肝细胞癌中ZHX2基因启动子甲基化增强AFP的表达

目的探讨肝细胞癌中锌指和同源框2(ZHX2)基因启动子甲基化表达与血清AFP水平的关系,分析AFP基因的表达调控机制。方法以0.5、1.0及5.0μmol/L甲基化抑制剂5-氮杂脱氧胞苷(5-Aza-Dc)培养人肝癌细胞株HepG2,采用RT-PCR及Western blot法检测用药前后ZHX2及AFP基因的mRNA和蛋白表达差异。运用甲基化特异性PCR检测肝细胞癌组织38例中ZHX2基因启动子表达情况,分析其与血清AFP水平的关系。结果 HepG2可见少量ZHX2 mRNA扩增,未检测到ZHX2蛋白表达,而AFP却高表达;应用终浓度为1.0μmol/L和5.0μmol/L的5-Aza-Dc处理肝癌细胞6 d,ZHX2表达明显增加,而AFP却表达下调。血清AFP高于25 ng/mL肝细胞癌组织中ZHX2启动子甲基化51.6%,明显高于血清AFP小于25 ng/mL组(P<0.05)。结论 ZHX2基因启动子甲基化与AFP基因的表达有关。     

新疆维吾尔族妇女宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中FHIT、P16~(INK4a)、RARβ蛋白的表达及意义

目的探讨脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)、P16INK4a与视黄酸受体β(retinoic acid receptor-beta,RARβ)蛋白在新疆维吾尔族妇女宫颈上皮内瘤变(cervical intra-epithelial neoplasia,CIN)及宫颈癌中的表达及其意义。方法采用免疫组化链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶链接(SP)法检测20例慢性宫颈INK4a炎、30例CIN(CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ各10例)以及40例浸润性宫颈鳞癌组织标本中FHIT、P16INK4a及RARβ蛋白的表达。结果(1)FHIT蛋白阳性表达率依次为慢性宫颈炎(90.00%)CIN(66.67%)浸润性宫颈鳞癌INK4a(27.50%)(P=0.000);P16和RARβ蛋白阳性表达率依次为浸润性宫颈鳞癌(82.50%;90.00%)CIN(46.67%;53.33%)慢性宫颈炎(0.00%;10.00%)(P=0.000;P=0.000)。(2)在宫颈各组织中,FHIT蛋白INK4a与P16INK4a蛋白表达呈负相关(r=-0.384,P=0.000);FHIT蛋白与RARβ蛋白表达呈负相关(r=-0.291,P=0.006);P16INK4a蛋白与RARβ蛋白表达呈正相关(r=0.445,P=0.000)。结论抑癌基因FHIT表达缺失与P16INK4a和RARβ过度表达与宫颈癌的发生发展密切相关,并且FHIT、P16INK4a、RARβ具有协同作用。FHIT蛋白与P16INK4a蛋白和RARβ蛋白的联合检测可作为宫颈癌早期诊断和宫颈癌进展的分子指标。     

肝细胞癌组织中IMP3与IGF2表达对预后评估的临床病理学意义

目的 探讨癌基因胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白3(insulin-like growth factor 2 mRNA binding protein 3,IMP3)和胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor 2,IGF2)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中表达的预后意义.方法 采用免疫组化SP法对92例HCC及其癌旁良性组织中IMP3及IGF2的表达进行检测,结合临床生物学指标及生存时间进行统计学分析.结果 HCC组织中IMP3和IGF2阳性率均明显高于癌旁组织(P均<0.01);IMP3表达与组织分化程度、是否转移、ACJJ分期、门脉癌栓及Ki-67表达均密切相关;IGF2的表达与肿瘤组织学分级和Ki-67蛋白表达相关(P均<0.05).IMP3与IGF2表达呈显著正相关(rs=0.265,P<0.05).生存分析显示,IMP3阳性表达的患者总生存期明显低于不表达的患者(Log-rank=16.854,P=0.000);IMP3和IGF2同时表达与二者单独表达的患者生存期差异有统计学意义(P=0.000和0.008).进一步分析证明IMP3是HCC生存期的独立影响因素(HR:0.473,95%CI:0.270～0.829,P=0.009).结论 联合检测HCC组织中IMP3和IGF2的表达对其诊断及预后有一定的价值,二者可能成为HCC生物标记中的新指标.     

