B7-H3和Smad7蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义

目的探讨B7-H3和Smad7蛋白在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达水平及临床意义。方法收集82例ESCC组织标本及其癌旁正常组织石蜡标本,运用免疫组织化学方法检测B7-H3及Smad7蛋白的表达。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测组织中B7-H3 mRNA的表达水平。结果 B7-H3在ESCC组织中的表达阳性率高于癌旁正常组织,Smad7蛋白表达阳性率低于癌旁正常组织(P<0.05)。ESCC组织中B7-H3和Smad7蛋白的表达呈负相关(rs=-0.294,P=0.005)。ESCC组织中B7-H3蛋白表达与临床分期、分化程度有关(P<0.05),Smad7蛋白表达与分化程度有关(P<0.05)。结论 ESCC组织中B7-H3蛋白表达上调,Smad7蛋白表达下调。B7-H3和Smad7蛋白的异常表达可能参与了ESCC的发生发展过程。     

Runx3和Smad4在胃癌中的表达及其临床意义

目的：研究Runx3、Smad4蛋白在胃癌及正常胃黏膜组织中的表达差异及其与胃癌生物学行为的关系。方法：应用免疫组织化学法检测Runx3、Smad4蛋白在56例胃癌组织及40例癌旁组织中Runx3、Smad4的表达。结果（：1）胃癌组织中Runx3和Smad4阳性表达率分别为37.5%和44.6%,在癌旁组织分别为92.5%和87.5%。两种蛋白在胃癌组织表达差异具有显著性（P〈0.05）。Smad4的表达与胃癌不同分化程度、浸润深度、淋巴结转移及临床分期相关（P〈0.05）;Runx3的表达与胃癌不同分化程度、浸润深度、淋巴结转移（P〈0.05）相关,与临床分期无关（P〉0.05）。（2）Runx3与Smad4在胃癌组织中的表达呈正相关（P〈0.05,r=0.4264）。结论：Runx3、Smad4的低表达与胃癌的浸润和转移有密切的关系,在胃癌的发生、发展中起着不同程度的作用。     

Smad4及Smad7在胃癌组织中的表达研究

目的:研究Smad4及Smad7在不同胃组织中的表达及作用.方法:病理学证实的胃癌根治术切除的胃癌组织标本78例,胃癌旁组织78例,采用SP免疫组织化学染色技术,检测Smad4及Smad7在不同胃组织中的表达.结果:qDSmad4蛋白在胃癌旁组织中的阳性表达率为69.23%,在胃癌组织中的阳性表达率为44.87%(P<0.01);随着胃癌分化程度的降低其阳性表达率降低;有淋巴结转移者阳性表达率为23.25%,无淋巴结转移者的阳性表达率为71.43%,差别亦有统计学意义(P<0.01).②Smad7蛋白在胃癌旁组织中的阳性表达率为17.95%,在胃癌组织中的阳性表达率为89.74%(P<0.01);随着胃癌分化程度的降低其阳性表达率升高;有淋巴结转移者阳性表达率为97.67%,无淋巴结转移者的阳性表达率为80.00%,有淋巴结转移者阳性表达率高于无淋巴结转移者(p<0.05 .结论:①smad4蛋白在胃癌组织中低表达,与癌旁组织比较差异有统计学意义(P<0.01),其表达的阳性率与胃癌的分化程度及转移有关.②Smed7蛋白在胃癌组织中高表达,与癌旁组织比较差异有统计学意义(P〈0.01),其表达的阳性率与胃癌的分化程度及转移有关.     

Cx43、Smad1蛋白在胃癌中的表达及意义

目的：探讨Cx43、Smad1蛋白在胃癌中的表达及意义。方法：采用免疫组织化学染色法检测Cx43和Smad1在胃癌和癌旁组织中的表达情况。结果：胃癌组织Cx43的阳性表达率明显低于正常胃组织,Smad1的阳性表达率明显高于正常胃组织（P＜0.05）。胃癌组织Smad1、Cx43蛋白的表达与年龄、性别无关,与分化程度、淋巴结转移和浸润深度有关（P＜0.01,P＜0.05）。胃癌组织Cx43与Smad1的表达呈显著负相关（P＜0.01）。结论：Cx43、Smad1蛋白的异常表达可能在胃癌的发生发展中具有重要作用。     

