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1.
目的观察凋亡相关蛋白Caspase-3体外对PIAS1蛋白的酶切作用,为后续研究奠定基础。方法以HEK293T细胞表达PIAS1蛋白,采用免疫共沉淀(Co-IP)实验观察其与Caspase-3间的结合作用;采用体外蛋白酶切实验检测Caspase-3对PIAS1的酶切作用。结果 Co-IP实验发现体外Caspase-3可与PIAS1蛋白结合;蛋白酶切实验发现PIAS1的酶切片段。结论 Caspase-3与PIAS1在体外具有相互作用,PIAS1体外可被Caspase-3酶切,为后续研究奠定了基础。 相似文献
2.
目的:探讨体外培育牛黄对慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)大鼠血清及肺泡灌洗液中IL-17含量及肺组织中Caspase-3表达情况的干预作用。方法:50只雄性SD大鼠随机分正常对照组(A)、慢阻肺模型组(B)、牛黄干预组(C)、激素干预组(D)、牛黄+激素干预组(E)。B、C、D、E组以烟熏联合脂多糖制备慢阻肺模型。每次烟熏前1 h各组分别给予相应的药物进行干预,造模后比较5组大鼠血清及肺泡灌洗液IL-17含量、肺组织病理改变及Caspase-3表达情况。结果:5组大鼠IL-17含量除C组和D组尚不能认为组间差异有统计学意义外(P0.05),余各组间差异有统计学意义(P0.05);5组大鼠以免疫组化技术检测Caspase-3表达,各组多重比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论:牛黄及布地奈德可使IL-17水平降低,有减轻炎症反应的作用;并可减少肺组织中Caspase-3表达,有抑制大鼠肺泡上皮细胞凋亡的作用。 相似文献
3.
目的:通过检测自发性胎膜早破患者、正常分娩产妇和择期剖宫产产妇胎膜中凋亡因子Caspase-3,-8,-9蛋白的表达及定位,探讨凋亡因子Caspase-3-、8-、9在自发性胎膜早破中的作用。方法:取自发性胎膜早破未发动分娩行剖宫产的患者的胎膜(即胎膜早破组)8例,正常经阴道分娩产妇的胎膜(即阴道分娩组)8例以及无产科并发症择期剖宫产的产妇的胎膜(即剖宫产组)8例,其中,阴道分娩组和剖宫产组均作为对照组。应用免疫组化方法(SP法)对三组胎膜中Caspase-3,-8,-9蛋白的表达及定位进行检测,同时在光学显微镜下观察胎膜组织形态学的改变,在透射电镜下观察胎膜细胞超微结构的变化。结果:Caspase-3,-9蛋白在3组胎膜中均表达,Caspase-3,-9蛋白主要表达在羊膜上皮细胞、绒毛膜滋养层细胞,少数表达于网状细胞和间叶细胞,均为胞浆表达,胎膜早破组Caspase-3蛋白表达量(OD)为[(62.86±3.83)×10-2],高于阴道分娩组[(42.33±2.99)×10-2]和剖宫产组[(20.97±2.94)×10-2],在阴道分娩组的表达高于剖宫产组,两两比较,差异有统计学意义(P<0.05);胎膜早破组Caspase-9蛋白表达量为[(52.20±3.28)×10-2],高于阴道分娩组[(25.87±5.52)×10-2]和剖宫产组[(17.65±1.78)×10-2],在阴道分娩组的表达高于剖宫产组,两两比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Caspase-8在3组几乎不表达。胎膜早破组胎膜在光镜下观察发现组织形态学发生明显改变,电镜下可观察到大量凋亡细胞。结论:Caspase-9和Caspase-3分别作为凋亡的线粒体途径的启动因子和效应因子,在胎膜早破中表达明显增高,超微结构也观察到大量凋亡细胞。因此推测线粒体途径的凋亡在胎膜早破发病机制中可能起到一定的作用。 相似文献
4.
