miR-424对非小细胞肺癌细胞株A549迁移及侵袭的影响

目的探讨miR-424对非小细胞肺癌细胞株A549迁移及侵袭的影响。方法 RT-PCR法检测肺癌细胞NCI-H460、NCI-H1975、NCI-H446、A549、NCI-H1299、NCI-H157及人胚肺成纤维细胞MRC-5中miR-424表达,脂质体LipofectamineTM2000将miR-424 inhibitor和miR-424 NC转入A549细胞中,48 h后,RT-PCR法检测miR-424表达,CCK-8法检测细胞活力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,western blot检测基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9、转化生长因子-β1(TGF-β1)及p-Smad3的表达。结果 miR-424在肺癌细胞NCIH460、NCI-H1975、NCI-H446、A549、NCI-H1299、NCI-H157中的[(1.78±0.13),(1.69±0.10),(1.89±0.18),(2.88±0.27),(2.52±0.20),(2.49±0.23)]表达量显著高于miR-424在人胚肺成纤维细胞MRC-5中的(0.58±0.05)表达量(P0.01)。与miR-424 NC组比较,miR-424 inhibitor组miR-424表达量显著降低(P0.01),细胞活力下降(P0.01),细胞迁移及侵袭能力降低(P0.01),MMP2,MMP9,TGF-β1及p-Smad3表达量均显著下调(P0.01)。结论 miR-424表达量下调后能通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路进而抑制A549细胞的迁移及侵袭。     

CCR10的表达对非小细胞肺癌细胞在增殖、迁移和侵袭的影响

目的 本研究旨在探讨趋化因子受体10（chemokine receptor 10,CCR10）的表达对NSCLC细胞在增殖、迁移和侵袭方面的影响。方法 应用基因工程技术将CCR10siRNA导入NSCLC细胞中,干扰CCR10的正常表达,进而研究CCR10对NSCLC细胞在增殖、迁移和侵袭等功能方面的影响。结果 转染了CCR10siRNA的人NSCLC腺癌细胞A549的细胞增殖率明显低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义（P<0.05）,空白对照组与阴性对照组的细胞增殖率比较,差异无统计学意义（P>0.05）。与空白对照组及阴性对照组比较,转染了CCR10siRNA的人NSCLC腺癌细胞A549的细胞迁移率明显低于空白对照组及阴性对照组,差异有统计学意义（P<0.05）,空白对照组和阴性对照组的细胞迁移率比较,差异无统计学意义（P>0.05）。转染了CCR10siRNA的人NSCLC腺癌细胞A549的细胞侵袭率明显低于空白对照组及阴性对照组,差异有统计学意义（P<0.05）,空白对照组及阴性对照组的细胞侵袭率比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 CCR10促进NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭能力,CCR10可能参与非小细胞肺癌的发生、发展、侵袭及转移过程。     

肝细胞生长因子对非小细胞肺癌侵袭和迁移的影响

目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)对非小细胞肺癌(NSCLC)转移的影响及其可能的分子机制.方法 以HGF进行诱导培养NSCLC细胞株A549及其耐药株A549/DDP,应用Real time PCR及Western blot检测诱导前后细胞内上皮间质转化(EMT)相关标志物波形蛋白(vimentin)、钙黏蛋白E(E-cadhe-rin)表达的变化.将细胞种植在细胞培养板,设置未外源性添加HGF的为对照组,外源性添加HGF进行细胞培养的为HGF诱导组,应用细胞划痕以及Transwell实验检测诱导前后两株细胞迁移侵袭能力的变化.结果 HGF在A549/DDP细胞的mRNA表达水平较A549细胞显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);提高A549/DDP及A549细胞微环境中HGF水平可诱导细胞vimentin增加、E-cadherin减少,差异均有统计学意义(基因水平P<0.01,蛋白水平P<0.05).细胞划痕实验显示,A549/DDP细胞愈合较A549细胞快,差异有统计学意义(P<0.05),HGF诱导可使细胞侵袭能力增强;Transwell结果显示,HGF诱导组的A549/DDP、A549细胞相对未诱导前细胞的侵袭能力增强,差异均有统计学意义(均P<0.01).结论 HGF促进NSCLC细胞A549/DDP及A549的侵袭迁移,其机制可能与通过调控EMT相关基因的表达相关.     

雌二醇对非小细胞肺癌A549细胞迁移及侵袭能力的影响

目的 观察雌二醇(17β-estradiol,E2)激动雌激素受体ERα和ERβ后,对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞A549和H1299迁移和侵袭能力的影响.方法 分别用E2、雌激素α受体激动剂PPT(ERαagonist)和雌激素β受体激动剂DPN(ERβago-nist)处理A549细胞和H1299细胞24 h和4...     