胃腺癌组织中Smad4的表达及其临床意义

目的研究胃腺癌及癌旁组织中Smad4的表达、临床意义及对预后的判断价值。方法收集130例胃腺癌患者的手术切除标本共378份,其中取自癌组织130份,癌旁组织248份。采用免疫组织化学法检测胃组织芯片中Smad4的表达。结果癌旁正常胃黏膜均可见Smad4的正常表达,Smad4在肠上皮化生和不典型增生中正常表达率分别为83.3%和75.0%,在癌细胞中则为64.6%。Smad4在胃癌组织中的表达率显著低于癌旁黏膜组织,差异有统计学意义（P〈0.05）。低分化癌细胞中Smad4蛋白表达率下降为42.2%,而高分化癌中仅为23.4%,Smad4表达与胃腺癌分化程度显著相关（P〈0.05）,而与其他临床病理参数无关。Kaplan-Meier分析显示,Smad4表达下降组3年生存率为35.0%,显著低于表达正常组的46.3%,差异有统计学意义（P〈0.05）。Cox回归多因素分析显示,Smad4表达是一个独立的预后因素。结论Smad4异常表达在胃腺癌发生发展方面起重要作用,Smad4可作为评价胃癌预后的独立指标。     

Smad7和IL-6在原发性肝细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨Smad7和IL-6在原发性肝细胞癌中的表达及临床意义。方法收集56例肝细胞癌患者术后肝癌组织及癌旁肝硬化组织,采用荧光定量PCR检测Smad7转录情况,免疫组化方法检测Smad7蛋白的表达水平,对比Smad7表达与患者一般临床病理特征如年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤计数、组织病理分化、TNM分期、是否存在包膜、门静脉系统侵犯、血清甲胎蛋白(AFP)浓度以及血清HBs Ag阳性率的关系。术前采用ELISA法检测肝癌患者血清中IL-6表达水平,与36位健康体检者血清IL-6水平对比。结果肝癌组织中Smad7转录水平低于对应癌旁肝硬化组织,肝癌组织中Smad7蛋白阳性表达率均低于癌旁肝硬化组织(P<0.05)。肝癌组织Smad7阳性表达组与阴性表达组在肿瘤大小、组织病理分化、TNM分期、门静脉系统侵犯方面比较,差异有统计学意义(P<0.05);肝癌组血清中IL-6水平高于健康组(P<0.05)。结论原发性肝细胞癌中存在Smad7和IL-6的异常表达,Smad7和IL-6可能是评估患者病情新的生物标志物。     

皮肤鳞状细胞癌Smad2和Smad7的表达及其临床意义

目的 检测Smad2和Smad7蛋白在皮肤鳞状细胞癌中的表达，分析其与皮肤鳞状细胞癌的病理分级及临床分期的关系。方法 采用免疫组化SABC方法，检测60例皮肤鳞状细胞癌及10例正常皮肤石蜡包埋组织标本中Smad2和Smad7蛋白的表达与定位。采用图像分析技术对蛋白表达定量分析，比较正常鳞状上皮与不同分化程度鳞状细胞癌之间Smad2和Smad7蛋白表达的差异，分析Smad2和Smad7蛋白在皮肤鳞状细胞癌临床Ⅰ期至Ⅲ期的表达差异。结果 正常皮肤和皮肤鳞状细胞癌的胞浆中都表达Smad2和Smad7。与正常鳞状上皮相比，皮肤鳞状细胞癌中Smad2的表达明显下调，而Smad7的表达明显上调（P〈0．05）。皮肤鳞状细胞癌中，临床分期从Ⅰ期到Ⅲ期，Smad2的表达逐渐降低，其中Ⅰ期与Ⅲ期及Ⅱ期与Ⅲ期之间相比，差异有统计学意义（P〈0．05），而Smad7的表达虽然逐渐增加，但差异无统计学意义。结论 Smad2的表达下调及Smad7表达上调可能解除了TGF-β信号对细胞增殖的抑制作用，引起TGF-β的生长抑制信号缺失，使细胞生长失去控制，导致肿瘤的发生。TGF-β信号的下游分子Smad2的表达下调与皮肤鳞状细胞癌的浸润和转移有关。     