目的:从炎症理论角度出发,探讨薏苡仁多糖(Coixan)对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)体外炎症模型的干预作用及其机制。方法:体外培养NCM460细胞,采用不同剂量(0、2.5、5、10、20和40μg/mL)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导NCM460细胞,筛选出最佳诱导剂量(20μg/mL);用不同浓度(0、5、10、20、40和80μg/mL)的Coixan诱导NCM460,筛选出最佳促增殖浓度(10、20、40μg/mL)。实验随机设为空白组、模型组(LPS诱导)、LPS+Coixan低、中、高剂量(10、20、40μmol/L)组,LPS+柳氮磺吡啶(sulfasalazine,SASP)(200μg/mL)组,除空白组外用LPS(20μg/mL)刺激48 h建立UC体外细胞炎症模型后,分别以薏苡仁多糖及SASP进行48 h干预治疗后,ELISA法检测细胞上清液中炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;免疫荧光... 相似文献
5.
目的 探讨大鼠黏蛋白rMuc3酶切保守基序LS1KGS2IV1V2中各氨基酸对其蛋白酶切的影响.方法 采用定点突变技术,设计相应突变引物,以p20为模板,基于PCR扩增得到突变体,并经测序验证.然后通过Western Blot检测各突变体的表达,并分析未酶切部分所占比例.结果 细胞裂解物经Western Blot免疫印迹实验,证实在55kd处存在未酶切的部分,在30kd处存在可被抗V5抗体检测的N端部分,经过Quantity one分析后发现,S2/A完全抑制了酶切的发生,G/A抑制了绝大部分的酶切(未酶切部分占79%),L/A、I/A、V1/A、V2/A均对酶切产生了不同程度的抑制,未酶切部分分别为22%、39%、14%和17%,而K/A和S2/A几乎对酶切没有影响,其未酶切部分分别为6%和3%,酶切效率与p20(未酶切部分占4%)几乎一样.结论 酶切保守基序LS1KGS2IV1V2中各氨基酸对其蛋白酶切的发生是很重要的,其机制可能是因为此保守基序位于β2和β3片层之间的环状区,其上的氨基酸对于维持黏蛋白的构象是必须的.在S1上可能有O型糖链的存在,并且去除此O型糖链不影响酶切保守基序LS1KGS2IV1V2的酶切. 相似文献
6.
Caspase-1抑制剂对大鼠急性痛风性关节炎的作用 总被引:2,自引:2,他引:0
目的 研究Caspase-1抑制剂AC-YVAD-CMK对尿酸钠晶体诱导大鼠急性痛风性关节炎(GA)的作用.方法 选用健康雄性Wistar大鼠50只,按随机区组法将大鼠分为5组:空白对照组(A组),模型组(B组),秋水仙碱组(C组),低剂量AC-YVAD-CMK组(D组),高剂量AC-YVAD-CMK组(E组),每组10只.采用尿酸钠晶体制备大鼠 GA模型,造模后给药3 d,A、B组给予生理盐水,C组给予秋水仙碱,D、E组给予不同剂量AC-YVAD-CMK.用皮尺测定造模后2、4、6、8、24、48、72 h大鼠的踝关节周径;造模后72 h,麻醉后心脏取血,生理盐水冲洗关节腔,行白细胞计数;采用放射免疫分析法测定大鼠关节冲洗液及血清中白细胞介素1β(IL-1β)的水平;以苏木精-伊红染色观察大鼠关节滑膜的病理学改变.结果 造模后72 h,AC-YVAD-CMK能显著降低 GA模型大鼠的踝关节肿胀度及关节冲洗液、血液白细胞水平(F=10.34~44.66,P<0.01).放射免疫分析检测结果 显示,AC-YVAD-CMK可显著降低GA大鼠关节冲洗液及血清中IL-1β的水平(F=4.34、4.49,P<0.01).病理组织学检查结果 显示,AC-YVAD-CMK可减轻 GA模型大鼠踝关节滑膜增生,减少关节组织炎性细胞浸润.结论 AC-YVAD-CMK对尿酸钠晶体诱导大鼠GA有显著的改善作用,其机制可能与降低IL-1β水平有关. 相似文献
7.
