SS模型小鼠RORγt m RNA和Fox P3 m RNA表达量,调节Thl7/Treg细胞平衡作用。     

小檗碱对结肠炎小鼠Th17/Treg细胞分化及IL-35的影响

目的研究Th17、Treg细胞分化及白细胞介素-35(IL-35)在小鼠结肠炎发病中的作用,探讨小檗碱对小鼠结肠炎的治疗作用和作用机制。方法将40只BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组和小檗碱组,每组10只。正常组未行造模,其余3组均采用三硝基苯磺酸进行结肠炎造模。造模24 h后,小檗碱组小鼠给予小檗碱腹腔注射,地塞米松组小鼠给予地塞米松腹腔注射,模型组和正常组小鼠均以生理盐水腹腔注射,均1次/d,共7 d。第8天处死各组小鼠,观察小鼠结肠黏膜大体形态及组织病理评分,用流式细胞仪检测小鼠脾脏Th17、Treg细胞分化情况,ELISA法检测小鼠结肠组织中IL-35表达情况。结果与正常组比较,模型组小鼠脾脏Th17细胞比例显著升高(P 0. 05),Treg细胞比例显著降低(P 0. 05),结肠组织中IL-35表达水平显著降低(P 0. 05);与模型组比较,小檗碱组、地塞米松组小鼠脾脏Th17细胞比例显著降低(P均0. 05),而Tregs细胞比例显著升高(P均0. 05),且结肠组织中IL-35表达水平显著升高(P均0. 05)。结论脾脏Th17/Treg细胞失衡,促炎细胞Th17细胞分化增加、免疫抑制细胞Treg细胞降低及结肠IL-35分泌减少参与了结肠炎的发生发展过程,而小檗碱可以通过抑制小鼠脾脏Th17细胞分化,促进Treg细胞分化和IL-35表达,起到减轻结肠黏膜炎症的作用。     

黄芪对单疱病毒性角膜炎患者Th1/Th2细胞因子的调节作用

目的：探讨黄芪对单疱病毒性角膜炎(haerpes simplex keratits,HSK)患者血清Th1／Th2细胞因子水平的影响。方法：选择106例HSK患者随机分为黄芪治疗组和病毒唑治疗组,治疗前后分别采用双抗体夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA)检测外周血白细胞介素-2(IL-2),白细胞介素-4(IL-4),白细胞介素-10(IL-10),γ-干扰素(γ-IFN)水平;并以同样方法检测62名体检正常献血员作健康对照组。结果：HSK患者血清中IL-4、IL-10水平较健康对照组显著增高(P<0．01);IL-2;γ-IFN水平较健康对照组显著降低(P<0．01)。黄芪治疗组患者治疗后,血清IL-4、IL—10水平显著降低(P<0．01),而IL-2、γ-IFN水平显著增加(P<0．01)。病毒唑治疗组治疗前后上述指标无明显改变(P>0．05)。结论：黄芪能调节HSK患者体内Th1／Th2细胞因子的失衡状态,改善患者机体免疫功能紊乱状况,这对HSK患者治疗有重要意义。     

紫朱软膏治疗非缺血型糖尿病足溃疡的临床疗效及对血清中Th1/Th2细胞的影响

目的：观察紫朱软膏治疗非缺血型糖尿病足溃疡的临床疗效观察及其对Th1/Th2细胞的影响。 方法：将符合纳入标准的104例非缺血型糖尿病足溃疡患者随机分为试验组和对照组,各52例。两组均根据《中国2型糖尿病防治指南》给予基础治疗,试验组局部溃疡采用中药紫朱软膏干预,对照组采用藻酸钙敷料干预,两组每天换药一次,连续治疗8周。治疗前后评估两组患者溃疡面积大小,并于治疗前后观察两组患者Th1/Th2细胞（Th1相关细胞因子TNF-α、IL-2、INF-γ;Th2相关细胞因子：IL-4、IL-5、IL-10）、肝肾功能。 结果：两组临床疗效比较,试验组整体疗效优于对照组,具有统计学差异（P ＜0.05）。两组患者血清中细胞因子水平治疗后比较,试验组在TNF-α、IL-2水平上低于对照组,具有统计学差异（P ＜0.05）,试验组在IL-4、IL-10水平上高于对照组,具有统计学差异（P ＜0.05）;血清中细胞因子水平治疗前后组内比较,两组均在TNF-α、IL-2、INF-γ水平上较治疗前降低,试验组在IL-4、IL-5、IL-10水平上较治疗前升高,对照组在IL-4、IL-5水平上较治疗前升高,均有统计学差异（P ＜0.05）。 结论：中药紫朱软膏能有效促进非缺血型糖尿病足溃疡愈合,可能通过调节Th1/Th2细胞分化实现。     

