生物膜铜绿假单胞菌耐药机制

生物膜与浮游菌相比,表现出更高的抗生素耐药性,其耐药机制复杂,是多因素综合作用的结果,单一机制不能全面解释生物膜耐药。本文就近期研究结果中与生物膜铜绿假单胞菌耐药有关的机制进行综述。     

生物膜形成对铜绿假单胞菌产不同种β-内酰胺酶的影响

mRNA的相对表达量为2.937±0.164,经环丙沙星、头孢他啶、亚胺培南诱导后CARB mRNA的相对表达量分别为9.528±0.050、10.844±0.062和21.900±0.087.结论 生物膜形成可影响铜绿假单胞菌产酶的能力;生物膜形成后,抗菌药物诱导后的铜绿假单胞菌TEM mRNA相对表达量的增幅高于CARBmRNA,证实生物膜形成对铜绿假单胞菌分泌β-内酰胺酶可产生不同的影响.     

铜绿假单胞菌生物膜形成过程观察

目的观察铜绿假单胞菌实验室保存株与临床分离的菌株体外细菌生物膜的形成过程。方法通过FITC标记的刀豆球蛋白(FITC-ConA)和碘化丙啶(PI),结合激光共聚焦显微镜(confocal laser scanning microscopy,CLSM)摄取生物膜形成阶段不同层面的图片。结果培养3 d后可观测到生物膜中的多糖开始形成,培养第7 d,多糖基质逐渐增多,细菌趋向化聚集,膜结构致密,其内部存在相互交通的间隙及孔道;CLSM结合FITC-ConA和PI标记,实现了对铜绿假单胞菌菌株生物膜动态形成过程的观察。结论铜绿假单胞菌生物膜可在体外支持物上形成并成熟;临床新分离株较实验室保存株更易形成生物膜。     

铜绿假单胞菌生物膜的形成及克拉霉素对其的抑制作用

近年来国外报道 ,慢性难治性肺部感染的形成与体内病原菌形成生物膜有关 ,在这类慢性肺部感染 (支气管扩张等 )患者的呼吸道分泌物中分离出的最常见细菌是铜绿假单胞菌。临床上发现 ,即使反复应用体外药敏实验证实有效的抗菌药物治疗 ,仍不能彻底清除铜绿假单胞菌 ,导致感染迁延难愈。进一步研究表明 ,铜绿假单胞菌可借助其表面分泌的黏性多糖蛋白复合物聚集在一起并黏附于支气管黏膜表面 ,形成所谓的生物膜。这层生物膜阻碍了抗菌药物的渗入 ,使得生物膜中的铜绿假单胞菌得以生存[1] 。据报道大环内酯类抗生素有破坏生物膜的作用[2 ] ,本研…     

铜绿假单胞菌生物膜对喹诺酮类抗生素耐药作用研究

目的观察喹诺酮类抗生素对铜绿假单胞菌及其形成细菌生物膜的影响,探讨细菌生物膜在细菌耐药中的作用。方法以铜绿假单胞菌及其形成的细菌生物膜为研究对象,分别设A、B、C、D、E 5组,其中A组为喹诺酮类抗生素作用于成熟的细菌生物膜,B组为其细菌对照组,C组为喹诺酮类抗生素作用于未成熟的细菌生物膜,D组为C组的细菌对照组,E组细菌生物膜未做任何处理。培养完成后对培养物进行处理,分别接种于普通琼脂培养基上培养,计数A、B、C、D、E 5组形成的菌落数,进行统计学分析。结果对A、B、C、D、E各组之间菌落计数的统计学分析显示,A组菌落数与B、D、E组比较,差异具有显著性(P<0.05);B组与C、D、E组比较,差异具有显著性(P<0.05);E组菌落数与C、D组比较,差异具有显著性(P<0.05)。结论铜绿假单胞菌生物膜的形成是细菌耐药性产生的重要因素,这为深入研究细菌生物膜的耐药机制奠定了基础。     

铜绿假单胞菌侵袭力的研究进展

铜绿假单胞菌极强的侵袭力是其能在院内感染致病菌中占主导地位的原因之一.侵袭力的测定方法主要是侵袭实验和单层细胞渗透法.侵袭力内容很广,包括黏附素(如菌毛、鞭毛、外膜蛋白等)和各种侵袭机制(如荚膜、侵袭性酶类、生物膜形成等).各个方面联系密切,其相关研究为抗菌治疗提供了新的思路.     