Smad4蛋白在胃癌组织中表达的研究

目的 了解Smad4蛋白在胃癌组织中的表达情况及其意义。方法 应用免疫组织化学方法,对10例正常胃粘膜组织和61例胃癌组织（高中分化 腺癌22例,低分化腺癌29例,粘液腺瘤3例,印戒细胞癌7例）中的Smad4的表达进行检测。结果 在正常胃粘膜组织,Smad4蛋白主要存在于腺体体底部细胞胞浆中。在胃癌组织,Smad4表达于胞浆及少量细胞核中,它在低分化胃癌组织中的表达明显减少（与正常胃粘膜和高分化腺癌相比,P＜0．01,P＜0．05）,而且分化越差的胃癌组织,其表达减少。提示在胃癌发生、发展中起了重要作用。结论 Smad4在低分化胃癌组织中表达明显减少,可能在胃癌的发生发展过程中起了一定作用。     

Galectin-3和Smad4与结肠癌浸润及转移的关系

目的探讨Galectin-3和Smad4在结肠癌及相应的癌旁组织中的表达差异及其与结肠癌生物学行为的关系。方法应用免疫组化S-P法检测Galectin-3和Smad4在61例结肠癌组织及对应癌旁组织中的表达情况。结果61例结肠癌中Galectin-3阳性表达50例,阳性率为82%,对应癌旁组织中Galectin-3表达阳性率为26.2%,差异有统计学意义（P〈0.05）。结肠癌中Smad4阳性率为24.6%,对应癌旁组织中阳性率为80.3%,差异有统计学意义（P〈0.05）。Galectin-3的阳性表达及Smad4表达缺失与大肠癌分化程度、浸润和转移有关（P〈0.01或〈0.05）。结论Galectin-3在结肠癌组织中表达率高,与结肠癌细胞的淋巴结转移、浸润有关,Smad4表达缺失与大肠癌分化程度和转移有关。二者是预测结肠癌转移的较有价值的指标。     

胃癌组织中RASGRF1基因甲基化及蛋白表达与其临床意义

目的探讨胃癌组织中Ras蛋白特异性鸟苷酸释放因子1（RASGRF1）基因甲基化及蛋白表达以及临床意义。方法收集80例胃癌病人病历资料,采用免疫组织化学法检测80例胃癌组织和相应癌旁组织中RASGRF1蛋白表达情况,采用甲基化特异性PCR检测RASGRF1基因甲基化状态,分析胃癌组织中RASGRF1基因甲基化及蛋白表达的相关性,并观察胃癌组织中RASGRF1基因甲基化状态及蛋白表达情况与病人临床病理参数的关系。结果胃癌组织和相应癌旁组织中RASGRF1蛋白表达与基因甲基化表达情况差异均有统计学意义（P < 0.05）;Spearman相关分析结果显示,胃癌组织中RASGRF1蛋白表达与基因甲基化呈负相关关系（P < 0.01）;胃癌组织中RASGRF1蛋白表达与性别、年龄、肿瘤直径、组织学分化程度、发生远处转移无关（P>0.05）,与肿瘤分期有关（P < 0.05）;胃癌组织中RASGRF1基因甲基化与性别、年龄、肿瘤直径、组织学分化程度无关（P>0.05）,与肿瘤分期、发生远处转移有关（P < 0.05和P < 0.01）。结论胃癌组织中RASGRF1基因甲基化和蛋白表达二者呈负相关关系,RASGRF1基因甲基化及蛋白表达与肿瘤分期、发生远处转移有一定关系。     