目的 探讨Caspase-3基因表达对人鼻咽癌细胞CNE2的凋亡诱导作用.方法 应用重组技术将重构型Caspase-3基凶亚克隆至带有报告基因的真核表达载体pEGFP中,脂质体介导转染人鼻咽癌细胞CNE2通过RT-PCR方法检测转染后Caspase-3基因的表达:荧光显微镜、电镜观察细胞形态学变化;MTT法检测转染Caspase-3基因对CNE2细胞生长的影响.结果 RT-PCR方法证实重构型Caspase-3基因可在CNE2细胞内表达,形态学观察显示转染组细胞较对照组出现明显细胞凋亡特征,结果表明Caspase-3对CNE2的细胞生长有抑制作用.结论 重构型Caspase-3对CNE2细胞的生长有抑制作用. 相似文献
8.
大黄素(Emodin,EM)是中药大黄的主要有效成分之一,为蒽醌类衍生物。有研究表明大黄素不仅具有抗炎、免疫调节等药理作用,而且近期的研究还发现大黄素可以通过诱导肿瘤细胞凋亡抑制和杀伤肿瘤细胞[1,2]。Caspases是一组存在于胞质溶胶中的半胱氨酸蛋白酶,目前确认的有11种,它们被认为参与了细胞凋亡的途径,Caspase-3是凋亡过程中最主要的终末剪切酶,参与了细胞凋亡的内凋亡途径和外凋亡途径。结肠癌的发病率目前呈逐年上升趋势,对于晚期结肠癌的治疗多采用化疗,但疗效欠佳,因此有必要寻找一些对结肠癌可能有效地药物单体。本研究采用大黄素处理HT-29细胞,探讨大黄素对HT-29细胞Caspase-3表达的影响,从而进一步探讨大黄素诱导HT-29细胞凋亡的机制,为大黄素今后可能运用于结肠癌的治疗提供实验依据。 相似文献
9.
目的:研究NO对大鼠软骨细胞Caspase-3及蛋白激酶C(PKC)-α(PKC-α)表达的影响,探讨NO诱导软骨凋亡的机制.方法:软骨细胞用不同浓度的NO处理24 h后,用TUNEL、MTT法和流式细胞术检测细胞凋亡和细胞活力.Western blot检测Caspase-3及PKC-α的表达.结果:NO处理后软骨细胞TUNEL阳性率明显增高,细胞核片段损害明显,Caspase-3的表达升高,同时抑制PKC-α的表达.结论:NO诱导的软骨细胞凋亡可能通过促进Caspase-3表达,作用机制与抑制PKC-α有关. 相似文献
10.
