P300/CBP相关因子在BCa细胞DNA损伤修复与肿瘤干细胞干性维持中的作用

目的 探究P300/CBP相关因子(PCAF)在人膀胱癌(BCa)细胞DNA损伤修复与肿瘤干细胞干性维持中的作用。方法 利用Ad-PCAF RNAi转染人膀胱癌细胞系5637,荧光显微镜和Western blot检测转染效果,选择顺铂诱导膀胱癌细胞DNA损伤,MTS法检测损伤细胞的增殖活性,免疫荧光染色检测损伤细胞内PCAF与γ-H2AX的募集情况,细胞彗星实验分析顺铂诱导细胞DNA损伤的程度;从膀胱癌细胞中分选CD44⁺标记的肿瘤干细胞,Western blot检测Bca干细胞标志物67LR、OCT4及YAP1蛋白表达水平变化,细胞成球实验检测细胞干性变化。结果 Ad-PCAF RNAi转染5637细胞后,明显抑制了细胞中PCAF表达(P<0.05);在下调PCAF表达后,20、40、60、80、100 nmol/L的顺铂处理下5637细胞活性下降,增强了5637细胞对顺铂的敏感性,细胞内γ-H2AX焦点形成明显增加,细胞拖尾较长,拖尾细胞数目和尾距均增加(P<0.05);经分选得到CD44⁺比例为93%且67LR、OCT4及Y...     

CBP/P300介导的组蛋白H3K9乙酰化修饰对GATA4表达的影响

目的 明确GATA4在小鼠胚胎心脏发育过程中的时序表达,并阐明其组蛋白修饰调控机制.方法 选取胎龄11.5 d(E11.5)至新生0.5d胎鼠心脏,RT-PCR检测胎鼠心肌细胞中GATA4mRNA表达水平,CHIP-QPCR检测GATA4启动子区组蛋白H3K9ac水平及与CBP/P300的结合水平.用CBP30干预心肌祖细胞,RT-PCR检测心肌祖细胞在不同浓度CBP30(0.5、1、2、4μmol/L)干预不同时间点(6、12、24、36 h)后GATA4 mRNA表达水平,CHIP-QPCR检测心肌祖细胞中GATA4启动子区组蛋白H3 K9 ac水平及与CBP/P300的结合水平.结果 ①小鼠胚胎心脏发育过程中GATA4表达量,E14.5明显高于E11.5(P ＜0.05);CHIP结果显示E14.5 GATA4启动子区组蛋白H3 K9 ac水平高于E11.5(P ＜0.05);E14.5与CBP/P300的结合水平亦高于E11.5(P ＜0.05).②CBP30干预心肌祖细胞后,GATA4表达量较对照组明显降低(P＜0.05).CHIP结果显示CBP30组GATA4启动子区组蛋白H3K9ac水平及与CBP/P300的结合水平较对照组显著降低(P＜0.05).结论 CBP/P300可通过介导组蛋白H3 K9乙酰化修饰参与调控GATA4在小鼠胚胎心脏发育过程中的时序表达.     

胃癌组织中COX-2与P300/CBP表达的研究

目的：研究胃癌组织中环氧化酶-2（COX-2）和核蛋白P300/CBP的表达变化,并探讨两者与胃癌生物学行为的关系。方法：用免疫组织化学S-P法检测不同分化程度胃癌组织和正常胃黏膜组织中COX-2和P300/CBP的表达变化。结果：（1）COX-2在胃癌组织的表达阳性率为37.8%,明显高于正常胃黏膜组织（0.0）,P<0.05;在低分化型胃癌阳性率为56.1%,明显高于高中分化型胃癌组织（8.0%）,P<0.05。（2）P300/CBP在胃癌组织的表达阳性率为10.6%,明显低于正常胃黏膜组织（72.2%）,P<0.05;在低分化型胃癌阳性率为4.9%,低于高中分化型胃癌组织（20.0%）,但P>0.05,差异无显著性。（3）COX-2表达阳性率在胃癌淋巴结转移组和远处转移组均显著高于非转移组,P<0.05;P300/CBP表达阳性率在胃癌的淋巴结转移组和远处转移组均低于非转移组,但P>0.05,差异无显著性。（4）胃癌组织中COX-2和P300/CBP表达呈现负相关倾向。结论：COX-2和P300/CBP在胃癌组织中表达异常,在胃癌的发生、发展中起重要作用,可作为辅助临床判断胃癌分化程度和转移生物学行为的有用指标。     