铜绿假单胞菌肺炎的最新进展

铜绿假单胞菌属于条件致病菌,可引起社区获得性肺炎、医院获得性肺炎(特别是呼吸机相关性肺炎)及囊性纤维化患者中的下呼吸道感染,具有较高的死亡率。本文将对铜绿假单胞菌肺炎主要类型、发病机理、微生物学诊断、抗生素治疗及预防的最新进展进行综述。     

铜绿假单胞菌弹性蛋白酶的高效表创

目的 提取具有弹性蛋白酶活性的铜绿假单胞菌(绿脓杆菌)临床分离株的染色体DNA，PCR扩增弹性蛋白酶基因成熟蛋白编码区，A—T克隆于质粒pMD 18-T载体中，阳性重组子经酶切后连接至相应线性化的表达型载体pQE一31中，转化大肠杆菌JM109感受态，筛选高效表达株，表达产物经SDS—PAGE初步鉴定。所克隆的基因在大肠杆菌中获得高效表达，表达产物经重组质粒测序初步确定为铜绿假单胞菌弹性蛋白酶。本研究为该表达蛋白的纯化、复性和酶动力学研究奠定了基础。     

2002～2007年铜绿假单胞菌对美洛培南的耐药情况分析

2002～2007年,从本院ICU住院感染患者中共检出致病菌8337株,其中铜绿假单胞菌2151株（占25．80％）;2002～2007年各年度铜绿假单胞菌对美洛堵南的耐药率分别为11．22％、1I．49％、12．88％、14．46％、15．85％、17．94％;对美洛培南敏感的铜绿假单胞菌,美洛培南抑制50％受试菌的最低抑菌浓度（MIC50）在2002—2007年各年度分别为（1．26±0．24）、（1．41±0．24）、（1．73±0．29）、（1．94±0．28）、（2．26±0．32）、（2．56±0．35）μg／ml,抑制90％受试菌的最低抑菌浓度（MIC90）分别为（2．41±0．36）、（2．55±0．37）、（2．96±0．32）、（3．25±0．37）、（3．74±0．45）、（4．12±0．48）μg／ml。认为2002—2007年本院ICU感染患者中感染的铜绿假单胞菌对美洛培南的耐药率逐年上升,即使对美洛培南敏感的铜绿假单胞菌,美洛培南的MIC50及MIC50也逐年上升。     

铜绿假单胞菌耐药机制的研究

铜绿假单胞菌是主要的院内感染条件致病菌,常常感染免疫力低下的患者,同时对多种抗菌药物耐药,多重耐药性足导致其治疗效果不理想的重要原因.主动外排系统及生物被膜的形成是铜绿假单胞菌耐药的主要机制,本文对铜绿假单胞菌5种耐药机制的最新研究进展进行了综述.     