VEGF和Smad7双基因过表达慢病毒载体的构建

目的：构建过表达VEGF和Smad7双基因的慢病毒载体,为勃起功能障碍基因治疗的研究提供有效工具。方法：根据GenBank中基因信息,设计合成VEGF和Smad7引物,采用overlap PCR方法扩增目的基因片段,运用基因重组技术将其克隆至慢病毒表达载体Ubi-MCS-3FLAG-CBh-gcGFP-IRES-puromycin,经酶切、测序对重组质粒进行验证。将重组质粒和Helper1.0、pHelper2.0辅助质粒共转染293T细胞,包装双基因过表达慢病毒并测试其滴度。结果：经酶切和测序鉴定表明VEGF和Smad7双基因重组慢病毒载体构建成功,荧光法测定重组慢病毒滴度高（2E+8TU/mL)。VEGF和Smad7重组慢病毒能高效转染293T细胞,Western blot检测显示VEGF和Smad7蛋白在靶细胞中过表达。结论：成功构建了携带VEGF和Smad7基因并能正确表达的高滴度的重组慢病毒载体。     

Smad7基因沉默对细胞增殖的影响

TGF—β是一种多功能的细胞因子,可调节细胞的分化、增殖和凋亡。它对多种上皮细胞尤其是支气管上皮细胞的生长、增殖有很强的抑制作用。Smad7作为TGF—β信号转导通路的抑制分子,可以抑制TGF—β信号在胞浆内的传导。我们以永生化人支气管上皮细胞BEP2D,及恶性转化的BERP35T2细胞为基础所做的研究表明：Smad7基因的表达随细胞恶性度增高而增高,     

信号传导蛋白Smad2和Smad3的研究进展

Smad蛋自家族是近年来发现的新的细胞内信号转导蛋白,哺乳类中共发现了有8种不同的Smad蛋白.可分为3个不同的亚族:R-Smad、Co-Smad和I-Smad.Smad2和Smad3属于R-Smad,本文从Smad2和Smad3的结构、功能以及相关蛋白等多个方面探讨Smad2和Smad3在TGF-Bl信号转导中的不同作用.     

Smad4基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

目的:构建Smad4基因RNAi慢病毒载体. 方法:针对已经筛选确定的Smad4基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经Mlu I和Cla I酶切后的pLVTHM载体[含H1启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接产生LV-shSmad4慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定. 用LV-shSmad4,pCMV-dR8.74和pMD2G 3质粒共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度. 结果:PCR和测序证实,成功构建Smad4 shRNA的慢病毒载体LV-shSmad4. 包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为5×1010 pfu/L. 结论:成功构建人Smad4基因RNAi慢病毒载体.     

Smad2,3,4,7蛋白在大鼠5/6肾切除肾衰模型中的定位和表达变化

目的　研究Smad2 ,3 ,4,7蛋白在 5 6肾切除模型中的定位和表达变化。方法　Wistar大鼠行 5 6肾切除 ,分别于模型 4、8、12周处死大鼠。用免疫组化检测Smad2、Smad3、Smad4和Smad7蛋白的定位和表达 ;纤维化程度通过测定肾组织羟脯氨酸含量来判断。结果　Smad2、Smad3和Smad4主要在肾小球和肾小管上皮细胞内有表达 ,而Smad7主要在肾小球表达。随着肾功能衰竭的加重 ,肾小球Smad2、Smad3和Smad4蛋白表达逐渐增加 ,而Smad7蛋白表达却逐渐下降 ,并伴有肾组织羟脯氨酸含量的明显增高。结论　TGF β Smad信号通路参与了肾间质纤维化进程 ,Smad2 ,3 ,4高表达和Smad7负调控不足是本模型TGF β高表达导致肾小球硬化加重的主要原因之一。     

