三种吸虫抗原与日本血吸虫抗原之间的交叉反应性及基表位研究

采用免疫标记技术（ＴＥＳ－ＩＥＳＴ，ＡＷＡ－ＩＥＳＴ和ＴＥＳ－ＩＦＡＴ）及酶联免疫印渍技术（ＥＬＩＢ）对卫氏并殖吸虫，华支睾吸虫和姜片虫成虫可溶性抗原与日本血吸卵和成虫可溶性抗原之间的交叉反应性及其表位分子基础进行了研究，７１０份上述３种吸虫病人血清与日本血吸虫抗原之间的交叉反应率分别为３．９％（１０／２５９），４．２％（１１／２６１）和３．２％（６／１９０），用ＥＬＩＢ上对述吸虫组分抗原分析结果     

卫氏并殖吸虫固相抗原IFAT和IEST的比较研究

用卫氏并殖吸虫成虫、童虫固相抗原作间接荧光抗体试验（ＩＦＡＴ）免疫酶染色试验（ＩＥＳＴ）对比检测７９例肺吸虫感染者和２５４例健康人血清，两法的阳性率分别为９３．７％、８９．９％和９６．２％、９３．７％，假阳性率均为０。ＩＦＡＴ和ＩＥＳＴ对比检测２０例血吸虫病人血清、２５结支睾吸虫病人血清和２０例肺结核病人血清。ＩＦＡＴ出现的交叉反应率为１５％、４％、０和１５％、４％、０。ＩＦＳＴ出现的交叉反应率为     

华支睾吸虫特异性抗原的筛选

华支睾吸虫特异性抗原的筛选田海生苏畅张耀娟（南京医科大学寄生虫学教研室，南京２１００２９）关键词华支睾吸虫；电泳；特异性抗原华支睾吸虫、血吸虫、肺吸虫、肝片形吸虫和姜片虫成虫间存在着共同抗原，并引起交叉反应，已为多年来中外学者的工作所证实［１～４］...     

应用单克隆抗体检测华支睾吸虫病人的循环抗原

本文应用抗华支睾吸虫成虫抗原的单克隆抗体建立了Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ，以检测华支睾吸虫病人血清中的循环抗原。被检的６１例中５１例（８３％）呈阳性反应，而肺吸虫、血吸虫、旋毛虫、猪囊虫病人以及健康人均为阴性。     

华支睾吸虫尿素溶解性抗原的临床应用

采用ＥＬＩＳＡ法，以华支睾吸虫成虫尿素溶解性抗原（ＵＳＡ）和该虫水溶性抗原（ＡＳＡ）检测９８份华支睾吸虫病人血清，阳性率分别为９２．８６％和９４．９８％。用这两种抗原检测日本血吸虫病人血清，假阳性率分别为１１．１１％和３３．３３％，肺吸虫病人血清的阳性率分别为０和２０％。结果表明，ＵＳＡ有与ＡＳＡ相似的敏感性，但特异性显著高于后者，具有更好的实用价值。     

抗华支睾吸虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其初步应用

本文用华支睾吸虫成虫可溶性抗原免疫的BALB/c小鼠与SP_2/o骨髓瘤细胞融合,经筛选和克隆化后获得4株抗华支睾吸虫单克隆抗体杂交瘤细胞。该4株荜克隆抗体与华支睾吸虫成虫抗原作ELISA,结果均为阳性。经交叉试验(ELISA法)证明与日本血吸虫成虫抗原,虫卵抗原和卫氏并殖吸虫成虫抗原均呈阴性反应。4株单克隆抗体免疫球蛋白亚类鉴定除3F_7株为IgG_1外,其余3株均属IgM。初步试用3F_7株单克隆抗体作ELISA双抗体法检测人体华支睾吸虫循环抗原。     