目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对急性淋巴细胞白血病(ALL)原代白血病细胞的作用及作用机制,为As2O3在急性淋巴细胞白血病中的应用提供实验依据.方法 采用MTT法检测As2O3对ALL原代白血病细胞生长的抑制作用;结果As2O3浓度为1.0-10.0μmol/L的As2O3可以明显抑制ALL原代白血病细胞的生长,并呈时间与浓度依赖性.结论 As2O3可诱导ALL原代细胞凋亡; As2O3通过激活Caspase-3诱导ALL原代细胞凋亡. 相似文献
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Caspase-1抑制剂对实验性急性胰腺炎肾损害的治疗作用 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 :评价Caspase 1抑制剂对实验性急性胰腺炎 (AP)肾损伤的治疗作用。 方法 :SD大鼠 4 2只 ,随机分为 3组 :正常对照组 (HC组 ,n =6 ) ;AP造模 +生理盐水组 (AP S组 ,n =18) ;AP造模 +ICE抑制剂组 (AP ICE I组 ,n =18)。以 5 %牛磺胆酸钠逆行注入胰胆管诱发AP模型 ,造模后 2h腹腔注射生理盐水和Caspase 1抑制剂 ,12h后重复一次 ;HC组模拟胰胆管穿刺操作 ,但不注射药物。分别在各时间点将存活的大鼠处死 ,留取标本。结果 :AP S组血清尿素氮 (BUN)、肌酐 (Cr)水平显著升高 (P <0 .0 1vsHC) ;AP ICE I组在 12h和 18h其水平显著降低 (P <0 .0 1vsAP S)。AP S组血清IL 1β水平显著升高 (P <0 .0 1vsHC) ;AP ICE I组其水平显著降低(P <0 .0 1vsAP S)。HC组肾内可见Caspase 1及IL 18mRNA表达 ,但IL 1βmRNA表达较弱 ;AP S组其表达水平显著上调 (P <0 .0 1vsHC) ;AP ICE I组IL 1β及IL 18mRNA的表达显著下调 (P <0 .0 1vsAP S) ,而Caspase 1mRNA表达无显著改变 (P >0 .0 5 )。Caspase 1抑制剂治疗对肾脏病理改变影响不明显。结论 :Caspase 1激活的细胞因子IL 1β及IL 18在AP肾损害过程中发挥重要的作用 ;ICE抑制剂可有效地改善肾功能损害。 相似文献
12.
Caspase-3属于白介素1β转换酶(interleikin-1 convetting enzyme,ICE)家族,是涉及细胞凋亡的蛋白酶,参与肿瘤细胞凋亡的病理过程并在脑肿瘤疾病中起重要作用。现就近几年来Caspase-3的生物学研究进展及其在脑肿瘤细胞凋亡中的作用综述如下。 相似文献
13.
为探讨尿蛋白酶抑制剂的抗休克作用,我们选用S.D.大鼠制成肠系膜上动脉夹闭性休克模型,观察其对大鼠平均生存时间,平均动脉血压,平均动脉血一和心率的影响。结果发现;静脉注射尿蛋白酶抑制剂后,大鼠平均生存时间明显延长,平均动脉血压和动脉血压 流量亦明显高于盐水组动物。 相似文献
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次硫酸氢钠甲醛对小鼠大脑Caspase-3、NOS-1表达的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:研究摄入次硫酸氢钠甲醛后小鼠大脑皮层中Caspase-3、NOS-1表达的变化,以探讨次硫酸氢钠甲醛对大脑的影响。方法:健康雄性昆明小鼠,随机分为10d组、30d组,每组再分为对照组和0.4‰、0.8‰、1‰三个剂量实验组。10d后处死10d组小鼠;30d后处死30d组小鼠,取出大脑,采用Zamboni固定液固定,常规冰冻制片,免疫组织化学染色,光镜观察。结果:10d实验组小鼠大脑皮层中Caspase-3、NOS-1阳性表达同对照组比较表达明显增强,不同剂量间未见显著性差异。30d实验组小鼠大脑皮层中Caspase-3阳性表达和对照组相比无显著性变化,不同剂量间未见明显差异;30d实验组小鼠大脑皮层中NOS-1阳性表达同对照组相比明显降低,不同剂量间未见显著性差异。结论:次硫酸氢钠甲醛喂食后,可引起小鼠大脑皮层中Caspase-3、NOS-1表达增高,提示次硫酸氢钠甲醛促使大脑皮层中神经元凋亡增加,长期摄入可使神经元濒临死亡。 相似文献
16.
目的探讨测定基质金属蛋白酶1(MMP-1)水平对早期结核病的诊断价值。方法获取肺结核患者(20名)与健康人(20名)外周血淋巴细胞。分别用结核杆菌全菌与外周血淋巴细胞共培养12h,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测培养上清液中MMP-1与IFN-γ浓度。结果结核组MMP-1与IFN-γ浓度明显高于健康对照组(P〈0.001),检测敏感度与特异度分别为(88.9%,100%)和(85.7%,100%)。结论 MMP-1释放反应对结核病具有临床诊断价值。MMP-1与IFN-γ联合测定对早期结核病诊断具有临床意义,可用于早期结核的鉴别诊断。 相似文献
17.