肝细胞癌中Wnt-5a、Ror2蛋白的表达及临床意义

目的探讨肝细胞癌(HCC)中Wnt-5a、Ror2蛋白表达的关系及临床意义。方法采用免疫组化SP法检测Wnt-5a及Ror2在62例HCC癌与癌旁组织中的表达。结果对比于癌旁组织,Wnt-5a在85.49%的HCC癌组织内表达明显减低或缺失(P0.001);Ror2在80.65%的HCC癌组织内表达明显减低或缺失(P0.001),两者表达呈正相关性(r=0.462,P=0.04);并且均相关于高的肿瘤分期(P0.05)、高的AFP水平(P0.05)以及高的Ki-67指数(P0.05)。结论 Wnt-5a和Ror2在HCC中可能发挥抑癌基因样作用,其减低或缺失表达可能与HCC的发生、发展有关。     

肝细胞癌中TLR3介导的间质微环境细胞改变

目的探讨肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中Toll样受体3(Toll-like receptor 3,TLR3)的表达及其与临床病理特征、间质微环境的相关性。方法采用专利技术(CN101319971B)制备人体HCC组织芯片,应用免疫组化SP法染色检测HCC细胞中TLR3的表达,同时检测间质中各项指标。采用多因素相关分析HCC中TLR3表达与其临床病理特征及间质微环境的关系。结果 HCC中TLR3的阳性率为71.57%,与癌脉管侵犯(P=0.001)、肝硬化背景(P=0.007)、Edmondson分级(P=0.001)、TNM分期(P=0.000)呈负相关;与癌乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBs Ag)阳性呈正相关(P=0.000);与间质浸润的T细胞(P=0.002)和自然杀伤(natural killer,NK)细胞(P=0.000)呈正相关;与癌相关肌纤维母细胞(carcinoma-associated fibroblasts,CAFs)(P=0.000)和微血管密度(microvessel density,MVD)(P=0.000)呈负相关。结论TLR3对HCC间质微环境具有十分重要的影响。     

Snail在乳腺癌中的表达及其与上皮-间质转化的关系

目的研究Snail蛋白在乳腺癌组织中的表达,并探讨Snail蛋白及其调控的上皮-间质转化(EMT)与乳腺癌恶性生物学行为的相关性。方法采用免疫组织化学SP法检测20例正常乳腺组织、60例乳腺癌组织(非特殊性浸润性导管癌)及其中20例乳腺癌癌旁组织中Snail蛋白、上皮标记物E-cadherin蛋白、间质标记物Vimentin蛋白的表达;分析乳腺癌组织中3种蛋白表达强度的相关性,以及Snail蛋白表达与乳腺癌淋巴结转移的关系。结果①在正常乳腺组织、乳腺癌癌旁组织、乳腺癌组织中,Snail蛋白表达逐渐递增,其阳性率分别为0、30%、53.3%;Vimentin蛋白表达亦逐渐递增,其阳性率分别为0、40%、63.3%;E-cadherin蛋白表达则逐渐减少,其阳性率分别为100%、75%、56.7%;正常乳腺组织、乳腺癌癌旁组织与乳腺癌组织间3种蛋白的表达差异均具有统计学意义(均P0.05)。②Snail蛋白表达与Vimentin蛋白表达呈显著正相关(r=0.536、P=0.000);Snail蛋白表达与E-cadherin蛋白表达呈负相关(r=-0.413、P=0.001);3种组织中,E-cadherin和Vimentin蛋白两者的表达差异呈显著负相关(r=-0.526、P=0.000)。③Snail蛋白的表达与乳腺癌腋窝淋巴结转移呈正相关,差异有统计学意义(r=0.600、P=0.000)。结论锌指转录因子Snail可能通过参与调控EMT过程从而在乳腺癌的发生和侵袭过程中发挥重要作用,并推动乳腺癌的远处淋巴结转移。     