卫氏并殖吸虫期特异性抗原的鉴定

为了建立检测卫氏并殖吸虫抗原的血清学诊断方法，我们制备了针对卫氏并殖吸虫囊蚴和成虫的单克隆抗体，部分鉴定了为单克隆抗体所识别的抗原表位，其中，囊蚴期特异性抗原表位对高碘酸敏感而对蛋白酶具有抵抗力，系碳水化会物；反之，成虫期特异性抗原表位对高碘酸具有抵抗力而对蛋白酶敏感，系多肽。应用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ，以并殖吸虫的期特异性单克隆抗体能够检测人血清中０．３～７５ｎｇ／ｍｌ相应的并殖吸虫抗原。     

卫氏并殖吸虫成虫的特异性诊断抗原

目的：寻找诊断并殖吸虫病的特异性抗原。方法：应用SDS-PAGE和Western blot对卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原中的蛋白组分进行分析。结果：卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原蛋白经SDS-PAGE后显示14条蛋白带，其中相对分子质量为53000、3l000、25000、16000、11000是主带；相对分子质量为53000和34000的条带可与华支睾吸虫病患者血清反应；108000、94000、65000的条带可与血吸虫病患者血清反应；58000、53000、43000的条带可与旋毛虫感染的大鼠血清、小鼠血清及旋毛虫病患者血清反应。37000的蛋白带只能被斯氏狸殖吸虫感染的大鼠血清和并殖吸虫病患者血清所识别，而不与华支睾吸虫病、血吸虫病患者血清、旋毛虫感染的大鼠和小鼠血清、旋毛虫病患者血清、正常大鼠、小鼠血清及正常人血清发生交叉反应。结论：卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原中相对分子质量为37000的蛋白组分为卫氏并殖吸虫成虫的特异性抗原，可用于并殖吸虫病的免疫学诊断及血清流行病学调查．     

华支睾吸吸虫尿素溶解性抗原的临床应用

采用ＥＬＩＳＡ法，以华支睾吸虫成虫尿素溶解性抗原和该虫水溶性抗原检测９８份华支睾吸虫病人血清，阳性率分别为９２．８６％和９４．９８％。用这两种抗原检测日本血吸虫病人血清，假阳性率分别为１１．１１％和３３．３３％，肺吸虫病人血清的阳性率分别为０和２０％。结果表明，ＵＳＡ有与ＡＳＡ相似的敏感性，但特异性显著高于后者，具有更好的实用价值。     

华支睾吸虫成虫特异性诊断抗原分析

目的:寻找诊断华支睾吸虫病的特异性抗原.方法:应用SDS-PAGE和Western blot对华支睾吸虫成虫可溶性抗原中的蛋白组分进行分析,试验血清包括旋毛虫感染的大鼠和小鼠血清,正常大鼠和小鼠血清,旋毛虫病、华支睾吸虫病、并殖吸虫病、日本血吸虫病及囊虫病患者血清,斯氏狸殖吸虫感染的大鼠血清和正常人血清.结果:华支睾吸虫成虫可溶性抗原蛋白经SDS-PAGE后显示17条蛋白带,其中相对分子质量为65 000、54 000、31 000、25 000、13 000的为主带.Western blot结果显示,相对分子质量为108 000、94 000、71 000、65 000、56 000、53 000、43 000的蛋白带可被华支睾吸虫病患者血清识别,108 000、71 000、65 000、63 000、53 000的蛋白带可被并殖吸虫病患者血清识别,108 000、94 000、71 000可被日本血吸虫病患者血清、旋毛虫感染的大鼠血清及旋毛虫病患者血清识别;56 000的蛋白组分只能被华支睾吸虫病患者血清识别,而不与其他试验血清发生交叉反应.结论:华支睾吸虫成虫可溶性抗原中相对分子质量为56 000的蛋白组分为华支睾吸虫成虫的特异性抗原.     