光镜及电镜观察发现,经三七皂甙R_180μg/ml处理 5日,可诱导68%的HL-60细胞分化,其中晚幼粒32%,杆状30%,分叶6%。证实了三七皂甙R_2是HL-60细胞系的强诱导剂,可诱导HL-60细胞向中性粒细胞分化。~3H-TdR掺入实验结果表明,三七皂甙R_1在诱导HL-60细胞分化的同时,对细胞DNA和RNA的合成均有影响。与对照相比,48小时掺入抑制率~3H-TdR为26.32%,~3H-UR为18.57%(P<0.05);72小时掺入抑制率分别为17.46%和21.76%(P<0.05)。 相似文献
18.
目的:探讨软骨细胞在体外培养过程中或药物诱导下细胞凋亡与细胞表达Caspase-3之间的关系,TNF-α和Cycloheximide(CHX)诱导凋亡的软骨细胞,检测Caspase-3基因表达及细胞凋亡,为阻断细胞凋亡寻找理想的作用靶点;为增加软骨组织工程种子细胞的产量提供理论依据和新策略;为临床耳廓成型及修复提供新的材料来源。方法:①胎儿软骨细胞常规分离培养;不同浓度TNF-α+CHX组合诱导软骨细胞凋亡。②MTT法测定细胞生长曲线;TUNEL法和DNA片段化检测细胞凋亡。③所得数据用SPSS软件包分析。结果:①经不同浓度的TNF-α+CHX诱导体外培养的软骨细胞,流式细胞术和TUNEL法检测出细胞凋亡,凋亡指数在18.4%~67.9%之间。②TUNEL法和比色法检测分别显示诱导后凋亡发生时,不同代次软骨细胞Caspase-3基因表达和蛋白表达均比对照组有显著上升。结论:体外培养软骨细胞通过诱导凋亡,观察到凋亡发生时,Caspase-3基因和蛋白表达均出现显著上升。为体外规模培养工程细胞提供了阻滞凋亡的分子靶点。 相似文献
19.
目的 观察酸性成纤维细胞生长因子(FGF-1)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的H9c2心肌细胞凋亡作用及对半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),半胱氨酸蛋白酶-8(Caspase-8)和半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)表达的影响,并探讨可能机制。方法 体外培养H9c2 细胞,随机分为5 组:模型组,肝素(Heparin)组、FGF-1 组、FGF-1/Heparin 组和正常对照组。采用3-(4,5- 二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色分析检测H9c2 细胞的存活率,TUNEL 染色检测H9c2 细胞凋亡指数和Western blot 分析检测H9c2 细胞Caspase-3,Caspase-8 和Caspase-9 的表达。结果 模型组H9c2 细胞存活率与正常对照组比较,差异有统计学意义(P <0.05),模型组降低;FGF-1 组和FGF-1/Heparin 组H9c2 细胞存活率与模型组比较,差异有统计学意义(P <0.05),FGF-1 组和FGF-1/Heparin 组均升高。模型组H9c2 细胞凋亡指数,Caspase-3、Caspase-8 和Caspase-9 的表达与正常对照组比较,差异有统计学意义(P <0.05),模型组升高;FGF-1 组和FGF-1/Heparin 组H9c2 细胞凋亡指数,Caspase-3、Caspase-8 和Caspase-9 的表达与模型组比较,差异有统计学意义(P <0.05),FGF-1 组和FGF-1/Heparin 组降低。结论 FGF-1 对TGF-β1诱导的H9c2 心肌细胞凋亡具有抑制作用,其机制可能与抑制Caspase-3、Caspase-8 和Caspase-9 的表达有关。 相似文献