Twist在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨Twist在肝细胞癌中的表达意义及其与缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的关系。方法:采用免疫组化方法分别检测89例肝细胞癌组织中Twist和HIF-1α的表达状况,并分析其与临床病理间的关系。结果:癌组织Twist的阳性表达率为70.79%,明显高于癌旁组织19.10%(P<0.05)。Twist和HIF-1α的表达呈正相关(P<0.05),与HCC病理分级呈正相关(P<0.05)。结论:肝细胞癌组织与癌旁组织在Twist高表达率上存在明显差异,在肝细胞癌发生、发展过程中它可能与HIF-1α信号通路有直接作用,检测Twist表达对预后判断有一定帮助。     

RNA干扰HDAC7表达在肝细胞癌中的作用

目的：探讨组蛋白去乙酰化酶7（histone deacetylase 7,HDAC7）在肝细胞癌发生发展中的作用。 方法：体外构建pSUPER-HDAC7反转录病毒干扰质粒,分为pSUPERHDAC7RNAi+组（有效干扰）、pSUPERHDAC7RNAi-组（无效干扰）和对照组（pSUPER空载体）,转染人肝癌细胞HepG2和人微血管内皮细胞（human microvascular endothelial cell,HMEC-1）。Western免疫印迹检测HDAC7,p21,细胞周期素E(cyclin E)、基质金属蛋白酶10（matrix metalloproteinases 10, MMP10）、低氧诱导因子-1α（hypoxiainducible factor-1α,HIF-1α）蛋白表达,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐［3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT］、流式细胞术、体内裸鼠皮下种植、体外血管内皮细胞二维成管方法检测HDAC7表达的作用。结果：与pSUPERHDAC7RNAi-组和对照组相比,pSUPERHDAC7RNAi+组细胞HDAC7蛋白表达抑制,细胞生长抑制率和凋亡率明显增加,差异具有统计学意义（P＜0.05）;且HIF-1α和p21蛋白表达上调,cyclin E蛋白和MMP10表达下调,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论：HDAC7蛋白通过上调p21和HIF-1α蛋白表达、下调cyclin E及MMP10蛋白表达,介导肝癌细胞凋亡和血管成管。     

P53基因产物在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的 研究Ｐ５３基因产物在肝细胞癌中的表达及与肝细胞癌临床病理学特征的关系。方法 应用免疫组织化学技术,检测５０例肝癌及癌旁组织中Ｐ５３蛋白的表达。结果 肝癌突变型Ｐ５３蛋白表达阳性率为３２％（１６／５０）,癌旁组织均为阴性;有门静脉癌栓３１例,Ｐ５３蛋白阳性率为４５％（１４／３１）,而无门静脉癌栓１９例仅２例为阳性（Ｐ〈０．０５）;血清甲胎蛋白（ＡＦＰ）≥４００μｇ／Ｌ３６例,Ｐ５３蛋白阳性率为     

EP300/CBP在肿瘤中的研究现状和进展

EP300和CBP是组蛋白乙酰化转移酶,不仅具有乙酰化转移酶的活性,还能够与不同的转录因子结合形成不同的转录调控复合物,调控靶基因的表达。不同的突变位点和不同的转录因子的结合不 仅能够促进肿瘤的进展,也可以抑制肿瘤的恶性表型,和不同转录因子的结合还影响肿瘤细胞对药物的敏感性,其重要的溴结构域抑制剂也越来越成为药物研发的热点。     

p27^kipl在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的研究p27kip1在原发性肝细胞癌(HCC)中的表达及其临床意义.方法应用免疫组化S-P法检测40例HCC、15例肝硬化组织和5例正常肝组织石蜡标本中p27kip1的表达.结果 p27kip1蛋白在40例HCC中表达阳性率为32.5 %(13/40),在15例肝硬化组织中为60%(9/15),在5例正常肝组织中为80%(4/5).p27kip1蛋白在HCC中的表达与其在肝硬化组织和正常肝组织中的表达相比有显著性差异(P<0.05),p27kip1蛋白与HCC的组织学分级、组织学类型、淋巴结转移、远处转移和生存期均有统计学差异.结论 p27kip1与HCC的发生、发展可能均有密切联系,p27kip1蛋白在一定程度上可判断患者的病情进展和预后.     