免疫印渍技术用于斯氏并殖吸虫病抗原检测的研究

采用免疫印渍技术分析了斯氏并殖吸虫30、60和90d虫体抗原组份与斯氏、卫氏并殖吸虫病人、华支睾吸虫、血吸虫、囊虫、包虫病人和健康人血清反应情况。结果发现斯氏和卫氏并殖吸虫病人血清均可识别9条抗原多肽，分子量分别为17、27、29、35.5、37.5、60、72和90kDa，其中35.5、37.5和39kDa三条抗原带可100％同2种并殖吸虫病人血清起反应，特异性达100％。72和90kDa抗原多肽可与其他寄生虫病人和正常人血清发生交叉反应。不同虫龄期的抗原在反应条带上无明显区别，但以30d龄虫体抗原的显色更清晰。结果提示35.5、37.5、和39kDa抗原多肽具免疫学诊断价值。     

抗日本血吸虫单克隆抗体制备及其靶抗原性质的研究

为建立两株抗日本血吸虫单克隆抗体－ＣＡ－７、ＣＡ－８，（均为ＩｇＭ型）。用单抗ＤＯＴ－ＥＬＩＳＡ方法可检测出血吸虫感染兔血清中的靶抗原。ＣＡ－７的靶抗原存在于虫卵、尾蚴中；ＣＡ－８的靶抗原存在于虫卵、尾蚴和成虫中。用亲和导析的方法分离纯化了这两株单抗的靶抗原，实验结果表明ＣＡ－７和ＣＡ－８的靶抗原是中性糖含量分别为２３．３％和１４．７％，Ｍｒ为２２０×１０＾３和２００×１０＾３的糖蛋白，这两种抗原     

SVLBP重组抗原用于日本血吸虫病免疫诊断的研究

目的研究日本血吸虫极低密度脂结合蛋白重组抗原(reSVLBP)在血吸虫病诊断中的应用价值及现场推广前景。方法以reSVLBP为抗原建立reSVLBP-ELISA,检测血吸虫病人及其它寄生虫感染者血清中特异性抗体,并与常规SEA-ELISA进行平行检测和比较。结果reSVLBP抗原和SEA对血吸虫的敏感性分别为90.5%和97.3%(P>0.05),两者对血吸虫的特异性分别为100%和77.0%(P<0.05);reSVLBP与肺吸虫、姜片虫血清未见交叉反应,与华支睾吸虫、蛔虫、鞭虫感染者血清的交叉反应率分别为20.0%、20.0%、10.0%。SEA对肺吸虫和姜片虫病人血清的交叉反应率分别为29.4%和16.7%,与华支睾吸虫、蛔虫、鞭虫感染者血清的交叉反应率分别为26.7%、30.0%、20.0%。结论reSVLBP作为诊断抗原具有很高的特异性,与其它寄生虫的交叉反应少,敏感性与SEA相近,在血吸虫病诊断中具有一定的应用前景。     

丰富并殖吸虫后尾蚴,成虫及小睾并殖吸虫成虫的蛋白电泳分析

应用ＩＥＦ技术对丰富并殖吸虫后尾蚴的可溶性蛋白进行分析，并同丰富并殖吸虫成虫、小睾并殖吸虫成虫电泳结果进行比较。ＩＥＦ结果显示：丰宫并殖吸虫后尾蚴显带１１条，主带６条（３－４，６，８－１０），成虫显带１７条，主带７条（４－７，１２－１４）；小睾并殖吸虫成虫显带１３条，主带５条（６－７，１０－１２）。     

日本血吸虫循环免疫复合物中抗原的鉴定

用低浓度ＰＥＧ（ＭＷ６０００）提取的日本血吸虫感染兔血清中循环免疫复合物（ＣＩＣ）直接免疫家兔，制备ＣＩＣ兔血清。采用酶联免疫印迹技术（ＥＩＴＢ）分析鉴定日本血吸虫ＣＩＣ中抗原成份。结果表明，ＣＩＣ中成虫及其排泄分泌物源性抗原成份有１７种，虫卵源性抗原成份有５种。且ＩＦＡＴ方法分析ＣＩＣ中抗原成份定位于成虫表膜及肠腔上皮。     