红霉素对铜绿假单胞菌蹭行运动的抑制

目的体外培养铜绿假单胞菌（pseudomonasaeruginosa，PA），观察低浓度红霉素对铜绿假单胞菌蹭行运动（twitchingmotility）的影响。方法将铜绿假单胞菌ATCC1244菌株接种于3组不同浓度红霉素（2．5mg／L、0.5mg／L、0.25ms／L）的细菌培养基中，同时接种于未加红霉素的对照培养基中，采用肉眼观察、免疫荧光显微镜检查、免疫印迹实验、点杂交实验、电镜观察等方法观察铜绿假单胞菌蹭行运动的变化及鉴别其蹭行运动的分子组成。结果经过18—36h的孵育，LB平板上不同浓度的红霉素对PA蹭行运动有抑制作用，细菌光晕（halation）直径与药物浓度呈反比；18h时细菌的平均光晕直径2．5mg／L组为（0.48±0．14）cm，0．5mg／L组为（0．64±0．20）cm，0．25mg／L组为（0.95±0.18）cm，对照组为（1．40±0．21）cm，组间比较差异有统计学意义（F=123．15，P〈0．01）；24h时2．5mg／L组为（0．67±0．12）cm，0．5mg／L组为（0．82±0.23）cm，0．25mg／L组为（1．18±0．24）cm，对照组为（1．58±0．28）cm，组间比较差异有统计学意义（F=76．37，P〈0．01）；36h时2．5mg／L组为（0.91±0．17）cm，0．5mg／L组为（1．04±0．32）cm，0．25mg／L组为（1．49±0．31）cm，对照组为（2．07±0．38）cm，组间比较差异有统计学意义（F=54．75，P〈0．01）。免疫荧光显微镜观察结果可见细菌菌体一端呈簇状突起，为Ⅳ型菌毛的位置所在，簇状突起的多少与药物浓度呈反比。免疫印迹实验结果显示，随着药物浓度的减少，Ⅳ型菌毛的主要成分PilA蛋白表达增加。点杂交实验结果显示在蹭行运动中起作用的PilA蛋白主要表达在光晕的最外周，但组间未见明显区别。电镜下可见红霉素作用后PA菌体一端的Ⅳ型菌毛较对照组减少，部分脱离菌体。结论低浓度红霉素对PA的蹭行运动有抑制作用，且与红霉素浓度呈正比。     

不同pH肝浸汤培养基培养阴道毛滴虫的观察

目的 观察不同pH值对阴道毛滴虫生长发育的影响，为实验室培养或临床诊断培养阴道毛滴虫提供参考。方法 配制pH值分别为2、2．5、3、3．5、4、4．5、5、5．5、6、6．5、7、7．5、8、8．5的肝浸汤培养基，分别接种相同数量的阴道毛滴虫，37℃恒温培养48h，用血球计数板计数滴虫数量。以pH值为横坐标，滴虫密度为纵坐标作曲线图，找出培养滴虫的最适pH值范围。同时，连续观察各pH值管滴虫生长情况，直至滴虫死亡，记录各pH值培养基中滴虫的最长存活时间。结果 阴道毛滴虫能在pH3～8的肝浸汤培养基中生长繁殖，最适pH范围为5～7．5，最适pH值是6。在pH4和pH8的培养基中连续不转代培养时，滴虫存活时间最长，分别达180h和189h。结论 肝浸汤培养基pH值为6时，滴虫生长良好，运动活泼，繁殖速度快，适用于快速繁殖滴虫，提高滴虫收获量；在pH4和pH8时，滴虫生长缓慢，但存活时间显著延长，适合保种培养。     

Some storage characteristics of platelet concentrates contaminated with pseudomonas aeruginosa

The present work investigates the effects of contamination with Pseudomonas aeruginosa on some properties of platelet concentrates, i.e. the ability to transmit light, swirling and the degree of platelet activation and cell lysis. 20 pairs of platelet concentrates were studied over a 7 day period. On day 1, one of the concentrates was inoculated with Pseudomonas aeruginosa, while the other served as an identical non-contaminated control. In the contaminated concentrates, swirling and release of platelet factor 4 and lactate dehydrogenase were analysed on day 1, day 2 and day 3; bacterial counts were performed on day 2 and day 3, and on day 7 all these variables were determined in both concentrates. After the 7 day storage period, bacterial growth was found in 13/16 of the contaminated platelet concentrates; all these preparations displayed transmission changes and at least one deviating biochemical parameter. On day 3 all contaminated concentrates had unimpaired swirling, 15/20 had bacterial growth and 10/20 light transmission changes. The study demonstrates that light transmission monitoring on day 3 offers significant advantage (p < 0.05) compared to the visual estimation of swirling. The results also show that the optical method often fails to identify contaminated concentrates during early storage.     