p300/CBP、Smad4在非小细胞肺癌组织中的表达

目的：探讨p300/CBP、Smad4蛋白在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及其临床意义。方法：采用免疫组化SABC法检测60例NSCLC组织和20例正常肺组织中p300/CBP、Smad4的表达,分析两者相关性,并探讨其与NSCLC临床病理特征之间的关系。结果：p300/CBP在NSCLC组织中表达率为65.0%,过表达率为51.7%。Smad4在NSCLC组织中表达率为63.3%。p300/CBP和Smad4均与NSCLC淋巴结转移、分期等临床病理学参数有关（P〈0.05）。p300/CBP的表达还与NSCLC分化有关（P〈0.05）。p300/CBP、Smad4在NSCLC组织中阳性表达率呈中度负相关（P〈0.05）。结论：联合检测p300/CBP和Smad4的表达,在预测NSCLC的恶性生物学行为方面可能比单因素检测更具意义。     

干细胞转录因子Nanog在肝细胞癌中的表达及意义

对2007年8月至2011年4月在我院行手术治疗的40例肝细胞癌(HCC)患者肝癌组织及其中10例患者的HCC癌旁组织、10例肝血管瘤的肝组织及5例精原细胞瘤组织,采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法,行干细胞转录因子Nanog蛋白表达的检测.各类组织中Nanog蛋白表达的比例分别为42％( 17/40)、1/10、0/10和5/5;Nanog蛋白表达与性别、年龄、血清AFP水平、HBsAg阳性、肿瘤分化情况、Child分级及TNM分期,无明显相关性(P＞0.05).Nanog蛋白可作为HCC干细胞的表面标志物.     

肝细胞癌组织中P16、P21蛋白表达的临床病理意义

目的　探讨P16和P2 1蛋白表达与肝细胞癌 (HCC)临床病理的关系。方法　应用免疫组织化学SABC法检测 4 6例HCC癌及其配对 38例癌旁肝组织P16和P2 1蛋白的表达 ,结合临床病理资料分析其意义。结果　P16蛋白的表达缺失率 ,在HCC癌组织 (5 8.7% )明显高于癌旁肝组织 (34.2 % ) (P <0 .0 5 ) ;在EdmondsonⅢ～Ⅳ级HCC(78.9% )显著高于EdmondsonⅠ～Ⅱ级HCC(4 4 .4 % ) (P <0 .0 5 ) ,在直径 >3cmHCC(6 5 .0 % )显著高于直径≤ 3cm早期HCC(16 .7% ) (P <0 .0 1) ,但在有无门脉癌栓组间比较则无明显差别。P2 1蛋白的表达缺失率 ,在HCC(80 .4 % )也显著高于癌旁组织 (4 7.4 % ) (P <0 .0 1) ,但在不同分化程度、肿瘤大小及有无门脉癌栓形成组间比较则无统计学差别。结论　P16蛋白的表达缺失与HCC分化程度及侵袭进展密切相关。     

Expression of aspartyl beta-hydroxylase and its clinicopathological significance in hepatocellular carcinoma

The human aspartyl beta-hydroxylase is a highly conserved enzyme that hydroxylates epidermal growth factorlike domains in transformation-associated proteins. The aspartyl beta-hydroxylase gene is upregulated in many human malignancies. The purpose of this study was to investigate the expression of aspartyl beta-hydroxylase in hepatocellular carcinoma. Aspartyl beta-hydroxylase mRNA levels were measured in 161 hepatocellular carcinomas and paired nontumorous liver tissues by conventional and real-time RT-PCR. Immunohistochemical staining of aspartyl beta-hydroxylase was performed using EnVision Plus system. The results showed that aspartyl beta-hydroxylase was overexpressed in 150 of 161 hepatocellular carcinomas （93 %）, including 45 of 48 unifocal small hepatocellular carcinomas （94 % ）. Aspartyl beta-hydroxylase was highly expressed in hepatocellular carcinoma cells in contrast to its low level of expression in non-neoplastic liver cells. The protein expression level of aspartyl heta-hydroxylase in the hepatocellular carcinoma was parallel with the mRNA expression level （r=0. 659 4, P〈 0. 000 1）. A significantly higher tumor aspartyl beta-hydroxylase overexpression level was associated with the presence of intrahepatic metastasis and the progression of histological grades.     