ALK-3、Pax-8基因抑制后大鼠心肌细胞中Smad1/5/8的表达

目的：抑制大鼠胚胎心肌细胞株中ALK-3、Pax-8基因的表达后,探索Smad1/5/8在其中所起的作用。方法：将H9C2（2-1）大鼠胚胎心肌细胞分为4组：针对Pax-8基因的小干扰RNA（Pax-8siRNA）组、ALK-3基因的小干扰RNA（ALK-3siRNA）组、阴性对照（NCsiRNA）组和空白对照组。前3组分别给予相应siRNA（5.0μL）和Lipofectamine2000（5.0μL）配制成的siRNA-脂质体复合物溶液,空白对照组给予等量的细胞培养基。采用qRT-PCR测定Pax-8和ALK-3的mRNA表达,Westernblot法检测磷酸化Smad1/5/8（p-Smad1/5/8）和半胱天冬酶（Caspase）-3表达。结果：与NCsiRNA组和空白对照组比较,Pax-8siRNA组的Pax-8mRNA表达分别下调50%（P＜0.05）和54%（P＜0.05）,ALK-3siRNA组的ALK-3mRNA表达分别下调49%（P＜0.05）和53%（P＜0.05）,而NCsiRNA组与空白对照组间差异无统计意义（P＞0.05）。与NCsiRNA组和空白对照组比较,ALK-3siRNA组p-Smad1/5/8的蛋白表达量分别下调58%（P＜0.05）和55%（P＜0.05）,Pax-8siRNA组p-Smad1/5/8的蛋白表达量差异无统计意义（P＞0.05）。NCsiRNA组与空白对照组间差异无统计意义（P＞0.05）。与NCsiRNA组和空白对照组比较,Pax-8siRNA组Caspase-3蛋白表达量分别上调76%（P＜0.05）和81%（P＜0.05）,ALK-3siRNA组Caspase-3的蛋白表达量分别上调135%（P＜0.05）和140%（P＜0.05）,而NCsiRNA组与空白对照组间差异无统计意义（P＞0.05）。结论：在大鼠胚胎心肌细胞株中对基因ALK-3、Pax-8干扰后能引起细胞凋亡蛋白Caspase-3明显增多,并且在ALK-3siRNA组发现Smad1/5/8蛋白磷酸化减少,而Pax-8siRNA组中未发现Smad1/5/8磷酸化减少,提示Smad1/5/8在基因ALK-3被干扰后引起细胞凋亡蛋白Caspase-3增多中起重要作用。     

Smad2和Smad4蛋白在乳腺癌组织中的表达及其意义

目的：研究细胞信号传导分子Smad2和Smad4蛋白在乳腺癌组织中的表达,阐明其与乳腺癌发生发展的关系及意义。方法：选取53例乳腺导管癌和50例癌周正常组织标本,应用免疫组织化学SP法检测乳腺癌组织和癌周正常组织中Smad2和Smad4蛋白的表达水平,并评估二者的表达与乳腺癌临床病理参数间的关系。结果：乳腺癌组织中Smad2蛋白表达水平明显高于癌周正常组织（Z=-2.08,P < 0.05）;乳腺癌组织中Smad4蛋白表达水平明显低于癌周正常组织（Z=-5.01,P < 0.01）。乳腺癌组织中Smad2和Smad4蛋白的阳性表达率与患者年龄无关（r=0.035,P > 0.05;r=-0.077,P > 0.05）,与肿瘤大小无关（r= 0.128,P > 0.05;r=0.133,P > 0.05）,与淋巴结转移无关（r=0.163,P > 0.05;r=0.006,P > 0.05）,与是否有远处转移无关（r=0.113,P > 0.05;r=0.126,P > 0.05）,与ER的表达无关（r=0.056,P > 0.05;r=0.047,P > 0.05）,与PR的表达无关（r=0.129,P > 0.05;r=0.107,P > 0.05）;但与HER2的阳性表达率呈负相关关系（r=-0.388,P < 0.01;r=-0.360,P < 0.01）,与乳腺癌病理分级呈负相关关系（r=-0.331,P < 0.05;r=-0.388,P < 0.01）;乳腺癌组织中Smad2与Smad4的表达呈正相关关系（r= 0.830,P < 0.01）。结论：Smad2和Smad4蛋白在乳腺癌的发生发展过程中起重要作用,可能成为评估乳腺癌恶性程度及预后的重要生物学指标。     

Smad7和组织器官纤维化

转化生长因子β(TGF-β)在组织器官纤维化发生过程中起关键作用。Smad7是TGF—β信号转导途径的主要抑制性蛋白,其异常表达可影响TGF—β活性,进而改变纤维化进程。调控Smad7的表达可能提供一种纤维化疾病的新治疗手段。     

Smad7和组织器官纤维化

转化生长因子β(TGF-β)在组织器官纤维化发生过程中起关键作用.Smad7是TGF-β信号转导途径的主要抑制性蛋白,其异常表达可影响TGF-β活性,进而改变纤维化进程.调控Smad7的表达可能提供一种纤维化疾病的新治疗手段.