日本血吸虫循环免疫复合物中抗原的鉴定

用低浓度ＰＥＧ（ＭＷ６０００）提取的日本血吸虫感染兔血清中循环免疫复合物（ＣＩＣ）直接免疫家兔，制备抗ＣＩＣ兔血清。采用酶联免疫印迹技术（ＥＩＴＢ）分析鉴定日本血吸虫ＣＩＣ中抗原成份。结果表明，ＣＩＣ中成虫及其排泄分泌物源性抗原成份有１７种，虫卵源性抗原成份有５种。用ＩＦＡＴ方法分析ＣＩＣ中抗原成份定位于成虫表膜及肠腔上皮。     

抗重组Sj26（rSj26）GST多抗金免疫测定法检测日本血吸 …

为探讨ｆＳｊ２６ＧＳＴ抗原诊断日本血吸虫病的应用价值，本研究以抗ｒＳｊ２６ＧＳＴ多克隆抗体为捕获抗体和金标记抗体，建立了夹心斑点金免疫测定法（Ｓ－ＤＩＧＦＡ０检测日本血吸虫循环抗原的简易免疫学方法。同时以ＳＥＡ－ＤＩＧＦＡ和ＳＥＡ－ＥＬＩＳＡ检测抗体作对照。结果三种方法检测慢性血吸虫病人的敏感性分别为７６．７％〉９８．９％和９６．５％；特异性分别为９７．５％，９６．３％和９１．２％。初步试验结果表     

旋毛虫肌蚴可溶性抗原与日本血吸虫抗血清交叉反应的研究

目的 从分子水平研究旋竿虫诱导抗日本血吸虫保护性免疫。方法 应用ＥＩＴＢ技术对旋毛虫肌蚴上清抗原与多种日本吸虫抗血清的交叉反应进行分析。结果 旋毛虫肌蚴抗原与日本吸虫感染血清、抗雄虫家兔血清、抗尾蚴血清、抗成熟卵及未成熟血清、抗环卵血清、抗成虫表膜血清及抗ＧＳＴ血清存在广泛交叉反应带。结论 旋毛虫抗血吸虫抗原具有复杂性,其与血吸虫不同发育阶段、不同组分免疫血清存在交叉反应。     

斯氏肺吸虫和华支睾吸虫基因组态DNA的初步分析

目的 比较分析斯氏肺吸虫和华支睾吸虫基因组多态ＤＮＡ的多态性和探讨两吸虫间的相似基因。方法 应用随机扩增多态性（Ｒａｎｄｏｍ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＤＮＡ，ＲＡＰＤ）技术对斯氏肺吸虫和华支睾吸虫的基因组多态ＤＮＡ进行扩增，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后分析结果。结果 引物Ｐ１和Ｐ２扩增产生斯氏肺吸虫和华支睾吸虫的成虫ＤＮＡ图谱，而Ｐ３引物未扩增出产物。斯氏肺吸虫和华支睾吸虫的Ｐ１     

单克隆抗体双夹心ELISA检测血吸虫循环抗原对抗血吸虫药疗效考核的价值

应用日本血吸虫抗３１／３２ｋＤ（１Ｄ＝０．９９２１ｕ）单克隆抗体双夹心酶联免疫吸附试验（双夹心ＥＬＩＳＡ）检测血吸虫循环抗原，用于城市急性血吸虫病经吡喹酮治疗５年后无再次感染患者的疗效考核，阳性率为１２．２０％。与快速法ＥＬＩＳＡ检测循环抗原的符合率为９６．３４％。与常用检测抗体的ＩＨＡ、ＥＬＩＳＡ法平行对照，阳性率基本一致。与改进的粪便孵化法比较，两法的符合率为８５．３６％。无疫水接触史健康人未见阳性反应。对肝病患者无交叉反应。结果显示双夹心ＥＬＩＳＡ法检测循环抗原敏感性高，特异性强，具有良好的抗血吸虫药物疗效考核价值。