医院感染铜绿假单胞菌的耐药性调查

目的：探讨医院感染铜绿假单胞菌（PAE）的耐药现状,为临床医师合理使用抗生素提供科学依据。方法：严格按照《全国临床检验操作规程》进行细菌培养和鉴定菌株;采用KB法进行药敏试验。结果：212株PAE中,泛耐药菌株检出率为14.6%。药敏试验结果表明：PAE对亚胺培南、美罗培南、哌啦西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦耐药率最低（14.2%～21.7%）,对其他常用抗菌药物的耐药率均〉40%。结论：我院铜绿假单胞菌耐药性已非常严重,应加强合理使用抗生素管理工作,遏制多药耐药细菌导致的医院感染暴发流行。     

美罗培南对PAO1及lasR／rh1R基因缺陷型铜绿假单胞菌生物被膜的作用

目的 研究美罗培南对铜绿假单胞菌PA01野生型及其lasR／rhlR基因缺陷型菌株生物被膜的作用。方法 采用生理盐水一吸痰管系统进行铜绿假单胞菌PA01野生型、PA01 lasR、PA01 rh1R基因缺陷型体外生物被膜培养7d，经26μg／ml美罗培南作用24h，扫描电子显微镜观察生物被膜的变化。结果 7d后PA01野生型和PA01 lasR、PA01 rhlR基因缺陷型都能形成生物被膜结构，美罗培南作用后，PA01野生型的生物被膜结构明显稀薄，而PA01 lasR、PA01rhlR基因缺陷型的生物被膜结构基本被破坏。结论 lasR，rhlR基因抑制美罗培南对P．a生物被膜内的敏感性。     

美罗培南对PAO1及lasR/rhlR基因缺陷型铜绿假单胞菌生物被膜的作用

目的研究美罗培南对铜绿假单胞菌PAO1野生型及其lasR/rhlR基因缺陷型菌株生物被膜的作用。方法采用生理盐水-吸痰管系统进行铜绿假单胞菌PAO1野生型、PAO1lasR、PAO1 rhlR基因缺陷型体外生物被膜培养7d,经26μg/ml美罗培南作用24h,扫描电子显微镜观察生物被膜的变化。结果7d后PAO1野生型和PAO1lasR、PAO1 rhlR基因缺陷型都能形成生物被膜结构,美罗培南作用后,PAO1野生型的生物被膜结构明显稀薄,而PAO1lasR、PAO1 rhlR基因缺陷型的生物被膜结构基本被破坏。结论lasR,rhlR基因抑制美罗培南对P.a生物被膜内的敏感性。     

肺结核病合并感染铜绿假单胞菌的药敏分析

目的调查分析铜绿假单胞菌对抗生素的耐药情况。方法采用法国生物梅里埃公司自动微生物鉴定仪,对360例培养有各类致病菌的患者中、分离出106例合并感染铜绿假单胞菌的肺结核患者进行鉴定及药物临床分析。其中15～50岁19例,51～88岁87例。结果铜绿假单胞菌的感染率29.4%,50岁以上的老年患者感染铜绿假单胞的机率明显高于50岁以下的患者.经统计学分析（P〈0.05）对复方新诺明、氨苄西林＋舒巴坦耐药率97.2%,庆大霉素42.5%,耐药较低的有妥布霉素25.5%,头孢他定23.6%,阿米卡星20%,美罗培南17%,亚胺培南14.2%。结论肺结核病患者由于长期服药,免疫功能低下,易产生抗药性,用药应重视。     

铜绿假单孢菌多发性肺脓肿1例并文献复习

目的探讨铜绿假单孢菌多发性肺脓肿的发病特点、诊断和治疗方法。方法结合本科收治的1例铜绿假单孢菌多发性肺脓肿患者的临床资料以及相关的文献资料对该病的发病特点、诊断和治疗方法进行综合分析。结果多发性肺脓肿多为血源性肺脓肿,病原体为铜绿假单孢菌者少见,诊断时需要与金葡菌等其它病原菌导致的肺脓肿相鉴别,治疗上应用抗菌药物需针对铜绿假单孢菌,并遵循敏感、联合、足量、足程的原则。结论多发性肺脓肿需注意鉴别诊断,治疗上应给予充分的抗感染和祛痰等治疗。