Expression of PEG10 and SIAH2 in hepatocellular carcinoma and their clinical implications

目的 探讨遗传印记基因PEG10(paternally expressed gene 10,PEG10)与泛素连接酶SIAH2(seven in absentia homologs 2,SIAH2)在原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组化SP法检测50例HCC和相应癌旁组织中PEG10、SIAH2蛋白的表达.结果 (1)PEG10和SIAH2在肝癌组织中的阳性率分别为84%和78%,高于相应癌旁组织中的阳性率8%和14%,差异有统计学意义(P＜0.01).(2)PEG10和SIAH2表达与肿瘤TNM分期有相关性(P＜0.01),但与患者的年龄、性别、肿瘤大小、血清HbsAg、AFP水平、是否伴肝硬化无相关性(P>0.05).(3)HCC中PEG10、SIAH2蛋白表达呈正相关(r=0.42,P＜0.01).结论 PEG10、SIAH2表达与HCC的发生、发展具有明显相关性.     

甲胎蛋白阴性肝细胞癌中埃兹蛋白(ezrin)和SIX1蛋白表达水平的临床病理意义

目的探讨埃兹蛋白(ezrin)和SIX1蛋白过表达在甲胎蛋白(AFP)阴性肝细胞肝癌(HCC)中的临床病理学意义。方法应用免疫组织化学En Vision法检测ezrin和SIX1蛋白在50例AFP阴性的HCC组织及其相应的癌旁肝组织中的表达水平,χ~2检验和Spearman等级相关分析检验两者表达的相关性。结果在50例AFP阴性的HCC组织中,ezrin和SIX1蛋白的阳性率分别为68.0%(34/50)和60.0%(30/50),明显高于癌旁肝组织的阳性率,分别为38.0%(19/50)和26.0%(13/50)。χ~2检验显示ezrin和SIX1蛋白表达与肿瘤的TNM分期以及脉管浸润相关。Spearman等级相关分析显示ezrin和SIX1在AFP阴性HCC组织中的表达呈显著正相关。结论 Ezrin和SIX1蛋白在AFP阴性HCC组织中均高表达,两者的表达与肿瘤的TNM分期以及脉管浸润相关,并且两者在肝癌中的表达具有相关性。     

肿瘤相关基因在肝细胞癌及癌旁正常肝组织中表达

目的　探讨肿瘤相关基因dek、cyclinD1、胰岛素样生长因子Ⅱ (IGF Ⅱ )、GPC3、核糖体蛋白 0 (rpP0 )mRNA在肝细胞癌 (HCC)组织中及癌旁正常肝组织中的表达及其临床意义。方法　应用RT PCR方法检测 32例HCC组织及相应癌旁正常肝组织中dek、cyclinD1、IGF Ⅱ、GPC3和rpP0mRNA的表达情况。 结果　dek、cyclinD1、IGF Ⅱ、GPC3、rpP0mRNA在癌组织中阳性表达率为 78 1%、87 5 %、87 5 %、75 0 %和 81 3% ,在癌旁正常肝组织中阳性表达率为 15 6 %、4 0 6 %、 37 5 %、2 1 9%和 31 3% ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。dek、cyclinD1、IGF Ⅱ、GPC3、rpP0mRNA在高分化HCC组织中阳性率为89 0 %、6 6 7%、6 6 7%、6 6 7%和 77 8% ,在低分化HCC组织中阳性率为 73 9%、95 7%、95 7%、95 7%和 82 6 % ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。在AFP阴性的HCC中其阳性率分别 90 0 %、80 0 %、90 0 %、90 0 %和 90 0 % ,而AFP阳性的HCC这些基因mRNA的阳性率为 72 7%、86 3%、77 3%、90 9%和 6 8 2 % ,差异无显著性意义 (P >0 0 5 )。结论　dek、cyclinD1、IGF Ⅱ、GPC3、rpP0mRNA在HCC组织中呈高表达状态 ,即使是AFP阴性的HCC也呈高表达 ,因此它们可以作为诊断HCC的基因标志 ,而且联合应用时意义更大。这些基因在     