雷公藤甲素对人胃癌细胞株SGC-7901增殖的抑制作用及其机制

目的观察雷公藤甲素对激素依赖性人胃癌细胞株SGC-7901增殖的抑制作用,并初步探讨可能的机制。方法 MTT法检测雷公藤甲素对SGC-7901细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测雷公藤甲素对SGC-7901细胞周期的影响,Western blotting法观察雷公藤甲素对SGC-7901细胞内雌激素受体(ER-α)蛋白表达的影响。结果雷公藤甲素对SGC-7901细胞增殖有显著的抑制作用,并呈现良好的量-效关系。雷公藤甲素还能有效地使SGC-7901的细胞周期阻滞在S期,同时明显下调ER-α蛋白的表达。结论雷公藤甲素能抑制人胃癌细胞SGC-7901增殖并且使细胞周期阻滞在S期,其对SGC-7901细胞增殖的抑制作用和周期阻滞作用的机制可能与其下调ER-α的表达有关。     

从调节性T细胞和Th17细胞变化探讨抗敏平喘方治疗哮喘机制

目的从调节性T细胞(Tregs)和Th17细胞亚群平衡方面来探讨抗敏平喘方治疗哮喘的机制。方法将6~8周龄雌性BALB/c小鼠随机分为5组:对照组、模型组、泼尼松(5.5 mg/kg)组、抗敏平喘方低和高剂量(4.95、9.90 g/kg)组;用卵清蛋白诱导小鼠哮喘模型,每天雾化后ig给药,连续15 d,末次给药后处死小鼠,通过病理切片HE染色观察肺组织的损伤情况,用流式细胞术测定血液中Th17和Tregs细胞亚群的变化比例;ELISA法检测小鼠血清中白细胞介素-4(IL-4)、转化生长因子-β(TGF-β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白的表达水平。结果病理切片HE染色显示抗敏平喘方能够改善哮喘小鼠肺组织损伤,降低淋巴细胞对肺组织的浸润水平;抗敏平喘方能够下调血液中Th17细胞比例和上调Tregs细胞比例,并且存在剂量依赖效应;抗敏平喘方同时能够显著提高血液中IL-4和TGF-β水平并降低TNF-α水平。结论抗敏平喘方能够通过影响Th17细胞和Tregs在血液中的比例以及相关炎症因子的水平而达到治疗哮喘的作用。     

京尼平苷对雷公藤甲素肝损伤的保护作用

目的:观察不同剂量京尼平苷对雷公藤甲素所致小鼠肝损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法:32只小鼠随机平均分成4组:空白对照组,每天灌胃生理盐水;雷公藤甲素组,每天灌胃雷公藤甲素400μg/kg;京尼平苷50mg/kg组:每天灌胃雷公藤甲素400ug/kg+京尼平苷50mg/kg;京尼平苷150mg/kg组:每天灌胃雷公藤甲素400ug/kg+京尼平苷150mg/kg。每天给药1次,连续28d后检测血清中ALT、AST、TBIL、ALP和LDH,测定肝组织中MDA、GST、GSH、SOD和UGT1含量。HE染色观察肝脏病理改变。结果:与雷公藤甲素组相比,联合给予京尼平苷150mg/kg的小鼠ALT、AST、TBIL和ALP有显著的下降,联合给予京尼平苷50mg/kg对ALT、AST、TBIL和LDH的改变没有显著性影响。京尼平苷150mg/kg和50mg/kg剂量均能不同程度的升高肝组织中GST、GSH、SOD和UGT1含量,但不能改善肝组织中MDA的含量。病理检查结果也显示京尼平苷的联合给予改善了雷公藤甲素引起的病理改变。结论:京尼平苷150mg/kg和50mg/kg剂量均能保护雷公藤甲素引起的小鼠肝损伤,其中150mg/kg剂量的保护效果更佳,其保护机制有待深入的研究。