沉默MACC1基因表达对耐药性非小细胞肺癌A549细胞增殖及侵袭的影响

目的探讨siRNA沉默结肠癌转移相关基因1(MACC1)表达对耐药性非小细胞肺癌细胞株A549增殖及侵袭的影响。方法培养非耐药性和耐药性非小细胞肺癌A549细胞,应用RT-PCR技术检测MACC1 mRNA的表达水平;通过化学合成特异性siRNA,与阳离子脂质体Lipofectamine 2000形成复合体,转染耐药性A549细胞,RT-PCR检测转染效果;继续顺铂药物处理耐药性A549细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率;Hoechst33258染色法观察siMACC1后耐药性A549细胞的凋亡形态;Transwell法检测siMACC1后耐药性A549细胞迁移能力;Western blot法检测siMACC1后耐药性A549细胞周期蛋白E-cadherin和N-cadherin的表达水平。结果与耐药性A549细胞组比较,非耐药性A549细胞组中MACC1 mRNA表达量显著下降(P0.05)。与siRNA NC耐药性A549细胞组比较,siRNA MACC1耐药性A549细胞组中MACC1 mRNA表达量显著降低(P0.05),细胞增殖抑制率上升(P0.05);Hoechst 33258细胞染色结果表明siRNA MACC1耐药性A549细胞组发生细胞皱缩,细胞核聚集,细胞形态学呈现细胞凋亡改变;Transwell实验表明MACC1基因沉默后,细胞迁移能力变弱;Western blot结果表明MACC1基因沉默后,与siRNA NC耐药性A549细胞组比较,siRNA MACC1耐药性A549细胞组中E-cadherin蛋白表达显著增加(P0.05),N-cadherin蛋白表达显著减少(P0.05),细胞的侵袭转移能力显著减弱。结论 MACC1在耐药性A549细胞中的异常升高,可能是肺癌肿瘤细胞耐药性产生的分子机制之一。siRNA MACCl能够有效转染耐药性A549细胞,能显著地抑制耐药性A549细胞增殖与侵袭。     

Vav3 在小细胞肺癌组织中的表达及 对细胞迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨Vav3 在小细胞肺癌（SCLC）组织中的表达及对细胞迁移和侵袭能力的影响。方法 选 取SCLC 患者87 例及同期因肺外伤行手术治疗的正常肺组织50 例作为对照组,免疫组织化学（免疫组化）检 测SCLC 和对照组组织中Vav3 蛋白的表达,培养人小细胞肺癌H446 细胞并分为siRNA-Vav3 组、siRNA- 对 照序列组和空白组,实时荧光定量PCR 技术检测各组细胞中Vav 3 基因表达,划痕实验检测各组细胞迁移能 力,Transwell 法检测各组细胞迁移和侵袭能力。结果 SCLC 组织中Vav3 蛋白阳性表达率为81.6%,高于对照 组的14.0%（χ2=17.739,P =0.000）;SCLC 组织中Vav3 蛋白表达与临床分期、远处转移和生存状态有关（P = 0.024、0.016 和0.014）;Vav3 蛋白阳性表达组患者平均生存时间23.14 个月,而阴性表达组则为44.89 个月,差 异有统计学意义（χ2=6.280,P =0.012）;siRNA-Vav3 组细胞中Vav3 mRNA 相对表达量低于siRNA- 对照序列 组和空白组（P=0.000）;siRNA-Vav3 组细胞24 h 后划痕愈合率低于siRNA- 对照序列组和空白组,siRNAVav3 组迁移细胞数低于siRNA- 对照序列组和空白组（P =0.000）;siRNA-Vav3 组侵袭细胞数低于siRNA- 对 照序列组和空白组（P =0.000）。结论 Vav3 蛋白在SCLC 组织中呈高表达,且与患者预后相关,特异性沉默 SCLC 细胞中Vav3 基因可抑制细胞迁移和侵袭能力。     

Osteopontin knockdown suppresses non-small cell lung cancer cell invasion and metastasis

Background Osteopontin (OPN) was identified as one of the leading genes that promote the metastasis of malignant tumor.However,the mechanism by which OPN mediates metastasis in non-small cell lung canc...     