精氨酸酶2在肝细胞癌组织中的表达及临床病理意义

目的 研究精氨酸酶2(Arg-2)在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及临床病理意义.方法 收集113例HCC组织及癌旁肝组织,其中29例伴有癌旁异型增生结节(DN),另取12例正常肝组织.运用蛋白质印迹分析法检测Arg-2蛋白在15例HCC组织、癌旁肝组织和12例正常肝组织中的表达;运用免疫组织化学方法检测Arg-2在113例HCC、癌旁肝组织及DN中的表达情况,并分析其与HCC各临床病理特征间的关系以及鉴别诊断价值.结果 蛋白质印迹分析结果显示,Arg-2在正常肝组织和癌旁肝组织中均不表达,在HCC组织中表达升高(P＜0.01);免疫组织化学结果显示,Arg-2阳性表达于肝癌细胞质内,阳性率为77.0％(87/113),其表达与HCC组织学分级相关(P＜0.05);Arg-2在低级别DN中无表达,在高级别DN中阳性表达率为14.3％(2/14),而在高分化HCC中阳性表达率为66.7％(8/12),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Arg 2在HCC中高表达,并且与HCC组织学分级相关,其可能参与HCC的发生、发展过程.检测Arg-2表达有助于鉴别高分化HCC与DN.     

肝细胞癌肿瘤血管生成及其临床病理意义

目的:探讨肝细胞癌肿瘤血管生成及其临床病理意义,以及组织缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)对肿瘤血管生成的调控作用。方法:对66例肝细胞癌患者手术切除的标本,应用免疫组化方法检测HIF-1α、VEGF的蛋白表达,根据CD34阳性的血管内皮细胞计数来测定肿瘤微血管密度(MVD)。结果:转移组HIF-1α、VEGF表达显著高于无转移组(P<0.01);转移组MVD值显著高于无转移组(P<0.01)。结论:HIF-1α及VEGF的表达可能相互作用并影响MVD,且均与肝癌的转移相关;肿瘤血管的形成受HIF-1α及VEGF的表达的影响与调控,可能是促进肝细胞肝癌进一步发展的重要调控因子。     

UbcH10在肝细胞癌中的表达及临床病理意义

目的研究UbcH10在肝细胞癌中的表达及其与临床病理特征的联系,初步探讨UbcH10在人肝细胞癌中的生物学意义。方法利用RT-PCR法检测正常肝脏细胞系及肝癌细胞系,和肝癌组织及对应的癌旁组织中UbcH10 mRNA的表达水平。分析UbcH10 mRNA的表达水平与肝癌临床病理特征之间的关系。利用免疫组化方法检测UbcH10蛋白在肝癌组织及其癌旁组织和正常肝脏组织中的表达。结果正常肝脏细胞系L02中UbcH10 mRNA表达水平显著低于肝癌细胞细胞系BEL-7402、Hep3B、HepG2、SMMC-7721中UbcH10 mRNA的表达水平(P<0.05)。肝癌组织中UbcH10 mRNA的表达水平显著高于其癌旁组织(P<0.05)。UbcH10 mRNA表达水平与肿瘤直径、组织病理分化程度、TNM分期、门静脉侵犯特临床病理特征显著相关(P<0.05)。肝癌组织中广泛表达UbcH10蛋白,总体阳性率为68.6%(48/70),癌旁组织和正常肝组织中较少见UbcH10蛋白阳性表达,其染色阳性率分别28.6%(20/70)和26.7%(8/30)。结论 UbcH10在肝癌细胞系及肝癌组织中高表达。UbcH10的高表达与肝癌的恶性临床病理特征相关,UbcH10可能成为潜在的分子标志物或治疗靶点。     

Expression and clinicopathological significance of miR-146a in hepatocellular carcinoma tissues

Background. Aberrant expression of microRNA-146a (miR-146a) has been found in several classes of cancers. However, its expression and clinicopathological contribution in hepatocellular carcinoma (HCC) has not been fully elucidated.

Objective. To explore the clinicopathological significance of the miR-146a level in HCC formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) tissue.

Methods. Eighty-five HCC samples and their para-cancerous normal liver tissues were collected. Total mRNA including miRNA was extracted, and miR-146a expression was determined using real-time RT-PCR. Furthermore, the correlation between the miR-146a expression and clinicopathological parameters was investigated.