Syk基因对乳腺癌血管内皮生长因子-C表达的调控作用

目的 研究Syk基因对乳腺癌血管内皮生长因子(VEGF)-C表达的调控机制.方法 采用免疫组织化学(EnVision法)检测乳腺癌组织中Syk、NFκB与VEGF-C的蛋白表达情况,分析三者的相关性及与淋巴转移的关系.转染pcDNA3.1(-)-Syk至乳腺癌MDA-MB-231细胞,检测对VEGF-C和NFκB表达的影响.结果 在淋巴转移组中,Syk蛋白阳性率低于非淋巴转移组,VEGF-C与NFκB阳性率在淋巴转移组高于非淋巴转移组.Syk蛋白表达与NFκB(r=-0.448,P=0.002)、VEGF-C(r=-0.620,P=0.000)蛋白表达呈负相关,VEGF-C与NFκB呈正相关(r =0.310,P=0.036).转染pcDNA3.1(-)-Syk重组质粒的乳腺癌细胞中VEGF-C的mRNA及蛋白表达水平均低于空白对照组,细胞核NFκB蛋白表达低于空白对照组(均P＜0.05).结论 Syk基因与乳腺癌转移相关,可能是通过抑制NFκB的活性而下调VEGF-C的表达,从而抑制乳腺癌的淋巴转移.     

Decreased expression of zinc-alpha2-glycoprotein in hepatocellular carcinoma associates with poor prognosis

ABSTRACT: BACKGROUND: Zinc-alpha2-glycoprotein (AZGP1, ZAG) was recently demonstrated to be an important factor in tumor carcinogenesis. However, AZGP1 expression in hepatocellular carcinoma (HCC) and its significance remain largely unknown. METHODS: Quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR) was applied to determine mRNA level of AZGP1 in 20 paired fresh HCC tissues. Clinical and pathological data of 246 HCC patients were collected. Tissue-microarray-based immunohistochemistry (IHC) was performed to examine AZGP1 expression in HCC samples. Relationship between AZGP1 expression and clinicopathological features was analyzed by Chi-square test, Kaplan-Meier analysis and Cox proportional hazards regression model. RESULTS: AZGP1 expression was significantly lower in 80.0% (16/20) of tumorous tissues than that in the corresponding adjacent nontumorous liver tissues (P<0.001). Consistently, IHC data revealed that decreased expression of AZGP1 was present in 80.1% (197/246) of HCC patient tissues (P<0.001). Furthermore, AZGP1 expression in HCC significantly associated with several clinicopathological parameters, including serum AFP level (P=0.013), liver cirrhosis (P=0.002) and tumor differentiation (P=0.025). Moreover, HCC patients with high AZGP1 expression survived longer, with better overall survival (P=0.006) and disease-free survival (P=0.025). In addition, low AZGP1 expression associated with worse relapse-free survival (P=0.046) and distant metastatic progression-free survival (P=0.036). CONCLUSION: AZGP1 was downregulated in HCC and could be served as a promising prognostic marker for HCC patients.     