α-烯醇化酶1对非小细胞肺癌侵袭转移的影响

目的 探讨α-烯醇化酶1(alpha-enolase 1,ENO1)对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）侵袭转移的影响。方法 利用生物信息学数据库分析ENO1在NSCLC组织中的表达及其与患者临床病理特征和预后的关系;利用siRNA干扰A549、H460细胞中ENO1表达,实时定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法验证干扰效果,探索ENO1对NSCLC增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果 数据库分析结果显示,ENO1在NSCLC组织中高表达,且与患者预后不良显著相关（P<0.05）;ENO1的表达与患者组织学分型及是否复发显著相关（P<0.001）,在TNM分期中仅与肺腺癌具有一定的相关性（P<0.05）。体外功能实验表明,干扰ENO1表达后,NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭能力均受到抑制。结论 ENO1能够促进NSCLC的侵袭、转移,且其表达水平升高提示患者预后不良。     

癌基因Stat3与非小细胞肺癌侵袭和转移的关系

目的：观察癌基因Stat3、CyclinD₁及增殖细胞核抗原(PCNA)在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达情况,并分析其在非小细胞肺癌发生发展中的作用。方法：应用免疫组织化学SP法检测45例 NSCLC中Stat3蛋白、CyclinD₁蛋白及PCNA蛋白的表达。结果:45例NSCLC中32例Stat3蛋白阳性表达,阳性表达率为71.1%; NSCLC不同组织学分级、有无淋巴结转移Stat3的表达差异有显著性（P<0.05）,肿瘤不同大小及不同组织学分型间表达差异无显著性（P>0.05）;Stat3与CyclinD₁蛋白及PCNA蛋白的表达呈正相关（r＝0.531, P<0.01;r＝0.618,P<0.01）。结论：Stat3在NSCLC中异常表达,并可能参与NSCLC中CyclinD₁蛋白的调节,促进细胞增殖,Stat3可能促进NSCLC侵袭和转移。     

骨桥蛋白在淋巴结转移的非小细胞肺癌中的表达

目的 研究骨桥蛋白(OPN)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达.方法 应用组织芯片免疫组织化学方法检测226例肺癌组织(无淋巴结转移116例,淋巴结转移110例)和25例正常肺组织中OPN的表达,并进行比较分析.结果 226例肺癌组织中OPN表达阳性84例(37.2%),其中51例为有淋巴结转移的肺癌组织,33例为无淋巴结转移的肺癌组织;正常肺组织中无OPN表达.结论 OPN在有淋巴结转移的NSCLC组织中表达增高,提示其在NSCLC的转移中起重要作用.     

骨桥蛋白在淋巴结转移的非小细胞肺癌中的表达

目的研究骨桥蛋白(OPN)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达。方法应用组织芯片免疫组织化学方法检测226例肺癌组织(无淋巴结转移116例,淋巴结转移110例)和25例正常肺组织中OPN的表达,并进行比较分析。结果226例肺癌组织中OPN表达阳性84例(37.2%),其中51例为有淋巴结转移的肺癌组织,33例为无淋巴结转移的肺癌组织;正常肺组织中无OPN表达。结论OPN在有淋巴结转移的NSCLC组织中表达增高,提示其在NSCLC的转移中起重要作用。     

长链非编码RNA HOTAIR对非小细胞肺癌迁移与侵袭能力的影响

目的:探讨非小细胞肺癌组织中长链非编码RNA HOTAIR的表达情况及其对细胞侵袭与迁移水平的作用。方法:利用定量的反转录PCR技术检测50例非小细胞肺癌组织中LncRNA HOTAIR的表达,然后通过过表达技术与RNA干扰技术研究LncRNA HOTAIR的主要功能。再对其pcDNA-HOTAIR与si-HOTAIR进行转染调控LncRNA HOTAIR的表达,设置空白载体与阴性对照组,应用反转录PCR进行转染效率的定量检测。然后分别实施MTT与Transwell两种方法来判断LncRNA HOTAIR的异常表达对非小细胞肺癌细胞活性的干预作用。结果:在非小细胞肺癌组织中LncRNA HOTAIR的相对表达水平是(24.50±7.43)。LncRNA HOTAIR在SPC-A1和SK-MES-1两种细胞中的相对表达水平比在正常的支气管上皮细胞中更高,在A549细胞中的相对表达水平比在正常的支气管上皮细胞中更低。而经2d的转染siRNA后,LncRNA HOTAIR在A549与SPC-A1两种细胞中的表达水平降低;pcDNA3.1-HOTAIR后,LncRNA HOTAIR在A549细胞中的表达水平升高。利用RNA干扰技术阻碍HOTAIR的表达水平,不能抑制非小细胞肺癌细胞的增殖。而利用si-HOTAIR的转染降低LncRNA HOTAIR的表达水平能够阻碍癌细胞的迁移与侵袭作用(P<0.05);而LncRNA HOTAIR的过度表达能够明显推动癌细胞的迁移与侵袭作用(P<0.05)。结论:HOTAIR在非小细胞肺癌中的高水平异常表达,能够提高非小细胞肺癌细胞迁移与侵袭水平,可能和患者的不良预后有联系。     