Results. MicroRNA-146a expression in HCC tissues was lower compared with that in adjacent non-cancerous hepatic tissues. MicroRNA-146a expression was also related to clinical TNM stage, metastasis, portal vein tumor embolus, and number of tumor nodes.

Conclusions. Down-regulation of miR-146a is related to HCC carcinogenesis and deterioration of HCC. MicroRNA-146a may act as a suppressor miRNA of HCC, and it is therefore a potential prognostic biomarker for HCC patients.     

c-Met蛋白在甲状腺癌中的表达及其临床病理意义

目的 检测c-Met 蛋白在甲状腺癌及癌旁甲状腺组织中的表达,并分析c-Met 蛋白表达与甲状腺乳头状癌患者临床病理特征的关系。方法 采用免疫组织化学En Vision二步法检测81 例甲状腺癌组织及52 例癌旁甲状腺组织中c-Met 蛋白的表达。结果 甲状腺癌和癌旁甲状腺组织中c-Met 蛋白阳性率分别为46.9%（38/81）和7.7%（4/52）,两者比较有统计学差异（P＜0.01）。其中甲状腺乳头状癌中c-Met 蛋白阳性率50.8%（31/61）,髓样癌中阳性率60.0%（3/5）,均高于滤泡癌26.7%（4/15）,但均无统计学差异（均P＞0.05）。甲状腺乳头状癌c-Met蛋白表达与患者各项临床病理特征均无相关性（均P＞0.05）。结论 甲状腺癌中c-Met 表达增强,其高表达可能与甲状腺癌发生相关,有望成为抗甲状腺癌治疗的一个潜在靶点。     

肝细胞癌组织中泛素、P27蛋白表达及两者与临床病理分级的关系

目的研究人肝细胞癌组织中泛素（ubiquitin）蛋白表达对P27蛋白表达的影响,及两者与肝细胞癌不同病理分级的关系及临床意义。方法采用免疫组织化学法结合蛋白免疫印迹技术,分别检测人肝细胞癌组织不同病理分级中泛素、P27蛋白的表达情况,分析人肝细胞癌组织中泛素、P27蛋白的不同表达情况与临床病理分级之间的相关性。结果肝细胞癌组织中均有泛素、P27蛋白的表达,泛素蛋白定位于细胞核及细胞质,其表达量随分化程度降低反而增高（P〈0．05）,P27蛋白主要定位于细胞核,其表达量随分化程度降低而降低（P〈0．05）。泛素和P27蛋白的表达与病理分级有明显的相关性（P〈0．05）。结论泛素蛋白高表达在P27蛋白降解过程中发挥重要作用,并与肝细胞癌的恶性程度、疾病进展有密切的关系。     

瘦素和瘦素受体在肝癌中的表达与临床意义

摘要：目的探讨瘦素和瘦素受体在原发性肝细胞癌中的表达及其与肝癌各临床病理因素的关系。方法应用免疫组化
EnVison法检测81例原发性肝细胞癌患者组织中瘦素和瘦素受体的表达情况,分析其表达特点和患者的临床病理特征之
间的关系。结果瘦素和瘦素受体在肝癌中的过表达率分别为56.8%和35.8%。二者表达没有显著相关性(r=0.236, P=
0.034)。瘦素受体表达与肿瘤直径和TNM分期相关(P<0.05),与年龄、体质量指数、血清AFP值、HBsAg状态、肿瘤分化
程度、有无癌栓和有无肝硬化无关(P>0.05)。瘦素表达与上述各临床病理因素均无关(P>0.05)。结论瘦素受体的过表达
可能对原发性肝癌具有抑制作用,瘦素和瘦素受体相结合发挥功能时主要取决于瘦素受体的表达状态。     

胃癌组织中E-钙黏蛋白的表达及其临床意义

目的 观察E-钙黏蛋白(E-cad)在胃癌组织中的表达,分析其与临床病理因素及预后的关系,探讨其在胃癌发生、发展过程中的作用.方法 采用免疫组化S-P法检测68例胃癌手术标本及癌旁组织的E-cad表达强度,并分析其与患者临床病理因素的关系.结果 E-cad的表达强度与肿瘤浸润深度、分化程度、淋巴结转移、TNM分期及预后有关(P＜0.05或0.01),与肿瘤直径、患者年龄、性别无关(均P ＞0.05).结论 E-cad与胃癌的发生、浸润、转移有密切关系,其表达水平可作为胃癌病程及预后的指标之一.