肝癌肝移植患者外周血中AFP mRNA和MXR7 mRNA的表达及其与预后的关系

目的： 探讨甲胎蛋白（ɑ-fetoprotein,AFP）mRNA和米托蒽醌抗性基因（Mitoxantrone-resistant 7，MXR7）mRNA作为游离癌细胞（isolated tumor cells,ITC）的标志物在肝癌肝移植患者外周血中的表达情况及其与术后肿瘤复发和转移的关系。方法: 以2002年4月至2003年12月期间的53例肝癌肝移植患者为对象，通过建立稳定可靠的实时荧光定量RT-PCR检测方法来定量检测肝癌患者外周血全细胞中AFP mRNA和MXR7 mRNA在整个肝移植术围手术期的表达和动态变化情况，并与术后肝癌复发和转移进行相关分析。 结果: 将研究对象分为肝癌移植组（53例）、晚期肝癌组（8例）、良性肝病组（26例）、正常对照组（10例），检测发现在肝移植术前，晚期肝癌组的AFP mRNA和MXR7 mRNA其表达率均达到100％,在肝癌移植组中表达率分别为57.7%和53.6%。2者均明显高于在良性肝病组（表达率为19.2%和0）和正常对照组（表达率均为0）（P<0.05）。同时在2者的阳性结果表达水平上，晚期肝癌组和肝癌组要明显高于良性肝病组和正常对照组(P<0.05)，前2者阳性结果定量水平达到1×10¹²copies/g RNA，是后2者定量水平的100－200倍。围手术期AFP mRNA和MXR7 mRNA的表达无论是表达率还是阳性结果表达水平，均以在术中的检测标本为最高，而术后1周为次之。术后出现2次以上的持续性的AFP mRNA和MXR7 mRNA的表达往往提示肝癌的复发和转移，较之移植术后没表达或一过性升高的病例，其差异有统计学意义（P<0.05），而术前和术中单次的AFP mRNA和MXR7 mRNA的表达与否则对术后肝癌复发和转移无明显影响（P>0.05）。结论: AFP mRNA和MXR7 mRNA可以作为肝癌ITC细胞的标志物，具有较好的特异性。术后血全细胞检测出现2次以上的持续性的AFP mRNA和MXR7 mRNA的表达可以有效预测肝癌肝移植术后肿瘤复发和转移。     

结直肠癌中ZHX2蛋白表达的检测及其临床病理意义

目的检测结直肠癌中ZHX2蛋白的表达情况,探讨ZHX2与结直肠癌的关系。方法利用免疫组化法分别检测73例结直肠癌组织及其对应的癌旁正常组织中的ZHX2蛋白的表达情况。结果 73例结直肠癌组织中ZHX2蛋白的阳性率为82.2%(60/73),癌旁正常组织中ZHX2蛋白的阳性率为94.5%(69/73),差异具有统计学意义(P<0.05)。在结直肠癌组织中,ZHX2蛋白的阳性表达与肿瘤的发生部位及分化程度有关(P<0.05),与性别、年龄、肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移及Dukes分期无关(P>0.05)。ZHX2(+)组患者的生存时间长于ZHX2(-)组(P<0.05)。结论 ZHX2作为一种转录抑制因子,可能参与结直肠癌的发生与演进,并有助于患者预后的判断。     

Glypican-3在原发性肝细胞癌中的表达及其对预后的影响

目的:探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)在原发性肝细胞癌(HCC)中的表达及其临床意义。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学方法检测了59例HCC组织及其癌旁组织、10例肝内胆管细胞癌组织、11例肝硬化肝组织、14例正常肝组织(肝血管瘤旁)中GPC3的表达。应用Kap lan-M e ier法进行生存分析;Cox比例风险回归模型进行患者术后无瘤生存的独立危险因素分析。结果:GPC3 mRNA在HCC组织中的阳性率为83.1%(49/59),明显高于癌旁组织的35.6%(21/59)(2=27.53,P0.01)。GPC3蛋白在HCC中的阳性率为78.0%(46/59),也明显高于在癌旁组织的阳性率32.2%(19/59)(2=24.97,P0.01)。而GPC3在肝内胆管细胞癌(ICC)、肝硬化和正常肝组织中不表达。Kap lan-M e ier生存分析显示在HCC组织中GPC3(+)组病人的1年无瘤生存率明显低于GPC3(-)组(33.6%vs72.7%,P0.05);癌旁组织GPC3(+)组病人的1年无瘤生存率也低于GPC3(-)组(23.5%vs40.1%,P0.05);随着GPC3在HCC组织中表达强度的增加,患者的无瘤生存率也明显降低。Cox风险回归模型分析结果显示,肿瘤AFP阳性[优势比(OR)]=0.372,95%置信区间(CI):0.140-0.900,P0.05]、肿瘤大小(OR=5.215,95%C:I 1.737-15.656,P0.01)、癌旁组织GPC3表达(OR=0.226,95%CI:0.085-0.599,P0.01)、肿瘤GPC3表达的强度(OR=1.946,95%C:I 1.080-3.507,P0.05)是影响患者术后无瘤生存率的独立危险因素。结论:GPC3在肝细胞癌组织中高表达,而在肝内胆管细胞癌组织、肝硬化组织和正常肝组织不表达。癌旁组织GPC3表达、肿瘤GPC3表达的强度是影响HCC患者术后无瘤生存率的独立危险因素;但对患者1年总体生存率无明显影响。     