不同肺叶非小细胞肺癌的跳跃性淋巴结转移分析

目的研究不同肺叶非小细胞肺癌患者的跳跃性淋巴结转移概率,为合理的淋巴结清扫提供依据。方法回顾性分析我科2007年1月～2009年10月期间327例行完全性切除的N2期非小细胞肺癌患者的临床病理资料,根据淋巴结是否存在跳跃性转移将327例患者分为跳跃转移阳性和阴性2组,对2组患者发生跳跃性转移的概率进行对比研究。结果 327例患者中有跳跃性转移112例,发生率为34.25%（112/327）。右肺上叶癌跳跃转移发生率为41.03%（32/78）,右肺中下叶癌跳跃转移发生率为29.66%（35/118）,左肺上叶癌跳跃转移发生率为46.58%（34/73）;左肺下叶癌跳跃转移发生率为18.97%（11/58）。结论非小细胞肺癌患者发生跳跃性转移的概率较高,尤其左肺上叶癌发生跳跃转移的概率最高,认为系统性淋巴结清扫对于非小细胞肺癌患者来说是必需的,尤其对于左肺上叶癌更为重要。     

非小细胞肺癌转移预测指标的研究

目的 :研究非小细胞肺癌 (NSCLC)淋巴结和远处转移的预测指标 ,并建立Logistic回归模型。　 方法 :通过免疫组化、ELISA、酶谱电泳等方法 ,对NSCLC肿瘤病理标本、血清、尿液和骨髓等进行检查 ,并通过Logistic回归分析建立预测概率模型。　结果 :免疫组化指标肿瘤组织内微血管密度 (IMVD)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)、白细胞分化抗原变异型 (CD4 4v6 )、基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )与NSCLC淋巴结转移危险有关 (P <0 .0 5 ) ,组织金属蛋白酶抑制物 (TIMP 2 )、上皮型钙粘素 (E cad)与NSCLC淋巴结转移危险下降有关 (P <0 .0 5 )。血清MMP 2、MMP 9,尿液MMP 2、MMP 9及骨髓上皮膜抗原 (EMA)阳性细胞与NSCLC远处转移危险有关 (P <0 .0 5 )。其中免疫组化指标CD4 4v6、IMVD、E cad及尿液MMP 2、骨髓EMA阳性细胞对NSCLC转移有显著回归效果而分别被选入概率模型 1和 2 ,其预测准确率分别为 81.1%和 72 .7%。　结论 :组织标本中CD4 4v6、IMVD、E cad以及尿液中MMP 2及骨髓EMA阳性细胞检查 ,可预测绝大多数NSCLC的淋巴结转移和远处转移状况 ,为NSCLC转移的早期诊断提供重要信息 ,有助于NSCLC的个体化治疗和改善预后     

全科医师骨干理论培训的效果评价及其影响因素分析

目的了解广东省全科医师骨干理论培训的短期效果,为改进培训策略和措施提供依据。方法采用问卷调查和试卷测试相结合的方法,对参加广东省全科医师骨干培训班的194名学员进行培训前和培训后的调查和测试。结果学员培训前后测试的平均分数分别为(44.64±7.45)分和(62.52±9.72)分,培训前后测试分数间差异有统计学意义(P<0.05)。除临床基本技能外,培训后学员各项全科医学相关知识技能自评分值均高于培训前,差异有统计学意义(P<0.05)。学员对培训内容和培训保障项目的评价较低。学员知识技能水平提高程度的影响因素包括培训内容、学员性别、学员学历等。结论本次骨干培训班的理论培训取得了较好的效果;今后培训应结合社区卫生服务实际和基层医生的特点合理设计培训内容,注意课程的系统性和连续性,并重视对培训班的组织和管理,以期进一步提高全科医师培训的效果。     

淋巴管癌栓和血管癌栓对非小细胞肺癌预后的影响

脉管癌栓是指镜下发现肿瘤的小静脉、小动脉或小淋巴管的管壁受侵、破坏或管腔内有瘤栓,由此又可分为血管癌栓和淋巴管癌栓。目前研究表明,脉管癌栓是非小细胞肺癌的预后不良因子,其易导致肺癌发生早期复发及转移,据统计发现具有脉管癌栓的患者其无复发生存期（ RFS）和总生存期（ OS）均低于不具有脉管癌栓的患者,但此结果是由于血管癌栓作用还是淋巴管癌栓作用仍存在争议。据目前国内外文献报道,术前高分辨率CT和CEA水平可预示脉管癌栓发生的几率,其促进早期肺癌发生复发及转移的机制可能与血管内皮生长因子（ VEGF）表达上调、集群孤立肿瘤细胞（ITCs）的存在等有关,在行免疫组化时,建议用CD34抗体标记血管癌栓,用D2-40抗体标记淋巴管癌栓。同时建议行病理诊断时对血管癌栓和淋巴管癌栓进行鉴别,建议脉管癌栓纳入NSCLC的TNM分期中,重新评估ⅠA期具有脉管癌栓的患者是否需行术后辅助化疗。