CUEDC2在肝细胞癌组织中的表达及其临床预后的意义

目的:检测含CUE结构域蛋白2(CUEDC2)在肝细胞癌组织中的表达,探讨其与临床预后的关系。方法:选取具有完整临床及预后资料的186例手术切除肝细胞癌组织的石蜡组织标本,采用免疫组化技术检测CUEDC2的表达,并结合肝癌临床病理因素及预后进行分析。结果:CUEDC2在85.5%(159/186)的肝癌组织中有表达,其中低表达为52.2%(97/186),高表达为47.8%(89/186);CUEDC2的表达状态与血清甲胎蛋白(AFP)水平、肿瘤大小、肿瘤数目、肝癌分化程度和TNM分期有关(P0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示CUEDC2高表达的患者术后总生存及无复发生存期较低表达者显著缩短;多因素Cox回归分析显示CUEDC2的表达状态、血清AFP和肿瘤数目是影响肝癌患者术后无复发生存(RFS)及总生存期(OS)的独立危险因素。结论:CUEDC2在多数肝癌组织中有表达,与肿瘤的生长、分化及预后有关;CUEDC2可以作为一个有价值的肝癌预后预测的新指标。     

转录抑制因子ZHX2对AFP启动子的抑制作用

目的：探讨转录抑制因子ZHX2对人甲胎蛋白（AFP）启动子的抑制作用。方法PCR扩增人ZHX2基因，构建ZHX2与绿色荧光蛋白和HA-tag融合表达载体pEGFP-ZHX2、pcDNA-ZHX2-HA，共转染后通过荧光显微镜及Western blot检测融合基因的表达。扩增人AFP核心启动子269bp插入pGl3-Basic，构建报告质粒phAF269。将pcDNA-ZHX2-HA和phAF269共转染HepG2细胞。48h后裂解细胞，双荧光检测分析ZHX2对AFP启动子的抑制作用。结果荧光显微镜及westem blot检测证实pEGFP-ZHX2和pcDNA-ZHX2-HA可在体外有效表达ZHX2融合蛋白，双荧光实验表明报告质粒phAF269具有AFP启动子活性，且pcDNA-ZHX2-HA与phAF269共转染HepG2后可显著抑制AFP启动子的转录作用，此抑制作用具有剂量依赖性。结论：成功构建两种新型转录抑制因子ZHX2融合表达载体，并证实其对人AFP启动子的抑制作用，为进一步探讨肝癌发生中AFP表达调控机制及提高AFP介导的靶向肿瘤基因治疗提供基础资料。     

Effects of IFN-alpha on alpha-fetoprotein expressions in hepatocellular carcinoma cells.

We investigated the effects of pegylated (PEG)-IFN-alpha2b on alpha-fetoprotein (AFP) expression as demonstrated by protein and mRNA levels in six human hepatocellular carcinoma (HCC) cell lines. The number of KIM-1 cells in culture with PEG-IFN-alpha2b decreased between 24 amd 240 h, whereas the levels of intracellular and secreted AFP per cellular protein increased (except at 192 h), with levels 1.9-fold and 2.9-fold higher at maximum, respectively, than cells without PEG-IFN-alpha2b (control). The mRNA level increased between 72 and 192 h, when the level was 3-fold higher than that of the control. In the 72-h culture with 40-5000 IU/mL PEG-IFN-alpha2b, there were dose-dependent increases in AFP protein and mRNA expression and dose-dependent decrease in cell number resulting from apoptosis and blockage of the cell cycle at the S-phase. The rate of fucosylated AFP in the cell lysate decreased in a dose-dependent and time-dependent manner. In the PEG-IFN-alpha2b culture of the other five HCC cell lines, cell proliferation was suppressed, but the expressions of AFP protein and mRNA increased in only two cell lines, and suppression of cell proliferation was not related to the increase in AFP expressions. Our findings demonstrated that PEG-IFN-alpha2b induces an increase in AFP expression at both the protein and mRNA levels.